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Divulgao

Quim. Nova, Vol. 26, No. 4, 556-563, 2003


ESPECTROMETRIA DE MASSAS COM IONIZAO POR ELECTROSPRAY APLICADA AO ESTUDO DE
ESPCIES INORGNICAS E ORGANOMETLICAS
#

Maria Carolina B. Moraes


Centro de Energia Nuclear na Agricultura, Universidade de So Paulo, CP 96, 13400-970 Piracicaba - SP
Claudimir Lucio do Lago*
Departamento de Qumica Fundamental, Instituto de Qumica, Universidade de So Paulo, Av. Prof. Lineu Prestes, 748, 05508900 So Paulo - SP
Recebido em 27/5/02; aceito em 20/11/02

ELECTROSPRAY IONIZATION MASS SPECTROMETRY APPLIED TO STUDY INORGANIC AND ORGANO-METALLIC


SPECIES. Although electrospray ionization mass spectrometry (ES-MS) has been extensively applied to study organic and
biochemical species, it is also specially suitable to study inorganic and organo-metallic species. Such species, even those that are
low-volatile or thermo-unstable, can be easily ionized or simply transferred from liquid to gas phase by electrospray. However,
chemical transformations frequently occur during the process. This paper discusses the fundamental aspects of electrospray
ionization as well as its analytical applicability to inorganic and organo-metallic species in order to spread the technique and
make its characteristics more familiar to potential users.
Keywords: mass spectrometry; electrospray; metal ions.

INTRODUO
Um espectrmetro de massas pode ser entendido, via de regra,
como um instrumento contendo uma fonte de ons, um separador ou
filtro de massas na realidade, massa/carga (m/z) e um detector.
Embora, existam vrias estratgias para separao e deteco, a etapa de ionizao aquela com o maior nmero de diferentes estratgias. Isso se deve grande variedade de tipos de amostras e espcies
de interesse. Amostras slidas, lquidas ou gasosas contendo espcies volteis ou no e com interesses voltados desde a anlise elementar at a composio de protenas requerem diferentes processos
de ionizao. Uma vez gerados os ons, os processos de separao e
deteco podem ser escolhidos de acordo com caractersticas mais
ou menos comuns como sensibilidade, resoluo e preciso de m/z e
custo. Neste contexto, surgiu a ionizao por electrospray como
uma alternativa para gerao de ons a partir de espcies pouco volteis presentes em fase lquida.
Um levantamento na literatura mostra que, de 1980 a 2000, o nmero aproximado de artigos publicados usando electrospray passou
de 100 para 7800, sendo que 80% destes esto relacionados com anlise de biomolculas e de compostos orgnicos, 10% so relativos
instrumentao e estudos sobre os aspectos fundamentais da formao do electrospray e 10% das publicaes esto associadas a espcies organometlicas e inorgnicas nas mais diferentes formas. Apesar
deste fato, vrios pesquisadores ainda desconhecem a potencialidade
desta tcnica, o que motivou este artigo de divulgao.
ASPECTOS FUNDAMENTAIS DA IONIZAO POR
ELECTROSPRAY
Embora seja normalmente considerada como uma fonte de
ionizao, o electrospray , na realidade, um processo de transfe*e-mail: claudemi@iq.usp.br
#
endereo atual: Embrapa Cernagen PqEB, W/5 Norte (final), 70770-900
Braslia - DF

rncia de ons pr-existentes em soluo para a fase gasosa. Pode-se


dizer que a efetiva ionizao (transformao de uma espcie neutra
em um on) um efeito secundrio. De qualquer forma, fcil entender porque uma tcnica que permite a transferncia de ons de uma
soluo para a fase gasosa para anlise por espectrometria de massas,
em to pouco tempo, teve um impulso to grande: isto se deve ao fato
da maioria dos processos qumicos e bioqumicos ocorrerem em fase
lquida, envolvendo muitas vezes espcies pouco volteis.
O electrospray foi sugerido como um possvel modo de
ionizao para espectrometria de massas por Dole em 19681. No
entanto, seus experimentos no foram convincentes pois estes visavam a anlise de espcies polimricas, como poliestireno, que no
esto ionizados em soluo. Foi somente em 1984 que Yamashita e
Fenn demonstraram a aplicabilidade da fonte de electrospray como
um mtodo de ionizao branda2.
Mtodos de ionizao anteriores ao electrospray, no qual ons
so transferidos da fase lquida para a fase gasosa, tal como
bombardeamento de tomos rpido (FAB) ou dessoro por plasma,
provocam no s a dessolvatao dos ons, mas, muitas vezes, sua
fragmentao e formao de ons a partir de molculas neutras. Isto
se deve ao fato de que, nestas tcnicas, uma grande quantidade de
energia fornecida de forma focalizada e em um curto perodo de
tempo. A principal vantagem do electrospray sobre estas outras
tcnicas que a dessolvatao ocorre gradualmente em temperaturas
relativamente baixas (tipicamente, de temperatura ambiente at
80 C), de forma a no gerar fragmentos nem molculas ionizadas.
Assim, muitos dos ons gerados na fase gasosa mantm exatamente
a mesma estrutura e carga das espcies em soluo, o que perfeito
para anlise de espcies no volteis e para estudos de especiao.
No entanto, isto no ocorre para todas as espcies. Muitas vezes,
uma espcie com carga maior ou igual a dois est estabilizada devido camada de solvatao. medida que a espcie dessolvatada,
tende a se envolver em processos que levem reduo de sua carga.
Alm disto, espcies neutras podem ser ionizadas por processos
eletrolticos na fase lquida, formao de agregados inicos durante
o processo de electrospray e por dissociao induzida por coliso

