Radiofarmcia I

Professor: Antnio Paulo (apaulo@ctn.ist.utl.pt)

OBJECTIVOS
Fornecer conhecimentos bsicos nas reas da radioqumica e da qumica radiofarmacutica que permitam
compreender o design, a preparao e o controlo de qualidade de radiofrmacos para aplicaes de
diagnstico ou terapia.

BIBLIOGRAFIA RECOMENDADA

- Fundamentals of Nuclear Pharmacy, Gopal B. Saha, 5th Edition, Springer-Verlag, New York, 2010;.
- Handbook of Radiopharmaceuticals: Radiochemistry and Applications, Michael J. Welch (Editor), Carol S.
Redvanly (Editor), Wiley, 2002;
-Radiopharmaceuticals in Nuclear Pharmacy and Nuclear Medicine, R. J. Kowalsky, S. W. Falen, 2nd Edn,
American Pharmacist Association, 2011;
- Radioiodination Reactions for Pharmaceuticals, H. H. Coenen, J. Mertens, B. Mazire, Springer 2006.
-Technetium-99m Pharmaceuticals, Ilse Zolle Editor, Springer, 2010.
1

Radiofrmaco: Preparao farmacutica que contem um composto

radioactivo, usada em medicina nuclear para fins de diagnstico ou terapia e que
no origina usualmente uma resposta fisiolgica.

Radiofrmaco Produto Marcado

Longo processo legal de

licenciamento: Estudos em
modelos animais e em
humanos antes da utilizao
clnica

Uso limitado investigao qumica

ou biolgica

Componentes bsicos de um radiofrmaco :

Vector qumico

Radionuclido

Radionuclido:

Vector Qumico:

 emite fotes que so detectados no exterior do corpo,

fornecendo imagens dos orgos ou tecidos em que se
localiza (Diagnstico).

 permite a incorporao do radionuclido numa forma

qumica adequada, levando fixao preferencial no rgo
ou sistema que se pretende estudar (e.g. Molcula
radioiodada, sal de tlio, complexo de tecncio, protena
marcada).

 emite partculas ou ou electres Auger que

destroem clulas tumorais (Terapia).

Radiao : radiao electromagntica de curto

comprimento de onda, com uma gama de energia varivel
(2 keV 2.76 MeV) e muito penetrante.

Partculas : ncleos de hlio ( He2+) emitidos por

radionuclidos emissores ; Espectro contnuo de
energia (4-10 MeV), pouco penetrantes.

Partculas : electres emitidos por radionuclidos

emissores -; Espectro contnuo de energia ( 0-Emax),
moderadamente penetrantes.
3

Caractersticas Ideais de um Radiofrmaco: Diagnstico vs Terapia

Propriedades do Radionuclido: Agentes de Diagnstico
Emissor gama puro (SPECT): decaimento por captura
electrnica (CE) ou por transio isomrica (TI).

Emissor + (PET): radiao de aniquilao de 511

keV (ex: 18F, 11C, 68Ga, 64Cu)

Gama ideal de energias: 100-250 keV, devido s

caractersticas tcnicas da cmara gama.

Exemplos de emissores utilizados em estudos clnicos

cujas energias esto fora desta gama :201Tl e 133Xe , 70-80
keV e 67Ga (300 keV).
Exemplos de emissores com energias que podem ser
consideradas ideais, em termos de resoluco e
sensibilidade: 99mTc (141 keV), 111In (171 e 245 keV) e 123I
(159 keV).

Radiaes no-penetrantes, ou , so
indesejveis: s um nmero reduzido de
partculas consegue atravessar os tecidos;
elevado LET( Transferncia Linear de Energia)
o que implica um aumento significativo da
dose.
4


Propriedades do Radionuclido: Agentes de Terapia

Os Radionuclidos usados clinicamente para fins teraputicos so emissores -. Devido ao elevado LET, as partculas
- permitem uma destruio eficaz dos tecidos celulares, mesmo sem uma fixao altamente selectiva nos tecidos alvo.
Exemplos: 90Y, 131I, 153Sm, 166Ho, 186/188Re
Os emissores e os emissores de electres Auger tambm podem ser teis em terapia, j que estas partculas tm
uma elevada radiotoxicidade. No entanto, devido s suas propriedades fsicas, a fixao no tecido alvo deve ser
altamente selectiva.
Maior exigncia na selectividade da biodistribuio dos emissores deve-se diferena no grau de penetrao das
partculas:

40 - 200

Partculas : mm-cm

clula

Partculas e electres Auger: m

3-4
Auger

<

clula
clula

Muitos radionuclidos utilizados em terapia tambm permitem a aquisico de imagens, assegurando o acompanhamento
da resposta do paciente aco teraputica (e.g. 131I).
5


Semi-Vida Efectiva:
Aps administrao, os radiofrmacos so eliminados, via excreo urinria ou fecal. A eliminao biolgica tem
um comportamento exponencial, tal como o decaimento radioactivo.
Cada radiofrmaco apresenta uma semi-vida biolgica (Tb) caracterstica.
Em qualquer sistema biolgico, a eliminao do radiofrmaco devida ao decaimento radioactivo do radionuclido
(T1/2 ou Tp) e eliminao biolgica do radiofrmaco.
A semi-vida efectiva (Te) funo da semi-vida fsica (T1/2 ) e da semi-vida biolgica (Tb):

1/Te = 1/T1/2 + 1/Tb

Radiofrmacos para Diagnstico: Idealmente, a semi-vida efectiva (Te) deve ser 1.5 vezes superior durao
do exame de diagnstico.
Minimiza dose de radiao
Maximiza dose administrada,
Melhora a estatstica de contagem
Melhora a qualidade da imagem
6


Exemplos:
No estudo da ventilao pulmonar com 133Xe, o
radiofrmaco eliminado completamente alguns
minutos aps aquisio das imagens: Na prtica,
a semi-vida efectiva aproximadamente igual
semi-vida biolgica (T1/2 >> Tb).

No estudo morfolgico do fgado com enxofre

coloidal marcado com 99mTc, Tb >> T1/2 e a semivida efectiva praticamente idntica semi-vida
fsica.

O radiofrmaco 99mTc-MDP (cido metileno

difosfnico), um agente osteotrpico, apresenta
uma semi-vida efectiva ideal: Te = 6h para uma
durao do exame de diagnstico de 4 h.

