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STEEVEN MENDOZA TORRES

INMUNOLOGA

DR.JAIME VINTIMILLA UGALDE

ANTICUERPO MONOCLONAL
Un anticuerpo monoclonal es un anticuerpo homogneo producido por una clula hbrida
producto de la fusin de un clon de linfocitos B descendiente de una sola y nica clula madre y
una clula plasmtica tumoral.
Los anticuerpos monoclonales son anticuerpos idnticos porque son producidos por un solo tipo
de clula del sistema inmune, es decir, todos los clones proceden de una sola clula madre. Es
posible producir anticuerpos monoclonales que se unan especficamente con cualquier molcula
con carcter antignico. Este fenmeno es de gran utilidad en bioqumica, biologa
molecular y medicina.

PRODUCCIN DE ANTICUERPOS MONOCLONALES


Si una sustancia extraa (antgeno) se inyecta en el cuerpo de un humano, alguna de las clulas
B de su sistema inmune se transformarn en clulas plasmticas y empezarn a producir
anticuerpos que se unirn a ese antgeno. Cada clula B produce un solo tipo de anticuerpo, as
diferentes linfocitos B producirn anticuerpos estructuralmente diferentes que se unirn a
distintas partes del antgeno. Esta mezcla fisiolgica natural de anticuerpos es conocida
como Antisuero policlonal.
Para producir anticuerpos monoclonales, primero se extraen clulas B del bazo de un animal
que ha sido expuesto al antgeno. Estas clulas B son fusionadas en presencia de PEG
(polietilenglicol) con clulas tumorales de mieloma mltiple (un tipo de cncer) que pueden
crecer indefinidamente en cultivo celular. Esta fusin hace a las membranas celulares ms
permeables. Estas clulas fusionadas hbridas, llamadas hibridomas pueden multiplicarse rpida
e indefinidamente (ya que son clulas tumorales despus de todo) y pueden producir gran
cantidad de anticuerpos. Los hibridomas son suficientemente diluidos y cultivados para obtener
un nmero diferente de determinadas colonias, las cuales producen slo un tipo de anticuerpo.
Los anticuerpos de diferentes colonias son analizados para conocer su capacidad de unirse a un
antgeno determinado, por ejemplo con un tipo de test llamado ELISA, y para seleccionarse y
aislarse de la manera ms efectiva.
El proceso de produccin de anticuerpos monoclonales es complejo. Primero se disgrega el
bazo del ratn inmunizado, donde se acumulan los linfocitos B que tienen una escasa viabilidad
en cultivo, y se fusionan con clulas de mieloma deficientes en enzimas implicados en la
sntesis del nuevo ADN como la timidina quinasa (TK) o la hipoxantina guanina fosforibosil
transferasa (HGPRT). Los productos de la fusin celular (hibridomas) son cultivados en medio
HAT (de hipoxantina, aminopterina y timidina) donde las clulas mielmicas son eliminadas.
Solamente pueden crecer en el medio de cultivo HAT las clulas que son producto de la fusin
entre un linfocito y una clula de mieloma. Las clulas hbridas obtenidas tras el proceso de
fusin contienen un nmero elevado de cromosomas (72 del mieloma y 40 del linfocito B) que
en las sucesivas divisiones celulares se irn perdiendo hasta oscilar entre los 70 y los
80 cromosomas. Como consecuencia de dicho proceso, algunas clulas pierden la capacidad de
secrecin de anticuerpos o bien funciones bsicas para la viabilidad celular. Por ello tan pronto
como se identifica como positivo un pocillo se somete a un proceso de clonacin para evitar el
crecimiento de clulas no productoras que al ser metablicamente ms eficientes acabaran por
dominar el cultivo.
Los anticuerpos monoclonales pueden ser producidos en cultivos celulares o en animales.
Cuando las clulas de un hibridoma son inyectadas en cultivos de tejidos como el peritoneo
(cavidad peritoneal), produce tumores que sintetizan un fluido rico en anticuerpos
llamado lquido asctico.