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Espectrometria de Massas com Ionizao por Electrospray

(CID) j na fase gasosa. A preservao ou no dos ons originais est


intimamente ligada ao processo de ionizao por electrospray3.
A ionizao por electrospray envolve a formao de um spray
eletrosttico, a partir do qual so geradas pequenas gotas carregadas
e destas so liberados os ons. A implementao de uma fonte de
electrospray relativamente simples, comparando-se com outras
fontes para espectrometria de massas3. necessria uma fonte de
alta tenso (1000 a 7000 V) que esteja em contato com a soluo
contendo eletrlitos. Tipicamente, esta soluo bombeada atravs
de um capilar (d.i. 50 a 100 m) com uma vazo inferior a 10 L/min.
No caso de fluxos menores que 1 L/min, o processo chamado de
nanoelectrospray.
A Figura 1 mostra uma representao esquemtica da fonte de
electrospray de um espectrmetro Platform II (Micromass, Inglaterra). Toda a regio da fonte est presso atmosfrica. Quando um
potencial positivo, por exemplo, aplicado na soluo, os ons positivos tendem a se afastar para uma regio menos positiva, isto , em
direo ao contra-eletrodo. Assim, a gota sendo formada na ponta do
capilar estar enriquecida em ons positivos. Este tipo de separao
de carga chamado de processo eletrofortico. Conforme a densidade de carga aumenta na gota, o campo eltrico formado entre o capilar e o contra eletrodo aumenta provocando a deformao da gota. A
gota ganha a forma de um cone que denominado de cone de Taylor.

Figura 1. Representao esquemtica da fonte do electrospray: a- capilar,


b- contra-eletrodo, c-cone de amostragem, d- skimmer, e- lentes do skimmer.
A regio I est presso atmosfrica, a regio II, a presso intermediria e
a regio III, sob alto vcuo

Esta gota na forma de cone permanece presa ao capilar at o


momento em que a densidade de carga na superfcie da gota e o
aumento da repulso entre os ons venam a tenso superficial do
lquido, ocorrendo ento a liberao de pequenas gotas com alta densidade de carga. A freqncia deste processo depende da magnitude
do campo eltrico, da tenso superficial do solvente e da
condutividade da soluo.
A FONTE DE ELECTROSPRAY COMO UMA CLULA
ELETROQUMICA
Como foi relatado anteriormente, a fonte de electrospray pode
gerar espcies eletroliticamente. Isto porque esta pode ser comparada a uma clula eletroltica de dois eletrodos. O capilar metlico ou
um fio metlico em contato com a soluo um dos eletrodos da
clula. Apesar de no estar diretamente em contato com a soluo, o
contra-eletrodo completa o circuito. Devido ao potencial aplicado e
proximidade entre a ponta do capilar e o contra-eletrodo, h um
alto campo eltrico nesta regio que provoca a formao do cone de
Taylor. O sistema de electrospray funciona como um tipo especial
de clula eletroltica. Especial porque o transporte de ons no ocor-

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re ininterruptamente pela soluo, como nas clulas eletrolticas convencionais. Parte do transporte dos ons ocorre na fase gasosa. Uma
reao de oxidao normal ocorre no eletrodo positivo, isto , na
interface soluo/fio metlico. Esta reao fornece ons positivos
soluo, convertendo tomos do metal em ons metlicos positivos e
liberando eltrons (Equao 1). Outra alternativa remover ons negativos presentes na soluo atravs da oxidao (Equao 2) ou
oxidao do solvente ou outra espcie neutra (Equao 3). A reduo das espcies ocorre no contra-eletrodo (Equao 4). Estes processos so vlidos se considerarmos o electrospray como fonte de
ons positivos. Obviamente, com a reverso dos potenciais sobre os
eletrodos, os processos de oxidao e reduo seriam invertidos.
M(s)  M2+(aq) + 2e (no metal)
4OH (aq)  O2(g) + 2H2O + 4 e (na soluo)
H2O  2H+ +1/2 O2 + 2 e (oxidao do solvente)
A+ + e  A (no contra eletrodo)

(1)
(2)
(3)
(4)

Como nas clulas eletrolticas convencionais, predominar a reao com menor potencial de oxidao. Isto vai depender da composio do eletrodo, do material na soluo e da natureza do solvente.
Prova da ocorrncia de oxidao eletroqumica no capilar metlico
foi fornecida por Blades e colaboradores4,5. Estes usaram um capilar
de slica recoberta com um depsito de zinco como ponta do capilar.
Quando o potencial foi aplicado, ons Zn2+ foram detectados. Resultados similares foram obtidos usando capilares de cido inoxidvel,
quando ons Fe2+ foram detectados.
O processo eletroqumico poder ter uma influncia desprezvel
no espectro de massas da espcie em estudo. Por exemplo, no caso
da maior parte dos estudos conduzidos por electrospray estudos
de biomolculas como peptdeos, protenas e oligonucleotdoes ,
as alteraes eletroqumicas sobre estas espcies so desprezveis
porque normalmente outras espcies comuns no sistema como
eletrlitos, o metal do capilar e o prprio solvente sofrem muito
mais facilmente o processo redox6-8. O mesmo tambm ocorre se, ao
invs de aplicar o potencial diretamente no capilar, for utilizado um
eletrodo imerso no reservatrio da soluo. Neste caso, devido ao
grande volume de soluo comparado com a pequena extenso das
transformaes eletrdicas, h uma diluio das espcies transformadas e pequena ou nenhuma alterao no espectro de massas acaba
sendo observada.
DESSOLVATAO DAS GOTAS
Depois da liberao das gotas com alta densidade de carga do
cone de Taylor, estas passam pela regio entre a ponta do capilar e o
contra eletrodo e vo sofrendo dessolvatao. A evaporao do
solvente favorecida pela energia trmica do ambiente e pelo auxlio de um gs secante, normalmente nitrognio. Conforme a gota
perde solvente, a densidade de carga aumenta at um ponto em que
as foras de repulso vencem a tenso superficial e gotculas so
liberadas pela fisso da gota inicial.
A carga mxima Q que uma gota de raio R pode manter antes de
se fragmentar fornecida pela Equao 5.
Q = 8 . (0 . . R3)1/2