Semi-Vida Efectiva Ideal (Te) para

Agentes de Terapia: Te varia entre vrias horas ou
alguns dias mas, comparativamente aos agentes de
diagnstico, o problema mais complexo. As diferenas
entre o comportamento biolgico do radiofrmaco nos
tecidos sos e nos tecidos alvo, bem como as dimenses
do
alvo,
condicionam
a
escolha
do
radionuclido/radiofrmaco.
Exerccio

A semi-vida biolgica do 111In-DTPA (cido

dietilenotriamino pentaactico), utilizado para medir a
velocidade da filtrao glomerular, de 1.5 h. Qual a
semi-vida efectiva deste radiofrmaco.

Dados: T1/2 (111In) = 67 h.


Toxicidade

Disponibilidade e Preo:

Em geral, a toxicidade potencial de um dado

radiofrmaco, para diagnstico ou terapia, no levanta
grandes problemas devido baixa concentrao em que
administrado.

O radiofrmaco dever ser produzido por

processos simples, rpidos e sem recurso a
equipamento muito sofisticado, de modo a que
possa ser fornecido a preos econmicos aos
centros de Medicina Nuclear.

Os problemas de toxicidade colocam-se para os

componentes qumicos da preparao radiofarmacutica
que se encontram em concentraes significativamente
superiores s do radionuclido. Estes componentes devem
apresentar uma baixa toxicidade.

Disponibilidade fortemente condicionada pelas

caractersticas fsicas do radionuclido: radionuclidos
de semi-vida curta exigem que o fornecedor se
encontre a uma curta distncia do utilizador (e.g.
Ciclotres junto a Centros de Medicina Nuclear para
fornecimento de radiofrmacos PET)

Exemplo:

O io Tl1+ uma potente cardiotoxina e, no entanto, o cloreto de tlio-201 utilizado rotineiramente para o
estudo da perfuso do miocrdio, em doses de cerca de 3 mCi. Porque que a sua utilizao em medicina
no suscita problemas para a sade do paciente?
(Dados: 201Tl (t1/2 = 73 h); LD50 20 mg/Kg (em rato)
8


Disponibilidade dos Radiofrmacos

Radiofrmacos prontos a utilizar (ready for use): contm radionuclidos com uma semi-vida suficientemente
longa para permitir a distribuio desde o fabricante aos Centro de Medicina Nuclear (e.g. 131I-MIBG (miodobenzilguanidina) ).
Radiofrmacos semi-manufacturados: requerem apenas um mnimo de operaes antes da administrao ao
doente (e.g. eludos de Geradores de radionuclidos, kits liofilizados).
Radiofrmacos In-house: preparados nos Centros de Medicina Nuclear antes da administrao (e.g. radiofrmacos
baseados em radionuclidos de ciclotro).

Formas de Dosagem de Radiofrmacos

Solues: - Injectveis (maior parte dos radiofrmacos)

Gases (e.g. 133Xe)

- Orais (e.g. Na131I)

Solues Coloidais (e.g. 99mTc- Enxofre coloidal)

Aerosis (e.g. 99mTc-DTPA)

Suspenses de Partculas Marcadas (e.g. 99mTc-MAA

(Macroagregados de Albumina))

Cpsulas (e.g. Na131I)


Critrios de Seleco de Radionuclidos

Semi-Vida Fsica

Actividade Especfica

Radiotoxicidade

Disponibilidade e Custos de Produo

Pureza: Radionucldica ou Radioqumica

Comportamento Qumico

Pureza Radionuclidica: relao entre a radioactividade devida ao radionuclido em causa e a radioactividade total da
amostra (e.g. 186Re contaminado com 188Re).

Pureza Radioqumica: relao entre a radioactividade do radionuclido sob uma dada forma qumica e a radioactividade
total devida a esse radionuclido (e.g. 99mTcO4- contaminado com 99mTcO2).

Actividade Especfica (AE): Radioactividade de um radionuclido por unidade de massa do correspondente elemento. A
actividade especfica mxima quando o radionuclido obtido puro, sem a presena de outros istopos (carrier free ou
non-carrier added (nca)):

3,13 x 109
(AE)max =

M x T1/2

M Massa atmica do Radionuclido

T1/2 semi-vida em horas
AE - mCi/mg

10


Modos de Produo de Radionuclidos:

Por bombardeamento com partculas neutras (Reactores

Nucleares)

Por bombardeamento com partculas carregadas

(aceleradores).

Por separao isotpica dos produtos de fisso do urnio

(Recatores Nucleares).

Por sistemas de Geradores de Radioistopos.

Produo em Reactores Nucleares

Escolha da reaco adequada

Escolha do alvo
Optimizao das condies de irradiao
Tratamento qumico da amostra irradiada

11


Reaces Nucleares

Reaco (n,): Induzida por neutres trmicos ( 0,025 eV); o

radionuclido formado um istopo do(s) nuclidos(s) irradiados e no
pode ser separado; Obteno de actividades especficas elevadas
obriga ao enriquecimento isotpico.
152Sm

153Sm

+ 0n

152Sm(n,)153Sm

Reaco (n,) seguida de decaimento: o radionuclido produzido

filho do radionuclido obtido pela irradiao. Obteno de actividades
especficas mais elevadas.
131mTe
130Te

131I

(n, )
131Te

O ncleo do reactor constitudo por elementos de combustvel que contm 235U

enriquecido. Ao sofrerem fisso, os ncleos de 235U libertam neutres rpidos (E 1,5 keV)
com reduzida probabilidade de interactuar com outros ncleos; A sua termalizao por
aco de moderadores (gua pesada (D2O); grafite; berlio) permite obter neutres trmicos
utilizados nas reaces (n,).

12

Reaco (n,p) ou (n,

): iniciadas por neutres rpidos (at 14 MeV); o radionuclido pode ser obtido com
elevadas actividades especficas. Rendimento final da irradiao inferior ao obtido com reaces (n,).
32S(n,p)32P
27Al(n,

)24Na

Reaco (n,f): Fisso de 235U ou de 239Pu por bombardeamento com neutres origina vrios radionuclidos, com
elevada actividade especfica e alguns deles com interesse em medicina nuclear .

Escolha do Alvo

A produo do radionuclido deve ser muito selectiva, o que pode obrigar ao enriquecimento isotpico do
elemento que constitui o alvo (e.g. O crmio natural s tem 4,31% de 50Cr, utilizando-se na produo de 51Cr
amostras enriquecidas com 80-90% de 50Cr).

Os produtos utilizados na preparao do alvo e no seu tratamento qumico, aps irradiao, devem apresentar
uma pureza qumica elevada.

