Cuestionariodetcnicaseninmunologa2016

Integrantes:
SofiaBustosLorenaNavarreteJocelynOrellana
Este cuestionario debe ser desarrollado por grupos de 3 o 4 estudiantes. Los
grupos se indican en el archivo excel que est en la carpeta de la pgina web del
curso.Eltiempomximodeentregaeselprximo18demarzode2016.
1 Los anticuerpos son molculas ampliamente utilizadas en tcnicas inmunolgicas.
Respondaclaraybrevementelassiguientepreguntas:

a. Quesunanticuerpo?
Los anticuerpos son protenasproducidasenlosvertebradosenrespuestaala
exposicin a estructuras extraas conocidas como antgenos. Los anticuerpos
son increblemente diversos y especficos en su capacidad para reconocer
formas extraas, y son los principales mediadores de la inmunidad humoral
frenteatodotipodemicrobios.(1)

b. Mencione al menos 2 caractersticas quehacenimportanteynecesarioel

usodelosanticuerposeneldesarrollodetcnicasinmunolgicas.
Los anticuerpos presentan una alta especificidad para la determinacin de la
cantidad de protenas u otros antgeno, ya que son capacidad de unirse de
manera precisa a una determinada molculablanco,locualesdegranutilidad
en el caso mdico, de esta forma se minimiza la posibilidad de dar un
diagnsticofalsoaunindividuosano.
Adems posee una gransensibilidadalahoradelosresultadosenpruebasde
diagnsticomdico,sonindicadoresparadetectarenfermedades
.
(2)

c. Menciones y explique 3 tcnicas

diferentes que involucren el uso de
anticuerposentcnicasinmunolgicas.

Western blot:
Esta tcnica de inmunotransferencia permite la deteccin y
caracterizacin de protenas mediante el reconocimiento entre antgeno y
anticuerpo.Para ello debe haber una separacin por electroforesis segn su
peso molecular, estructura, hidrofobicidad, etc. Posteriormente se realiza una
transferencia cuantitativa e irreversible a una membrana de PVDF de las
protenas de una mezcla compleja (lisado total celular). Los antgenos quese
han transferido a lamembranasonreconocidosporanticuerposmonoclonales
o policlonales especficos de ellos.
Finalmente, se detecta la
unin
antgenoanticuerpo por
actividad enzimtica o
fluorescencia
, entre otros
mtodos.(3)

Inmunofluorescencia: En esta tcnica se utilizan anticuerpos unidos

qumicamente a sustancias fluorescentes para determinar la presencia de
molculasespecficas.(4)

En la inmunofluorescencia directa, lasolucindeanticuerposfluorescentesse

aplica sobre el corte, se incuba y se lava. Los anticuerpos unidos se revelan
despus con un microscopio provisto de lmpara de luz ultravioleta. La luz
ultravioleta se dirige hacia el corte a travs del objetivo, con lo que el campo
queda oscuro y las reas con anticuerpos presentan fluorescencia verde. el
patrndefluorescenciaescaractersticoparacadaantgeno.(4)

En la inmunofluorescencia indirecta, el anticuerpo se aplica sobre el corte,

despus de lavarlo, con l se prepara antiinmunoglobulina fluorescinada
aadiendoantisuero.(4)

Inmunoprecipitacin:
Es la tcnica mediante la cual un antgenoproteicoes
precipitado de unasolucinusandounanticuerpoque seuneespecficamente
aesaprotena.
Este proceso puede ser usado para aislar y concentrar un protena particular
deunamuestraquecontienemuchosmilesdeprotenasdistintas.
En algn momento del procedimiento, la inmunoprecipitacin requiere de que
elanticuerpoesteacopladoaunsubstratoslido.(4)

2Existen diferentes tipos de ensayos de ELISA (

EnzymeLinked ImmunoSorbent
Assay
). Consulte al menos 2 tipos de ELISA,explicandobreveyclaramentecules
la diferencia y los alcances de cada uno. Hagausodeundibujooesquema parasu
explicacin. Adems Nombre al menos 3 aplicaciones del mtodo de ELISA en la
industria,investigacinodiagnstico(seaespecfico)
.

