Facultad de Qumica
Laboratorio de Bioqumica Experimental
REGULACIN DEL METABOLISMO: REGULACIN GENTICA EN EL OPERN lac
Bautista Quiroz Erik Antonio, Canchola Carrillo Eileen Vittoria.
Informacin
19 noviembre de
2014
Palabras clave:
E. coli W3110
Opern
ONPG
-galactosidasa
Resumen
El opern Lac es un opern requerido en el transporte y el metabolismo de lactosa en
diversas bacterias. En este ensayo experimental se evalu su regulacin gentica,
incubando una cepa de E. coli W3110 en un medio con diferentes concentraciones de
glucosa y lactosa para activar la sntesis de la -galactosidasa. Posteriormente, a estas
bacterias se les aadi ONPG; el cual es hidrolizado por la -galactosidasa para generar onitrofenol, un compuesto que funciona como marcador de que se est llevando a cabo la
reaccin de dicha enzima otorgndole a las muestras una coloracin amarillenta. Para
poder asignar un valor cuantitativo a la produccin de -galactosidasa (coloracin amarilla)
de las muestras, se midi su absorbancia a una longitud de onda de 420 nm. Se determin
una coloracin ms intensa en el tubo B (Lactosa 2%), es decir, una concentracin de onitrofenol mayor, lo cual es directamente proporcional a la cantidad de -galactosidasa
INTRODUCCIN
La regulacin metablica es el incremento
o el decremento de una reaccin
enzimtica o de toda una secuencia de
reacciones enzimticas de las rutas
metablicas, a travs de mecanismos
globales de regulacin que involucra el
aumento
o
disminucin
de
la
concentracin de enzimas por medio de la
regulacin de la expresin gentica, que es
explicada a travs de modelos conocidos
como operones (Moat, 2002).
En bacterias, el opern Lac es necesario
para la utilizacin de lactosa como fuente
de carbono. El opern (Figura 1) consiste
de 3 genes: lac Z (-galactosidasa), lac Y
(-galacto-permeasa) y lac A (Galactsidotransacetilasa). Adems de stos genes
existen la secuencia promotora, operadora
y el gen lac I. El operador es el sitio de
unin para el represor transcripcional
codificado por lac I, que es una protena
que se transcribe independientemente de
los otros genes lac.
OBJETIVO
Comprender el funcionamiento del opern
de lactosa en presencia y ausencia de
glucosa y lactosa, monitoreando la
produccin de -galactosidasa por medio
de una reaccin colorida.
HIPTESIS
La presencia o ausencia de la lactosa ser
el nico factor que influye en la expresin
de los genes involucrados para el uso de
este carbohidrato como fuente de carbono.
METODOLOGA
La parte experimental fue realizada de
acuerdo al protocolo: REGULACIN DEL
METABOLISMO
PARTE I: REGULACIN GENTICA EN EL
OPERN lac del Manual de Prcticas de
Bioqumica Experimental de la Facultad de
Qumica de la UNAM
RESULTADOS
Despus de una incubacin a 31C durante
15 minutos, se procedi a la lectura de la
actividad
enzimtica,
usando
como
marcador de dicha actividad al ONPG.
El ONPG al ser hidrolizado por la galactosidasa, se produce o-nitrofenol, que
es un compuesto de coloracin amarilla
cuya absorbancia se lee a 420 nm; esta
coloracin se puede apreciar en los tubos
(A (glucosa), B (lactosa), C (glucosa +
Blanco (Tubo
E)
A
B
C
D
Conteni
do (al
2% en
250.0
L)
-
A420 nm
glucosa
lactosa
glucosa +
lactosa
Glucosa
+ lactosa
aadida
7.5 min.
Despus
0.222
0.683
0.436
0.591
DISCUSIN
Se realiz el monitoreo de la
regulacin gentica del Opern
Lac del cultivo de Escherichia
coli W3110 en medio M9glicerol,
en
presencia
de
glucosa, lactosa o una mezcla
de ambos. Para permitir la
visualizacin de la expresin
del gen Z (.galactosidasa) ; se
aadi ONPG, el cual es
hidrolizado
a o-nitrofenol
(compuesto
amarillo).
La
cantidad
de
o-nitrofenol
Tubo A
(glucosa
)
Tubo C
(glucosa
+
lactosa)
Tubo E
(blanco
)