O alvo no deve sofrer transformaes qumicas durante a irradiao, por via trmica ou por aco da
radiao. Os alvos so geralmente constitudos pelos elementos, metlicos ou no metlicos, ou pelos xidos
ou carbonatos correspondentes.
13


Condies de irradiao: Equao de Produo de Radionuclidos

Reaco X(P1,P2)Y: X - nuclido alvo

Y - radionuclido produzido
P1- Partculas capturadas
P2 Particulas emitidas

A = N(1-e-t)

A = Actividade (em dps) do Radionuclido Produzido (Y)

96,9%
93,7%

87,5%

= fluxo de neutres (em neutres.cm-2.s-1)

0,8

75%

N = Nmero de tomos do Nuclido Alvo (X)

= seco eficaz (em
(1 barn = 10-24 cm2)

cm2);

dada em unidades de barn

0,6

Asat

50%

0,4

= constante de decaimento (em s-1)

0,2

t = tempo de irradiao (em segundos)

1

t(semi-vidas)

Para tempos de irradiao 5 ou 6 vezes superiores a T1/2 atinge-se a saturao:

Asat = N

14


Tratamento das Amostras Irradiadas

O tratamento qumico das amostras irradiadas efectuado em instalaes apropriadas para a manipulao de
produtos altamente radioactivos.
O tratamento qumico envolve manipulao distncia processos simples e fiveis.
O tratamento qumico tem como objectivo obter o radionuclido na forma qumica adequada, com elevada
pureza radioqumica e radionucldica, atravs de processos convencionais de separao como: precipitao,
extraco com solventes, mtodos cromatogrficos, destilao, etc.
O conjunto das operaes deve obedecer s prticas GMP (Good Manufacture Practice) da produo de
frmacos.

Produo do Iodo-131 (131I)
Caractersticas do Radionuclido: T1/2 = 8.02 d; Emisses principais: 364 keV, - 606 keV
O iodo-131 utilizado na preparao de radiofrmacos para terapia (e.g. MIBG-131I).
Reaco de Formao: (n, ) seguida de decaimento
131mTe
130Te

131I

(n, )
131Te

15

Escolha do Alvo- Condies de irradiao

-O iodo-131 obtido por irradiao do telrio (Te) natural ou sob a forma de xido (TeO2).
-O telrio natural tem vrios istopos e cada um deles origina novos radionuclidos por reaco (n, )
Radionuclidos produzidos por irradiao do telrio natural:
Istopo

Radionuclido
Produzido

Perodo

Produto de
Decaimento

120Te

121mTe

121Sb

(estvel)

120Te

150 d
17 d

123Te

(estvel)

125Te

(estvel)

(0,09 %)

122Te

(2,47 %)

123mTe

104 d

123Te

(0,89 %)

124Te

estvel

124Te

(4,74 %)

125mTe

58 d

125Te

(7,09 %)

126Te

estvel

126Te

(18.72 %)

127mTe

104 d
9,3 h

127I

129I

129Te

33 d
74 min

131Te

25 min

131I

127Te
128Te

130Te

(31.75 %)
(34.27 %)

129mTe

(estvel)
(1,7.107 a)

Os istopos de iodo no podem

ser separados e baixam a
actividade especfica do 131I

16

Produo de Iodo-131, Tratamento Qumico do Alvo: Via Hmida (i)

Via Seca(ii)

TeO2
+
Radionuclidos

(i) H2O2

N2
I2

H2SO4, Na2MoO4

(ii)
Forno de SiO2

Soluo
Tampo

Vantagens / Desvantagens
Via Seca : Origina menos resduos radioactivos e o
produto mais puro/ Equipamento caro
Via Hmida : Equipamento simples e econmico / Uso
de maior nmero de reagentes que podem influenciar a
qualidade final e a actividade especfica do 131I.

Soluo alcalina
de iodo-131

17


Produo do Rnio-186 (186Re)

Caractersticas do Radionuclido: T1/2 = 3,07 d
Emisses principais: 137 keV
- 939 e 1076 keV
HEDP-186Re tem interesse como paliativo da dor em pacientes com metstases sseas.

Reaco de Formao: 185Re(n, )186Re

-O rnio-186 obtido por irradiao de rnio elementar enriquecido em rnio-185.
-O rnio natural tem dois istopos estveis: 185Re (37,07%) e 187Re (62,93%). Cada um deles origina radionuclidos por
reaco (n, ).
186

185Re

(n, )

186Re

Os
- (96%)
T1/2 = 90 h
CE (4%)

Tratamento Qumico do Alvo: Re

H2O2

188mRe

(estvel)
187Re

(n, )

TI
188Re

186W

(estvel)

HReO4

NaCl 0.9 %

17 h

188Os

(estvel)

ReO418


Produo do Samrio-153 (153Sm)

Caractersticas do Radionuclido: T1/2 = 47 h
Emisses principais: 103 keV
- 640 e 720 keV
EDTMP-153Sm (Quadramet) utilizado como paliativo da dor em pacientes com
metstases sseas.
Reaco de Formao: 152Sm(n, )153Sm
-O samrio-153 obtido por irradiao de Sm2O3 enriquecido em 152Sm (> 98%), j que o samrio natural
apresenta diferentes istopos.
-

(n, )

Istopo

Abundncia Isotpica
(%)

Sm-144

2,87

Sm-147

14,94

Sm-148

11,24

Sm-149

13,83

Sm-150

7,36

Sm-152

26,90

Sm-153

22,84

152Sm

153Sm

153Eu

(n, )

154Eu

Minimizado com
irradiao 2T1/2

emissor T1/2= 8,8 a

Tratamento Qumico do Alvo

Sm2O3

HCl aq.

SmCl3
19


Produo do Crmio-51 (51Cr)

Caractersticas do Radionuclido: T1/2 = 27,8 d
Emisses principais: 320 keV (CE)

Cromato de sdio-51Cr usado na marcao in vitro dos eritrcitos

Reaco de Formao: 50Cr(n, )51Cr
O alvo constitudo por xido de crmio enriquecido em crmio-50 (>80%)
Istopo

50Cr

52Cr

53Cr

50Cr

Abundncia

4,41

83,46

9,54

2,62

- Nas condies de irradiao apenas se forma um radionuclido com semi-vida

muito curta que facilmente eliminado por decaimento:
54Cr(n,)55Cr

3,6 min

55Mn

(estvel)

Tratamento Qumico do Alvo:

CrO3

N2H4

Cr(OH)3

HCl

CrCl3

20


Produo do Fsforo-32 (32P)

Caractersticas do Radionuclido: T1/2 = 14,28 d
Emisses principais: - 1710 keV

Fosfato de sdio-32P usado no tratamento da leucemia, entre outras desordens hematolgicas neoplsicas.
Reaco de Formao: 32S(n, p)32P
Escolha do Alvo- Condies de irradiao:
-O alvo constitudo por enxofre natural que bombardeado com neutres rpidos.