(5)

onde 0 a permissividade livre no espao e a tenso superficial


da gota. Esta deduo foi proposta por Lord Rayleigh (1882) e
comumente conhecida como o limite de Rayleigh9.
Este processo de dessolvatao e fisso das gotas vem sendo
estudado por vrios grupos. Taflin e colaboradores7 observaram que
as gotas para sofrerem fisso no precisam alcanar o limite de

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Moraes e Lago

Rayleigh. A ruptura ocorre em torno de 80% deste limite e resulta na


expulso de aproximadamente 20 gotas descendentes somando de 2
a 3% da massa e 10 a 18% da carga da gota ascendente. Assim, as
gotas descendentes so bem menores que as gotas ascendentes e
possuem uma razo massa/carga menor. A fissura precoce da gota
deve estar relacionada a pelo menos dois fatores: (1) normalmente,
as gotas vibram, o que estimula sua ruptura e (2) a gota que possui
um desequilbrio de cargas sofre deformao por estar imersa em
um intenso campo eltrico. Esta deformao pode ser entendida considerando-se o que ocorre originalmente com a soluo na ponta do
capilar.
A Figura 2 mostra uma representao esquemtica do processo
de formao das gotas descendentes. As fisses subseqentes tambm so mostradas. A Figura 3 mostra esquematicamente o processo de deformao da gota quando esta inserida na regio com um
alto campo eltrico. Estas ocorrem em tempos, progressivamente,
mais curtos. O tempo de evoluo total e produo dos ons na fase
gasosa em torno de microssegundos10.

Figura 2. Representao esquemtica do processo de produo das microgotas por electrospray. Os valores so resultados de simulaes realizadas
por Kebarle e Tang30 e devem ser entendidos apenas como indicativos da
ordem de grandeza daqueles que realmente ocorrem. As setas em branco
indicam a evaporao; o tempo marcado sobre elas aquele necessrio
para que o dimetro seja reduzido at o ponto em que a fisso da gota
ocorre (indicado pela seta preta). Os valores numricos junto s gotas
referem-se ao nmero de cargas (ctions ou nions) em excesso. No caso
das gotculas, o nmero de cargas de cada uma est indicado ao lado do
conjunto. O resultado da fisso sempre uma gota principal e vrias outras
de pequeno tamanho. Deve-se notar que, aps uma reduo inicial do
dimetro da gota at o ponto de ocorrncia da primeira fisso, as sucessivas
fisses ocorrem em escala de tempo semelhante, gerando partculas com
dimenses sucessivamente menores. O quadro em destaque mostra que o
processo de fisso tambm ocorre com as gotas menores. No caso,
apresentado o processo de fisso gerando gotculas com dimetro da ordem
de 6 nm e duas cargas em excesso. Considerando, por exemplo, que o
dimetro de um on sulfato hidratado da ordem de 0,4 nm, nota-se que,
aps poucas fisses, as gotas j atingem o nvel molecular

FORMAO DO ON NA FASE GASOSA


Todo este processo de dessolvatao da gota at atingir o raio de
aproximadamente 30 nm j est muito bem entendido. No entanto,
ainda no se sabe exatamente como o on gerado na fase gasosa.
H dvidas se o on expelido da gota ou se o processo de fisses
sucessivas ocorre at restar um nico on. Existem dois diferentes
mecanismos que foram propostos para a formao dos ons na fase
gasosa.
O primeiro depende da formao de gotas extremamente pequenas, R 1 nm, e que contenham somente um on. A evaporao do
solvente da gota converter esta em um on na fase gasosa. Esse

Quim. Nova

Figura 3. Deformao e fisso de uma gota com excesso de carga. No estgio


I, considerado o aspecto de uma gota com excesso de carga que acabou de
ser introduzida em uma regio sob campo eltrico. No estgio II, observa-se
que a gota comea a sofrer deformao e o excesso de carga, que estava
uniformemente distribudo sobre sua superfcie, agora comea a concentrarse na direo determinada pelo campo eltrico. O estgio III mostra que,
embora a maior parte do corpo da gota permanea intacto, h uma deformao significativa da regio de maior densidade de carga. Esta deformao
acentua-se at o momento em ocorre a projeo das gotculas (IV), as quais
devem, de fato, possuir maior densidade de carga que a gota me

