Sesin 23
PROPIEDADES QUMICAS DE AMINOCIDOS Y PROTEINAS
Objetivos
1. Reconocer los aminocidos y las protenas utilizando los reactivos de ninhidrina y de Biuret,
respectivamente.
2. Realizar con la solucin de albmina los siguientes ensayos:
a. Prueba de coagulacin utilizando varios agentes.
b. Pruebas de precipitacin con cationes.
3. Determinar el punto isoelctrico de la casena.
4. Identificar la presencia de ncleos aromticos en las protenas (reaccin xantoprotica).
5. Identificar la presencia de triptfano, tirosina y aminocidos azufrados en las protenas.
Aspectos tericos
Las protenas son el primer grupo de compuestos orgnicos de importancia biolgica. Forman las dos
terceras partes del peso seco de las clulas y son imprescindibles en todos los procesos que se tienen en
los seres vivos. Algunas transportan pequeas molculas e iones al interior de las clulas. Otras, como los
anticuerpos, reconocen y neutralizan sustancias extraas al organismo, como los virus y las bacterias. Otras
intervienen en la generacin y transmisin de los impulsos nerviosos.
La funcin primaria de las protenas es formar, unir y proteger la estructura de los organismos vivos, en
contraste con los carbohidratos, que se utilizan primordialmente como fuente de energa y con los lpidos,
que son los constituyentes de las membranas celulares y que tambin se utilizan como fuente de energa.
La hidrlisis cida, bsica o enzimtica de las protenas de todos los seres vivos producen veinte -Laminocidos, los cuales se muestran en la siguiente tabla:
Aminocidos contenidos en los seres vivos
Glicina
Cisteina
Alanina
Metionina
Valina
cido asprtico
Leucina
cido glutmico
Isoleucina
Asparagina
Serina
Glutamina
Treonina
Lisina
Fenilalanina
Arginina
Tirosina
Histidina
Triptfano
prolina
1. -L-aminocidos: Son una clase de compuestos orgnicos que contienen simultneamente un grupo
amino, -NH2 (unido al carbono alfa) y un grupo carboxlico, -COOH. La naturaleza del grupo R, depende
de la estructura de cada -L-aminocido. Como los aminocidos contienen un grupo cido y un grupo
bsico, presentan una reaccin cido- base y se encuentran principalmente en la forma de un ion
bipolar o zwitterin:
R
H
OH
NH2
C
NH3
O
O-
C
+
Forma ionizada
(zwitterin)
Los -L-aminocidos se unen entre s, mediante enlaces amdicos o pptdicos, para producir los
pptidos, y estos, a su vez, se unen para formar los polipptidos protenas.
Enlace peptdico
H
H2N
H2N
R1
OH
R2
H
H2N
OH
H2O
O
C
R1
R2
OH
Un dipptido
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2.Protenas: Son polmeros naturales (polipptidos) de alto peso molecular conformados por -Laminocidos:
Estructura general de una protena
H
H2N
R1
R2
R3
OH
H
n
Aminocido
N-terminal
Aminocido
C-terminal
Enlaces amdicos
La mayora de las protenas tienen tres niveles de organizacin denominados: estructuras primarias,
secundarias y terciarias. Unas pocas presentan un cuarto nivel denominado estructura cuaternaria.
3. Reacciones caractersticas de aminocidos y protenas.
a. Reaccin de Ninhidrina: La ninhidrina, (hidrato de tricetohidrindeno) un agente oxidante,
reacciona con los -aminocidos a un pH entre 4 y 8 para dar un compuesto de color azul-prpura.
Esta reaccin se efecta tambin con aminas primarias y amonaco pero sin desprendimiento de
CO2.
Los aminocidos: prolina e hidroxiprolina, tambin reaccionan con la ninhidrina, pero en este caso
se obtiene un color amarillo. El complejo coloreado sirve como base para la deteccin y la medicin
cuantitativa de -L-aminocidos.
O
H
OH
+
OH
O
O-
+ CO2
(g)
+ 3 H2O +
NH3+
O
Ninhidrina
HO
Azul de Ruheman
de color azul-violeta
b. Reaccin Xantoprotica: El cido ntrico concentrado reacciona con algunas protenas que
contengan en su estructura aminocidos con anillos aromticos (por ejemplo, la queratina de la
piel), dando un color amarillo que se oscurece hasta anaranjado cuando se aade un lcali. Esta
reaccin es positiva para las protenas que contienen fenilalanina, tirosina o triptfano.
CH2CHCOONH3
3 HNO3
O2N
CH2CHCOOH + 3 H2O
NH3+
Fenilalanina
Color amarillo
NaOH
CH2CHCOO-
O2N
NH2
Color naranja
c. Reaccin de Hopkins-Cole: el reactivo de Hopkins-Cole est formado por una mezcla de cido
sulfrico concentrado con cido glioxlico; este, reacciona con protenas que contengan triptfano
dando un complejo color violeta.