Tratamento Qumico do Alvo:

S8 (voltil)
S8 +32P

sublimao
1 mm Hg
32P

HCl aq.

32PO

4H3

21

Produo de Radionuclidos por Reaces (n,f)

99Mo

131I

- A fisso induzida do U-235 com neutres trmicos origina

a emisso de neutres (n = 2 ou 3) e a formao de dois
radionuclidos que apresentam excesso de neutres
(emissores -). Separao dos vrios radionuclidos exige
tratamento qumico adequado e processos de separao
(precipitao, filtrao, cromatografia) complexos.

235

U+ n

A1Z1 + A2Z2 + xn (x = 2,46)

- A fisso do 235U utilizada para produzir vrios

radionuclidos com interesse em Medicina Nuclear,
nomeadamente 99Mo, 131I, 133Xe, 137Cs, 90Sr
Vantagens da fisso face reaco (n,): A principal
vantagem a obteno de radionuclidos com elevada
actividade especfica. Por exemplo, o 99Mo obtido por fisso
tem uma actividade 1000 vezes superior ao obtido por
reaco (n,).
22

Problemas
1. Calcular a actividade especfica, em mCi/mg, de
NCA.

131I

(T1/2 = 8 d) e

99mTc

(T1/2 = 6h)

2. Calcular o tempo de irradiao necessrio para produzir 600 mCi de 99Mo por
irradiao de 5g de 235U num reactor nuclear com um fluxo de 2x1014
neutres/cm2.s. Considere que a seco eficaz para a formao do 99Mo de 20
mbarn e que o perodo de semi-desintegrao do 99Mo de 66 h.
3. Procedeu-se irradiao, durante 48 h, de 1 g de rnio natural (37,07% de
62,93% de 187Re) num reactor com um fluxo de 1012 neutres/cm2.s.

185Re

a) Calcule a actividade obtida em 186Re e 188Re.

b) Como poderia aumentar a actividade especfica e a pureza radionucldica do
186Re produzido.
Dados: Seces Eficazes: 185Re, 120 barns; 187Re, 69 barns.
T1/2, 186Re, 90 h; 188Re, 17 h.
23

Produo de Radionuclidos em Ciclotro

Alguns dos radionuclidos utilizados em Medicina Nuclear s podem ser produzidos por reaces nucleares que
utilizam partculas incidentes carregadas, como protes, deuteres, ies 3He+, partculas ou ies pesados. Estas
partculas carregadas tm que ser aceleradas at velocidades da ordem dos MeV, de modo a ultrapassar as interaces
de Coulomb, repulsivas, entre os ncleos. A acelerao das partculas efectuada em ciclotres.
O princpio de funcionamento do ciclotro guiar, atravs de um campo magntico, as partculas carregadas
aceleradas por aco de um campo elctrico de alta frequncia.

(Vista geral de um ciclotro de 11 MeV)

24

Tipos de Ciclotro
Ciclotres hospitalares: instalados prximo de um centro de medicina nuclear; so utilizados para a
produo diria de radionuclidos com semi-vidas muito curtas (< 2 h) utilizados em radiodiagnstico de
rotina.
Ciclotres de energia mdia
Ciclotres de alta energia
Tipos de Radionuclidos produzidos em Ciclotro: Radionuclidos (CE ou + ) deficientes em
neutres.

Emissores : 201Tl, 67Ga, 123I, 111In, fornecidos aos centros de medicina nuclear por centros
especializados em produo de radionuclidos.

Emissores +: 18F, 11C, 13N, 15O, 75Br, 76Br, produzidos in situ em ciclotres integrados ou prximos de
centros de medicina nuclear, devido s curtas semi-vidas destes radionuclidos.

25

Produo de Radionuclidos Emissores

Tlio-201 (201Tl):
- T1/2 = 73 h;

- Alvo: xido de tlio (tlio natural ou

enriquecido em 203Tl (>90%) )

- Emisses principais: 135 keV e 67 keV

- Principais contaminantes: 203Pb, 200Tl e 202Tl.

X 69-86 keV
- Reaco de produo:

203Tl(p,3n)201Pb

+, CE
9,4 h

201Tl

- 201TlCl utilizado como agente de perfuso

do miocrdio.

Glio-67 (67Ga):
-Alvo: Zinco metlico (natural ou enriquecido
em 66Zn (>90%) )

- T1/2 = 78,3 h;
- Emisses principais: 93 keV, 184,5 keV e 300 keV
-Reaces de produo: 66Zn(d,n)67Ga (1)
68Zn(p,n)67Ga

(2)

-Principais contaminantes: 66Ga (reaco 1) ou

66Ga (reaco 2)
-Citrato de 67Ga utilizado para a deteco
de focos infecciosos e de alguns tumores
(linfoma, carcinoma)
26

Iodo-123 (123I):
- T1/2 = 13,2 h;
-Emisses principais: 159 keV
X 27 keV
- Reaco de produo:

124Xe(p,2n)123Cs

+, CE
123Xe
5,9 min

+, CE
2h

123I
123

-Alvo: 124Xe enriquecido a 99,9 % .

NH

-123I utilizado para a marcao de numerosas molculas com

interesse biolgico (e.g. 123I-MIBG)

CH2NH

NH2

123I-MIBG

Indio-111 (111In):
- T1/2 = 2,8 d.;

- Reaco de produo: 112Cd(p,2n)111In

- Emisses principais: 171 keV e 245 keV

-Alvo: Cdmio metlico enriquecido (>95%) em 112Cd

X 13 keV
- O Indio-111 utilizado para marcar molculas com interesse biolgico (protenas, pptidos, etc). O 111InPentatretido(Octreoscan) um radiofrmaco baseado num pptido marcado (octretido, um anlogo da
somatostatina) til para diagnstico de tumores neuroendcrinos; 111In-oxina (8-hidroxiquinolina) utilizado
para a marcao de leuccitos e de plaquetas.
27

Produo de Radionuclidos Emissores +

Carbono-11 (11C):
- T1/2 = 20,4 min
- Emisses principais: + 0,96 MeV
- Reaco de produo: 14N(p,)11C
- Alvo: Azoto gasoso mantido num contentor de alumnio.
- O Carbono-11 obtido na forma de 11CO2. O 11CO2 utilizado em estudos de perfuso pulmonar. Aps
transformaes qumicas adequadas, pode ser incorporado em molculas muito variadas (acares, lpidos,
protenas, aminocidos) que levam a um nmero alargado de aplicaes em medicina nuclear.