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Se conoce la tecnologa necesaria para la produccin de anticuerpos en ausencia de


inmunizacin del animal. Es la denominada tecnologa de los anticuerpos recombinantes. Los
avances en la tecnologa gnica han facilitado en gran medida la manipulacin gentica,
produccin, identificacin y conjugacin de fragmentos de anticuerpos recombinantes,
obtenindose nuevos anticuerpos multivalentes y multiespecficos.
Estas tecnologas han permitido desarrollar estrategias de screening de anticuerpos
monoclonales fuera del cuerpo humano. Para ello es necesario disponer, en primer lugar de
enormes
libreras
de
genes
de
anticuerpos,
habitualmente
mediante
amplificacin PCR de cADN de linfocitos, o, alternativamente, mediante sntesis in vitro de
genes usando cebadores randomizados ("randomized wobble"). El mtodo de 'screening' de
estas libreras debe tener una eficiencia comparable a la del sistema inmune, lo que se puede
conseguir exponiendo en la superficie de microorganismos los anticuerpos producidos.
Ejemplos de los microorganismos empleados son los fagos filamentosos como M13 o bacterias.
Esta presentacin en superficie permite establecer un enlace fsico entre la funcin de unin al
antgeno y el gen del anticuerpo, de forma que la afinidad al antgeno permite aislar el
microorganismo portador del gen del anticuerpo de inters entre millones de otros. Una vez
aislado el clon especfico se amplifica para la produccin del anticuerpo de inters, por ejemplo
en Escherichia Coli.
APLICACIONES DE LOS ANTICUERPOS MONOCLONALES
Una vez que se han producido anticuerpos monoclonales que se unen a determinadas sustancias,
estos pueden ser usados para detectar la presencia y cantidad de esta sustancia, gracias a la
prueba de Western blot, que detecta una sustancia en una solucin o con una prueba
de inmunofluorescencia, que detecta una sustancia en una clula entera. Los anticuerpos
monoclonales tambin son usados para purificar una sustancia con tcnicas llamadas
inmunoprecipitacin y cromatografa.
Los anticuerpos monoclonales muestran una serie de ventajas sobre los anticuerpos policlonales
como:
1. Mayor homogeneidad.
2. Reproductibilidad de sus efectos, como consecuencia de su homogeneidad.
3. Mayor capacidad potencial de seleccionar los mejores anticuerpos en afinidad, tipo de
reconocimiento.
Los anticuerpos monoclonales se utilizan en muchos campos como:

La investigacin biomdica, como la identificacin y clonacin de genes, la


identificacin y aislamiento de protenas, la activacin de enzimas, conocimiento de la
estructura molecular y morfognesis.

Diagnstico: En medicina, gracias a la gran especificidad y capacidad prcticamente


ilimitada de los anticuerpos monoclonales para reconocer cualquier estructura qumica,
permite la deteccin de hormonas, vitaminas, citocinas; la monitorizacin de drogas,
deteccin de enfermedades infecciosas en microbiologa; la deteccin de alergenos en
alergia, hematologa, marcadores tumorales e infartos de miocardio, aplicaciones forenses,
inmunoescintografa. En las tnicas diagnsticas se emplean diversas herramientas de
biologa
molecular
como ELISA,

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EIA, citometra, inmunohistoqumica, inmunofluorescencia. Los anticuerpos monoclonales


son unas de las sustancias ms utilizadas en los laboratorios de diagnstico.

Catlisis: Los anticuerpos monoclonales se han utilizado como catalizadores de


mltiples reacciones qumicas.

Biosensores: Los anticuerpos monoclonales acoplados a transductores electrnicos


pueden detectar tanto molculas orgnicas como inorgnicas como la contaminacinde
metales pesados en alimentos y agua, deteccin de gases txicos, etc. Un biosensor es un
instrumento analtico formado por un material biolgico inmovilizado como una enzima,
anticuerpo, clula entera, orgnulo o combinaciones de los mismos, en ntimo contacto con
un sistema transductor adecuado que convierta la seal bioqumica en una seal elctrica
cuantificable.

