Dr.$Ana$Cris+na$Fermino$Soares!
Cruz$das$Almas$
!
Referncia
Microbiologia, Tortora, J. G.
Captulo 6
Crescimento Microbiano
A diviso bacteriana;
As fases de crescimento microbiano;
Crescimento Microbiano
$Refere7se$ao$nmero$$e$NO$ao$tamanho$das$clulas$
$Acumulam$em$$$$$COLNIAS$
Milhares$de$clulas$
visualizadas$sem$
auxlio$de$microscpio$
Crescimento microbiano
Crescimento microbiano referente ao nmero e no ao tamanho
de clulas. Os microrganismos esto uamentando o seu nmero e se
acumulando em colnias.
! podemos estimular
interesse.
Crescimento Microbiano
Entender$as$condies$necessrias$$
!
"Controlar$o$crescimento$de$patgenos$
"Es+mular$o$crescimento$de$micro7organismos$de$interesse$
Fatores$Fsicos$
! Temperatura$
! pH$
! Presso$osm+ca$
1. Temperatura
! Psicrlos:$crescem$em$baixas$temperaturas$
! Meslos:$crescem$em$temperaturas$moderadas$
! Termlos:$crescem$em$altas$temperaturas$
Temperatura
!Psicrfilo (-10 a 20C) X Psicrotolerante ou Psicrotrfico
(cresce de 0 a 30C, com temp. tima de 20oC )
!Psicrfilos podem crescer a 0oC, mas sua temperatura
tima est em torno de 15oC. E so altamente sensveis a
elevadas tempaeraturas, no crescem a temperatura
ambiente. Encontrados nas profundezas dos oceanos,, em
regies polares e em geral, no causam problemas
na
preservao de alimentos.
!Psicotrficos so mais frequentes e podem crescer em
temperaturas utilizadas em refrigeradores, degradam
alimentos. No crescem bem na temp. de refrigerao, mas
dependendo do tempo de contato, acabam por degradar os
alimentos.
Mesfilos
! Temperatura tima de crescimento entre 25 oC e 40oC.
! so os mais abundantes.
! A maioria dos organismos que degradam os
alimentos
e os
Termfilos ou termoflicos
! crescem em altas temperaturas.
para a
atividade metablica.
! 110oC temperatura mais alta conhecida em que crescimento o bacteriano foi
obervado. Em regies hidrotermais , nas profundezas dos oceanos.
Meslos$
Ex:$Escherichia$coli$
Psicrotrcos$
refrigerador$
Psicrlos$
Ex:$profundezas$
oceanicas,$regies$
polares$
Termlos$
Ex:Bacillus$stearothermophilus$
Hipertermlos$
Ex:$Thermococcus$
celer$
2. pH
#$Crescem$perto$da$neutralidade$(6,5$$7,5)$
Neutrlos$
Taxa$de$
crescimento$
Ex:$Escherichia$coli$
Acidlos$
Ex:$Acidithiobacillus$
sp$
Alcallos$
Ex:$Bacillus$sp$
$$$$1$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$3,5$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$7$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$9$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$14$
pH$
pH
! acidoflicos (0,1 a 5,4)
Thiobacillus (cresce em pH 1,5)
Lactobacillus
! neutroflicos (6,5 7,5)
A maioria das bactrias
Podem tolerar pH na faixa de 5,4 a 8,5
! alcaloflicos (> 7,5)
Vibrio cholearae (pH 9,0)
Agrobacterium (pH 12,0)
3. Disponibilidade de gua
Taxa$de$crescimento$
Halotolerantes$
Ex:$Staphylococcus$
aureus$
No$haloalico$
Ex:$Escherichia$coli$
Haloalicos$
Ex:$Vibrio$scheri$
Haloalicos$extremos$$
Ex:$Halobacterium$
salinarium$
Concentrao$salina$
Presso Osmtica
Meio hipertnico - Elevada concentrao de NaCl
clulas sensveis plasmlise
halfilo extremo no sobrevive em baixas concentraes de NaCl
(30%)
halfilo tolerante de 2 a 15% NaCl
Fatores$Qumicos$
Composio$aproximada$de$elementos$qumicos$$
de$uma$clula$bacteriana$(E.$coli)$
ELEMENTO$
$
Carbono$
$
Oxignio$
$
Nitrognio$
$
Hidrognio$
$
Fsforo$
$
Enxofre$
$
Potssio$
$
Sdio$
$
Clcio$
$
Magnsio$
$
Cloro$
$
Ferro$
$
Outros$
$
%$do$PESO$SECO$
$
50$
$
20$
$
14$
$
8$
$
3$
$
1$
$
1$
$
1$
$
0,5$
$
0,5$
$
0,5$
$
0,2$
$
0,3$
$
Elementos Qumicos
Carbono:$
$$$$!!!Um!dos!mais!importantes!!!!!