mecanismo foi proposto por Dole em 1968 e foi denominado modelo da carga residual (CRM)1.
O outro mecanismo foi proposto por Thomson e Iribarne modelo da evaporao do on (IEM)11,12 e sugere que a emisso dos
ons ocorre diretamente de gotas muito pequenas e altamente carregadas. Para comear a ocorrer este processo, a gota precisa ter um
raio de 8 nm e 70 cargas aproximadamente. Nestas condies, a gota
no sofre ruptura mas pode emitir ons para a fase gasosa. Assim, a
gota no precisaria atingir tamanhos to pequenos como 1 nm e podem existir outros solutos.
O IEM foi proposto porque, em espectros de solues 1 mmol/L
de NaCl em metanol:gua, o nico on detectado foi Na+ e espcies
solvatadas. ons como Nan(NaCl)n+m, que deveriam ser formados caso
o modelo CRM ocorresse, no foram observados em seus experimentos. Somente espcies solvatadas, protonadas e ons livres foram detectados. No entanto, os experimentos de Wang e Cole mostraram a existncia de ons como Cs+ e Cs(CsCl)+ em uma soluo
50:50 gua:metanol13. ainda provvel que ambos os processos estejam ocorrendo simultaneamente.
DISSOCIAO INDUZIDA POR COLISO
Depois de formado, o on alcana a regio do capilar ou cone de
amostragem que tem um orifcio bem pequeno (da ordem de poucos
micrometros). A partir da, o sistema passa para a regio de baixa
presso. Na entrada, h um conjunto de lentes que conduzem os ons
ao analisador de massas (Figura 1). O sistema de bombas e tica
varia conforme o produtor do espectrmetro. A regio entre o capilar ou cone de amostragem, o skimmer e as lentes muito importante, pois nesta regio pode ocorrer dissociao induzida por coliso (CID).
Esta regio contm ons formados no electrospray e o gs
secante (nitrognio). Como h um campo eltrico, os ons so acelerados provocando a coliso entre estes e as molculas do gs secante.
Assim, por exemplo, se um on solvatado entrar nesta regio ele pode

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Espectrometria de Massas com Ionizao por Electrospray

sofrer coliso e perder molculas do solvente ou at mesmo sofrer


processos de rearranjo intramolecular ou fragmentao.
O processo de CID pode ser interessante em alguns estudos, mas
pode dificultar a visualizao das espcies na forma como elas se
encontravam em soluo. O fenmeno de CID pode ser minimizado
controlando a queda de potencial sentida pelo on na regio do cone
de amostragem e o skimmer.
INTENSIDADE DO PICO VERSUS CONCENTRAO
Um dos grandes problemas no electrospray a falta de
linearidade da intensidade com a concentrao. A vazo da amostra,
do gs nebulizante, do gs secante e a distncia da ponta do capilar
ao contra eletrodo so parmetros que afetam a estabilidade do
electrospray e, portanto, a formao das espcies na fase gasosa.
No entanto, estes so facilmente controlados para se obter um fluxo
de amostra constante. J a presena de outros eletrlitos na soluo
no to fcil de ser controlada e compromete a linearidade de resposta da intensidade de um pico em funo da concentrao. A seo linear do electrospray trabalha numa faixa estreita de concentrao (de 10-6 a 10-3 mol/L). Todavia, esta linearidade pode ser prejudicada se outros eletrlitos estiverem presentes na soluo.
No solvente utilizado sempre h impurezas. Por exemplo, no
metanol as impurezas so principalmente sais de amnio e sdio numa
concentrao 10-5 mol/L3. Muitas vezes, essas impurezas so necessrias, porque no h formao do electrospray se a condutividade for
menor do que 10-7 ohm-1 cm-1. Por exemplo, considerando um analito
A+ e uma impureza B+, quando A+ estiver em baixas concentraes, B+
predominar na gota e ser transportado em maior nmero para a fase
gasosa. Conforme a concentrao de A+ aumenta, este comea a dominar. Normalmente, para uma concentrao do analito acima de
10-5 mol/L, a intensidade de B+ (IB) comea a diminuir. Os ons A+
competem com os ons B+ no processo de converso para a fase gasosa. Baseando-se em tais consideraes, Kebarle e Tang propuseram a
Equao 6. Esta foi elaborada para um sistema de dois eletrlitos, mas
pode ser estendida para n eletrlitos10.
+

kA[A ]
IA = f . p . I .
kA[A+] + kB[B +]

(6)

onde IA a intensidade do on A+ que foi detectada no espectrmetro


de massas, [A+] e [B+] so as concentraes dos eletrlitos na soluo,
f frao de cargas na gota que so convertidas para a fase gasosa e p
a frao de ons detectados em relao aos ons gerados, kA e kB so
constantes que expressam a taxa de transferncia de ons da gota carregada para a fase gasosa. A Equao 6 expressa a competio entre os
ons em soluo pela transferncia para a fase gasosa. Assim sendo, a
intensidade de uma espcie na fase gasosa, IA, no depender somente
da sua concentrao na soluo e sim da razo entre kA / kB .
Atravs da Equao 6 pode-se perceber que, aumentando a concentrao do analito A+, h um aumento da corrente, mas como esta
tambm est no denominador, existe um limite para este aumento. O
aumento da concentrao no altera a corrente devido a efeitos
interinicos, o que diminui a mobilidade inica e provoca saturao
da espcie na gota10.
No geral, em concentraes acima de 1 mmol/L, a intensidade
da corrente mantm-se constante e algumas vezes pode at diminuir.
O raio das primeiras gotas formadas por electrospray deve ser da
ordem de 0,5 a 1 m para sofrerem todo o processo de dessolvatao
e gerarem os ons na fase gasosa (Figura 2). Para tanto, deve-se utilizar capilares com dimetro interno menor que 100 m e fluxo de
amostra menor que 10 L/min. Gotas grandes no sofrem

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dessolvatao eficiente para gerar os ons na fase gasosa. Diminuio do fluxo de amostra e aumento da condutividade so dois
parmetros que permitem obter gotas menores, aumentando a eficincia da dessolvatao.
A supresso do on devido competio entre os ligantes pelo
tomo central pode ser observada na Figura 4. Esta figura mostra o
estudo14 de supresso usando solues com concentrao constante,
100 mmol/L, de Zn(NO3)2 e diferentes concentraes de iodeto, que
variaram de 10 mol/L a 10 mmol/L. Quando o iodeto est numa
concentrao inferior a 100 mol/L, a espcie favorecida o complexo Zn(NO3)3 , com o aumento da concentrao de iodeto h um
favorecimento da espcie ZnI3.