Fluor-18 (18F):
OH

- T1/2 = 110 min

- Emisses principais: + 0,635 MeV
- Reaco de produo:
- Alvo: H2

18O

18O(p,n)18F

(>95%) mantida num contentor de alumnio.

HO
HO

O
18

OH

[18F]-FDG

-O fluor-18 usualmente obtido na forma de fluoreto. utilizado para marcar diferentes molculas orgnicas, j que
o hidrognio e o fluor tm raios de Van der Walls semelhantes. A 2-[18F]fluoro-2-deoxi-D-glucose (FDG) o mais
utilizado dos agentes PET. A FDG utilizada no estudo do metabolismo da glucose em tumores, cardiologia ou em
diferentes patologias do crebro.
28

Oxignio-15 (15O):
- T1/2 = 122 s
- Emisses principais: + 1,72 MeV
- Reaco de produo: 14N(d,n)15O

Alvo: Azoto gasoso mantido num contentor de

alumnio.
- O oxignio-15 obtido na forma de oxignio
molecular. utilizado na forma gasosa (15O2, C15O,
C15O2) em estudos de ventilao pulmonar.

Azoto-13 (13N):
- T1/2 = 10 min
-Emisses principais: + 1,19 MeV
-Reaco de produo: 16O(p,)13N
- Alvo: H216O mantida num contentor de ao ou
titnio.

O azoto-13 obtido na forma de azoto molecular ou

de 13NH4OH. utilizado, na forma gasosa ou
dissolvido em soro fisiolgico, em estudos de
ventilao pulmonar. utilizado para preparar
diferentes
molculas
orgnicas
marcadas,
nomeadamente aminocidos.

29

Produo de Radionuclidos por Sistemas de Geradores

-Geradores de radionuclidos so sistemas que contm um par de radionuclidos pai/filho em equilbrio e que permitem
obter o radionuclido filho, de semi-vida curta, in situ nos centros de medicina nuclear. De certa forma, o gerador faz
com que o radionuclido filho siga o decaimento do radionuclido pai.

Caractersticas do Gerador Ideal

-O eluido deve ser estril e apirogneo.

-As propriedades qumicas do radionuclido filho devem ser diferentes das do radionuclido pai para que seja possvel
separ-los, usualmente por processos cromatogrficos.
-Idealmente o gerador dever ser eludo com soro fisiolgico. Durante a eluio a interveno humana deve ser
mnima para reduzir a dose de radiao.
-A semi-vida do radionuclido pai deve ser relativamente curta para permitir a recuperao de actividade em
radionuclido filho aps cada eluio. No entanto, a semi-vida do radionuclido pai deve ser suficientemente longa para
permitir o transporte e utilizao continuada do gerador.
-A qumica do radionuclido filho deve ser verstil de modo a permitir a sua incorporao em diferentes compostos, em
particular a partir de kits liofilizados.
-O gerador deve ter um preo econmico, com uma blindagem eficiente para minimar as doses de radiao do
utilizador.
30

Tipos de equilbrio
Decaimento sucessivo de um par de Radionuclidos pai/Filho:
P

(P - Radionuclido Pai;
F - Radionuclido Filho;
E - Istopo estvel)

dNF = PNP - FNF

dt
(AF)t = FNF=

F(AP)0
F-P

(e-Pt - e-Ft) (1)

-Equilbrio transiente:
Se F>P ento o termo e-Ft na equao 1 desprezvel e encontramo-nos perante uma situao
de equilbrio transiente:
(AF)t =

F(AP)0
F-P

(e-Pt) =

F(AP)t

(2)

F-P

A situao de equilbrio transiente

verifica-se quando a razo entre
as semi-vidas dos radionuclidos
pai e filho se encontra entre 10 e
50.
31

-Equilbrio Secular:

Se F >> P, ento na equao 2 podemos desprezar P. Nestas condies a equao 2 transforma-se na

equao 3:

(AF)t = (AP)t

(3)

Nestas condies encontramo-nos perante uma situao de equilbrio secular. O equilbrio secular verificase quando as semi-vidas dos radionuclidos pai e filho diferem por um factor superior a 100.
A

P
F

32

Exemplos de Sistemas de Geradores

Pai

(T1/2)P, Tipo de
Decaimento

Modo de
Produo

99Mo

66 h, -

235U(n,f)

(T1/2)F

Tipo de
Decaiment
o (Filho)

Emisses
Principais
(keV)

Coluna

Eluente

(T1/2)P/(T1/2)F

99mTc

6,02 h

TI

140

Al2O3

NaCl 0.9%

11.0

Filho

Tc

98Mo(n,)
113Sn

115 d, CE

112Sn(n,)

113mIn

99,5
min

TI

392

ZrO2

HCl 0.05 N

1664

87Y

80 h, -

88Sr(p,2n)

87mSr

2,8 h

TI

388

Dowex 1x8

NaHCO3
0.15 M

28,6

68Ge

271 d, CE

69Ga(p,2n)

68Ga

68 min

511

Al2O3
SnO2

EDTA
0.005 M
HCl 1N

5739

62Zn

9,3 h, + (18) ou
CE (82)

63Cu(p,2n)

62Cu

9,7 min

511

Dowex 1x8

HCl 2N

57,5

137Cs

30 a, -

235U(n,f)

137mBa

2,6 min

TI

662

Molibdofosfato de
amnio

HCl 0.1 N +
NH4Cl 0.1
N

6.0x106

81Rb

4.6 h, +

79Br(,2n)

81mKr

13 s

TI

190

BioRAD AG1

H2O ou ar

1274

82Sr

25,5 d, CE

85Rb(p,4n)

82Rb

75 s

511

SnO2

NaCl 0.9%

2.9x104

191Os

15,4 d, -

190Os(n,)

191mIr

4.9 s

TI

129

BioRAD AG1

NaCl 4%

2.7x105

195H

41.5 h, CE

197Au(p,3n)

30.6 s

TI

362

Silica gel
revestida com
ZnS

Soluo de
Na2S2O4

4882

65 d, -

187W(n,)

