UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA DE LABORATORIO CLINICO E
HISTOPATOLOGICO

TEMA: TINCIONES ESPECIALES EN

HISTOQUMICAS
ELABORADO POR:
ALLAUCA VIVIANA
COLLAGUAZO GABRIELA
DE LA TORRE KATHERINE
MARTINEZ NATALY

Tercer Semestre

INTRODUCCIN

COLORACI N

Es el proceso mediante el
cual un cuerpo es tenido por
una sustancia colorante, sin
perder el color cuando es
lav ado con el disolv ente
utilizado al preparar la
solucin colorante.

Tipos de
coloraciones:

Ortocromticos
:
Los
tejidos
adquieren un color igual a de la
solucin colorante empleada.

Metacromticos: una sustancia o un

componente se tie con un color
diferente
al
del
colorante
empleado.

COLORANTES Y REACCIN HISTOLGICAS

COMUNES

HEMATO
XILINA:
ncleos y
regiones
acidas.

EOSINA:
regione
s
bsicas
y
colge
no

TINCION
ES
ARGENTI
CAS:
Fibras
reticular
es

HEMATOXI
LINA
FERRICO :
Msculos,
eritrocitos.

TRICOMIC
A DE
MASSON:
ncleos,
queratina,
musculo y
citoplasma

ACIDO
PERYODI
CO
DE
SCHIFF:
molcula
s ricas en
carbohidr
atos
y
glucgen
o.
COLORANT
ES DE
WRIGHT Y
GIEMSA:
eritrocitos,
ncleos de
leucocitos.
citoplasma
de los
monocitos
y linfocitos

La histoqumica es la aplicacin de
las reacciones qumicas y bioqumicas en la
tcnica histolgica, con el fin de localizar y
determinar de manera cientfica ciertas
sustancias o elemento presentes en los
tejidos dando un color caracterstico.

La tincin de hematoxilina y eosina (HE) se

utiliza rutinariamente en histopatologa para
analizar diferentes tejidos del organismo,
incluyendo cortes de piel. Sin embargo, esta
tcnica no permite apreciar elementos
como fibras elsticas o mastocitos, ni
diferencia entre pigmento melnico y
hemosiderina, de modo que obliga a
recurrir a tinciones secundarias o especiales

Durante el procesamiento del tejido previo

a la reaccin histoqumica, como la fijacin
o la inclusin, hay que evitar daar a la
molcula que queremos detectar porque
de otra manera resultara en falsos
negativos, es decir, no tener tincin cuando
en realidad la molcula de inters s est
presente en el tejido, aunque deteriorada.

TCNICA DEL PAS (cido

Perydico Schiff)

La tcnica de Schiff, es una tincin que se usa

comnmente en Histoqumica. Utiliza PAS, cido
perydico de Schiff, es un colorante incoloro
pero que se torna rojo estable al contacto con
los grupos aldehdos.

La tcnica de PAS se utiliza en los preparados para

microscopa ptica, permitiendo la tincin de
componentes celulares que contienen hidratos de
carbono, por ejemplo algunas membranas celulares,
clulas caliciformes en la mucosa del intestino, fibras
reticulares que estn rodeados por hidratos de carbono,
etc.

TCNICA DE TINCIN:

Desparafinar
e hidratar
(xilol y
decrecientes
alcoholes)
Deshidratar,
aclarar y
montaje.

cido
perydico
0.5 % 5 min.

Lavar en
agua
corriente.

Lavar en
agua .

Aclarar en 3
baos de
agua
sulfurosa 2
min. Cada
uno.

Reactivo de
Schiff 15- 30
min.

TINCIN DE GRAM MODIFICADA BROWN- BRENN

Es un tipo de tincin que se

utiliza para demostrar gramnegativas y gram-positivos en el
tejido

Cristal Violeta
al 1%

Lugol

Acetona

Fucsina
bsica al 0,25

cido Pcrico
Acetona

TCNICA:
Desparafinar e hidratar
al agua destilada

Tincin con Fucsina

bsica durante 3
minutos.