!!!!!!!Sntese!de!compostos!orgnicos!
!
! !!
Heterotrcos$$Composto$orgnico$$7$fonte$de$C$
!!!!!!!!!!!!!!!!!!compostos$orgnicos$$CHO,$aa,$lipdeo$
!
Autotrcos!4!CO2$$fonte$de$C$
#
$
!
Elementos Qumicos
$
!
Nitrognio:$
$$$Sntese$de$aminocido,$protenas,$DNA,$RNA,$ATP$
!!!compostos$inorgnicos$7$N2,$NO37,$NH3$
$compostos$orgnicos$$aa,$bases$nitrogenadas !!
!
Elementos Qumicos
#
#
#
#
Hidrognio$(H2,$H2O)$
$Oxignio$(O2,$H2O)$
$Enxofre$(SO47)$(aminocidos,$vitaminas)$$
Fsforo$(PO434)!(cidos!nucleicos,!ATP,!co4
fatores)!
Outros$elementos:!potssio,!sdio,!clcio,!
magnsio,!ferro,!zinco,!cobre,!mangans,!
molibdnio,!cobalto,!etc.(co4fatores)!
Fatores$orgnicos$de$crescimento:!vitaminas,!
aminocidos,!etc!
Oxignio
Aerbios obrigatrios
Anaerbios obrigatrios
Anaerbios facultativos
Microaerfilos
Anaerbios aerotolerantes
Formas$rea+vas$do$oxignio$
O2!!+!e4!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!O24!(radical!superxido)!
O24!+!H2O2!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!O2!!+!!OH42!!+!OH!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!(radicais!hidroxila)!
!
! O2!+!O24!!+!2H+!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!H2O2!+!!O2!!
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!(perxido!de!hidrognio)!
!
Mecanismos$de$destoxicao$
!
2O24!!+!!!2H+!!SOD!!!!!!!!!O2!!!+!H2O2!(nion!perxido!O242!)!
2H2O2!!!!!catalase!!!!!!!H2O!!!!+!O2!
H2O2!+!!!2H+!!!peroxidase!!!!!2H2O!
1. Aerbios obrigatrios
Crescimento na presena de O2
Crescimento no meio de cultura em
altas concentraes de de O2
Presena das enzimas CAT, SOD
2. Anaerbios obrigatrios
No h crescimento na presena de O2
Crescimento no meio de cultura em
regies que no h O2
Ausncia das enzimas que neutralizam
as formas txicas de oxignio
No tolera oxignio
Ex: Clostridium (Botulismo e ttano)
3. Anaerbios facultativos
4. Microaerfilos
5. Anaerbios aerotolerantes
!
!
!
!
!
Aerbios obrigatrios
Anaerbios obrigatrios
Anaerbios facultativos
Microaerfilos
Anaerbios aerotolerantes
Meio$de$Cultura!
Nutrientes$corretos$
Condies$adequadas$(pH,$temperatura,$O2)$
Estril$
Meios de cultura
! Meio de cultura material nutritivo utilizado para crescimento
de microrganismos em laboratrio.
! Algumas bactrias so capazes de crescer em qualquer meio
de cultura, outras necessitam de meios seletivos e outras no
crescem nos meios de cultura j desenvolvidos.
! Os microrganisms so chamados de inculo quando so
colocados em um meio de cultura para crescer.
gar$
Polissacardeo$complexo$
Meio$quimicamente$denido$para$
bactrias$quimioautotrcas!
Ingredientes$
$
Quan+dade$
!
0,5!g!
(NH4)2SO4!
Funo$
$Fonte!de!nitrognio!e!energia!
NaHCO3!
Fonte!de!carbono!
0,5!g!
Na2HPO4!
Tampo!e!ons!essenciais!
13,5!g!
KH2PO4!
Tampo!e!ons!essenciais!
0,7!g!
MgSO4.7H2O!
!
ons!essenciais!
0,1!g!
FeCl3.6H2O!
ons!essenciais!
0,014!g!
CaCl2.2H2O!
ons!essenciais!
0,18!g!
!
!
!
!
!
!
gua!
!
