RESUMEN
El cncer es una patologa con prevalencia en alza y cuyo
origen se encuentra en el DNA, ms especficamente en las
alteraciones que lo afectan, y que finalmente se traducen en
la desregulacin del ciclo celular y de los mecanismos celulares reparadores del DNA. La desregulacin del ciclo celular se
traduce finalmente en la formacin de tumores, que pueden
invadir tejidos u rganos distantes, provocando la muerte del
paciente. Conocer y entender las alteraciones y/o daos que
puede sufrir el DNA permite comprender el proceso de carcinognesis a escala molecular, pero tambin a escala humana.
Esta revisin pretende actualizar y/o clarificar algunos conceptos moleculares bsicos del cncer, cmo stos pueden
estudiarse en un laboratorio de biologa molecular y cmo
pueden ayudar a mejorar la prctica clnica con un paciente
oncolgico.
Palabras clave: Cncer, DNA, gen, mutacin, polimorfismo,
PCR, anlisis gentico.
SUMMARY
Cancer prevalence is rising worldwide. The main pathogenic
events of this devastating disease are alterations in the
DNA, which eventually result in the dysregulation of
both the cell cycle and DNA repair mechanisms. This
dysregulation of the cell cycle results in the formation of
a tumor, from which cancer cells disseminate to distant
organs, finally bringing about patient death. Knowledge
and understanding of the nature of the DNA alterations is
essential to the comprehension of the carcinogenic process
at both a molecular and human scale. This review aims to
update and clarify some basic molecular concepts in cancer,
INTRODUCCIN
La alta prevalencia del cncer a nivel mundial y la gravedad de sus implicancias lo han convierten la ms icnica de las patologas humanas.
Es as como prcticamente cualquier persona tiene una nocin ms o
menos acertada de qu es el cncer. La Organizacin Mundial de la
Salud define al cncer como un proceso de crecimiento y diseminacin
incontrolado de clulas que puede aparecer prcticamente en cualquier
lugar del cuerpo. El tumor suele invadir el tejido circundante y puede
provocar metstasis en puntos distantes del organismo. Sin embargo,
lo que mayoritariamente no se sabe es que el cncer podra tambin
definirse como una enfermedad del DNA, y que como consecuencia del
dao en el DNA se afecta la proliferacin celular con todas las consecuencias frecuentemente conocidas.
El DNA es otro cono de las ciencias biolgicas, con una estructura tridimensional de doble hlice fcilmente reconocible e instalada en el subconsciente colectivo. Destaca adems por ser la molcula codificadora
de las instrucciones genticas usadas en el desarrollo y funcionamiento
de todos los organismos vivos conocidos y algunos virus. Adems, es la
molcula responsable de la transmisin hereditaria. Sin embargo, poco
se sabe sobre las alteraciones que puede sufrir el DNA, de sus repercusiones, o de los mecanismos que utiliza el organismo para defenderse
o reparar los daos a los que estamos habitualmente expuestos. Entendiendo los tipos de alteraciones y/o daos que puede sufrir el DNA es
posible comprender el proceso de carcinognesis desde un punto de
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La regin codificante a su vez esta dividida funcionalmente en 2 tipos de segmentos; (i) los exones y (ii) los intrones. Los exones e intrones
se intercalan ordenadamente como vagones de un ferrocarril. Los exones contienen la informacin gentica cifrada mientras que los intrones
no. Los intrones deben ser removidos, dejando nicamente a los exones
alineados y ordenados. Este proceso se conoce como corte y empalme
o splicing y genera una secuencia de RNA especfica, ms corta que
su contraparte de DNA.
RNA
DNA
ESTRUCTURA Y FUNCIN DE UN GEN.
Actualmente se define como gen a un segmento de DNA que codifica
para cualquier molcula con actividad biolgica3, no slo protenas.