ELISA directo:
En esta tcnica se cubren los pocillos con la muestra, inmovilizando los
antgenos que se presumen est dentro de esta, posteriormente se incuban con
anticuerpos marcados capazde generarunproductodetectable,yaseaconuncambiode
coloroalgnotrotipo,losqueevidenciaranlapresenciadeantgenos.

ELISA Sandwich:
En este tipo de elisa se adhiere al pocillo un primer anticuerpo anti
antgeno, luego de lavar el exceso se agrega la muestra, que ser retenida al ser
reconocida por el primer anticuerpo. Luego de un segundo lavado donde se retira el
materialoadheridoalanticuerpo,seagregaunsegundoanticuerpoconunamarca.
Esta variedad de ELISA posee mayor especificidad y sensibilidad que los dems, yaque
el segundo anticuerpo permite amplificar la seal, sin embargo solo permite la deteccin
delantgenoynodelanticuerpo(5).

AplicacionesdelmtodoELISA:
DiagnsticoparaelVIH
Testdeembarazo
Enfermedadesautoinmune
Enfermedadesproducidasporvirusenfrutas
Enfermedadesproducidasporbacteriascomo
Mycobacteriumtuberculosis
CuantificacindeinmunoglobulinasIgG
IgE
IgA

3 Para realizar la deteccin de los complejos antgenoanticuerpo formados

durante el ensayo de ELISA y proceder a realizar su cuantificacin existen 3
sistemas: colorimtricos, fluorescentes y luminiscentes. En qu consiste cada
mtodo
.

Colorimtrico: al formarse el producto, se agrega un cromforo alsustrato,yste

acoplado a la reaccin darlugara unasustanciacoloreadaquepuedesermedida
porunespectrofotmetro.
La cantidad de sustancia formada depende de la cantidad de anticuerpo presente,
posteriormente para conocer la concentracin exacta se compara la absorbancia
del problema con la absorbancia del blanco y las muestras de referencia que
contienen
concentraciones conocidas de anticuerpos y que se haban procesado en paralelo
realizandorectasdecalibradoconlasconcentracionesconocidas.(6)

Fluorescente:
variacin del colorimtrico, la enzima convierte el sustrato en un
producto de reaccin que emite fluorescencia cuando es excitado a una
determinada longitud de onda, siendo las unidades relativas de fluorescencia
(fotonesdeluzemitidos)proporcionalesalacantidaddeproductoanalizado
Este mtodo de cuantificacin es ligeramente mssensiblequeelcolorimtrico,ya
que ampla el rango de medida a pesar de ser susceptible a cambios en el pH,
temperatura, concentracin inica, concentracin de detergente, secado, y a la
matrizslida,locualpuedeconduciradistorsindeluz.(7)

Luminiscencia:
Similar a la fluorescencia, una enzima transforma un substrato e
unproductoqueemitefotonesenlugardedarcolorvisible.
hay distintas formas de luminiscencia dependiendo de la forma en que se alcanza
elestadoexcitado.(7)

Fotoluminiscencia: la excitacin se alcanza mediante luz de una determinada

longitud de onda, es decir, igual que en la fluorescencia. Bioluminiscencia, la
excitacin se alcanza mediante la utilizacin de un compuesto que emiteluz alser
degradado como luciferina o luciferasa. Quimioluminiscencia: la excitacin se
alcanza mediante una reaccinqumica,siendoestaltimaelmtodomssensible
debidoalaposibilidaddemultiplicacinyamplificacindeseal(7)