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CH2CHCOO-
NH3+
OH
O
+
C
CH2CHCOOH
H2SO4
- H2O
N
H
H
+
C
C
H OH
N
H 3N
HOOCHCH2C
NH3+
CH2CHCOOH
O
C
N
H
C
H-
H OH
N
H3N
HOOCHCH2C
Complejo color violeta
d. Reaccin de aminocidos azufrados: Los aminocidos que contengan azufre, como es el caso
de la cisteina y la metionina, reaccionan con acetato de plomo en medio bsico formando un
precipitado negruzco de sulfuro de plomo.
H
HSH2C
1. 3 NaOH
2. (CH3COO)2Pb
PbS(S) + HOH2C
Calor
NH3
Cistena
Precipitado
negro
NH2
HO
1. NaNO 2/HCl
2.
H 2N
SO3H
HO 3S
O
CH
H2C
OH
Colorante azoico
OH
COOH
NH2
CH 2
Acido sulfanlico
H
C
Tirosina
f. Prueba de Biuret: Las sustancias que contengan dentro de la molcula varios grupos amida muy
cercanos dan una coloracin, usualmente violeta-prpura, cuando se les adiciona una pequea
cantidad de sulfato de cobre (II) en medio alcalino. La coloracin se debe a la formacin de un
complejo de coordinacin entre el Cu2+ y los grupos amida de las uniones peptdicas.
H
H
O
O
2
C
2+
+ Cu
CH
R
+ 2 H2O
CH
R
O
C
2+ Cu
HC
N
O
Cadena peptdica
Las protenas, proteosas y peptonas, dan positiva esta prueba. A medida que progresa la hidrlisis
de una protena, el color producido en la prueba de Biuret se decolora gradualmente a rosa y
despus desaparece ya que los pptidos ms pequeos y los aminocidos no dan la coloracin.
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g. Punto Isoelctrico: Las protenas y los aminocidos son compuestos anfteros, pueden
reaccionar en medio cido o bsico as:
NH3
O-
OH-
NH3
O-
+ H2O
NH2
O-
H 3O +
OH + H2O
NH3+
La presencia de las cargas negativas o positivas netas anteriores causan la migracin de las
protenas en un campo elctrico. Existe un pH en cual la carga neta es igual a cero y la protena no
se desplaza en el campo elctrico, ese valor de pH se conoce como punto isoelctrico (P.I).
NH3
OH
H3O+
NH3
O-
OH-
O-
NH2
pH
pH bajo
(protonado)
Punto isoelctrico
(ion dipolo neutro)
pH alto
(desprotonado)
La mayora de las protenas muestran una solubilidad mnima en su punto isoelctrico; la casena
por ejemplo, es la principal protena encontrada en la leche y se puede separar ajustando el pH en
el P.I de la casena.
h. Precipitacin: En la purificacin de protenas es a menudo de inters separarlas de otras
molculas de la solucin por procesos de precipitacin catinica y aninica. En la precipitacin la
actividad biolgica de las protenas se preserva, y esto se tiene muy en cuenta en protenas como
enzimas u hormonas protecas, ya que las condiciones biolgicas pueden ser cuidadosamente
controladas.
A un pH de 7 y por encima de l, las protenas estn normalmente cargadas negativamente, as que
la adicin de cationes metlicos neutralizan la carga y la protena se precipita. La precipitacin por
iones de metales pesados, como son: Hg2+, Pb2+ Ag+, es, por lo tanto, ms efectiva a valores de
pH neutros o ligeramente alcalinos, pero la solucin no puede ser muy alcalina, porque se corre el
riesgo de que se precipiten hidrxidos de los metales.
El precipitado es frecuentemente soluble en un exceso de iones de metal pesado, ya que tal exceso
confiere a las partculas cargas positivas estables.
[Proteina]-n + n Ag+
[Proteina]Ag
(s)
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Solucin de
albmina
Temperatura
pH
Solventes orgnicos
otros
calor
Proteina desnaturalizada
(Insoluble)
formacin
de cogulos
gotas de cido
Materiales:
Beaker
Probeta
Leche
Tubos de ensayo
Sustancias:
Acido Actico 10 %
Acido clorhdrico concentrado
Acido ntrico concentrado
Acido sulfrico concentrado
Acido glioxlico
Hidrxido de sodio al 50 %
Nitrato de plata al 2 %
Acido sulfanilico 0.5%
Nitrito de sodio 20%
Reactivo de Hopking Cole (solucin al
25% de acido glioxilico en acido actico)
NH4OH 0.2M
Tirosina al 1%
Sulfato de cobre al 2 %
Etanol
Albumina y Solucin de albmina
(albumina diluida 10 veces)
Glicina al 2 %
Reactivo de ninhidrina
Reactivo de Biuret
Acetato de plomo al 2%
Seccin experimental
1. Prueba de Ninhidrina: En tres tubos de ensayo coloque 10 gotas de las siguientes soluciones
acuosas:
Tubo 1: Glicina
Tubo 2: Leche
Tubo 3: Albmina diluida
A cada tubo adicione 3 gotas del reactivo de ninhidrina y caliente al bao mara. Observe y anote los
resultados. Residuos orgnicos no halogenados.
