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Tratamiento de muestras Laboratorio de anatoma patolgica

1. Qu es el formol bufferado, cul es su composicin qumica y como


se hace?
Formol bufferado al 10% - 15% usada en fijacin de biopsias (10 o 15ml de
solucin de formaldehido, 90ml de agua corriente para hacerla ms alcalina).
La fijacin tiene como objetivo matar las clulas y conservarlas, hasta donde
sea posible, en el estado que se encontraban durante la vida.
Para obtener 1000 ml de formol bufferado se utiliza:
Formaldehido al 35-40%: 100 ml
Agua destilada: 900 ml
Fosfato de sodio monobsico: 4 gr
Fosfato de sodio dibsico: 6.5 gr
La formalina al 10% se debe aplicar en volmenes de 5 a 10 veces en relacin
al volumen de la muestra a fijar. Segn el tamao de la muestra, para una
adecuada fijacin el tejido (muestra) debe permanecer en formalina entre 6 y
48 Hr.
2. Hasta dnde ingresa el formol en el espesor de los tejidos?
Es necesario que los trozos a fijar sean de un espesor no mayor de 0.5 mm.
Para una buena fijacin es necesario que la relacin volumen del tejido
volumen del fijador sea de 1/40.
Tiene aproximadamente una velocidad de un milmetro por hora apenas altera
la coloracin tisular, por eso es el agente de eleccin para fijar grandes piezas
quirrgicas.

Bibliografa
http://www.citolab.cl/concepto.php?c=15
http://www.buenastareas.com/ensayos/Formol-Bufferado/59870850.html

David Esteves Echanique

Grupo#7

Anatoma Patolgica

3. Pasos para la tincin de una placa histolgica con el procedimiento de


hematoxilina - eosina.
La coloracin de hematoxilina - eosina se considera como la tcnica de tincin de uso
ms frecuente en el estudio de clulas y tejidos, a travs del microscopio fotnico.
Consiste en la tincin de:
a) los ncleos mediante una hematoxilina, previamente oxidada y transformada en
hemateina a la que se le aade una sustancia mordiente para formar una laca (para tal
fin se usan sales metlicas de aluminio, plomo o fierro). Los ncleos se colorean de
azul, azul morado, violeta, pardo oscuro o negro, dependiendo de los agentes
oxidantes y mordientes que se utilizaron.
b) el citoplasma y material extracelular utilizando la eosina que les confiere diversos
grados de color rosado.
El procedimiento de coloracin de H & E es el siguiente:
1. Desparafinar los cortes en:
- xilol -------------------------- 3 minutos
- xilol -------------------------- 3 minutos
2. Hidratar los cortes en baos decrecientes de alcohol
- alcohol absoluto (100) ------3 minutos
- alcohol absoluto (100) ------ 3 minutos
- alcohol de 95---------------- 3 minutos
- alcohol de 95----------------- 3 minutos
- alcohol de 70----------------- 3 minutos
- agua corriente ----------------- 5 minutos.
- agua destilada (2 baos) -------1 minuto (cada uno)
3. Colorear con la solucin de hematoxilina. En este paso es conveniente
respetar el tiempo de coloracin que recomienda cada tipo de solucin de
hematoxilina. Dependiendo de la frmula de preparacin el tiempopuede variar de 3 a
20 minutos.
La hematoxilina de uso ms frecuente es la hematoxilina alumnica de Harris -------3 a
5 minutos.
4. Lavado en agua destilada (2 baos) ------un minuto cada uno.
5. Diferenciar, para eliminar el exceso de colorante, se emplea el alcohol cido,
hasta que los ncleos y los componentes basfilos de las clulas sean lo nicos que
permanezcan teidos
David Esteves Echanique

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Anatoma Patolgica

- lavar en agua corriente----------------- 2 minutos


6. Virar al color azul, empleando soluciones de:

- lavar en agua corriente -------------------- 5 minutos


- lavar en agua destilada (2 baos) -------1 minuto c/u.
7. Colorear con una solucin alcohlica o acuosa de eosina---------3 a 5 minutos
8. Deshidratar en baos crecientes de alcohol etlico
- alcohol de 70------------------------------- 1 minuto
- alcohol de 95-------------------------------1 minuto
- alcohol de 95--------------------------------1 minuto
- alcohol absoluto (100) --------------------1 minuto
- alcohol absoluto (100) ---------------------2 minutos
9. Diafanizar o aclarar empleando xilol
- xilol ------------------------------------------- 1 minuto
- xilol ------------------------------------------- 2 minutos
En estas condiciones los tejidos estn preparados
para realizar en ellos el montaje.