17 h

155

Al2O3

NaCl 0.15
M

91.8

In

Sr

Ga

Cu
Ba

Kr

Rb
Ir

195mAu

Au

g
188W

188Re

Re

33

Gerador 99Mo/99mTc: Princpio de Funcionamento

-O anio molibdato (MoO42-) adsorvido numa coluna de alumina (Al2O3) em meio cido. Nesta condies de pH
formam-se olgomeros (Mo7O246- ou Al(Mo6O24)9-)que ficam ligados irreversvelmente.
-A coluna eluda periodicamente com soro fisiolgico esterilizado (NaCl 0.9 %): o io pertecnetato (99mTcO4-) eludo e
o molibdato fica retido na coluna.
-O rendimento de eluio varia de gerador para gerador, sendo usualmente entre 85-95 % do valor terico. Diminuio
do rendimento mais significativa para geradores de alta actividade devido a processos de radilise da gua pelas
partculas - que origina a formao de espcies reduzidas de tecncio (provavelmente 99mTcO42-) que ficam retidas na
coluna.
34

- Minimizao dos processos de radilise foi conseguida por

recurso aos geradores de coluna seca. Estes geradores so
concebidos de modo que aps cada eluio retirado todo o
soro fisiolgico da coluna.

- O Perfil de eluio varia de gerador para gerador. A maior

parte dos geradores comerciais utiliza 99Mo de fisso, logo
com elevada actividade especfica, o que permite utilizar
colunas mais pequenas e menores volumes de eluio.
V

Equilbrio Transiente 99Mo/99mTc: Rendimento em 99mTc e Eluio do Gerador

- 87,6%
66 h

99Mo

12,4%

99mTc

TI 6,02 h

99Tc

2.105 a
99Ru,

estvel

Considerando que no temos actividade inicial em 99mTc, ento

aps cada eluio:

A99mTc = 0.957(AMo)0(e-0.0105t - e-0.1155t)

Por derivatizao da expresso anterior, podemos determinar
o tempo para o qual se atinge a actividade mxima em 99mTc:
dATc
dt

=0

t = 22,8 h
35

Se desprezarmos a actividade retida em 99mTc durante uma eluio prvia, a actividade em

situao de equilbrio transiente, dada pela equao seguinte:

99mTc,

em

ATc = 0.957(AMo)0(e-0.0105t)=0.957(AMo)t
Em resumo, o gerador 99Mo/99mTc eludo de 24 em 24
horas, pois assim obtm-se a mxima actividade em 99mTc.

100

Actividade (mCi)

99Mo

(T1/2 = 66h)

A actividade em 99Mo de geradores comerciais

indicada pelo fornecedor, com indicao da data e hora da
calibrao. O utilizador pode estimar com base nesse valor
a actividade prevista nas sucessivas eluies. A estimativa
dessa actividade permitir ajustar o volume de eluente de
modo a obter concentraes radioactivas mais ou menos
constantes nas sucessivas eluies.

a b
10
99mTc

(T 1/2 = 6h)

Tempo (dias)

Concentrao Radioactiva: Radioactividade por unidade

de volume, expressa por exemplo em mCi.ml-1

36

Teor de 99mTc no eluido do gerador

Como o 99Mo e o 99mTc decaem para 99Tc, no eluido de um gerador temos sempre 99mTc e 99Tc.
Quando aumenta o tempo entre eluies sucessivas a fraco de
assim a sua actividade especfica:

F99mTc =

99mTc

no eluido diminui, diminuindo

N99mTc
N99mTc + N99Tc

F99mTc = Fraco molar de 99mTc

F99mTc =

0.8799Mo(exp(-99Mot)-exp(99mTct))
(99Mo-99mTc)(1-exp(-99Mo))

37

Como o 99Tc tem o mesmo comportamento qumico que o 99mTc, o 99Tc compete com o 99mTc na formao
dos complexos, o que pode trazer problemas na preparao de alguns radiofrmacos:

- diminuio do rendimento de marcao (e.g. 99mTc-HMPAO)

- alterao do comportamento biolgico (e.g. 99mTc-HEDP)

Estes problemas podem ser evitados eluindo o gerador diariamente e usando sempre eluidos frescos!

38

Problemas
1 Um gerador 99Mo/99mTc de 2.6 Ci, calibrado para Quarta-Feira ao meio-dia, foi recebido numa
Radiofarmcia Hospitalar na Tera-Feira anterior. Qual a actividade total em 99mTc que poder ser eluda
na Sexta-feira seguinte s 8 h da manh? Considere que a eluio 100 % eficaz.

2 Um dado Centro de Medicina Nuclear utiliza regularmente um gerador comercial 99Mo/99mTc de 2200
mCi, calibrado para Sexta-Feira ao meio-dia, que eludo com 5 ml de soro fisiolgico com uma
eficincia de 80%.
2.1. Na Quarta-Feira seguinte s 8 h da manh, que volume do eludo 99mTc retiraria para preparar:
50 mCi de 99mTc-MDP; (b) 30 mCi de 99mTc-enxofre coloidal; (c) 20 mCi de 99mTc-MAA.
2.2. Compare a concentrao radioactiva do 99mTc-MDP preparado com a concentrao radioactiva do
eludo, considerando que o volume final da preparao 99mTc-MDP de 2ml.

3. Um dado gerador foi eludo com 20 mL de soro fisiolgico, tendo-se obtido uma actividade de 800
mCi em 99mTc. Pretende-se utilizar esse eludo para marcar um dado kit que s marcado
eficientemente quando o nmero de tomos de tecncio adicionados inferior a 1,48x1014. Sabendo
que o referido gerador tinha sido eludo 24 h antes, determine qual o volume mximo de eludo que
dever retirar para marcar o kit.
39

Controlo de Qualidade do Eludo do Gerador 99Mo/99mTc

- O eludo do gerador deve obedecer s especificaes exigidas pela Farmacopeia Europeia, ao

longo da sua vida til, devendo proceder-se para cada eluio s seguintes determinaes: pH,
Pureza Radionucldica, Pureza Radioqumica e Teor em alumnio.
- Adicionalmente, deve determinar-se a percentagem de
nominal de 99Mo.

99mTc

eludo, relativamente actividade

Medio do pH
-O pH medido com um elctrodo de vidro, previamente calibrado com solues tampo de pH=4 e
pH=7. Alternativamente, o pH pode ser medido qualitativamente com papel indicador de pH. O pH do
eluido deve estar entre 4,5 e 7,5. Usualmente, o pH do eluido aproximadamente 5,5.

