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SENAI - Curso de Tecnologia em

Processos Quimicos

Faculdade de Tecnologia SENAI Roberto Mange


Curso de Tecnologia em Processos Quimicos

Mtodos Cromatogrficos

FUNDAMENTOS DE
CROMATOGRAFIA
LQUIDA

Cromatografia

Planar
F.M. Lquida
C.Papel

 EDUARDO SANTOS LOUZADA

C.Camada
Delgada

Coluna
F.M. Gasosa
C. Gasosa

F.M. Lquida
CCC

CLAE

CCC
CCC-Cromatografia
em Coluna Clssica.
CLAE-Cromatografia Lquida de Alta Eficincia.
CLAE
1

CROMATOGRAFIA LQUIDA

CROMATOGRAFIA LQUIDA

Princpios de CLAE - HPLC

Princpios de CLAE HPLC

Inicialmente feita em coluna de vidro com


dimetros de 1 a 5 cm e comprimentos de 50 a
500cm.
Assegurar vazes razoveis, o dimetro das
partculas de fase estacionaria slida = 150 a 200um

Vazes muito baixas de


alguns dcimos de milmetro
por minutos e os tempos de
separao eram longos de
varias horas

CROMATOGRAFIA LQUIDA

CROMATOGRAFIA LQUIDA
Princpios de CLAE - HPLC

Princpios de CLAE HPLC

Cientistas perceberam que a eficincia da coluna


podia ser aumentada atravs da diminuio da
partcula da fase estacionaria

Acelerar o procedimento =
aplicao de bomba de vcuo
ou por bombeamento

1960 foi desenvolvida a tecnologia para produo


e uso de partculas de dimetro de 3 a 10um
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Analise Instrumental Prof Eduardo Louzada

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Processos Quimicos

CROMATOGRAFIA LQUIDA

CROMATOGRAFIA LQUIDA

Princpios de CLAE - HPLC

Princpios de CLAE - HPLC

Essa Tecnologia exigiu equipamentos sofisticados


operando a altas presses

ltimos 12 anos = desenvolvimento de vrios detectores


espectrofotomtricos que operam em comprimentos de
onda de at 190nm;

Surgiu o nome HPLC High Performance Liquid


Chromatography empregado para distinguir dos mtodos
bsicos

Houve um aumento na utilizao dos detectores por


fluorescncia, eletroqumico a o acoplamento com o
espectrmetro de massa;

CROMATOGRAFIA LQUIDA

CROMATOGRAFIA LQUIDA

Princpios de CLAE HPLC

Princpios de CLAE HPLC

Conhecer suas vantagens, limitaes,


componentes e os critrios de escolha entre as
opes de equipamentos uma obrigao dos
profissionais de laboratrios qumicos,
farmacuticos, bioqumicos e outros

Vrios nomes tm sido utilizados para denominar


esta tcnica de cromatografia liquida: alta
velocidade, alta presso, alto desempenho, alta
resoluo e alta eficincia o nome mais utilizado
CLAE

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CROMATOGRAFIA LQUIDA

CROMATOGRAFIA LQUIDA

Princpios de CLAE - HPLC

Princpios de CLAE - HPLC

Instrumentos muito sofisticados = totalmente


automatizados
Tendo a capacidade de realizar separaes e anlises
quantitativas de uma grande quantidade de compostos
presentes em vrios tipos de amostras, em escala de tempo
de poucos minutos, com alta resoluo, eficincia e
sensibilidade
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Atualmente CLAE ainda objeto de novos avanos que


em um futuro seu emprego ser ainda mais amplo.
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CROMATOGRAFIA LQUIDA

Mtodos Cromatogrficos
Cromatografia

CROMATOGRAFIA LQUIDA CLSSICA


Planar
F.M. Lquida
C.Papel

C.Camada
Delgada

Coluna
F.M. Gasosa
C. Gasosa

F.M. Lquida
CCC

CLAE

CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA


EFICINCIA

CCC
CCC-Cromatografia
em Coluna Clssica.
CLAE-Cromatografia Lquida de Alta Eficincia.
CLAE
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CROMATOGRAFIA
LQUIDA

