Pruebas de compatibilidad,

qu tcnica emplear?
XIV Jornadas de Medicina Transfusional

Dra. Carmen Buesa Garca

S Hematologa y Hemoterapia
Hospital Universitario Central de Asturias

Pruebas pretransfusionales
Objetivo: seleccionar para cada receptor los
componentes sanguneos adecuados de forma que una
vez transfundidos no produzcan una destruccin
clnicamente significativa de las clulas del receptor y
tengan una supervivencia ptima.
La parte ms importante del proceso es la correcta
identificacin del paciente, tanto al extraer la muestra
como al administrar el componente sanguneo.
Adems, se requiere la correcta realizacin de las
pruebas de compatibilidad.

Qu pruebas podemos hacer?

1. Estudio de grupos sanguneos: antgenos (AG)
y anticuerpos (AC)
2. Escrutinio de anticuerpos irregulares (EAI)
3. Pruebas cruzadas (PPCC)

ESTUDIO DE LOS GRUPOS SANGUNEOS

ANTGENOS: sustancias capaces de producir una
respuesta inmune especfica, formacin de un
anticuerpo

 Composicin de los antgenos:

Un solo tipo de

Molculas

molculas

compuestas

Protenas (Rh)

Glucolpidos (P1)

Glcidos (ABO)

Glicoprotenas (K)

cidos nucleicos

Lipoprotenas

Lpidos

Otros

 ANTICUERPOS:
protenas
plasmticas
formadas como respuesta a la entrada de
un antgeno.

Reaccin in vitro AG-AC:

Reaccin reversible
1 sensibilizacin de los hemates: el AC se fija a
los antgenos de la membrana del hemates
2 aglutinacin

1 Factores que afectan a la fase de sensibilizacin

AG

AC

No aglutinacin

AGH

Aglutinacin

2 Factores que afectan a la fase de aglutinacin

Intensidad inica del medio (potencial Z)
Diferencia de potencial entre el hemate con carga
negativa y rodeado de una nube de carga positiva y
el medio.

Cmo modificamos la reaccin AG-AC?

 Albmina:
Disminuye el potencial Z.
Permite que AC IgG unan hemates adyacentes

LISS (solucin de baja fuerza inica):

Disminuye la nube inica alrededor del hemate
Acorta tiempo de sensibilizacin
Se puede usar como lquido de suspensin de los
hemates

 Enzimas:
Los ms utilizados: ficina, bromelina, papana,
tripsina, neuraminidasa
Eliminan

cargas

negativas

disminuyendo

el

potencial Z
Algunas eliminan ciertos antgenos (ayuda en
identificacin de ACs)
Detectan anticuerpos no deseados
Requieren una manipulacin cuidadosa

MTODOS PARA OBSERVAR LA

AGLUTINACIN
Tcnicas en tubo
Aglutinacin en columna
Tcnicas en microplacas

Tcnicas en tubo
1. Hemates + suero/plasma
2. Incubacin
3. Centrifugacin

4. Lectura e interpretacin del resultado

Es la tcnica standard
VENTAJAS

DESVENTAJAS

Se pueden aadir aditivos La aglutinacin es inestable

para potenciar la reaccin:
LISS, enzimas, AGH
Permite la manipulacin

Requiere

manipulacin

lectura cuidadosa
Es visible la hemolisis

Utiliza

una

cantidad

importante de hemates y
suero

Aglutinacin en columna
La aglutinacin se produce en gel
Las columnas se presentan en tarjetas de 6 - 8
determinaciones
Existen gran variedad de tarjetas en el mercados
para realizar la mayor parte de las pruebas
inmunohematolgicas

 Equipos automticos o semi-automticos

Incubacin hemates + AC en la superficie del

gel. Las clulas aglutinadas no pueden pasar a
travs del gel tras la centrifugacin.