Fig Tec de Tincin: gamas de color del mtodo de


tincin H&E
http://www.facmed.unam.mx/deptos/biocetis/PDF/Portal%20de%20Recursos%20en%
20Linea/Apuntes/3_tecnica_histologica.pdf

1. Pasos para procesar los tejidos para las placas.

David Esteves Echanique

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Anatoma Patolgica

Obtencin

del

Lavados

Inclusin

material histolgico

Deshidratacin

Microtoma

para estudiar

Aclaramiento

Tincin

Proceso de fijacin

Infiltracin

Observacin

Obtencin del material histolgico


Los tejidos se pueden obtener de diferentes formas:

Biopsia

- Biopsa excisional - Biopsia incisional - Biopsa endoscpica - Biopsia colposcpica Puncin aspiracin con aguja fina (PAAF) - Biopsia por puncin con aguja gruesa (Trucut)

Abiopsia

Necropsia/autopsia

Fijacin
En este paso el tejido obtenido se coloca en una sustancia fijadora para evitar los
cambios post-mortem y para lograr conservar ("fijar") la forma original del tejido. Unos
de los fijadores ms usado es el formol al 10% (formaldehido). En el caso de que
utilicemos

ms

adelante

el

microscopio

electrnico,

usaremos glutaraldehdo (para protenas) u osmio(para lpidos).


Lavados
Se debe lavar el tejido para quitar el exceso de fijador. El exceso de fijador al
momento de la infiltracin, incluso en la microtoma, podra afectar los cortes
histolgicos, y por ello se debe lavar.
La deshidratacin se hace empleando diferentes soluciones de alcohol de
concentracin creciente.
Aclaramiento

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Anatoma Patolgica

En este paso se sustituye el alcohol por un disolvente de parafina. El ms usado es


el xilol (xileno) ya que como la muestra est deshidratada, el xilol entrar hasta lo ms
profundo del tejido. Tambin el tejido pierde color y adquiere un tono acaramelado.
Infiltracin
En este paso la muestra se coloca en parafina lquida, cabe mencionar que se debe
usar parafina histolgica. Como se ha dicho en el paso anterior el tejido est
completamente lleno de xilol, ahora debido a smosis sale el xilol y entra la parafina.
Inclusin
Tiene como finalidad proporcionarle al tejido un soporte slido que posibilite realizar un
corte muy fino, por lo que es de suma importancia que el medio utilizado para la
inclusin penetre al interior del tejido. Aqu se forman bloques de parafina dentro de
los cuales estn las muestras a estudiar. Tambin hay mquinas especializadas para la
inclusin en parafina de tejidos. Despus de su inclusin y posterior secado, estos se
deben poner a enfriar en un congelador para su posterior corte. Puede llevarse a cabo
en Parafina
Microtoma
Se realizan cortes histolgicos muy delgados segn lo requerido o la costumbre del
laboratorio donde se realice la tcnica. Los cortes van desde 0,5 micras hasta 8 u 10
micras. Los cortes se echan al bao de flotacin y se pescan con un portaobjetos, se
marcan con la fecha, el tipo de tejido y la tincin con que se van a procesar. El ngulo
de corte entre el cuchillo del microtomo y el bloque ha de estar entre 10 y 15. Una
vez realizado el corte se da un bao de agua destilada, para que la parafina se estire.
Un buen corte histolgico debe tener un grosor aproximado de 3-5 micras para que
sea fcilmente atravesado por la luz del sol atraviesa los poros celulares.
Tincin
Hay muchos tipos de tinciones para diferenciar en los tejidos las diferentes estructuras
o sustancias.
La

tincin

ms

usada

tambin

llamada

"de

rutina"

es

la

de hematoxilina y eosina (H&E). Se usa un colorante llamado hematoxilina que tie las
sustancias cidas o que las contengan, como el ncleo que contiene cido
desoxirribonucleico (ADN) La eosina amarillenta tie las estructuras bsicas como
el citoplasma y dems orgnulos eosinoflicosde la clula.
Como se mencion anteriormente hay muchas tinciones Otros ejemplos son:

Masson

Warthin-Starry

PAS

Ziehl-Neelsen

Perls

Van Gieson

Plata metenamina

Azul alcian

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Sudn III

Anatoma Patolgica

Rojo Congo

Observacin
Como se mencion al principio algunos autores no consideran la observacin como un
paso de la tcnica histolgica sino el objetivo final de la misma. Como se puede
deducir, se observa la laminilla al microscopio y se busca lo que se necesite ver para
llegar a un diagnstico.
La tcnica histolgica es muy empleada en laboratorios y hospitales. Permite hacer
diagnsticos de distintas enfermedades, como para saber si un tumor es maligno o
beningno, etc.
2. Cules son las micras del micrtomo para hacer el corte perfecto
para una placa histolgica?
0,5 a 10 micras

BIBLIOGRAFA
http://www.elsevier.es/es-revista-progresos-obstetricia-ginecologia-151articulo-tuberculosis-genital-femenina-13054685
http://www.uv.es/=histomed/tecnica/index.html

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Anatoma Patolgica

Practica #1
Entender su informe de anatoma patolgica
La mayora de los pacientes con cncer se sometern a una biopsia o a otro procedimiento
para extraer una muestra de tejido para su examen por un anatomopatlogo para diagnosticar
su enfermedad. Un anatomopatlogo es un mdico especializado en el diagnstico de la
enfermedad basado en el examen de tejidos y lquidos extrados del cuerpo. Al examen, el
anatomopatlogo determina si la muestra de tejido contiene clulas normales, precancerosas o
cancerosas y luego escribe un informe con sus hallazgos. El informe consiguiente se denomina
informe de anatoma patolgica y lo usa el mdico principal conjuntamente con otras pruebas o
radiografas relevantes para hacer un diagnstico final y determinar una estrategia de
tratamiento. Al tener unos conocimientos bsicos de lo que busca el anatomopatlogo y la
estructura del informe, es posible que entienda mejor su informe de anatoma patolgica. Es
muy recomendable tener una copia de su informe de anatoma patolgica entre sus papeles.
Su mdico principal debe ser capaz de contestar preguntas especficas que pueda tener sobre
su informe de anatoma patolgica.
Pida

una

copia

del

informe

de

anatoma

patolgica

Despus de una biopsia o escisin, debe usted pedir una copia del informe de anatoma
patolgica para guardarlo de manera que tenga documentacin de su diagnstico
anatomopatolgico. Adems, es til tener una copia del informe de anatoma patolgica para
consultarlo cuando est investigando acerca de su enfermedad.
Partes
de
su

informe

Aunque los informes de anatoma patolgica estn escritos por mdicos para mdicos, usted
puede descifrar parte del lenguaje mdico que contiene el informe. La estructura y la
informacin incluidas en su informe de anatoma patolgica pueden variar, pero normalmente
se incluyen las siguientes secciones.
Datos demogrficos: Esta seccin incluye el nombre del paciente y la fecha del
procedimiento. Debe comprobar que esta informacin es correcta para asegurarse de que tiene
el informe de anatoma patolgica correcto.
Pieza: La seccin sobre la pieza describe el origen de la(s) muestra(s) de tejido.
Historia clnica: La seccin de historia clnica aporta una descripcin breve de la historia
mdica del paciente relevante para la muestra de tejido que est examinando el
anatomopatlogo.
Diagnstico clnico (Diagnstico preoperatorio): El diagnstico clnico describe lo que
esperan los mdicos antes del diagnstico anatomopatolgico.
Procedimiento: El procedimiento describe cmo se extrajo la muestra de tejido.
Descripcin macroscpica: La descripcin macroscpica incluye las observaciones del
anatomopatlogo acerca de la muestra de tejido a simple vista. Puede incluir el tamao, el
peso, el color y otras caractersticas distintivas de la muestra. Si hay ms de una muestra, esta
seccin puede indicar un sistema de letras o nmeros para distinguir cada muestra.
Descripcin microscpica: En la descripcin microscpica, el anatomopatlogo describe el
aspecto que tienen las clulas de la muestra de tejido al microscopio. Algunos atributos
especficos que el anatomopatlogo puede buscar y describir pueden ser la estructura celular,
los mrgenes tumorales, la profundidad de invasin y el estadio anatomopatolgico.