CROMATOGRAFIA LQUIDA
CROMATOGRAFIA LQUIDA CLSSICA
CROMATOGRAFIA EM COLUNA

CROMATOGRAFIA EM
COLUNA

CROMATOGRAFIA DE ADSORO:
CROMATOGRAFIA LQUIDA-SLIDA

 O slido empacotado dentro


da coluna de vidro e a fase
mvel, que um solvente
composto de um ou mais lquidos
orgnicos, vai eluir os
componentes da mistura atravs
da coluna.

A fase estacionria um slido de superfcie ativa,


que pode ser: slica-gel, alumina ou celulose.
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CROMATOGRAFIA LQUIDA
CLSSICA
ETAPA 1 : Enchimento da coluna, deve ser repetido para cada
separao, representando um disperdcio de material e mo de obra
ETAPA 2 : Aplicao da amostra
ETAPA 3 : Vazo do eluente na coluna promovida pela ao da
gravidade e as fraes individuais de amostra so coletadas
manualmente ou atravs de um coletor de fraes, gastando varias
horas

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ETAPA 4 : Deteco e Quantificao so realizadas por anlise


manual das fraes individualmente por espectrofotometria ou
anlise qumica
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Cromatografia

Planar
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C.Papel

C.Camada
Delgada

Coluna
F.M. Gasosa
C. Gasosa

F.M. Lquida
CCC

CLAE

CCC
CCC-Cromatografia
em Coluna Clssica.
CLAE-Cromatografia Lquida de Alta Eficincia.
CLAE
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CROMATOGRAFIA LQUIDA

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CROMATOGRAFIA LQUIDA

Tcnicas da CLAE HPLC

CLAE - HPLC
Coluna fechada reaproveitvel
Sistemas de bombas para que a
fase mvel consiga migrar a uma
velocidade razovel atravs da
coluna
Injeo precisa da amostra usando
microseringa ou vlvula de injeo
Vrios tipos de detectores
proporcionando um registro continuo
da composio do eluente

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CROMATOGRAFIA LQUIDA

CROMATOGRAFIA LQUIDA

Vantagens da CLAE HPLC

Limitaes da CLAE HPLC

Menor tempo de anlise

Alto Custo da instrumentao

Alta resoluo ( misturas complexas)

Alto custo de Operao

Resultados Quantitativos

Falta de detector universal sensvel

Boa Sensibilidade

Necessidade de Experincia no seu manuseio

Versatilidade ( Diferentes Amostra)


Automatizao

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CROMATOGRAFIA LQUIDA

CROMATOGRAFIA LQUIDA

TERMINOLOGIA E
INTERPRETAO DOS
CROMATOGRAMAS

O VOLUME DA COLUNA = Vo
Injetor

Coluna

Detector

Vo = Volume de solvente (mL) contido entre o injetor e o detector


Vo = Volume mnimo que a bomba tem que bombear para que
qualquer componente injetado chegue at o detector
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CROMATOGRAFIA LQUIDA

Onde :

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CROMATOGRAFIA LQUIDA
Vp

Equao do Vo
0,65 . . R2 . Comprimento
Fluxo

Reteno K
Grau de interao da
amostra com a coluna e
fase mvel
K = (Vp Vo)

= 3,14 ; R = Raio da coluna ( cm )

Vo

Vo

Comprimento da coluna (cm)


Fluxo da fase Mvel ( mL/Min)

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CROMATOGRAFIA LQUIDA

CROMATOGRAFIA LQUIDA

Reteno K

Seletividade

Reteno afetada/controlada por:

A capacidade do sistema qumico (Coluna e fase mvel )


de diferenciar entre os componentes de interesse

Polaridade da fase mvel; isto pela % dos


componentes da fase

Controlada por:
Caractersticas qumicas da fase mvel
Caractersticas qumicas da fase Estacionria

Polaridade da fase estacionria

pH da fase mvel, quando se trata de compostos ionizados


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CROMATOGRAFIA LQUIDA

CROMATOGRAFIA LQUIDA

Seletividade

V1

Eficincia N

V2

= K2/K1 =
(V2-Vo)/(V1/Vo)
Vo

Diluio da banda de um
composto sofrida ao
passar pelo sistema
(alargamento do pico)
K e bons, falta o N

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Fatores que influenciam N

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CROMATOGRAFIA LQUIDA

Diferena no comprimento de percurso

Eficincia

Pico Injetado

Fluxo da
fase Mvel

N = Numero de
pratos tericos
uma medida de
quanto o sistema
est diluindo a
banda do
componente
durante a corrida

RECHEIO

Alargamento
do pico (banda)
33

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CROMATOGRAFIA LQUIDA

CROMATOGRAFIA LQUIDA

Eficincia N

Assimetria do Pico

A eficincia afetada /controlada por fatores fsicos como:


Temperatura
Forma e tamanho da partcula de recheio
Comprimento e dimetro da coluna
Fluxo
Volume e massa de amostra injetada

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CROMATOGRAFIA LQUIDA
R= V2 V1
(W1 + W2)/2

V1

V2

CROMATOGRAFIA LQUIDA

Resoluo

Equao Geral da Resoluo

Indica o grau de
separao entre
duas substncias
em uma mistura

R = ( K ) . ( 1 ) . ( N )
K + 1

4
Capacidade

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Seletividade

Eficincia
38

CROMATOGRAFIA LQUIDA
Parmetros experimentais que
influenciam:
Resoluo, Eficincia e Seletividade

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CROMATOGRAFIA LQUIDA

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CROMATOGRAFIA LQUIDA

Equipamento HPLC

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CROMATOGRAFIA LQUIDA

CROMATOGRAFIA LQUIDA

43

44

Equipamento HPLC

Equipamento HPLC

45

shimadzu

Equipamento HPLC

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CROMATOGRAFIA
VARIAN

LQUIDA

A FASE MVEL

Agilent

IMPORTNCIA E PREPARAO

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Merck

50

Waters

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CROMATOGRAFIA LQUIDA

A Importncia da Fase Mvel

Varian

COLUNA

FASE
MVEL
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AMOSTRA
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CROMATOGRAFIA LQUIDA

CROMATOGRAFIA LQUIDA
Caractersticas das FM CLAE:

A FASE MVEL

Ser de alto grau de pureza e fcil purificao

CARACTERSTICAS

Dissolver a amostra sem decompor os seus componentes


No decompor ou dissolver a fase estacionria

IMPORTNCIA

Ter baixa viscosidade

PREPARAO

Ser compatvel com o tipo de detector


Ter polaridade adequada para permitir a separao
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A FASE MVEL:

A FASE MVEL:

Fonte de Problemas

Pureza 1

Cerca de 50%de todos os problemas


de anlise e com o equipamento tm
origem na fase mvel
Reagentes Inadequados = a coluna e
o equipamento so sempre culpados

Parte Orgnica:
Solventes devem ser grau de pureza HPLC
ou HPLC/UV
Grau tcnico, para sntese, resduos de
pesticidas, para anlise ou UV = no servem

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A FASE MVEL:

A FASE MVEL:

Pureza 2

Tratamento 1

Parte Aquosa:
gua mono-destilada inadequada
gua usada deve ser grau HPLC = tipo Milli-Q

Aditivos:
Usar cidos, tampes e reagentes = purificados para
HPLC ou melhor grau p.a.
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O correto preparar DIARIAMENTE a fase mvel!!