Figura 4. Estudo sobre a supresso dos ons. Concentrao de Zn(NO3)2


constante em 100 mol/L e a concentrao de iodeto variando de 10 mol/L
a 10 mmol/L

DESCARGA CORONA
Um dos principais problemas enfrentados para se obter uma corrente constante de ons a ocorrncia de descarga corona, principalmente no modo de operao para ons negativos. O efeito de descarga corona ocorre quando eltrons livres presentes no gs so acelerados a uma velocidade suficiente para ionizar molculas de gases
presentes na cmara de ionizao, provocando a ionizao destas e
gerando ons como CH3O a partir do metanol e O2 do ar. A descarga
corona diminui a intensidade dos ons do analito e os picos correspondentes s espcies geradas pela descarga aparecem com uma intensidade muito alta. A presena de espcies que capturam eltrons,
como os gases O2, SF6 e os hidrocarbonetos policlorados, inibem a
descarga corona1. A Figura 5 ilustra este problema. O on de m/z 32
(Figura 5a) indica a ocorrncia de descarga corona. Este espectro foi
obtido de uma soluo 100 mol/L de NaNO 3 e NaCl em
metanol:gua 50:50 (v/v) e com uma tenso de 4 kV aplicada no
capilar. A Figura 5b mostra o espectro da mesma soluo obtida com
a tenso no capilar em 2 kV, onde no se observa a formao de
espcies caractersticas da descarga corona. Alm disto, pode-se observar na Figura 5a que h uma supresso do sinal do NO3 e do Cl
comparativamente ao espectro da Figura 5b.
TRANSFORMAES QUMICAS DOS ONS PRESENTES
NA GOTA CARREGADA DURANTE O PROCESSO DE
ELECTROSPRAY
primeira vista, o electrospray deveria ser a tcnica ideal para
se fazer especiao. Bastaria controlar os eletrlitos presentes na

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Moraes e Lago

Quim. Nova

do metal permanea o mesmo, tais reaes podem conduzir formao de espcies diferentes daquelas encontradas na fase aquosa. Assim, difcil observar na fase gasosa ons metlicos livres com cargas +3 ou +2, a no ser que o on esteja complexado.
Alm disto, a observao de ons com mltiplas cargas depender tambm do tipo de solvente utilizado. Lantandeos com carga +3
s podem ser observados com solventes como dimetilsulfxido
(DMSO) e dimetilformamida3-5. Cu(II) tende a sofrer reduo na
presena de solues preparadas com acetonitrila como solvente.
ALGUMAS APLICAES DE ES-MS PARA ESPCIES
INORGNICAS E ORGANOMETLICAS

Figura 5. Estudo mostrando o efeito da descarga corona nos espectros de


massas. Espectro de uma soluo de NaCl e NaNO3 em metanol:gua (1:1):
(a) tenso no capilar 4 kV, (b) tenso no capilar 2 kV

soluo e facilmente poder-se-ia identificar qualquer espcie inica.


Todavia, quando a gota comea a sofrer o processo de dessolvatao,
a concentrao das espcies e o pH da gota podem ser significativamente alterados15. Alm disso, as mudanas posteriores na fase gasosa normalmente conduzem reduo de carga das espcies e
dissociao induzida por coliso.
A concentrao do soluto, que menos voltil do que o solvente,
aumenta porque o volume da gota diminui com a evaporao do
solvente. Mudanas na concentrao do soluto levam a mudanas do
pH e, portanto, do espectro de massas, uma vez que o grau de
ionizao das espcies depende do pH.
possvel estimar a concentrao final do analito na gota atravs dos raios das gotas formadas conforme estas evaporam. Solutos
no volteis como o NaCl e outros eletrlitos podem aumentar a sua
concentrao em at 50 vezes na gota final.
O processo de reduo da carga da espcie bastante complexo
e pode ocorrer por CID, atravs da dessolvatao ou por influncia
do solvente. A reduo da carga do complexo devido evaporao
da gua mostrada nas Equaes 7 e 8.
M(H2O)3+
 M(OH)(H2O)n2+-2 + H3O+
n

(7)

M(OH)(H2O)n2+-2  M(OH)2(H2O)n1+-4 + H3O+

(8)

Conforme as molculas do solvente so removidas, o complexo


on-solvente no consegue mais estabilizar a carga devido diminuio da esfera de solvatao do on. Embora o estado de oxidao