Lavar en agua corriente,

y secar levemente la
muestra.

Tincin de Cristal Violeta

por 1 minuto

Lavar en agua corriente

Pasar rpidament e por 2

baos de acet ona.

Lavar en agua corriente

Decolorar con alcoholAcetona (saca el

exceso del colorante
Cristal Violeta)

Pasar a la mezcla de
cido Pcrico solucin
acetona al 0,1% hasta
que aparezca un color
rosado-amarillo en la
muestra.

Aplicar lugol por 1

minuto

Lavar agua corriente

Pasar por 2 cambios de

acetona

RESULTADOS
Bacterias Gram positivas : azul
Bacterias Gram negativas: rojo
Ncleos: rojo
Fondo: Amarillo

TINCIN DE ZIEHL-NEELSEN

es una tcnica de tincin

diferencial rpida y
econmica, usada para la
identificacin de bacterias
cido-alcohol resistentes
(BAAR) en cortes de tejido
en parafina.

Fucsina fenicada:
0,5 g .fucsina bsica
50 ml agua destilada
5 ml etanol absoluto
28,5 g.. cristales de fenol
derretidos

Alcohol cido 1%:

Acido Clorhdrico1ml.

Hemat oxilina
Acido peridico al 5 %

Alcohol ABS99ml.

Tcnica:

Desparafinar e
hidratar los
cortes

cido peridico
5%, 10 min

Lav ar con agua

destilada

Fucsina
fenicada, 15 min

Decolorar en
alcohol cido al
50%

Lav ar con agua

destilada

Hematoxilina, 10
min

Carbonato de
litio, azulamiento

Deshidratar,
aclarar y montar
preparaciones

Resultados

BAAR: rojo.
Ncleos: azul
semiamarillo.

TCNICA DE GRIMELIUS

Se utilizan principalmente
para la identificacin de las
clulas neuroendocrinas y
sus tumores, tambin para la
demostracin de fibras de
reticulina, melanina y calcio.

Impregnacin:

Reduccin:

Solucin de Plata 1%:

Nitrato de Plata al 1%...4ml.
Buffer de Acetato (0.2mol)10ml.
Agua Bidestilada86ml.

Solucin de Hidroquinona.
Hidroquinona1gr.
Sulfato de Sodio5gr.
Agua Bidestilada100ml.

Tcnica:

1.-Desparafinar
hidratar.

2.-Solucin de
Plata 58
a 60C3Hrs.

5.-Lavar en
Agua.

4.-Solucin de
Hidroquinona
40
a 45C1:30Hrs.

3.-Lavar en
Agua.

6.-Deshidratar,
Aclarar y
Montar.

Resultados:

Grnulos Argirofilos
(formaciones de
proteina ) pardo,
Dorado o Negros..

TECNICA DEL ROJO CONGO

Es considerada como la
tcnica ms fiable y prctica
para detectar amiloide y
tambin se usa para teir
preparaciones microscpicas,
especialmente en tinciones
para el citoplasma y
los eritrocitos

Resultados:
El amiloide se tie en rojo
claro, y brilla con luz
polarizada.

Tcnica:

1.- Cortes por

congelacin 10
micras.

2.- Colocarlos en
solucin de Rojo
congo al 1% en
agua,- 30 min.

3.- Poner en
carbonato de Litio (a
saturacin en agua)--15 seg.

4.- Lavar en alcohol

de 80, hasta que no
arrastre mas
colorante.

5.- Lavar en agua

corriente 15 min.

6.- Teir con

hematoxilina.

7.- Lavar en agua,

deshidratar, aclarar
y montar.

TINCIN DE GOMORI
Demuestran tanto
las fibras
reticulares como
material de la
membrana basal.

Distinguir neoplasias
epiteliales de no
epiteliales, diversas
neoplasias
mesenquimales de
otras, y carcinoma in
situ.