Quando medir a fase mvel medir os componentes
separadamente e depois misturar antes de filtrar. No
juntar um componente com outro, avolumando para o
volume final.
Exemplo: Metanol: gua 20:80 quer dizer 200mL de
metanol
misturados
com
800mL
de
gua
60
independentemente do volume final que resultar

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A FASE MVEL:

A FASE MVEL:

Tratamento 2

Tratamento 3

Ajuste de pH

Desgaseificao indispensvel
funcionamento do sistema:

Acertar o pH do tampo aquoso


antes de misturar com a parte orgnica

bom

Reprodutibilidade do fluxo ( bolhas na bomba; ar ocupa


volume da fase)

Filtrao da fase mvel:


Para evitar entupimento dos filtros
(2um) da coluna filtrar por membrana
de 0,45um ou 0,22um

para

Estabilidade da linha de base ( bolhas no detector)


Transparncia na faixa de baixa UV, o O2 absorve prximo de
215nm
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A FASE MVEL:

A FASE MVEL:

Tratamento 4

Tratamento 5

Mtodos de Desgaseificao

Mtodos de Desgaseificao

1 - Ultra som: muito lento, pouco eficiente, requer agitao; em


geral o pior mtodo quando usado sozinho

3 Vcuo + Ultra som + agitao simultaneamente: muito


rapido (5 min totais), eficiente, refazer de 12 em 12 horas.

2 - Vcuo: Lento (mnimo de 20minutos o que pode alterar a


composio da fase mvel ) requer agitao.

4- Purga com He: continuo, Hlio caro, vazamentos aumentar o


custo operacional

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A FASE MVEL:

CROMATOGRAFIA LQUIDA

Tratamento 6

A FASE ESTACIONRIA

O Reservatrio da Fase mvel


Vidro pirex para anlise de orgnicos

CARACTERSTICAS

Filtro em ao inox ou teflon com


porosidade de 10 ou 40 um
Limpeza: sonicar em cido ntrico :
gua (50:50)

Bomba
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5 Degasser: Continuo, remove o ar logo antes de entrar na


bomba; investimento inicial, melhor opo a longo prazo. 64

COLUNAS DE FASE NORMAL E


FASE REVERSA
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Processos Quimicos

CROMATOGRAFIA LQUIDA

CROMATOGRAFIA LQUIDA

Caractersticas das FE Colunas:

Caractersticas das FE Colunas:

Pedao de tubo de algum material inerte, de dimetro


interno uniforme e capaz de resistir as presses = ao inoxidvel
Dimetro interno das colunas ao redor de 3 a 5 mm
Capacidade da coluna determinada pelo seu comprimento,
dimetro e material de recheio.

 Nos extremos da
coluna coloca-se um
disco de teflon ou
metal poroso para
evitar a perda do
recheio ou mudanas
na sua compactao.

Eficincia da ordem de 50.000 pratos tericos por metro de coluna


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CROMATOGRAFIA LQUIDA

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CROMATOGRAFIA LQUIDA

Caractersticas das
FE Colunas:

Cuidados com as Colunas:


Amostras muito sujas convm utilizar uma pr-coluna.
A pr-coluna uma coluna pequena com o mesmo recheio
ou similar da camada porosa usada na coluna.
Coloca-se entre o injetor e a coluna.

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As pr-colunas com esta finalidade geralmente so de 2 - 5


cm de comprimento com o mesmo dimetro interno da
prpria coluna, para que apresentem as mesmas
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caractersticas de separao.

CROMATOGRAFIA LQUIDA

CROMATOGRAFIA LQUIDA

Cuidados com as Colunas:

Cromatografia em fase normal:


A FE mais polar que a FM

 Os solventes devem ter um alto grau de pureza para


evitar a contaminao da coluna.

A FE so adsorventes orgnicos (slica)

 Um outro cuidado importante e que os solventes devem


ser filtrados, em filtros de 0.2 m, para retirar partculas
slidas, que podem riscar o pisto ou a vlvula injetora ou
mesmo entupir os tubos do sistema.

