TP X: ABSORCIN INTESTINAL DE GLUCOSA IN VITRO

Introduccin
El epitelio intestinal presenta transportadores para
monosacridos, necesarios para su absorcin hacia
la sangre.
Los transportadores son protenas de membrana que
interactan
con
cierta
especificidad
transportado. El
transportador para
denominado SGLT,

glucosa

con
y

el

substrato

galactosa

es

existiendo los subtipos 1 y 2. Se hallan en la membrana apical

del epitelio intestinal, mientras que en la basolateral se
presentan ATPasas de Na+/K+, que generan un
gradiente de Na+ desde la cara luminal a la basal. Este gradiente es necesario para el
transporte de glucosa,
conformando un mecanismo de cotransporte dependiente de energa.
La tcnica de los sacos evertidos (Wilson y Wiseman, 1954) permite estudiar el
transporte de substancias
a travs de la pared intestinal, identificando si la molcula se absorbe por mecanismos
activos o pasivos.
Se trata de evertir un segmento intestinal (de unos 3 cm de longitud), de modo que la
mucosa intestinal quede hacia el exterior, y hacer un saco mediante dos ligaduras. Los
sacos llenos de solucin conteniendo glucosa se incuban en la misma solucin bajo
aireacin continua. Una vez transcurrido el tiempo de
incubacin, se cuantifica la acumulacin de glucosa en
el compartimiento interno.

Objetivo
El objetivo consiste en evidenciar el transporte activo
de D-glucosa a travs de la pared intestinal. Para ello,
se incubarn los sacos a diferentes tiempos de 10, 20
y 30 minutos, en una solucin de 1 mM de D-glucosa presente tanto dentro como
fuera del saco. Dado que las dos soluciones son inicialmente idnticas, no hay
gradiente de concentracin de substrato. Una vez a transcurrido el tiempo de
incubacin se cuantificar la concentracin de monosacrido en el compartimento
interno.

PROCEDIMIENTO
Material necesario
-

Caja con hielo

Placa de Petri
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Material quirrgico: pinzas, tijeras, hilo quirrgico, aguja de crochet

Jeringa de 5 mL con aguja de punta roma

Vasos con suero fisiolgico mantenidos a 4C

Cronometro

Eppendorf rotulados

1. Soluciones de trabajo
a. Solucin de Srensen:

KH2PO4 (28,6 mM), K2HPO4 (118 mM), NaCl (1540 mM), MgSO 47 H2O (154 mM),
CaCl2 (109 mM).
b. Solucin de incubacin:

D-glucosa (100 mM) en solucin de Srensen (dilucin 1/100, D-glucosa final: 1

mM).
La solucin de incubacin alcanzar un pH fisiolgico (pH 7,4) y una osmolaridad de
320 mOsm/L.

2. Obtencin e incubacin de los sacos

Anestesiar la rata con un cctel de ketamina (90 mg/kg) y xilazina (10 mg/kg) por va
intraperitoneal, realizar incisin abdominal y extraer el intestino delgado (mejor la
mitad apical, incluyendo el yeyuno). Limpiarlo con una jeringa llena de suero
fisiolgico frio hasta extraer el contenido de la luz intestinal. Mantener en el suero
fisiolgico fro. Evertir el intestino, mediante una aguja de crochet introducida y fijada
al extremo curvado con una doble ligadura. Seguidamente se realiza la eversin
desplazando el tejido hacia el extremo ligado.
Para armar los sacos intestinales, se llena el tubo con solucin de incubacin mediante
jeringa de 5 ml y aguja de punta roma. Se ligan los extremos y se incuban a 37C
durante 10, 20 o 30 min.
Una vez transcurrido el tiempo de incubacin, se retiran los sacos y se secan en un
papel de filtro mojado con suero fisiolgico. Se los sujeta sobre un eppendorf y se
prctica una incisin para recoger el lquido. Luego se cuantifica la concentracin de
glucosa mediante una tcnica estndar.
Representar grficamente la concentracin de D-glucosa en los sacos en funcin del
tiempo de incubacin.
Preguntas
1. Cmo vara la concentracin de D-glucosa a lo largo del tiempo? A qu se debe
esta variacin?
2. La solucin de incubacin se prepara con la solucin de Srensen que contiene Na+
y Mg2+ Para qu son necesarios estos iones en el experimento?
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3. En un experimento de absorcin intestinal realizado en sacos evertidos, partiendo

de solucin de incubacin de glucosa 1 mM: a) se agreg ouabana en la solucin de
incubacin, b) se utiliz solucin de Srensen sin Na+. Hacer un grfico de la
concentracin de glucosa en funcin del tiempo.

Referencia:
The use of sacs of everted small intestine for the study of the transference of
substances from the mucosal to the serosal surface. Wilson TH, Wiseman GR J Physiol.
123, 116-25, 1954.

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