40

Pureza Radionucldica: Contaminao por 99Mo

- A eventual contaminao por 99Mo do eluido 99mTc devida eluio de pequenas quantidades de 99Mo
juntamente com o 99mTc.
- O 99Mo determinado, por atenuao , numa cmara de ionizao calibrada. Esta determinao baseiase nas diferentes energias do 99Mo (740 keV) e do 99mTc (140 keV). Usando uma blindagem de chumbo de
6mm de espessura, a radiao devida ao 99mTc absorvida completamente enquanto a radiao devida ao
99Mo detectada.
- Procedimento:
1) Introduzir a amostra num contentor de chumbo de 6 mm e medir a radioactividade da amostra na
cmara de ionizao.
2) Medir a radioactividade da amostra, sem proteco de chumbo, na cmara de ionizao.

- A contaminao por 99Mo dada pela expresso:

% 99Mo = 100x(Medida c/ proteco)/(Medida s/proteco)
O teor de 99Mo dever ser inferior a 0,15 Ci 99Mo/ mCi 99mTc
41

Presena de outros radionuclidos contaminantes

Como o 99Mo utilizado no gerador produzido por fisso podem ainda existir outros radionuclidos
contaminantes no eluido, tais como 103Ru, 132Te, 131I, 99Zr, 124Sb, 134Cs, 89Sr, 90Sr e 86Rb. A
percentagem total destes contaminantes nunca deve ser superior a 0,01 % da actividade total. Estes
contaminantes so determinados por espectrometria com analisador de multi-canal, aps deixar
decair o 99Mo e o 99mTc. Estes testes so efectuados pelo fabricante do gerador.
Determinao da Pureza Radioqumica
A pureza radioqumica determinada por cromatografia em papel (Whatman n 1) com metanol/gua
(80/20) como solvente. As eventuais impurezas radioqumicas correspondem a espcies reduzidas de
tecncio hidrolisado (99mTcO2.xH2O).
99mTcO

2.xH2O

(Rf = 0)

99mTcO 4

(Rf = 0,6)

- Procedimento:
1) Aplicar uma gota da amostra na tira de papel.
2) Desenvolver por cromatografia ascendente com
metanol/gua (80/20) como solvente, at atingir a
marca assinalada para a frente de solvente.

Ponto de Aplicao (Rf = 0)

Rf =

3) Secar a tira de papel e detectar a radioactividade

ao longo da tira. Determinar a percentagem de
pertecnetato (Rf = 0.6).

Frente de Solvente (Rf =1,0)

Distncia percorrida por um dado soluto

Distncia percorrida pela frente de Solvente

Rf varia entre 0,0 e 1,0

42

Determinao do Alumnio
- A contaminao por alumnio do eluido pode ser devida degradao da coluna de alumina
(Al2O3) do gerador, por aquecimento excessivo ou por tratamento com solues fortemente
cidas.
- A presena do alumnio pode interferir com a preparao de diferentes radiofrmacos 99mTc, j
que sendo um metal o alumnio pode competir na ligao qumica com os ligandos presentes
nos kits a marcar com 99mTc.
-O teor de alumnio dever ser inferior a 10 g Al/ml de eluido. O alumnio determinado por
mtodos colorimtricos, atravs de kits disponveis comercialmente. Estes kits fornecem tiras
que contm um agente complexante (Aluminon) do alumnio e uma soluo padro de Al3+.
Num teste de rotina aplica-se uma gota do eluido e uma gota da soluo padro de Al3+ numa
tira e compara-se a intensidade de cr das manchas resultantes. Se a cr da mancha devida ao
eluido for mais intensa, ento o eludo tem uma quantidade excessiva de alumnio e no deve
ser usado.

Forma complexos cor de rosa com

o io Al3+.
43

Qumica Radiofarmacutica

- Aspectos Gerais
Radiofarmcia I
- Molculas Radioiodadas
- Radiofrmacos de 99mTc
-. Radiofrmacos de outros metais de transio (111In, 67Ga, Ln)
- Radiofrmacos para PET (11C, 18F)

Radiofarmcia II

Marcao : Processo de incorporar um istopo radioactivo numa dada molcula, mediante o uso
de mtodos radioqumicos. A diversidade da qumica dos radionuclidos a incorporar e das molculas
a marcar faz com os processos qumicos e/ou radioqumicos utilizados sejam muito diversos.
- O desenvolvimento de qualquer mtodo de marcao envolve a optimizao de diferentes
condies experimentais, nomeadamente a concentrao de reagentes, a temperatura e o pH

44

Compostos Radioiodados e Mtodos de Radioiodao

O iodo um elemento do grupo dos halogneos (grupo 17) e do perodo 5 da tabela peridica. Na
forma elementar, o iodo aparece como molculas diatmicas de I2. O iodo molecular, I2, bastante
voltil, vaporizando facilmente temperatura ambiente e presso atmosfrica.
O iodo apresenta vrios estados de oxidao acessveis, de 1 a +7:

Alguns istopos radioactivos do iodo (131I, 123I, 125I) tm sido utilizados na marcao de molculas
orgnicas com interesse biolgico, nomeadamente na marcao de protenas j que o iodo pode ser
facilmente introduzido nos resduos histidina, tirosina ou histamina de protenas.
O
I*

N
N

I*

OH

OH
NH2
Histidina

NH2

HO
I*

Tirosina

I*

N
N

NH2
Histamina
45

 Propriedades Fsicas de Istopos Radioactivos de Iodo com Interesse Biomdico:

-O 123I o mais adequado para diagnstico in vivo, devido semi-vida relativamente curta e energia
dos seus fotes .
-O 125I utilizado para marcar produtos para doseamentos in vitro por radioimunoensaio (RIA), j que
tem uma semi-vida longa e uma baixa energia.
-O 131I foi largamente utilizado em diagnstico clnico mas, devido s sua propriedades nucleares
desfavorveis, tende a ser substitudo pelo 123I. Actualmente, o 131I utilizado essencialmente em
terapia.
Disponibilidade dos Radioistopos do Iodo
-Os radioistopos de iodo usados na preparao de radiofrmacos encontram-se disponveis
comercialmente sob a forma qumica de iodetos de sdio (NaI*), sem arrastador (nca, non-carrier
added) e sem adio de agentes redutores.
46

Marcao com Iodo Radioactivo

- A radioiodao de diferentes compostos envolve mtodos de marcao diferentes, que dependem da
natureza qumica desses compostos.
- No existe um mtodo de marcao ideal, pois depende do comportamento qumico do composto a
marcar, da posio onde se vai introduzir o radionuclido, da pureza qumica e radioqumica e da actividade
especfica
- A manipulao dos istopos radioactivos de iodo, ao nvel nca, implica algumas dificuldades
laboratoriais:
1) Perda potencial de radioactividade, devido eventual oxidao dos iodetos e volatilidade do iodo
molecular. Por esta razo, os istopos radioactivos de iodo devem ser sempre manipulados em caixas
de luvas ou clulas com ventilao apropriada.
2I2 + 2H2O