Quimicamente Ligada

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Slica = slica OH
Amina = slica O- Si (CH2)3 NH2.
Ciano = slica O Si (CH2)3 CN
Diol = slica O Si (CH2)3 (CH2OH)2

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CROMATOGRAFIA LQUIDA

CROMATOGRAFIA LQUIDA

Cromatografia em fase normal:

Cromatografia em fase normal:

Solventes usados = mistura de solventes orgnicos


(HEXANO) sem a adio de gua ( Variao na reteno)
As molculas menos polares so eludas primeiro,
enquanto as molculas mais polares so retidas
(A FE mais polar que a FM)
Atualmente pouca utilizada

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CROMATOGRAFIA LQUIDA

CROMATOGRAFIA LQUIDA

Cromatografia em fase normal:

Cromatografia em Fase Reversa:


A FM mais polar que a FE
Mais utilizada = FM aquosas
FM mistura de gua ou tampo com solvente
orgnico
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CROMATOGRAFIA LQUIDA

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CROMATOGRAFIA LQUIDA

Cromatografia em Fase Reversa:


Slica gel de Fase Reversa
Mais Utilizada o Octadecilsiloxano ODS - C18
Reteno dependente da quantidade de carbono
+ apolar (C18 > C8 > Ciano) apolar
A FM mais polar que a FE
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CROMATOGRAFIA LQUIDA

CROMATOGRAFIA LQUIDA

Cromatografia em Fase Reversa:


Slica gel de Fase Reversa
Formao da ligao silcio-carbono pelo tratamento
com o grupo silanol com cloreto de tionila, para
produzir o cloreto que em seguida reage com um
composto organometlico para produzir um grupo
orgnico ligado a superfcie da slica
Si-OH + SOCl2
Si-Cl + RLi

Si-Cl + HCl + SO2


Si-R + LiCl

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CROMATOGRAFIA LQUIDA
Cromatografia em Fase Reversa:
Trimetilsilano

Problema dos Silanois Livres (Si OH)


Desativao do Recheio com Trimetilsilano
Recheio No desativado = distoro do pico (cauda) devido
a formao de ligao de hidrognio com os compostos
Colunas com Capeamento (end capping) = reteno normal
e picos mais simetricos para os compostos

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Processos Quimicos

CROMATOGRAFIA LQUIDA
Resumo Fase Normal e Reversa:
Aspecto

Fase normal

Fase Reversa
Apolar

Polaridade da FE

Polar

Polaridade da FM

Apolar

Polar

Ordem de Eluio

Menos polar 1
(apolar)

Mais polar 1
(polar)

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Instrumentao HPLC

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Instrumentao HPLC
Reservatrio da Fase Mvel :
 Garrafa de solvente bem limpa, vidro ou plsticos inertes
 Volume varia de 1 a 3 litros de capacidade
 Captao = filtro, para remover partculas que possam
obstruir e estragar o sistema de bombeamento e a coluna
 Este filtro deve ter a capacidade de reter partculas sem
produzir queda excessiva de presso
 Remover os gases dissolvidos na fase mvel = Ultra-som
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Reservatrio da
Fase Mvel :

Instrumentao HPLC
Reservatrio da Fase Mvel :

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Processos Quimicos

Instrumentao HPLC

Instrumentao HPLC

Sistema de Bombeamento:

Sistema de Bombeamento:

 Desenvolvimento do sistema de bombeamento adequado


foi o fator mais importante para o desenvolvimento da
CLAE.
 A bomba tem que proporcionar uma vazo razovel
atravs da coluna, para que a anlise no seja lenta, e uma
vazo constante, para no atrapalhar o sistema de
deteco.
91

Os aspectos mais importantes so:


a) Presso mxima de operao na faixa de 5000 psi.
b) Vazo contnua, sem pulsos
c) Intervalo de vazes entre 0.01 e 10 mL/min
d) Reprodutibilidade e constncia da vazo de 1 %.
e) Volume interno pequeno, para uso em eluio com
gradiente e reciclagem.