Tinciones
de
retculo

Las membranas
basales se compone
principalmente de
colgeno tipo IV y
laminina.

Consisten en
fibras muy finas
de colgeno tipo
III, muy
extendidas en el
tejido conectivo.

Se trata de una tcnica de impregnacin argntica que utiliza como base fuerte el
hidrxido potsico y como agente reductor el formol.
1- Fijacin: formalina al 10%.
2- Cortes: en parafina, congelacin o en celoidina. 2 - 4

TCNICA
XILENO: 2x10min

ALCOHOL AL
100%: 2x5min

ALCOHOL AL 96%:
2x5min

LAVAR CON
AGUA CORRIENTE

LAVAR CON
AGUA DESTILADA

ACIDO OXALICO
AL 5%: Hasta que
se decolore

AGUA DESTILADA:
5min

PERMANGANATO
POTASICO AL 1%:
2min

ALUMBRE FERRICO
AMONIO AL 2%:
2min

AGUA DESTILADA:
5min

SOLUCION DE
PLATA
AMONIACAL:
3min

LAVAR CON
AGUA DESTILADA
RAPIDAMENTE

FORMOL AL
10%: 3min

LAVAR CON
AGUA
DESTILADA

CLORURO DE
ORO AL 1/500:
10min

LAVAR CON
AGUA
DESTILADA

HIPOSULFITO
SODICO AL
5%: 1min

LAVAR CON
AGUA
DESTILADA

PASAR POR
AGUA
CORRIENTE

ALCOHOL AL
96%: 2x5min

ALCOHOL AL
100%: 2x5min

XILENO Y
MONTAR

RESULTADOS:
Fibras reticulares
Negro
Fibras colgenas
Amarillento

Tincin tricrmica de
Masson
Se utilizan en combinacin con
varios colorantes aninicos

NCLEO

CITOPLASMA

Evaluacin del
tipo y cantidad
de material
extracelular

COLGENO

COMPONENTES:

Xileno

Etanol de
50, 70,
80, 90,
96 y 100

Hematoxil
ina frrica
de
Weigert

Acido
fosfomolidb
ico al 5%

Agua
destilada

Fucsina
escarlata

Verde
luz

Agua
corriente

TCNICA
2x10 min en
xileno para
desparafinar

5 min en
agua
destilada

5 min en
Hematoxilina
frrica de Weigert
(10 min si el
colorante lleva ms
de 5 das hecho)

2x10 min
en etanol
100

10 min
en etanol
50

5 min en agua
corriente para
diferenciacin.

10 min
en etanol
96

10 min
en etanol
80

3 min lavado
en agua
destilada

5 min en
fucsinaescarlata.

3 min de
diferenciacin
con cido
actico al 1% en
agua destilada

Deshidratado
rpido, unos
segundos, en
etanol de
graduacin
creciente: 80, 96
y 100

2 min
lavado en
agua
destilada

Unos
segundos en
agua
destilada.

2x10 min
en xileno

15 min en
cido
fosfomolbdic
o al 5% en
agua
destilada.

10 min en
verde luz al 2
% (puede ser
sustituido por
azul de
anilina).

Montaje

RESULTADOS:
Colgeno: verde
azulado.
Msculo: rojo,
marrn.
Citoplasma: rosado.
Ncleos: negro.
Citoplasma: rosado.

TINCIONES PARA MUCINA

La mucina es el trmino tradicional utilizado para un
gran grupo de macromolculas que contienen un grupo
acido, que se divide en dos categoras principales:

Glicoprotenas: unido a la
membrana o secretada
compuestos por :

Un grupo de
protenas

Un cido silico
que contiene
restos de
carbohidratos

Glicosaminoglicanos
del estroma que
contienen:
Acido
hialurnico que
puede ser
tambin
sulfatado.