!
!
!
!
Solvente!
!
!
!
!
!
!
!
!
1.000!ml!
!
Meio$quimicamente$denido$para$
bactrias$heterotrcas!
Ingredientes$
$
Glicose$
$
NH4H2PO4$
$
Funo$
$Fonte$de$energia$e$carbono$
$
Fonte$de$nitrognio,$tampo$e$ons$
essenciais$
Quan+dade$
$
1$g$
$
5$g$
$
K2HPO4$
$Tampo$e$ons$essenciais$
MgSO4.7H2O$
ons$essenciais$
0,2$g$
ons$essenciais$
5$g$
$NaCl$
$
gua$
$
$
$
$
Solvente$
$
1$g$
$
$
1.000$ml$
$
Meio$complexo$para$o$crescimento$de$bactrias$
heterotrcas$
Ingredientes$
Funo$
$
Extrato$de$
carne$
Substncias$hidrossolveis$de$tecido$
animal:$carboidratos,$compostos$de$
nitrognio$orgnico,$vitaminas,$sais$
3$g$
Nitrognio$orgnico,$algumas$
vitaminas$
5$g$
Quan+dade$
$
$
Peptona$
$
Cloreto$de$sdio$ ons$e$requerimentos$osm+cos$
$
gua$
Solvente$
8$g$
$
1.000$ml$
$
o crescimento de
Meio diferencial:
Streptococcus
pyogenescausa
infeces na
garganta
cresce e lisa
as clulas
sangunes,
causando a
formao do
halo
Meios$para$crescimento$de$
anaerbicos$
Jarra$de$anaerobiose$
Tampa$seladora$
Embalagem$contendo$
Bicarbonato$de$sdio$
Boroidreto$de$sdio$
Indicador$de$anaerobiose$
Azul$de$me+leno$
Placas$de$Petri$
Catalisador$de$paldio$
Cmara$anaerbica$
Culturas$mistas$
Culturas$puras$
Crescimento$bacteriano$
Aumento$do$nmero$de$indivduos$e$NO$o$aumento$do$tamanho$
de$determinada$clula.$
Formas$de$mul+plicao:!!
!
Brotamento:!Ex:!Rhodopseudomonas!
Fisso$binria:$Ex:!Escherichia!coli$
Fisso$binria$
#Tempo$de$gerao$
!Tempo$necessrio$para$a$clula$dividir$
$$$$$(a$populao$dobra$de$tamanho)$
$$$$$1$clula$=$2$clulas$
!Varia$com$o$microrganismo$e$as$condies$ambientais$
20$min$
E.$coli$
1$a$3$horas$
24$horas$
20$geraes$$7$horas$$1$milho$de$clulas$
30$geraes$$10$horas$$1$bilho$de$clulas$
24$horas$$21$zeros$de$clulas$
tg
$
tg
$
tg
20 N 0
$
2 1 N0
4N0
tg
8N0 . . .
$
2 2 N0
2 3 N0 . . . 2 n N0
Fase
de
morte
Fase
Log
Fase
Lag
Tempo (h)$
Mtodos de Quantificao do
crescimento bacteriano!
1.1.1 LMINA
1.1 TOTAIS
1.1.1 ELETRNICA
1. No. CLULAS
1.2.1 PLAQUEAMENTO
1.2 VIVEIS
MEDIDAS
DE
CRESCIMENTO
(diluies)
1.2.2 FILTRO
(concentrar)
2.1 DIRETA
2. MASSA
Contagem$de$colnias$em$placas$$
Diluio$seriada$
Contagem$de$colnias$em$placas$$
Filtrao$(concentrao$da$amostra)$
Dr.$Ana$Cris+na$Fermino$Soares!
Cruz$das$Almas$
!
Referncia
Microbiologia, Tortora, J. G.
Captulo 7
Controle do Crescimento Microbiano
Crescimento$Microbiano$
Fisso$binria$
log N
Fase
Estacionria
Fase
de
morte
Fase
Log
Fase
Lag
Tempo (h)$
Controle do Crescimento
Microrganismos
Controle do crescimento microbiano
150 Anos
Joseph Lister
Cirurgio
Pesquisador ingles
Usando a teoria Germe da doena de Pasteur
Anti sepsia
1867: 1o cirurgia assptica
Controle do Crescimento
Microrganismos
Controle = destruio, inibio ou remoo
Destruio: esterilizao
Inibio: refrigerao, congelamento
Remoo: filtrao
!
!