4 En inmunologa es muy importante tipificar los diferentes tipos celulares y sus

caractersticas funcionales especficas. Una de las formas ms utilizadas para la
identificacin de las clulas del sistema inmune es a travs del usodeanticuerpos
que reconocen molculas especficas en la superficie celular. En este sentido,
respondaclaraybrevemente:

a. Qu es un
Cluster of differentiation (CD) y paraquseusan?Adems,
Cmo se mide e interpreta la expresin de estos CDs en las clulas del
sistemainmune?
Son molculas marcadoras en la superficie celular, que reconocen ciertos anticuerpos, y
aon utilizadas para la identificacin del tipo de clula, etapa de la diferenciacin celulary
actividad de esta misma. Es un sistema de antgenos de superficie celular de los
leucocitoshumanos, quesecaracterizanmedianteanticuerposmonoclonales,permitiendo
la categorizacin de los leucocitos y otras clulas hematopoyticas (de la sangre).
Tambinseconocencomocmulodedeterminantesodedesignaciones.
Debido a que durante la maduracin y diferenciacin, los linfocitos inmaduros van
recibiendo en su superficie una serie de receptores inmunitarios, se denomina a dichos
compuestos marcadores de
diferenciacin,puesledanalaclulalinfocticacomponentes
fenotpicosnicosdelaetapadediferenciacinenqueestn.(10)
b. Queslacitometradeflujo?

La citometra de flujo es un mtodo analtico que permite la medicin rpida de ciertas

caractersticas fsicas y qumicas de clulas o partculas suspendidas en lquido que
producen una seal de forma individual al interferir con una fuente de luz. Una de las
caractersticas analticas ms importantes de los citmetros de flujo es su capacidad de
medir mltiples parmetros celulares, como el tamao, forma y complejidad y
componentes celulares o funcin que pueda ser marcada con un fluorocromo. Las
aplicaciones ms relevantes de la citometra de flujo en la prctica mdica se relacionan
con la hematologa e inmunologa clnicas, midiendo parmetros como nmero y
clasificacindeclulassanguneas.

Esta tcnica es empleada tambin en el conteo de subpoblaciones de linfocitos en

pacientes con el virus de la inmunodeficiencia humana, as como la caracterizacin de
leucemiasagudasysndromeslinfoproliferativoscrnicos,entreotrospadecimientos.

Elprincipioenelquesebasaestatcnica:
Hacer pasar clulas u otras partculas en suspensin alineadas y de una en una por
delante de un haz luminoso. La informacin producida puede agruparse en dos tipos

fundamentales: la generada por la dispersin de la luz y la relacionada con laemisinde

luz por los fluorocromos presentes en la clula o partcula al ser excitados por el rayo
luminoso.Lassealesluminosasdetectadassetransformanen impulsoselctricosquese
amplifican y se convierten en seales digitales que sonprocesadasporunacomputadora
(11)

c. Qu son los anticuerpos acoplados a fluorocromos y qu ventajas tiene

usarlos?

Los anticuerpos acoplados a fluorocromos o fluorforos son capaces de teir diversas

estructuras para lograr
examinar muestras teidas con dichos anticuerpos a diferentes
longitudes de onda de excitacin y de emisin. Con este sistema se pueden observar
diferentesmolculasblancomedianteelusodediferentesfluorforosaaltaresolucin.

Este tipo de tincin o marcaje es posible utilizarla, por ejemplo, mediante el uso de
microscopaconfocalodefluorescencia.(12)

d. Escriba al menos 3 marcadores o CD que permitan identificar las siguientes

clulas,ademsexpliquequsignificacadaunodelosmarcadoresqueeligi:

Tinciones

Quescadamolcula

Linfocitos

1.CD4

2.CD8

3.CD3

Monocitoso
macrfagos

1.CD68

2.CD16

3.CD13

Es una
molcula que se expresa en la superficie de algunas
clulas T y en las
clulas dendrticas
. Es una glucoprotena
monomrica de59
kDa de peso quecontiene cuatrodominios
(D1,D2,D3,D4)detipo
inmunoglobulinas
.(13)
CD8(Cmulode diferenciacin 8oclusterofdifferentation,en
ingls
), es una molcula que se expresa en la superficie de
algunas
clulas T
, conocidos como citolticas. Es una
glucoprotenadimricade 6570
kDaque cruza la
membranay
participa como coreceptoren la estabilizacin delaadhesin
del receptor de linfocitosTa
molculasdelComplejoMayorde
Histocompatibilidad tipo I (MHC I). Implicada tambin en la
maduracin
tmica de linfocitos T y en la transmisin de
sealesintracelularesdurantelaactivacindelHLAI.(14)
EninmunologasedenominaCD3(delinglsclusterof
differentiation)auntipodeantgenoCDpropiodelsistema
inmunedemamferos.Secaracterizaporposeerunpeso
molecularde:2528:20,:20kDaysunaturaleza
bioqumicaloencuadradentrodelafamiliadelas
inmunoglobulinas.Sufuncinbiolgicaenlaclulaes:
intervenirenlatransduccindeseales,expresindelTCRen
lasuperficiedelaclulayasociacinaesteltimoreceptor.Se
expresaespecficamenteentimocitosyclulasT.(15)(16)

CD68(Cmulodediferenciacin68oclusterofdifferentiation
68,eningls)esunaglicoprotenaexpresadaenlamembrana
plasmticadelosmacrfagos.LafuncindeCD68pareceser
lacaptacindelipoprotenasdebajadensidad.
LamacrosialinaeselequivalentedeCD68enratones.(17)(18)

En
inmunologa se denomina CD16 (del
ingls cluster of
differentiation 16)oFcRIIIauntipodeantgenoCDpropiodel
sistema inmune de
mamferos
. Se caracteriza por poseer un
peso molecular de 5080
kDa y su naturaleza bioqumica lo
encuadra dentro de la familia de las
inmunoglobulinas
. Su
funcinbiolgica enla
clulaes: actuar comocomponente del
receptor de baja afinidad para
Fc
, FcRIII, y mediar en la
fagocitosis y citotoxicidad debida a clulas dependientes de
anticuerpos. Se expresa especficamente en neutrfilos,
clulasNKymacrfagos
.(19)
En
inmunologa se denomina CD13 (del
ingls cluster of
differentiation 13) o aminopeptidasa N a un tipo de
antgeno
CD propio del sistema inmune de mamferos. Se caracteriza
porposeer un
peso molecular de 150170
kDaysunaturaleza
bioqumica lo encuadra dentro de la familia de
enzimas
metaloproteasas. Una de sus
funciones biolgicas conocidas
hastahoyen la clula es:hidrolizar protenas con suactividad
metaloproteasa de zinc. Se
expresa especficamente en
clulasmielomonocticas
.(20)

InformacinExtra
(21)(22)(23)(24)
:
Anticuerpos monoclonales: sustancias homogneas con accin sobre un solo
determinanteantignico(epitopo:epi=sobretopo=lugar),producidosporuncloncelular.
CD1ATimocitos
CD2

ReceptordeErosetas,molculadeadhesincelular,aumentalaafinidaddelainteraccincelular.

CD3

ClulasT

CD4

ClulasTmolculassuperficiales,cooperadoras/inductoras

CD5

ClulasT,subpoblacindeclulasbeta

CD6

ClulasT

CD7

ClulasT,clulasNK(Naturalkillers=destructorasnaturales)

CD8

ClulasT,molculassuperficiales,citotxicas/supresoras

CD9

ClulasTactivadas,clulaspreByplaquetas

CD10

Antgenodeleucemialinfoblsticaagudacomn,granulocitos.