AZUL DE ALCIANO

AZUL DE ALCIANO
Es un tinte bsico y
por lo tanto tiene
El Alcian Blue es un
colorante soluble en una afinidad por los
tejidos que
agua que deriva de
contienen grupos
su color azul del
aninicos tales como
cobre en las
mucinas con cido y
molculas.
otros carbohidratos
cidos.

Hay diferentes tipos

de PH que colorean
selectivamente
diferentes tipos de
mucinas cidas. El
Alcian Blue puede
ser combinado con
la tcnica de PAS
para demostracin
de mucinas neutrales
y cidas.

PREPARACIN
cido
Actico
Glaciar: 3
CC

Alcian Blue:
1g

Agua
Destilada :
97 CC

AZUL DE ALCIANO

PROCEDMIENTO:
Fijacin en
alcohol 96

lavado en agua
corriente

Pasar por cido

al 1% durante 5
Min

Deshidratar
(Alcohol 96 ,
100 , 100/

Lavado en agua
corriente durante
1 min

Teir con
Hematoxilina
durante 1 min

Aclaramiento :
Xilol1

Aclaramiento :
Xilol2

Montar con
blsamo.

Solucin de
Alcian Blue
(filtrado) durante
30 min

Lavado en agua
corriente

NCLEOS
AZULES

MUCINA
S

TINCIN DE GIEMSA
Tcnica muy til para la demostracin de
varios elementos hematolinfoides
(incluyendo mastocitos) y microorganismos.
El colorante de Giemsa tambin
da excelentes resultados para la
tincin rutinaria de frotes
sanguneos.
Debe fijarse primero
la muestra con
metanol absoluto por
un tiempo mnimo de
tres minutos

Tiempo de
coloracin podr ser
de 10 o 20 minutos

El colorante en
solucin nunca
se utiliza de
manera directa
solucin
amortiguadora en
una proporcin de
1:10 o 1:20

PREPARACIN
Polvo de
Giemsa azur
E.M: 3.8 gr

Glicerina
caliente :
2.50 ml

Metanol:
250 ml

GIEMSA

PROCEDMIENTO: (extendidos
citolgicos)
Coloca el reactivo de
Llevar al agua los cortes
histolgicos

giemsa azur por 4-5

minutos dependiendo
de la caducidad del
reactivo.

Secar al ambiente

Lavar en agua corriente

Colocar en xilol por

unos segundos

Montar

Ncleos
color
violeta

Citoplas
ma color
azul

TINCIN PARA FIBRAS

ELSTICAS
Las tcnicas tipo Weiger son bastantes especficas para la
elastina, y son consideradas por muchos como el mtodo de
eleccin para la demostracin de estas fibras
extracelulares.
Sim embargo la tincin de Gieson
Verthoeff-van (VVG) es la ms
popular porque es rpida
Ambas tcnicas se
suelen establecer
en el contexto
tricrmico.

Ncleos celulares
se tien de marrn
a negro

Se esbozan las
fibras elsticas
con un fuerte
color negro.
El colgeno de rosa
a rojo y el musculo
y el citoplasma de
amarilla.

PREPARACIN
Hematoxilina
alcohlica

Cloruro frrico
al 10 %:

Yoduro
potsico al 10
%:

Solucin de
Picrofucsina

Hematoxilina ------------------------------------10 gr.

Alcohol96 -------------------------------------100 ml
Cloruro frrico ----------------------------------10 gr.
Agua destilada ----------------------------------100 ml

Yoduro potsico --------------------------------10 gr.

Agua destilada ----------------------------------100 ml

Fucsina cida al 1 % ----------------------------1.3 ml

-cido pcrico a saturacin ---------------------- 9.7 ml

PROCEDMIENTO
Hidratar

Deshidratar
con alcohol al
50%

Aclarar con
xilol

Hematoxilina
de Verhieff por
30 minutos

Picrofucsina
una pasada

Montar

Lavar

Cloruro
frrico al 1%
una pasada

Colgeno

Citoplas
ma