Existem diferentes tipos de analisadores de massas interfaceados


com o modo de ionizao por electrospray. O mais comum, devido facilidade de manuseio e ao menor custo, o analisador
quadrupolar. O electrospray com filtro quadrupolar est sendo amplamente utilizado para estudos do comportamento dos ons na fase
gasosa, especiao de complexos metlicos e estudos sobre os processos fundamentais de ionizao. Outros tipos de analisadores de
massa como tempo de vo, setor magntico, ion-trap e ressonncia ciclotrnica tambm j existem comercialmente9.
A tcnica de electrospray permite a anlise de compostos com
peso molecular de at 200.000 Da em equipamentos com pequeno
alcance de massas (30 a 3000 u). Isto porque, no electrospray,
molculas com alto peso molecular podem ter mltiplas cargas. Estas cargas podem ser adquiridas pela ionizao da macromolcula
em diversos pontos da cadeia ou, mais comumente, pela incorporao de espcies inicas pequenas que estejam presentes na soluo.
Este o caso, por exemplo, da incorporao de NH4+ ou Na+ no
modo ons positivos ou de HCOO ou OH no modo ons negativos.
Obviamente, com a incorporao destas espcies, alm do aumento
de carga, h tambm o aumento de massa.
As principais aplicaes da ionizao por electrospray tm sido
os estudos na rea de bioqumica e qumica orgnica. No entanto,
vem crescendo o interesse na tcnica para aplicao em estudos fundamentais, de organometlicos e complexos inorgnicos16-26. ES-MS
vem sendo utilizado nos mais diferentes estudos como na investigao da acidez de diis27, estabilidade dos ons na fase gasosa28, identificao de ons organometlicos e ons inorgnicos16-29 e especiao28,33. No Brasil, os estudos para aplicaes bioqumicas e orgnicas tm avanado bastante nos ltimos trs anos, mas tem sido muito
modesta a aplicao da tcnica para estudos eletroqumicos e de complexos inorgnicos, entre outros.
Pesquisadores como Cole3, Fenn2 e Kebarle30 vm estudando
intensamente o comportamento de ons relativamente simples como
metais alcalinos e alcalinos terrosos a fim de tentar esclarecer o processo de transferncia dos ons da fase lquida para a fase gasosa31,4,5.
Os estudos de Kerbale e Tang 30,31 e Ikomonou4,5 para o entendimento da formao da gota carregada e produo dos ons na fase gasosa
foram realizados com ons inorgnicos simples como cloretos e
iodetos de sdio, potssio e csio, contribuindo muito para o entendimento sobre o comportamento destes ons em ES-MS.
Uma das questes a serem respondidas se os complexos observados no espectro de massas so formados na fase gasosa, durante o
processo de electrospray, ou se j esto presentes na fase lquida.
Existe uma srie de trabalhos que mostra que quando o on gerado no
est no estado de oxidao esperado, este resultou da formao na fase
gasosa. Moraes e colaboradores mostraram que espcies como NiI2,
com nquel no estado de oxidao um, so formadas na fase gasosa32.
Os estudos de Horlick e Agnes16-19 mostraram a possibilidade de
se utilizar o electrospray para a especiao de metais e semimetais.
Eles estudaram a dependncia da intensidade do sinal com a concen-

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Espectrometria de Massas com Ionizao por Electrospray

trao do analito e de outros eletrlitos presentes na soluo e a influncia dos parmetros de formao do spray na intensidade do sinal
e na composio dos ons gerados. Os experimentos de Horlick e Agnes
concordam com os experimentos de Kebarle e Tang e com a teoria por
eles desenvolvida (Equao 6). Estes mostraram que a formao de
ons por electrospray s gerada dentro de um mnimo de condutividade. Isto , necessria uma quantidade mnima de eletrlito na
soluo para a formao de um electrospray estvel. No entanto,
isto pode suprimir a ionizao da espcie de interesse. Por exemplo,
entre as espcies I e Cl , a primeira apresenta uma sensibilidade muito maior. A quantificao e especiao das espcies por electrospray
esto diretamente relacionadas com a supresso do sinal e respostas
relativas das intensidades das espcies presentes na soluo. As diferentes espcies presentes na soluo, o analito, o solvente e as impurezas, podem vir a ter um comportamento completamente diferente do
esperado, durante a formao do spray, como sofrer processos de
oxi-reduo, agregao, fragmentao e supresso.
Recentemente, diferentes trabalhos vm sendo publicados onde
os autores demonstram a possibilidade de fazer especiao utilizando condies brandas no electrospray16-18,20. No entanto, tm-se
observado que h algumas dificuldades. Obter ons estveis com mltiplas cargas no electrospray no uma tarefa fcil. Mesmo ons
como [Fe(CN)6]4- e [Fe(CN)6]3- que em fase lquida permitem a estabilizao do ferro nos estados de oxidao II e III, apresentaram, em
fase gasosa, predominantemente espcies com uma carga com o ferro em diferentes estados de oxidao: I, II, III e IV32. A especiao
por electrospray favorecida no caso de complexos volumosos e
com mltiplas insaturaes, o que ajuda a acomodar cargas maiores.
A ionizao por electrospray de complexos pequenos e monoatmicos, ao contrrio dos complexos volumosos, sofre grande influncia dos processos eletroqumicos.
Raymond e colaboradores33 demonstraram a possibilidade de
utilizar o electrospray para identificao de espcies de poliselenetos em solues aquosas. Orians estudou a especiao de complexos de diferentes metais com ligantes orgnicos. Por exemplo, no
caso do complexo de cobre com a 8-hidroxiquinolina, estes mostraram que em solues metanlicas a espcie predominante o complexo com Cu(II). No entanto, quando o solvente usado foi
acetonitrila, a espcie predominante o complexo com Cu(I)20.
O processo eletroqumico poder ter uma influncia desprezvel
no espectro de massas se os ons produzidos, consumidos, ou alterados pelo processo eletroqumico no so convertidos para a fase gasosa. No entanto, como discutido por Van Berkel34, Fernandez de La
Mora6 e outros22,23, o processo eletroqumico pode ter importncia
crucial em alguns estudos. Como na especiao de solues de complexos metlicos que sofrem facilmente processos de oxi-reduo.
Van Berkel34 e Moraes e colaboradores14 observaram que, durante o processo de electrospray usando-se um capilar de ao inoxidvel, no modo ons negativos, pode haver reduo do metal no capilar metlico. Isto tem duas conseqncias negativas: (1) alterao
do estado de oxidao da espcie podendo inibir ou at impedir a
sua deteco e (2) efeito de memria. Como o metal reduzido e
depositado no capilar, ao mudar a soluo necessrio um longo
tempo passando-se o solvente, com a polaridade positiva, para a limpeza do mesmo. O uso de um simples capilar de slica fundida ao
invs do capilar de ao inoxidvel minimiza de forma significativa o
processo de reduo e o efeito de memria14,35,36 .
Alm deste fenmeno, outros processos durante o electrospray
podem provocar alteraes eletroqumicas na soluo. Dependendo
da tenso aplicada no cone de amostragem, alguns estados de oxidao so observados14.
Um exemplo onde o estado de oxidao do metal no foi alterado devido formao do electrospray pode ser ilustrado pelo estu-