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Estructura celular: Usando un microscopio, el anatomopatlogo examina la estructura celular y


las caractersticas microscpicas de la muestra de tejido y le asigna un grado histolgico al
tumor. El grado histolgico ayuda al anatomopatlogo a identificar el tipo de tumor. El grado
puede describirse numricamente con el sistema de Scarff-Bloom-Richardson (1-3) o como
bien diferenciado, moderadamente diferenciado o mal diferenciado.
Grado 1 o bien diferenciado: Las clulas tienen aspecto normal y no estn creciendo
rpidamente.
Grado 2 o moderadamente diferenciado: Las clulas tienen un aspecto ligeramente diferente
del

normal.

Grado 3 o mal diferenciado: Las clulas tienen aspecto anormal y tienden a crecer y
extenderse ms agresivamente.
Mrgenes tumorales: Si hay clulas cancerosas presentes en los bordes de la muestra de
tejido, los mrgenes se describen como positivos o afectados. Si no hay clulas cancerosas
presentes en los bordes del tejido, los mrgenes se describen como limpios, negativos o no
afectados.
Invasin vascular: Los anatomopatlogos describirn tambin si hay o no vasos sanguneos
dentro del tumor.
Profundidad de invasin: La profundidad de invasin puede no ser aplicable a todos los
tumores, pero se usa para describir la invasin del tumor.
Estadio anatomopatolgico: El estadio clnico se

determina

partir

del

estadio

anatomopatolgico as como otras pruebas diagnsticas, como las radiografas. El estadio


anatomopatolgico, designado con una p describe la extensin del tumor determinada
exclusivamente a partir del informe de anatoma patolgica. El sistema de estadificacin ms
empleado por los anatomopatlogos se basa en el sistema TNM (Tumor, invasin de ganglios,
metstasis) de la American Joint Commision on Cancer (AJCC).
Pruebas o marcadores especiales: Dependiendo de la muestra de tejido, el anatomopatlogo
puede realizar pruebas para determinar mejor si hay o no protenas o genes especficos, as
como la rapidez con la que las clulas estn creciendo.
Diagnstico (resumen): El diagnstico final es la seccin en la que el anatomopatlogo
concluye la informacin de todo el informe de anatoma patolgica con un diagnstico
anatomopatolgico conciso. Incluye el tipo de tumor y la clula de origen.
Firma del anatomopatlogo: El informe est firmado por el anatomopatlogo responsable de
su contenido

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Practica #2
Muestras en anatoma patolgica
El estudio anatomopatolgico de las piezas de biopsia y quirrgicas en los laboratorios
de anatoma patolgica comienza con la descripcin macroscpica y la seleccin de las
reas sobre las que se va a realizar el estudio microscpico, proceso conocido como
tallado. Se realiza en una mesa de tallado (estacin, cabina, banco o campana) que
bsicamente consiste en una superficie de trabajo que est acondicionada para
evacuar los fluidos desprendidos durante el proceso.
Las operaciones que se realizan son:
- extraccin de la muestra - inmersa en la disolucin de conservacin y fijado- del
envase que la contiene,
- lavado con agua de la pieza para retirar el exceso de disolucin,
- realizacin de cortes e incisiones, y
- seleccin de las partes que se examinarn al microscopio.
Adems, como actividades conexas se consideran operaciones como la recepcin de
las muestras, los trasvases de contenido, dosificaciones y preparacin de nuevas
disoluciones, pesada de piezas, colocacin de muestras en los portamuestras
(cassettes), rellenado de envases de disolucin de fijado, decantacin a recipiente de
reciclaje, vaciado de residuos o el almacenamiento de muestras.

Ver figura 1, "Tallado de piezas pequeas" y figura 2, "Mesa de tallado con pieza
quirrgica".

Para la conservacin y fijado se emplean frecuentemente disoluciones fijadoras que


contienen formol (tambin llamado formalina).
El formol es una disolucin de formaldehdo en agua en concentraciones que varan
entre 25% y el 50% y estabilizada con metanol, en concentraciones entre el 10% y el
20%.
En el mbito sanitario se utilizan habitualmente disoluciones con aproximadamente un
4% de formaldehdo y entre 0,5 % y 1,5 % de metanol que frecuentemente se preparan
por dilucin a partir de productos comerciales.
La manipulacin del formol en las diversas operaciones hace que se pueda emitir al
ambiente formaldehdo que puede ser inhalado y entrar en contacto con los ojos y la
piel del trabajador. Tambin se pueden producir derrames y salpicaduras de formol
que pueden afectar a los ojos y la piel.

David Esteves Echanique

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