Sanitizao
Reduo das contagens microbianas at nveis
seguros de sade pblica e minimizar as chances de
transmisso de um usurio para o outro
Degerminao
Remoo mecnica de microrganismos de uma rea
limitada.
Produtos/Tratamentos
-cida morte dos microrganismos
-sttico
Mortes$por$
minuto
Nmero$de$
sobreviventes
1.000.000
900.000
100.000
90.000
10.000
9.000
1.000
900
90
#$Para$cada$MINUTO$
que$o$tratamento$$
100
aplicado,$90$%$da$
10 populao$MORRE.$
1
Nmero de microrganismos
Estado fisiolgico
Ambiente
Danos a Protenas
Mtodos de controle
do Crescimento Microbiano
! Fsicos
! Qumicos
Temperatura
Calor
Mata os microrganismos
inativao
Calor
!
Calor
Calor mido:
fervura, vapor de fluxo livre, autoclave, pasteurizao
e UHT.
!
FERVURA
(100oC ao nvel do mar)
Mata as formas vegetativas de bactrias, quase todos
os vrus, fungos e seus esporos em 10 minutos.
Autoclave
Mtodo eficiente de esterilizao, a no ser que o
material a ser esterilizado possa ser danificado com o
calor ou umidade.
!
Presso de 1 atm
121oC
Pasteurizao
! Pasteur
! Reduo
da contaminao
microbiana
! Mata
as clulas vegetativas de
muitos microrganismos
! No
um mtodo de esterilizao
Temperaturas Baixas
! Princpio:
reduo ou paralisao
da atividade biolgica
! No
um mtodo de esterilizao
Refrigerao
Congelamento
60C
!
85C
102
101
100
100C
Tempo em minutos
Bacillus!!
anthracis
Clostridium!!
botulinum
Calor!seco!(oxidao)
Temperatura!
(C)
Tempo!de!
Morte!(min)
Temperatura!
(C)
Tempo!de!
Morte!(min)
100
2415
140
>!180
180
100
3004530
120
50
110
32490
130
15435
Radiao$
Radiaes ionizantes
! Princpio:
ionizao de molculas
formao de radicais reativos
! Raios
eX
Poder de penetrao
Emisso em todas as direes
Liberao constante (raios )
Aplicao: equipamentos mdicos,
alimentos, materiais plsticos
Radiao No-ionizante
! Princpio:
! Radiao
Ultra-violeta (UV)
Filtrao
!
Princpio: Remoo de
microrganismos
Solues sensveis ao
calor: vitaminas, aminocidos,
antibiticos
Ar de salas asspticas ou
cmaras:
Filtros HEPA (high efficiency
particulate air)
Desidratao ou Dessecao
!
Agentes Qumicos:
caractersticas ideais
! Amplo
espectro em baixas
concentraes
! Solubilidade
! Estabilidade
! Ausncia de toxicidade
! Homogeneidade
! Perda mnima de atividade
! Poder de penetrao e outras
Principais desinfetantes
!
Compostos fenlicos:
Princpio: Alterao da permeabilidade da
membrana e desnaturao de protenas
! Bacteriostticos ou bactericidas (depende
da concentrao)
Aplicao: hospitalar
!
Biguanidas (clorexidina):
Princpio: Ruptura da membrana plasmtica
! Atxico e persistente
! Bactericida para Gram + e Gram -
Iodo tintorial
Cloro irritante
!
lcoois
Princpio: Desnaturao de protenas e dissoluo de
lipdeos
Bactericida e fungicida
Aplicao:
!
!
!
!
Germicidas e anti-spticos
!
membrana
Bactericidas, fungicidas, amebicidas e viricidas
Aplicao: Anti-spticos, surfactantes ou
detergentes - Remoo mecnica, indstria de
laticnios, frigorficos
Conservantes qumicos
Princpio: inibio da atividade metablica
Aplicao:
! cidos orgnicos: Benzoato de sdio, cido srbico e
propionato de clcio
! Sais de cura: nitrato e nitrito de sdio em produtos crneos
! Bioconservantes: antibiticos, bacteriocinas, cido ltico e
cido actico
Esterilizantes qumicos
Princpio: destruio celular (oxidao)
Aplicao: cobertores, materiais plsticos
! xido de etileno e beta-propiolactona (quimioesterilizantes
gasosos)
! Formaldedo e glutaraldedo: bactericida, viricida e
esporicida
! Peroxignicos: oznio, perxido de hidrognio, perxido de
benzola e cido peractico