CD11

ClulasTsupresoras,clulasNK,monocitos,granulocitos

CD13

Monocitos,granulocitos

CD14Monocitos,granulocitos:Seexpresaespecficamenteenclulasmielomonocticas.
CD15

Monocitos,granulocitos

CD16

ReceptorFcdeIgGsobreclulasKyneutrfilos

CD19

ClulasB

CD20

ClulasB

CD21

ClulasB,maduras

CD22

ClulasB

CD23

ClulasB

CD24

ClulasB,granulocitos

CD25

ClulasportadorasdereceptorIL2

CD34

Clulasprogenitoras

CD35

ClulasportadorasdecomplementoCR1

CD45

Leucocitos

5.
Los resultados que arroja el citmetro de flujo son grficos de frecuencia
representados como diagramas de puntos (cuando se analizan dos marcadores en
simultneo) o histogramasdefrecuencia(cuandoseanalizalaexpresinde unsolo
marcador). Adems con base en el tamao (forward scatter) y complejidad de la
clula (side scatter) se pueden identificar de una manera gruesa los diferentes
tiposcelularesqueseestnanalizando
.

Diagramadepuntos

Histograma: Muestra un Tamao

(FSC)
y
nico parmetro v/S complejidad(SSC)
Muestra
dos nmerodeeventos
parmetros
Este grfico es de
simultneamente.
densidad.
Mientras ms arribao
Son del mismo color
ms a la derecha
aquellos que tengan el
>mayoreslaseal.
mismo
nmero
de
eventos.

Conbaseenestainformacinyenloconsultado,interpretelossiguientesgrficos:

a. Una muestra de sangre perifrica contiene los siguientes leucocitos:

monocitos, linfocitos y granulocitos. Con base en el tamao y
granularidad de cada una de estas poblaciones celulares indique en el
siguientediagramadepuntosdondeseubicacadaunadeellas.

Respuesta:
A:Granulocito
B:Monocito
C:Linfocito
Fundamento:
Debido a que FSC, corresponde al tamao de la clula en este
caso. Aquellos elementos de menor tamao estn hacia la izquierda del eje x
(hacia el punto de coordenadas (0,0)). En cambio, El SSC, corresponde a la
complejidadcelularogranularidad.
En este caso, los linfocitossonclulasdemenor tamaoygranularidadquelos
Monocitos y Granulocitos. Por ende, corresponden a la poblacin celular
marcadas con la letra C. Por otra parte, no hay mucha diferencia de tamao
entre Monocitos y Granulocitos, pero s en cuanto a su granularidad, aquellas
que sean mscomplejasogranularestendrnunvalormayorenel ejey.Porlo
tanto, al comparar respecto a la granularidad entre monocitos y granulocitos,
sonlosgranulocitoslosqueposeenmayorgranularidad.

b. Ubique en forma de diagrama de puntos, como se veran las poblaciones

celularesindicadasdebajodecadagrfico:
Respuesta:

6 El sistema inmune es capaz de reconocer y responder ante distintas seales ya

sean provenientes de patgenos (PAMPs) o de elementos propios del organismo
(DAMPs). Mencione al menos dos tipos de receptores que reconocen estos
patronesyexpliquensumecanismodeaccin.

Lectinas de tipo C: corresponde a una familia de molculas de carbohidratos

dependientes de calcio, es sabido que se expresan sobre las membranas
plasmticas de clulas dendriticas, leucocitos y macrofagos. El mecanismo de
accin de algunas de estas consiste en identificar estructuras presentes en los
carbohidratos de la pared celular de algunos microorganismos pero que no se
encuentranenclulasdemamferos.(25)

Receptores Nformil MetLeuPhe: un ejemplo de estos FPR y FPRL1, se

expresan en neutrofilos y macrofagos respectivamente. Reconocen pptidos
cortos que contiene residuos de Nformilmetionina. Permiten a los fagocitos
identificar y responder a molculas microbianas ya que en todaslasbacteriashay
protenas que comienzan con N formilmetionina y por lo dems muy pocas de
mamferos las poseen. Estos receptores estn acoplados a una protena G,
fijadoras de GTP con siete dominios transmembrana. la unin del ligando al
receptor genera un cambio de GTP por GDP, la protena G ligada a GTPactivaa
numerosas enzimas celulares entre ellas una fosfolipasa C especfica del
fosfatidilinositol cuya funcin es elevar el calcio intracelular adems de activar la
protenacinasaC.(25)

