Fundamentos de microbiologa.
Resumen
En la industria es necesario que se utilicen de procesos biolgicos dados por
microorganismos y donde se empleen biomolculas de gran inters. En la prctica se realiz
la extraccin de ADN+ARN de clula vegetal de una cebolla, lo cual se permiti entender los
procedimientos para su debida obtencin, observndose una interfaz en forma de burbuja
incoloras insolubles en etanol. Luego se caracterizaron dos tipos de microorganismos como
E. Coli y Saccharomyces Cerevisiae segn su estructura en la pared celular por medio de la
coloracin de Gram donde se determin que una es Gram positiva y la otra Gram negativa,
respectivamente. Por ltimo, se realizaron dos siembras por agotamiento con los
microorganismos anteriormente mencionados y dos siembras masivas con saliva humana,
cada una en agar nutritivo.
Objetivos
o Conocer el fundamento y los procedimientos requeridos para el aislamiento de los
cidos nucleicos (ADN +ARN) del tejido vegetal de una cebolla.
o Realizar una coloracin de Gram de un cultivo bacteriano y de hongos en medio
slido para determinar su morfologa.
o Realizar una siembra por diferentes tcnicas.
1. Introduccin
La aplicacin de procedimientos con el fin de poner al descubierto las molculas de ADN
para este caso de una cebolla y reconocer la importancia de los procesos de extraccin y
aislamiento como parte esencial en la descripcin del genoma, representan el punto de
partida para numerosas aplicaciones en el campo de la investigacin y en la industria en la
elaboracin de nuevos productos y en la innovacin. Tcnicas sencillas como la extraccin la
cual comprende el rompimiento mecnico de tejido, la degradacin de las membranas
lipdicas con el uso de detergentes, filtracin, y principios de solubilidad permiten hacer un
acercamiento a la informacin contenida en las clulas y de esta forma determinar
caractersticas como tamao, forma, funcin entre otras.
Por otro lado, la biodiversidad requiere de tcnicas de identificacin y caracterizacin que
permiten hacer la distincin en cuanto a gnero y especie de microorganismos y de esta
manera conocer su morfologa, metabolismo entre otras propiedades que puedan ser
aprovechadas en diferentes campos y finalidades.
Siembra por estras: Este mtodo de siembra se realiza sobre la superficie de los medios de
cultivo slidos distribuidos en placas de "Petry" o en tubos de ensayo solidificados en forma
de cua. (Slam)
Siembra masiva: Cuando se desea realizar una siembra masiva se puede utilizar la esptula
de Driglaski. En este caso la gota de muestra liquida se esparce con la esptula por toda la
superficie del medio de cultivo slido imprimiendo un movimiento en espiral. La siembra
masiva tambin se puede realizar con un hisopo grueso embebido de un cultivo lquido,
procediendo a su deslizamiento sobre toda la superficie de una placa de agar. [3]
Con independencia del tipo de medio y el mtodo de siembra a emplear sta debe realizarse
en las proximidades de la llama del mechero y a que el calor emanado reduce el nmero de
microorganismos presentes en sus inmediaciones, lo cual es utilizado como un recurso a favor
del proceder asptico.
2. Resultados y anlisis
2.1 Extraccin de ADN
El uso del detergente en solucin y la sal disuelven la grasa, la cual es el componente
principal de la membrana plasmtica y nuclear, al romperse las membranas se libera el ADN
hacia el exterior. A su vez la mezcla de sal y detergente disminuyen la solubilidad de las
protenas, desnaturalizndolas ocasionando la precipitacin y la separacin de las molculas
de ADN; adems, la adiccin de calor contribuye en la desnaturalizacin de protenas en
especial las adenasas, las cuales podran degradar el material gentico. El bao con hielo es
indispensable puesto que impide el dao de los cidos nucleicos por causa del aumento de
la temperatura. [4]
Figura 1. Extraccin de
ADN
Figura 3. E. Coli
Figura 2. Levadura
Saccharomyces cerevisiae
Muestra
Caja de Petri 1
E-Coli en agar
nutritivo-Siembra
por estra
Caja de Petri 2
Levadura en agar
nutritivo-Siembra
por estra
Caja de Petri 3
Saliva en agar
nutritivo-Siembra
masiva
Resultados
Se observa una coloracin
blanca sobre superficie del
agar nutritivo en la caja de
Petri, en donde se observa
agotamiento
del
microorganismo
en
cada
terminacin. La forma de la
colonia es granular y su
margen es lisa.
Imagen
Caja de Petri 4
Saliva en agar
nutritivo-Siembra
masiva
Conclusiones
Referencias
[1] H. Curtis , S. Barnes y A. Schnek, Biologia: conceptos y principios, Septima ed., Mxico:
panamericana S.A., 2008, p. Capitulo 9.
[2] E. Cavallini, M. d. m. Gamboa , F. Chavarria y J. Garcia, Bacteriologa general, San Jos:
San Jose costa rica: Editorial de la universidad de costa rica , 2005.
[3] J. Gonzales Alfaro, BVS Cuba, 22 Junio 2004. [En lnea]. Available:
http://gsdl.bvs.sld.cu/cgi-bin/library?e=d-00000-00---off-0preclini--00-0----0-10-0---0--0direct-10---4-------0-1l--11-1l-50---20-about---00-0-1-00-0-0-11-1-0000&a=d&cl=CL1&d=HASH01ebc63ab80c0bbb5a182dab.20.4. [ltimo acceso: 08 Febrero
2016].
[4] Newsletter Microbial, Microbial Systems, 08 Febrero 2016. [En lnea]. Available:
http://www.microbial-systems.com/web/docs/Newsletter_Microbial_03.pdf.
[5] S. Quesada Mora, Manual de experimentos de laboratorio para bioqumica, Segunda ed.,
San Jos: EUNED, 2007, pp. 53-56.
[6] t. y. salud, actualidad en ciencia, salud, Biotecnologa y ambiente, 2014. [En lnea].
Available: http://tecnocienciaysalud.com/insulina. [ltimo acceso: 08 Febrero 2016].
[7] R. Vizuate, Universidad latina de Panam, 2012. [En lnea]. Available:
http://laboratoriodemicrobiologia.weebly.com/tincioacuten-de-gram--tincioacutendiferencial.html. [ltimo acceso: 08 Febrero 2016].
[8] M.
Pirez
y
M.
Mota
,
CEFA,
2008.
[En
lnea].
Available:
http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/MorfologiayEstructuraBacteriana.pdf. [ltimo acceso:
08 Febrero 2016].
[9] A. f. Rios y D. d. Mora , Scrib, 2014. [En lnea]. Available:
http://es.scribd.com/doc/91839312/DIFERENCIACION-DE-CRECIMIENTO-BACTERIANOPOR-SIEMBRA-EN-ESTRIA#scribd. [ltimo acceso: 08 Febrero 2016].