561

do para identificao de ftalocianinas sulfonadas de zinco, lutcio e


disprsio no modo ons negativos37. Os espectros obtidos para as
trs ftalocianinas apresentaram clusters do tipo [MPcs 2H] 3 ,
[MPcs2NaH2On]3, [MPcs2Na2H2On]3. A Tabela 1 mostra os principais ons identificados atravs do espectro obtido para uma soluo
1 mmol/L de ftalocianina de disprsio em meio metanol:acetonitrila
no modo ons negativos. Acredita-se que as estruturas das ftalocianinas
consigam estabilizar a carga do complexo e manter suas caractersticas mesmo na fase gasosa.
Tabela 1. Principais espcies identificadas no espectro de massas de
uma soluo de DyPcs2
Espcie
2-

[H2Pcs2]
[H2Pcs2Na ][Dy(Pcs2)2H2]3[Dy(Pcs2)2H3]2[Dy(Pcs2)2HNa2]2-

m/z
336,1
359,1
502,3
753,5
764,4

Um exemplo contrrio o estudo realizado por Prada e colaboradores38 para a determinao da composio e especiao de complexos do agente quelante di-2-piridilcetonabenzoilidrazona
(DPKBH) com ons de Cu(II), Fe(II) e Fe(III). Estes estudos mostraram que a composio do complexo Cu(II)/DPKBH 1:2 metal/
ligante. Os ons de m/z 667 e 669 indicam a presena do complexo
com Cu(II) protonado, [Cu(DPKBH)2H]+. Alm disto, foi possvel
observar os ons de m/z 666 e 668 que indicam a formao do complexo com Cu(III), [Cu(DPKBH)2]+. A oxidao do Cu(II) a Cu(III)
pode estar ocorrendo durante a dessolvatao das gotas no processo
de ionizao. O mesmo comportamento foi observado para o espectro com Fe(II), com a formao de [Fe II (DPKBH) 2 H] + e
[FeII(DPKBH)2]+ (Figura 6). Para o complexo com Fe(III), somente
o cluster de picos respectivos a [FeIII(DPKBH)2]+ foi observado. Estas espcies indicam a labilidade do complexo, uma vez que os espectros foram obtidos a baixas tenses do cone, quando no h
favorecimento de dissociao por CID38. Apesar das estruturas destes compostos serem volumosas e apresentarem um nmero de stios
que poderiam estabilizar a carga do complexo, o metal sofreu alterao do seu estado de oxidao. Na fase aquosa, seriam esperados
somente os complexos com Cu(II).

Figura 6. Espectro obtido de uma soluo de 100 mol/L de Fe(II) e


(DPKBH) em metanol

562

Moraes e Lago

Importantes estudos vm sendo conduzidos para a identificao


e quantificao de metalotionenas em fluidos biolgicos. Os primeiros estudos de complexos envolvendo metalotionenas foram conduzidos por Fenselau e colaboradores15, mostrando a possibilidade
de se utilizar o electrospray para estudos envolvendo as metalotionenas nos organismos vivos. Eles monitoraram o fluxo de entrada e sada de cdmio e zinco das metalotionenas por ES-MS.
A compreenso da importncia dos metais nos mecanismos
moleculares e sua toxicidade e essencialidade nos seres vivos e nos
ciclos biogeoqumicos depende de tcnicas analticas capazes de fornecerem informao da forma qumica na qual os elementos esto
presentes nos organismos e na natureza. Muitos estudos relacionados
biometilao de metais (principalmente mercrio, chumbo e cdmio)
e semimetais (arsnio, selnio e telrio) tm sido feitos, uma vez que
estes elementos podem apresentar um alto nvel de toxicidade, dependendo do estado de oxidao em que se encontram.
O acoplamento de eletroforese capilar ES-MS, ou CE-ES-MS,
uma poderosa ferramenta na especiao, pois associa as vantagens da
separao eficiente das espcies em pequenos volumes por eletroforese
capilar com a alta sensibilidade da espectrometria de massas.
A proposta de uma interface para o acoplamento do sistema de
CE-ES-MS tem sido objeto de estudo de vrias pesquisas em qumica analtica. Entretanto, certas consideraes com respeito ao
acoplamento CE-ES-MS devem ser avaliadas tais como a diferena
de intensidade de corrente operando no sistema. O circuito CE opera
com uma corrente de dezenas de micro amperes, enquanto o
electrospray opera com uma corrente em torno de centenas de nano
amperes. Isto pode provocar uma mudana na tenso na ponta do
capilar, o que altera a formao do spray. Hau e Roberts39 propuseram um sistema bastante simples para o acoplamento do sistema
CE-ES-MS, onde este efeito minimizado aterrando-se o capilar do
eletrlito auxiliar e usando um capilar para este fluxo com um dimetro bem maior do que o da eletroforese. Assim, h uma diminuio da resistncia e pode-se garantir que a tenso na ponta do capilar
mantida constante.
Estudos para especiao usando CE-ES-MS ainda no so muitos. Corr e Anacleto40 fizeram um estudo inicial para avaliar a interface
para especiao de metais, o grau de formao de cluster e fragmentao. Os estudos foram realizados com solues padro de 29 ctions
e 15 nions inorgnicos. Os espectros foram obtidos tanto no modo
ons negativos como positivos. Schramel e colaboradores22 realizaram estudos com espcies metlicas usando um sistema comercial
CE-ES-MS. No entanto, os autores relataram que o sistema comercial no produz electrospray estvel durante um perodo longo de
aquisio. Assim, estes mudaram o capilar de amostragem do sistema comercial por um capilar de eletroforese de 50 m de dimetro
interno. Inicialmente os autores estudaram os complexos CuEDTA,
CuCl2, cloreto de trimetrilantimnio (TMSbCl2) e espcies como
selenometionina e selenocistena sem o acoplamento. O sistema
hifenado foi avaliado para a especiao de selenometionina, selenocistina e selenocistamina. Lintschinger e colaboradores41 investigaram a forma qumica do dicloreto de trimetilantimnio (TMSbCl2)
em solues aquosas. Zheng e colaboradores42 mostraram a viabilidade do ES-MS sem acoplamento a tcnicas de separao para a
especiao dos compostos TMSbCl2 e TMSb(OH)2, tanto no modo
ons positivos como negativos e compostos inorgnicos de Sb(II) e
Sb(V) no modo ons negativos.
Um outro aspecto bastante relevante que o electrospray pode
ser uma ferramenta alternativa s fontes de plasma acoplado
indutivamente (ICP) e ionizao trmica para estudos de medidas
isotpicas. Ketterrer e Guzowisk43, em 1997, foram os primeiros a
propor o uso da tcnica para medidas de razo isotpica. No entanto,
estes propuseram o uso do electrospray como uma tcnica para