7 Qu es el complejo mayor de histocompatibilidad, conocido en ingls como

MHC (Major Histocompatibility Complex)?. Indique cules clulasexpresanMHCde
clase Iycules clulasexpresanMHCdeclaseIIyqufuncincumplen(Lafuncin
relacinelaconlinfocitosT).

El MHC corresponde a un conjunto de protenas especializadas y que estn

codificadas en los genes del
locus llamado complejo mayor de
histocompatibilidad, unas de sus funciones principales es la de presentar
antgenos al linfocito T. Adems permiten la diferenciacin de lo propioyloajeno,
comoelcasodelrechazodeinjertosdepieldeunacepanoconsangunea(26).
las molculas MHC1 contienen dos cadenas polipeptdicas unidas de forma no
covalente,adems pptidos unidos a molculas del MCH1 son reconocidos por
linfocitos tCD8, estos ltimos reconocen pptidos derivados de protenas
citoslicas y de sntesis endgena. las molculas del MHC1 se expresan en
generalentodaslasclulashumanasnucleadas(26).
los pptidos unidos a molculas del complejo MHC2 son reconocido por los
linfocitos TCD4, estos reconocen principalmente pptidos derivados de protenas
extracelulares que se internalizan en las clulas presentadoras de antgeno. las
celulas dendriticas, los macrofagos y los linfocitos B, expresan molculas del
MCH2(26).

8 Los genes MHC son altamente polimrficos. Usted hereda un grupo de alelos
tanto delpadrecomodelamadre.Dequformaseexpresan estasglicoprotenas?
(Utilice conceptos como dominancia, recesividad,etc) Quventaja tienequeestos
genesseexpresendeesaforma?

Estas glicoprotenas se expresan de manera codominante, es decir, se expresan

todoslosalelosheredadosdeambosprogenitoresdeigualforma.
La ventaja de este polimorfismo consiste en que al heredarungrupodealelosdel
padre y otro grupo de la madre hay un significativo aumento del nmero de
molculas del MHCdisponiblesparaunirse apptidosypresentarloaloslinfocitos
T, es decir, es posible presentar un mayor nmero de pptidos derivados del
patgeno durante una determinada infeccin, as ocurre un mejoramiento de la
potencia de la respuesta inmune contra el patgeno debido a que se aumenta el
nmerodelinfocitosTespecficosdelpatgenoactivado(27).

9 Defina qu significa elsiguientetermino: restriccindeMHC(eningls,selfMHC

restriction)? QuexperimentohicieronZinkernagelandDohertyparademostrarlo?
YqurelacintieneconlareaccinmixtalinfocitariaoMLR?

La restriccin de MHC es una consecuencia de losprocesosdeseleccindurante

la maduracindeloslinfocitosTeneltimo,duranteesta,lasclulasqueexpresan
receptores del antgeno especficos frente a los pptidos propios asociados al
MHC son seleccionadas para vivir y as se da muerte a aquellas clulas que no
diferencianelMHCpropio(28).
El experimento de los cientficos demostr que el sistema inmune es capaz de
distinguir lo propio de lo extrao. Para demostrar esto los cientficos utilizaron
linfocitos provenientes de clulas del bazo de ratones inmunizados contra el virus
coriomeningitis linfotoxica (LCMV) y fibroblastos infectados con el mismo virus y
marcados con cromo. cuando los fibroblastos infectados provenan de cepa de
ratones cuyos antgenos de histocompatibilidad eran distintos ocurra que eran
ignorados por los linfocitos T inmunes,entonces no se produca ataque.Siocurre
liberacin de cromo como resultado de citotoxicidad, es decir, cuando linfocitos y
fibroblastos si compartianantgenosdehistocompatibilidadestosignificabaquelos
reconocancomopropios(29).
La reaccin mixta linfocitaria ocurre cuando hay proliferacin de linfocitos al ser
estos incubados enpresenciadeotrasclulasconantgenosMCHIIdiferentes,se
empleaparadeterminarhistocompatibilidadentrasplantes.