2. Reaccin Xantoprotica: En tres tubos de ensayo coloque 10 gotas de las siguientes soluciones
acuosas:
Tubo 1: Glicina
Tubo 2: Leche
Tubo 3: Albmina diluida
A cada tubo adicione 5 gotas de cido ntrico (HNO 3) concentrado y caliente al bao mara hasta
cambio de coloracin. Alcalinice la mezcla adicionando gota a gota hidrxido de sodio al 25 %.
Observe y anote los resultados. Residuos orgnicos no halogenados.
3. Prueba de Hopkins-Cole: En tres tubos de ensayo coloque 10 gotas de las siguientes soluciones
acuosas:
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Tubo 1: Glicina
Tubo 2: Leche
Tubo 3: Albmina diluida
A cada tubo adicione 10 gotas del reactivo de Hopkins Cole. Mezcle bien y adicione a cada tubo por
las paredes lenta y cuidadosamente, sin agitacin, 5 gotas de cido sulfrico concentrado. La
formacin de un anillo violeta en la interfase es prueba positiva para triptfano. Residuos
orgnicos no halogenados.
4. Reaccin de los aminocidos azufrados: En tres tubos de ensayo coloque 10 gotas de las
siguientes soluciones acuosas:
Tubo 1: Glicina
Tubo 2: Leche
Tubo 3: Albmina
A cada tubo adicione 3 gotas de hidrxido de sodio al 25 % y 5 gotas de acetato de plomo al 2 %.
Caliente la mezcla de reaccin al bao mara por 10 minutos. Observe y anote los resultados.
Residuos orgnicos con metales.
Solucin de
albmina
acetato de plomo
Adicionar
NaOH
incolora
5.
Solucin
color negro
Reaccin de Erlrich. Adicione a cada tubo en el siguiente orden: 10 gotas de acido sulfanilico y 10
gotas de nitrito de sodio, mezcle bien y deje reposar 5 minutos. Luego a cada tubo agregue 10
gotas de:
Tubo 1: Tirosina
Tubo 2: Leche
Tubo 3: Albmina (concentrada)
Agite y agregue a cada tubo 5 gotas de NH4OH. Observe y anote los resultados.
6. Prueba de Biuret: En tres tubos de ensayo coloque 10 gotas de las siguientes soluciones acuosas:
Tubo 1: Glicina
Tubo 2: Leche
Tubo 3: Albmina
A cada tubo adicione 5 gotas de hidrxido de sodio al 25 % y 5 gotas del reactivo biuret. Observe y
anote los resultados. Residuos orgnicos con metales.
Solucin de
albmina
Adicionar
incolora
NaOH
gota a gota
CuSO 4
(solucin violeta)
8. Precipitacin: En dos tubos de ensayo, coloque en cada uno, respectivamente, 10 gotas de las
siguientes soluciones:
Tubo 1: Leche
Tubo 2: Albmina
A cada tubo adicione 5 gotas de nitrato de plata (AgNO 3) al 2 %. Observe y anote los resultados.
Repita el proceso anterior con sulfato de cobre (CuSO 4) al 2%. Compare los resultados obtenidos.
Residuos orgnicos con metales.
9. Desnaturalizacin de protenas: En cuatro tubos de ensayo coloque 10 gotas de la solucin acuosa
de albmina y proceda de la siguiente manera: el tubo 1 calintelo gradualmente en bao mara y
observe la temperatura de coagulacin; a los otros tres tubos adicione, respectivamente:
Tubo 2: 20 gotas de etanol. Residuos orgnicos no halogenados.
Tubo 3: 5 gotas de cido clorhdrico (HCl) concentrado. Residuos orgnicos halogenados.
Tubo 4: 5 gotas de hidrxido de sodio (NaOH) 50 %. Residuos orgnicos no halogenados.
Agite y observe si se produce coagulacin.
Preguntas
1. Dibuje la estructura de la valina en una solucin con pH cido y un pH bsico.
2. Por qu se utiliza frecuentemente la clara de huevo como antdoto para el envenenamiento con
plomo y mercurio?
3. La presencia de albmina en la orina indica que el paciente tiene nefritis. Sugiera un mtodo para
detectar albmina en la orina?
4. Cul es la evidencia experimental que pone de manifiesto que la estructura tridimensional de las
protenas determina su actividad biolgica?
5. Qu y cules son los aminocidos esenciales?
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