Quim. Nova

gerao de espcies monoatmicas. Usando condies drsticas de


ionizao, possvel gerar espcies monoatmicas, como em ICPMS. Estes mostraram a aplicabilidade da tcnica para prata, chumbo
e tlio. No caso da prata e tlio no houve problema. No entanto,
para o chumbo, foi detectada a espcie PbH+ que foi comprovada
usando solvente deuterado, sendo detectada a espcie PbD+. Assim,
no possvel usar o espectro de massas para obter diretamente o
padro isotpico do chumbo. Uma alternativa seria determinar o
padro isotpico do cluster do PbH+ e subtra-lo do padro isotpico
do Pb+. Moraes e colaboradores desenvolveram um procedimento
matemtico para eliminao de interferentes isobricos gerados pela
perda de um ou mais tomos de hidrognio em conjuntos de picos45.
Recentemente, Brito e Lago45 publicaram um outro procedimento
matemtico bastante genrico para calcular o padro isotpico e eliminar interferentes isobricos em um determinado cluster.
A tcnica de ES-MS assim como a espectrometria de massas
com ionizao trmica (TIMS) permite a utilizao de espcies
poliatmicas, aumentando as possibilidades de se trabalhar em regies de m/z livres de interferncias isobricas comuns. Moraes e colaboradores32 estudaram a viabilidade de se utilizar ES-MS para determinaes de padres isotpicos usando complexos de Zn, Cd, Ni,
Fe, Hg, Cu, Tl e B47 usando ligantes monoatmicos, como I e F ,
que no interferem no padro isotpico. A Figura 7 apresenta o espectro de uma soluo 100 mol/L de Hg2+ e 1 mmol/L de NaI no
modo ons negativos e o padro isotpico do mercrio, mostrando
que, alm da boa concordncia, o espectro est livre de interferentes
como observado por Ketterrer e Guzowisk43.

Figura 7. Espectro de uma soluo 100 mol/L de Hg2+ em NaI 1 mmol/L


em metanol:gua 50:50 (v/v). O grfico de barras representa as intensidades
esperadas considerando-se o padro isotpico natural do mercrio

CONCLUSES
ES-MS uma tcnica bastante conveniente para estudos de compostos pouco volteis. Embora, em geral, os ons pr-existentes em
fase lquida sejam observados atravs dos espectros, outros podem
ser produzidos durante o electrospray. O surgimento destas novas
espcies dependente da composio da soluo solvente, pH,
presena de espcies ligantes e supressores e das condies da
fonte de electrospray tenses no capilar, contra-eletrodo e lentes
e vazes dos gases. Estes fatores devem ser cuidadosamente considerados j que estas alteraes costumam levar a uma interpretao
equivocada da composio da soluo original.
A tcnica de ionizao por electrospray apresenta uma enorme versatilidade e uma importante ferramenta nos mais variados

Vol. 26, No. 4

Espectrometria de Massas com Ionizao por Electrospray

estudos desde a identificao e quantificao de espcies inorgnicas


e organometlicos at medidas isotpicas e especiao. A tcnica
acoplada a mtodos de separao apresenta uma alternativa aos mtodos espectroscpicos normalmente utilizados para deteco de
metais, como ICP-MS. A tcnica bastante promissora mas ainda h
muitos estudos a serem realizados e otimizados principalmente nos
campos do acoplamento CE-ES-MS, das medidas isotpicas e do
desenvolvimento da instrumentao.
Uma das grandes vantagens da tcnica a relativa simplicidade
da fonte de ionizao comparada a outras fontes utilizadas na
espectrometria de massas, o que permite uma versatilidade grande
de configuraes, dependendo da criatividade do pesquisador.

16.
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