.
10 Un cocultivo es un experimento en el que se ponen en contacto 2 tipos de
clulas distintas: clulas presentadoras de antgenos y linfocitos T, esto con el fin
de evaluar la activacin de estos linfocitos T. Para realizar el experimento usted
cuentaconlossiguientescomponentesmurinos(deratn):
a. Clulas presentadoras: Dendritic cell (H2b), Lung Epithelial cell
(H2b),Macrophage(H2b/d)
b. Linfocitos:CD4Tcell(H2d),CD8Tcell(H2b)
c. Pptidos: A (para MHCI), B (para MHCII). Los pptidos se cargan
inmediatamente en los respectivos MHC y pueden ser reconocidos
porloslinfocitosTencuestin.
Con base en la informacin consultada y considerando el concepto de la
restriccin del MHC Cules son las posibles combinaciones entre clulas
presentadoras de antgenos y linfocitos? Necesariamente tiene que escoger
una clula presentadora, un pptidoy unlinfocito(Estoesunacombinacin).
Nota: Haplotipos: H2b, H2d H2b/d (Posee ambos haplotipos). Adems
indique cmo medira usted que los LT maduraron o no (marcadores CD y
secrecindecitoquinas)

Antecedentesyrespuesta:
La restriccin de MHC tiene relacin con el reconocimiento del pptido antignico
por el linfocito T, nicamente si se encuentra unido a una molcula MHC en la
membranadelaclulapresentadora.
Los linfocitos T CD8+ tienen una restriccin MHC de clase Y, porque solamente
son capaces de reconocer pptidos antignicos que se presenten unidos a
molculas MHC de clase I en la membrana de otra clula. Cualquiera de las 3
clulas antes mencionadas(Dendrtica, epitelial o macrfago) puede actuar como
clula presentadora, ya que todas las clulasnucleadasdelcuerpoposeenMHCI.
Por lo tanto, en este caso la combinacin apropiada entre clula presentadora,
pptido y linfocito es : Clula dendrtica, epitelial o macrfago + CD8+ t +
pptidoA(paraMHCI)

(31)
Por otra parte, los linfocitos T CD4+ tienen una restriccinMHCdeclaseII,porque
slo reconocen pptidos unidos a molculas MHC de clase II en la membrana de
las clulas presentadoras, por lo que una combinacin apropiada para este tipo
sera :
Clula dendrtica, epitelial o macrofago (las 3expresanMHCII)+CD4+
T+pptidoB(paraMHCII).
(32)

11Lacomunicacinentrelasclulasdelsistema inmunesedaatravsdediversas
seales. Entre ellas se destacan dos tipos de molculas: Citoquinas y
Quimioquinas.DefinacadaunadeellasHaciendonfasisensusdiferencias.
Las citoquinas y quimioquinas son molculas que permiten la comunicacin
mediantelainteraccinconreceptoresdesuperficieespecficos.
Las citoquinas son protenas producidas de forma breve y autolimitada por las
clulaslinfoidesydeotrostipos,queregulanyestimulanlarespuestainmunitaria.
El radio de accin de las citoquinas es corto y generalmente tienen funcin
autocrina (sobre la misma clulaquela produce),yuxtacrina(sobrelaclula vecina
mediante la expresin en membrana de la citoquina) o paracrina (sobre la clula
vecina al liberarse de forma soluble), favoreciendo de esta manera la aparicin de
fiebre y refuerzan la respuesta inflamatoria, provocando la activacin de los
macrofagos.
Su accin fundamental consiste en la regulacin del mecanismo de la
inflamacin
,
estas pueden actuar sobre diferentes tipos celulares e inducirdiversasrespuestas.
Estas pueden ser pro inflamatorias, las cuales son producidas principalmente por