Tratamiento: Las aplicaciones teraputicas constituyen el campo ms importante de los


anticuerpos monoclonales, ya que son capaces de destruir clulas, incluidas las tumorales,
mediante distintos mecanismos. Se emplean en el tratamiento de diversas enfermedades
autoinmunes como la artritis reumatoide, el cncer o para evitar el rechazo tras
un trasplante. Existen varios anticuerpos monoclonales aprobados para su uso en
determinadas enfermedades.1

ANTICUERPOS MONOCLONALES QUIMRICOS Y HUMANIZADOS


Los anticuerpos monoclonales de ratn o murinos, pese a ser perfectamente vlidos para todos
los usos teraputicos, no son tiles para su empleo en seres humanos, especialmente en terapias
que requieran tratamientos prolongados, ya que el sistema inmune los identifica como cuerpos
extraos y reacciona para destruirlos, por lo que su eficacia teraputica se ve claramente
disminuida.
Adems
pueden
presentar
posibles
efectos
secundarios
como
nefrotoxicidad, reacciones anafilcticas, etc. Por ello se debera obtener anticuerpos
monoclonales humanos.
Se han desarrollado diferentes tcnicas para ofrecer soluciones a la inicial imposibilidad de
obtener anticuerpos monoclonales enteramente humanos, entre las que destacan la
transformacin de linfocitos B humanos en cultivo mediante el virus de Epstein-Barr, la
utilizacin de ratones con inmunodeficiencia severa combinada, el uso de ratones transgnicos,
o tcnicas de ADN recombinante. Todas estas tcnicas han presentado distintos inconvenientes
que han imposibilitado el desarrollo final de los anticuerpos monoclonales humanos.
Sin embargo, se ha obtenido una segunda generacin de anticuerpos monoclonales, basada en la
humanizacin de los anticuerpos monoclonales de ratn mediante ingeniera gentica, evitando
as el rechazo del sistema inmune al ser introducidos en el organismo. Son los
llamados anticuerpos quimricos. Un anticuerpo quimrico es creado de tal manera que
incorpora parte animal y parte humana. La parte animal o hipervariable (un 30%) es
indispensable para que el anticuerpo reconozca la sustancia extraa (antgeno) y la parte
humana (un 70%) es responsable de que el sistema inmunitario pueda contribuir a aadir
efectividad a su accin. De este modo es posible modificar los anticuerpos monoclonales, casi
de manera infinita para dotarlos de propiedades efectoras y de reconocimiento diferentes a las
originales y minimizar la posibilidad de generar respuesta inmune frente al propio anticuerpo
teraputico.

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Un anticuerpo monoclonal humanizado significa que contiene un 90% de material humano, lo


que reduce la inmunogenicidad de los anticuerpos, es decir, el rechazo del sistema inmunitario.
La humanizacin es una tcnica que se basa en la estructura terciaria del sitio de combinacin
con el antgeno, el paratopo, donde existen unas regiones responsables de la unin al antgeno
mientras que otras zonas slo sirven de soporte estructural al paratopo. Por lo tanto las regiones
estructurales se obtienen de un anticuerpo humano mientras que las regiones responsables de la
unin al antgeno proceden del anticuerpo del ratn.

ANTICUERPOS MONOCLONALES APROBADOS PARA USO TERAPUTICO


Cada vez son ms los anticuerpos monoclonales que tienen utilidad teraputica en muchas
enfermedades como el cncer, el rechazo de trasplantes de rganos, enfermedades autoinmunes
y alrgicas.

ANTICUERPO
MONOCLONAL
Abciximab

Adalimumab

Alemtuzumab
Basiliximab
Bevacizumab

MECANISMO DE ACCIN
Inhibe la agregacin plaquetaria
Inhibe el efecto proinflamatorio de
TNF-alfa
ADCC( Antibody-dependent cellmediated cytotoxicity), CDC

INDICACIONES
Antitrombtico en intervenciones
coronarias y angioplsticas
Enfermedad de Crohn, Artritis
reumatoide, Espondilitis
anquilopoytica, Psoriasis
Leucemia linfoide crnica B

Inhibe la activacin de linfocitos T

Prevencin del rechazo agudo en

mediada por CD25

trasplante de rin.

Inhibe el efecto
proangiognico del VEGF-A

Cncer colorrectal

Bloquea la unin de EGF a


Cetuximab

su receptor en las clulas


tumorales y su proliferacin

Cncer colorrectal

ADCC, CDC
Daclizumab

Inbibe la activacin de linfocitos

Prevencin del rechazo agudo

T mediada por CD25

en trasplante de rin
Osteoporosis en mujeres

Denosumab

Inhibicin de los osteoclastos

posmenopausicas con alto riesgo de


fracturas

Edrecolomab
Efalizumab

Inhibe receptores de factores de


crecimiento
Inhibe la adhesin de linfocitos T

Cncer colorrectal
Psoriasis

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INMUNOLOGA

al endotelio y su activacin

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