As, encontramos genes que codifican para ribozimas (fragmentos
de RNA que cortan y destruyen a otro RNA), RNA de transferencia
(tRNA) necesarios para la sntesis de protenas, micro-RNA (miRNA)
o RNA con actividad reguladora de la expresin gnica, entre otras,
siendo las protenas el producto principal (en adelante generalizaremos como protenas al producto de la expresin gnica). Funcionalmente, los genes estn divididos en 2 regiones: (i) la regin codificante y (ii) la regin promotora. Se llama regin codificante al
segmento de DNA que contiene la informacin que dar origen a una
protena. Por otro lado, la regin promotora (o promotor) es un
segmento de DNA localizado inmediatamente adelante o rio arriba
de la regin codificante, y que posee una funcin reguladora de la
expresin gnica. El promotor es el responsable de que no todos los
genes se expresen en todas las clulas del cuerpo. As, la insulina se
expresa slo en las clulas beta del pncreas y no en neuronas o cardiomiocitos. En otras palabras, puede visualizarse al promotor como
un interruptor gentico que determina la expresin especfica de una
protena en un tejido particular, o en un ciclo circadiano da/noche, o
en respuesta a un estmulo especfico.
Traduccin
Protena
Modificaciones posteriores
Replicacin
Replicacin
Transcripcin
Traduccin
RNA
DNA
Replicacin
Protena
Transcripcin
inversa
Concepto propuesto inicialmente en 1958 por Francis Crick, postulndose
nuevamente en un artculo de la revista Nature publicado en 1970, que ilustra un
mecanismo unidireccional de transmisin y expresin de la herencia, desde el DNA
hasta las protenas, pasando por el RNA. El dogma inicial postulaba que slo el ADN
puede duplicarse y, por tanto, reproducirse y transmitir la informacin gentica a la
descendencia. Actualmente se ha ampliado el dogma debido al descubrimiento
de la transcriptasa inversa, enzima capaz de transformar el RNA a DNA, presente
en retrovirus, o los priones, protenas capaces de replicarse en ausencia de DNA,
o de las ribozimas, RNAs con propiedades autocatalticas capaces de modificarse
y duplicarse a s mismos en ausencia de protena y ADN. Otra situacin que rompe
con la secuencia definida por el dogma es la posibilidad de obtener protena in vitro,
en un sistema libre de clulas y en ausencia de ARN, por lectura directa del ADN
mediante ribosomas, en presencia de neomicina.
1
Se llama transcripcin al proceso de paso de DNA a RNA. Tanto el DNA como el RNA estn compuestos por las mismas unidades bsicas, los nucletidos adenina (A), timina (T),
guanina (G) y citosina (C). Haciendo una analoga literaria es posible imaginar que el DNA y RNA hablan un mismo idioma, el idioma de los nucletidos. Cobra sentido entonces
el hecho que el nombre del proceso de paso de DNA a RNA se llame transcripcin, ya que solo se esta transcribiendo o copiando un mensaje en el mismo idioma.
2
Se llama traduccin al proceso de paso de RNA mensajero (o mRNA) a una protena. A diferencia del DNA y RNA, las protenas estn compuestas por unidades bsicas distintas
a los nucletidos, los aminocidos. Continuando con la analoga anterior, en el paso del RNA a protenas existe un cambio de idioma, traduciendo el idioma de los nucletidos
al idioma de los aminocidos.
3
Inicialmente se aceptaba el axioma de Un gen, una protena haciendo referencia a que cada protena de nuestro cuerpo estaba codificada por su nico y exclusivo gen. El
genoma humano esta compuesto por aprox. 27000 genes. Sin embargo, poseemos mucho ms de 27000 protenas distintas. En la actualidad se sabe que un gen puede dar origen
a ms de una protena mediante un proceso llamado corte y empalme alternativo o splicing alternativo.
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[Biologa Molecular en oncologa: Lo que un clnico debiera saber - Dr. Gonzalo Encina S.]
no contienen secuencias codificantes). La regin intrnica inmediatamente colindante al exn contiene seales para el correcto splicing del
mRNA. Alteraciones en esta regin, aunque no alteran directamente la
codificacin de aminocidos, pueden producir la retencin total o parcial de un intrn, o la prdida total o parcial de un exn, cambiando la
naturaleza de la protena sintetizada.
La va de sealizacin de EGFR esta comnmente activada en varios tipos de cncer por la sobreexpresin del receptor de EGF. Normalmente la va se activa por unin de un
ligando al receptor de EGF, el cual se dimeriza y activa, transmitiendo y amplificando la seal hacia el interior de la clula hasta el ncleo donde se iniciar la expresin de un
sinnmero de genes que orquestarn una respuesta celular coordinada y regulada. Esta seal se transmite al ncleo celular a travs de una serie de protenas intermediarias que
traspasan una seal qumica (ej. fosforilacin) de una a otra, como una posta de relevos en atletismo o un efecto domin. Cuando una de las protenas intermediarias (como KRAS)
esta mutada y constantemente activada, la seal de activacin se enva al ncleo celular pese a no haber estimulo alguno en el receptor de EGF. Pacientes con mutaciones en KRAS
no sern buenos respondedores a terapias que busque bloquear el receptor de EGF ya que la va seguir activa por accin de la protena KRAS mutada.