monocitos y macrofagos, celulas dendriticas activadas y linfocitos, como tambin

antiinflamatorias(33)(34)
Las quimioquinas son protenas de bajo peso molecular, que se asocian a la
respuesta inflamatoria, ya que estn ligadas a la heparina, glicosaminoglicanos y
molculas de azcar cargadas negativamente de la superficie celular,
direccionando el movimiento de los leucocitos hacia el sitio de la lesin, de esta
formasonconsideradascitoquinasproinflamatorias.
La forma en que las quimioquinas dirigen el movimiento de las clulas
mononucleares por el organismo
es a travsdelgradientehacialaszonasconuna
mayor concentracin de quimioquina,
generando una respuesta inmuneadaptativa
que se denomina quimiotaxis, de esta forma son capaces de activarreceptoresde
neutrfilos,basfilos,monocitosylinfocitost.
Adems, las quimioquinas regulan la adhesin, migracin transendotelial,
degranulacin, angiognesis, desarrollo de clulas hematopoyticas e inmunes,as
comolagnesisderganoslinfoides.(34)(35)

12 Un ratn fue infectado con el Virus Respiratorio Sincicial (RSV) y se quiere

evaluar la presencia de protenas virales en el pulmn, adems de su ubicacin en
las clulas infectadas Qu tcnica utilizara usted en un corte histolgico
pulmonar para determinar la ubicacin de una protena de inters? Explique el
fundamentodeestatcnicaysusaplicaciones
.
Para evaluar la presencia de protenas virales se puede realizar un ELISA para la
deteccindelantgenomedianteanticuerposespecficosdelvirusrespiratoriosincicial.
En cuanto a la ubicacin de la protena, realizaremos una inmunohistoqumica, ya que
esta tcnica permite identificar la ubicacin celular y subcelular, en este caso una
protena, a la cual se le agrega un anticuerpo marcado con fluorescencia, de esta forma
se genera un complejo entre la protena y el anticuerpo marcado, quedando adherido en
la muestra del corte histopatolgico pulmonar, pudiendo determinar la ubicacindedicha
protena.
Esta tcnica es un mtodo de localizacin especfico de un antgeno en el tejido o en la
clula,basadoenelreconocimientoantgenoanticuerpo.
La inmunohistoqumica tiene sus orgenes en la histoqumica, pero extendida a una gran
variedad de componentes deltejido,dondeelprincipiobsicodeestemtodo,comoel de
cualquier otra tcnica de tincin es una evidente visualizacin de la localizacin del
componentemarcado.

Actualmente ha sido reconocido el potencial de la inmunohistoqumica siendo ms que

una tincin, un inmunoensayo en el tejido, con caractersticas de reproduccin y
cuantificacin de un test de ELISA, el cual no solo detecta la presencia de un analito,
protena o antgeno,enrelacinaltejidoyarquitecturacelularsinoquetambin proveede
unaprecisinyfiabilidadensusmediciones.
El desarrollo de esta tcnica hacausado unrolimportanteeneldiagnsticode patologas
comoelreconocimientoyclasificacindetumores(36)(37)
Bibliografa
1 Abbas, A. K., Lichtman, A. H., & Pillai, S.
INMUNOLOGA (Doctoral dissertation,
MassachusettsGeneralHospital).

2 Bielsa, I. (2010). Significado biolgico de los autoanticuerpos y tcnicas para su

deteccin.
MedCutanIberLatAm,

38
(3),109116.

3 De la Fuente Gonzlez, A., Lozano, J. R., & Capdevila, E. F. (2007). Anlisis de

protenas mediante electroforesis e inmunotransferencia (Western blot).
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