VENTAJAS

DESVENTAJAS

Utilizan aditivos (LISS,

EDTA) para aumentar la
sensibilizacin,
disminuyendo el tiempo de
incubacin

Precio del equipamiento

(equipos automticos o
semiautomticos)

La reaccin es
semipermanente y necesita
pequeas cantidades de
reactivo

Son muy sensibles y pueden

detectar anticuerpos que no
son clnicamente
significativos

Permite automatizacin

Otra tcnica en columna

Test de afinidad en columna
Hemates sensibilizados se unen a una matriz
inmunolgicamente activa: Protena G o A
(Staphyloccocus aureus), antiIgM y antiC3d.
Incubacin (AG-AC)
Centrifugacin en 3 fases
1hemates atraviesa el medio de alta densidad
que los separa del gel
2 y 3 hemates sensibilizados se unen a la matriz
de alta afinidad y quedan en la parte alta del gel

Microplacas
Permite automatizacin y se usan para grandes
series de muestras

 La aglutinacin se produce en los pocillos

Los reactivos estn unidos a la superficie de los
pocillos

CON CENTRIFUGACIN
Tipaje ABO-Rh:

Ensayos de adherencia en fase slida:

determinacin de AGs o de ACs

SIN CENTRIFUGACIN
Uso de hemates magnetizados

Qu tcnica es la mejor?
Mltiples estudios comparando las tres tcnicas
Mayor sensibilidad en columna y microplaca
(EAI)
Aumenta n de falsos positivos
No implica mayor seguridad en la transfusin, no est
claro si ACs detectados con algunas tcnicas van a
tener trascendencia in vivo
Aumenta trabajo en el laboratorio y retrasa la
transfusin PERO PERMITEN AUTOMATIZACIN

Automatizacin de las pruebas bsicas

Permiten analizar mayor nmero de muestras
Reducen trabajo manual
Mejoran la precisin
Utilizan mtodos estandarizados
Eliminan subjetividad en interpretacin de
resultados
Mnima manipulacin de las muestras
Trazabilidad

PRUEBAS SEROLOGICAS
DETERMINACIN DE GRUPO ABO y Rh
ESCRUTINIO DE ANTICUERPOS IRREGULARES
PRUEBAS CRUZADAS

 Determinacin del grupo ABO

Grupo directo/hemtico: presencia de antgenos
del grupo ABO
Grupo inverso/srico: presencia en el suero o
plasma de ACs frente a AGs del grupo ABO

 Escrutinio de anticuerpos irregulares (EAI)

Detectar

la

aloanticuerpos

presencia

en

inesperados

el

suero

dirigidos

de

contra

antgenos que no sean del grupo ABO.

Transfusiones previas, embarazo.

Se utilizan muestras de sangre con una composicin

antignica conocida: paneles de clulas distintas con
combinaciones de AGs.

 Composicin antignica del panel: D, C, c, E, e, Kell, k,

Lea, Leb, Jka, Jkb, Fya, Fyb, P1, M, N, S y s.

Efecto dosis: un AG que se presenta de forma

heterozigota, al poseer la mitad de dosis puede dar
negativo en el panel (E, Jka)

deben incluir al menos

una homozigota para Fya, Fyb, Jka, Jkb, D, c, S y s.

 Prueba cruzada
Objetivo: Demostrar in vitro que una sangre no va
a ser perjudicial in vivo para el paciente
Se realizaban en diferentes fases (salino, Coombs).
*

Estudios no han demostrado reacciones relevantes en caso de

transfusin con EAI () y PPCC (+) a posteriori

Recomendaciones de la AABB
1. EAI positivo: PPCC con AGH
2. EAI negativo: Salino rpido o PC electrnica

Prueba cruzada electrnica

 Requisitos para PC electrnica:

Pacientes que poseen dos determinaciones de grupo
ABO-Rh y en los que se ha demostrado la ausencia de
AAII en el suero
No pueden ser incluidos cuando:
x Muestra extrada antes de las 72 h previas
x No existen dos determinaciones del grupo ABO y Rh
x Se demuestra la presencia o historia anterior de AAII en
el suero
x Pacientes sometidos a trasplante de mdula sea y cuyo
grupo ha cambiado

Muchas gracias por vuestra atencin