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Instrumentao HPLC

Uma vlvula tpica (check-valve) consiste em uma esfera de


rubi aparada em base de safira, formando um selo.

Bombas Recprocas :

A presso dentro do reservatrio da bomba a responsvel


pela abertura e o fechamento do selo.

Escoam volumes constantes de forma no contnua, isto ,


pulsante.

Estes
movimentos
dependem da
localizao da
esfera
(na entrada ou
na sada da
vlvula).

Essas bombas operam mediante o movimento de um


pisto e atravs de um sistema de vlvulas que
alternadamente se abrem e fecham, onde se enche e
esvazia, de modo alternativo, uma pequena cmara.
Estas bombas apresentam um volume interno de
100-200L
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Bombas Recprocas :

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Instrumentao HPLC
Bombas Recprocas :
As principais vantagens deste tipo de bomba so:
Capacidade de alimentao contnua do sistema,
Facilidade na mudana da fase mvel
Trabalho com pequenos volumes.
Desvantagens deste tipo de bomba:
Vazo pulsante e no uniforme, isto pode causar perda
de eficincia na coluna e instabilidade no detector.

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Analise Instrumental Prof Eduardo Louzada

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Processos Quimicos

Instrumentao HPLC

Instrumentao HPLC

Bombas Recprocas de Duplo Pisto :

Bombas Recprocas de Duplo Pisto :

 Dois pistes so acionados por um mesmo eixo


excntrico, de forma que, quando um pisto succiona a fase
mvel, o outro expulsa o lquido para fora da bomba.
 A vazo de ambos os pistes, j quase livre de pulsao,
encaminhada coluna por uma via comum.
 Assim o sistema de duplo pisto tem todas as vantagens
da recproca de pisto simples, alm da vantagem adicional
da grande diminuio do problema de pulsao.
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Bombas Recprocas de Duplo Pisto :

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Instrumentao HPLC
Programadores de Fase mvel :
Dispositivo complexo que consiste em trocar a composio
da fase mvel conforme transcorre a anlise = Gradiente
A ) Programadores que efetuam a mistura em uma
cmara, depois o lquido passa para a bomba e coluna
B) Programadores de mistura em corrente que requerem
duas ou mais bombas = caros

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Instrumentao HPLC

Instrumentao HPLC

Medidores e controlador de presso :

Vlvulas para Amostragem:

Permeabilidade da coluna
A presso dependente:

Viscosidade da fase mvel


Dimetro das partculas da FE
Comprimento da coluna

Importncia:
Indicar problemas com o sistema (entupimento ou vazamento)
Sistemas podem ser equipados com alarmes de desligamento
automtico da bomba para presses mximas e mnimas101

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Amostra, introduzida na vlvula mediante seringa, deve


encher o espao interno da poro do tubo capilar de ao, a
ala de amostragem (carga).
Normalmente o volume contido na ala de 1 a 100 L.
Amostra injetada na coluna, ao girar a vlvula para que a
posio de entrada e sada mude (injeo na coluna).
102

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Processos Quimicos

Instrumentao HPLC

Instrumentao HPLC

Vlvulas para Amostragem:

Vlvulas para Amostragem:


 Desta forma pode-se injetar-se na

coluna pressurizada um intervalo amplo


de volumes de amostra, dependendo da
ala de amostragem utilizado, com um
alto grau de reprodutibilidade.

103

 As vlvulas para amostragem so


fabricadas somente de material inerte,
como teflon e ao inoxidvel, e seu
desenho tal que resistem a presses
muito elevadas.