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[Biologa Molecular en oncologa: Lo que un clnico debiera saber - Dr. Gonzalo Encina S.]
5
Los partidores son fragmentos cortos de DNA de hebra simple de aproximadamente 15 a 25 nucletidos de longitud, diseados especficamente para ser complementarios a la
secuencia gnica de inters segn las reglas de Watson y Crick donde A se une a T y C se une a G.
6
El sistema original usaba grandes fuentes con agua a distintas temperaturas en las cuales se sumergan manualmente los tubos de ensayo con la mezcla de reaccin, durante
varios ciclos.
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Esquema del proceso cclico de amplificacin de un fragmento de DNA especfico, por accin de la DNA polimerasa. Al subirse la temperatura de la reaccin se logra separar
las 2 hebras del DNA. Bajando la temperatura se logra la unin especfica al DNA blanco de unos pequeos fragmentos de DNA, llamados partidores o primers, diseados in
vitro para ser compatibles con regiones conocidas del gen que se desea estudiar. Esta unin permite el posicionamiento correcto de la polimerasa, la que comienza a replicar
la hebra molde usando nucletidos libres agregados a la mezcla de reaccin. Al cabo de 30 ciclos se habr logrado la generacin de ms de 2 mil millones de copias del
fragmento original, permitiendo tener una gran cantidad de DNA de inters replicado para la realizacin de diversos estudios, como la secuenciacin en busca de mutaciones.
Esquema adaptado de New England Biolabs.
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(A) El estudio de mutaciones somticas se realiza a partir del DNA extrado de una pieza tumoral. Es amplificado mediante PCR y estudiado por secuenciacin o PCR en tiempo
real, tcnica que incorpora partidores fluorescentes que permiten aumentar enormemente la sensibilidad y disminuir los tiempos de trabajo. (B) El estudio de mutaciones
de lnea germinal se realiza a partir del DNA extrado de una muestra de sangre del paciente. Se amplifica mediante PCR y se secuencia en busca de mutaciones, las que se
visualizan en un electroforetograma como el doble peak correspondiente al nucletido 73 de la secuencia mostrada.
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CONSEJERA GENTICA
Los avances cientficos y tecnolgicos han permitido el advenimiento
de sistemas de deteccin de diversos tipos de aberraciones genticas
y genmicas que permiten obtener resultados con una sensibilidad extraordinaria, a una velocidad inimaginada slo algunos aos atrs (ej.
sistemas de secuenciacin masiva, PCR en tiempo real, etc). Sin embargo, la cantidad y complejidad de los resultados obtenidos puede ser
abrumadora e incomprensible incluso para el cuerpo mdico y, ms importante an, para el paciente con cncer. Entender que una mutacin
puede predisponer al desarrollo de cncer, que pudo ser heredada (o no)
de uno de sus padres y que por lo tanto puede ser transmitida a su descendencia, es fundamental para desarrollar estrategias de prevencin
y/o de vigilancia activa, y de apoyo emocional. La consejera gentica
cobra un rol fundamental en el acercamiento de la brecha que existe
entre el mundo de la ciencia bsica y el paciente. Profesionales capacitados en consejera gentica son fundamentales para aclarar dudas y
conceptos en un paciente que ya debe lidiar con una carga emocional
fuerte relacionada a su enfermedad o a la de un familiar. Entender conceptos bsicos de biologa molecular del cncer ayuda a aclarar estos
conceptos que parecen oscuros y complejos, pero que en el fondo son
simples y disponer de ellos puede hacer una diferencia en el tratamiento
integral de un paciente oncolgico.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
561-3.
2. Lander, E.S., et al., Initial sequencing and analysis of the human genome.
Nature, 2001. 409(6822): p. 860-921.
3. Venter, J.C., et al., The sequence of the human genome. Science, 2001.
291(5507): p. 1304-51.
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