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Detectores usados em CLAE:

Instrumentao HPLC

 Um detector ideal para a CLAE seria aquele com as


seguintes caractersticas:

Detectores usados em CLAE:

a)Alta sensibilidade e baixo limite de deteco

 Funo destes
equipamentos a
deteco dos
componentes
vindos do eluente
da coluna

b) Resposta rpida a todos os solutos


c) Insensibilidade a mudanas nas temperatura e na vazo da fase
mvel.
d) Resposta independente da fase mvel
e) Resposta que aumente linearmente com a quantidade do soluto
f) No destruio do soluto.
g) Segurana e convenincia de uso.
105

h) Informao qualitativa do pico desejado.

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Instrumentao HPLC - Detectores

Instrumentao HPLC - Detectores

Absorbncia no ultravioleta e no Visvel :

Absorbncia no ultravioleta e no Visvel :

Funcionamento baseia-se na
absorbncia de luz por parte da
amostra ao passar atravs dela
radiao eletromagntica;
Em timas condies, pode-se
atingir sensibilidades de at 0,001
unidades de absorbncia e, se o
composto absorve intensamente
na faixa de UV, possvel detectar
quantidades de amostras da
ordem de nanogramas (10-9 g).

Analise Instrumental Prof Eduardo Louzada

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Processos Quimicos

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DETECTOR DE ARRANJO DE FOTODIODO

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Instrumentao HPLC - Detectores


ndice de Refrao :
 Acompanha continuamente a diferena de ndice de refrao entre
a fase mvel pura e o efluente que sai da coluna contendo os
componentes da amostra.
A resposta deste detector universal e sua sensibilidade
moderada,geralmente da ordem de micrograma (10-6 g).
Para observar esta diferena necessrio um controle de
temperatura de aproximadamente 0,001 oC, o que normalmente
conseguido por circulao de gua, de uma boa fonte termostatizada,
ou um bom controle da temperatura ambiente.
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Analise Instrumental Prof Eduardo Louzada

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SENAI - Curso de Tecnologia em


Processos Quimicos

Instrumentao HPLC - Detectores

Instrumentao HPLC - Detectores


Fluorescncia :
 Mtodo de deteco dos

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Instrumentao HPLC - Detectores


Eletroqumico :

mais sensveis da atualidade,


especfico para compostos que
fluorescem;
Em boas condies possvel
detectar quantidades da ordem
de picogramas (10-12 g);
Monocromador primrio deixa
passar somente o excitante, o
secundrio deixa passar o
emitido pela amostra.

116

Instrumentao HPLC
Detectores usados em CLAE:

 Vantagens de alta
seletividade, alta sensibilidade
e serem muito bons para as
anlises de traos.
 importante destacar que,
neste tipo de deteco, a
amostra tem que ser constituda
de ons ou compostos que
sofram ou oxidao ou reduo

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SENAI - Curso de Tecnologia em


Processos Quimicos

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Volume Morto

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Cromatografia Lquida

COLUNA
200mm x 4,6 mm . 3m
300mm x 4,0 mm . 5m
250mm x 4,0 mm . 5m
150mm x 3,9 mm . 3m
100mm x 4,6 mm . 5m
50mm x 4,0 mm . 3,5m
250mm x 4,6 mm . 3m
300mm x 4,0 mm . 5m
100mm x 3,9 mm . 4m
125mm x 4,0 mm . 10m

FLUXO
1,5mL/Min
1,0mL/Min
0,5mL/Min
1,2mL/Min
1,5mL/Min
2,0mL/Min
1,5mL/Min
0,8mL/Min
1,0mL/Min
2,0mL/Min

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Calcule as resolues do cromatograma, onde estamos


utilizando uma coluna de 250mm x 4,6mm com 5500 de
pratos tericos e um fluxo de 1,0 mL/Min ?

Calcule a resoluo
do pico 2 do
cromatograma
abaixo, onde
estamos utilizando
uma coluna de
200mm x 4,6 mm
com 7500 de pratos
tericos e um fluxo
de 1,5 mL/Min ?

Analise Instrumental Prof Eduardo Louzada

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