4I- + O2 + 4H+

I2 + 2H2O

2HI + H2O2
2 I- + 2OH

I2 + 2OH-

Reaces de oxidao que podem ocorrer em

meio aquoso; a sua minimizao pode ser
conseguida trabalhando a pH 7,0-8,5

2) Devido baixa concentrao molar do iodo radioactivo, pode ainda haver perdas de radioactividade
como consequncia da adsoro ao material utilizado.
47

Mtodos de Radiodao
- Substituio Nucleoflica

- Mtodo da Conjugao

- Substituio Electroflica: Mtodos Oxidativos de

Radioiodao

- Reaces de Desmetalao
- Marcao por excitao

- Permuta Isotpica
Radioiodao por Substituio Nucleoflica
- A radioiodao ocorre por substituio de
um grupo de partida (X) por iodeto
radioactivo (I*-) que a forma em que o iodo
fornecido comercialmente. O io iodeto
actua como nuclefilo, ou seja como uma
espcie qumica com tendncia para atacar
centros de carga positiva. O grupo de
partida pode ser, por exemplo, um brometo.
- Existem dois mecanismos para a
radioiodao por substituio nucleoflica: o
mecanismo SN1 (unimolecular) e o
mecanismo SN2 (bimolecular)

SN1

SN2

48

Exemplos de Radioiodao por Substituio Nucleoflica

- A substituio de bromo por iodo radioactivo um exemplo de reaco de radioiodao efectuada por
substituio nucleoflica aliftica. Este tipo de marcao leva a elevadas actividades especficas desde
que o precursor bromado seja eficientemente separado do produto radioiodado.
- A substituio do bromo por iodo feita a quente sob refluxo do solvente ou temperatura do ponto de
fuso (em melt). Tem sido usada para marcar cidos gordos de cadeia longa e de derivados esterides.

16-bromoestradiol

16-[125I]iodoestradiol

49

Substituio Electroflica: Mtodos Oxidativos de Radioiodao

A substituio electroflica utilizada para radioiodar compostos que tm anis aromticos activados por
substituintes electrodoadores (-OH, -NH2). O iodo radioactivo incorporado no anel aromtico por
substituio de um tomo de hidrognio.
- Na substituio electroflica a forma reactiva do iodo o io I+. Como o iodo radioactivo fornecido na
forma de NaI*, este tipo de radioiodao exige a presena de agentes oxidantes para gerar o io I+:
Radioiodao Oxidativa.
- A radioiodao oxidativa tem sido muito utilizada para marcar protenas, por incorporao de iodo
radioactivo nos resduos tirosilo (A) ou histidilo (B) das protenas.

Mtodos de Radioiodao
Oxidativa

Monocloreto de iodo
Cloramina T
Iodogneo
Via enzimtica
Via electroltica

50

 Mtodo do Monocloreto de Iodo

- O iodo o nico halogneo que forma ies positivos, existindo sob a forma de monocloreto de iodo:

- O monocloreto de iodo radioactivo (NaI*) preparado por permuta isotpica do monocloreto de iodo
frio (Na127I) em HCl diludo. O monocloreto de iodo frio obtido por oxidao de iodeto com iodato:

2NaI + NaIO3 + 6HCl

ICl + NaI*

3ICl + H2O + 3NaCl

I*Cl + NaI

- A incorporao de iodo frio (127I) na molcula a marcar, com consequente diminuio da actividade
especfica, um dos inconvenientes deste mtodo.

51

 Mtodo da Cloramina T
- A cloramina-T (N-cloro-p-toluenosulfonamida) o
agente oxidante mais utilizado em radioiodao
oxidativa, quer na forma livre quer suportada em
prolas de poliestireno.

- A cloramina-T decompe-se lentamente por

exposio ao ar. solvel em meio aquoso e,
devido sua instabilidade, as solues de
cloramina-T
devem
ser
preparadas
imediatamente antes da radioiodao. Em
soluo aquosa forma-se cido hipo-cloroso
(HClO) que oxida o iodeto a cido hipo-iodoso.

-+
Na
SO2N-Cl

+ H2O

NaOCl + HI*

SO2NH2

NaOCl

HOI* + NaCl

- A oxidao do iodo radioactivo ocorre na presena da molcula a marcar. A reaco interrompida por
adio de um agente redutor que desactiva a cloramina-T e reconverte o I+ a I-.
- Neste mtodo as condies de oxidao so relativamente agressivas o que pode causar
reaces laterais, nomeadamente a oxidao dos grupos tiol ou tioter de protenas. Tal pode
ser minimizado usando as prolas de cloramina-T.

52

 Mtodo do Iodognio
- O iodognio (1,3,4,6-tetracloro-3,6-difenilglucouril)
insolvel em gua. imobilizado nas paredes do tubo onde
se conduz a radioiodao, o que minimiza a exposio do
produto a marcar aco do oxidante.

-O iodognio dissolvido num solvente orgnico, por exemplo o clorofrmio, e a quantidade pretendida de
soluo colocada no tubo de marcao. O solvente evaporado em seguida, obtendo-se um filme de
iodognio nas paredes do tubo. Estes tubos revestidos so estveis durante meses quando conservados
no frigorfico.
-A marcao efectuada por adio da molcula a marcar e do iodo radioactivo ao tubo revestido. Aps
alguns minutos de incubao a mistura reaccional separada do oxidante.

-De um ponto de vista prtico, o iodognio pode ser considerado o agente oxidante de eleio devido
simplicidade da sua utilizao, evitando a preparao de reagentes frescos.

53

 Via enzimtica (lactoperoxidase/perxido de hidrognio)

- As enzimas to tipo peroxidase, em particular a lactoperoxidase, tm sido usadas para oxidar o
iodeto a I+, especialmente na radioiodao de protenas.
- A lactoperoxidase estvel em solues de baixa fora inica e entre pH 3 a 10. Esta enzima
activada pelo perxido de hidrognio (H2O2).
- A lactoperoxidade tambm pode sofrer radioiodao, sendo necessrio proceder sua separao.
Esta separao pode ser simplificada utilizando lactoperoxidase acoplada a uma fase slida,
facilmente eliminada por centrifugao.
- A radioiodao por via enzimtica um mtodo mais suave do que os mtodos baseados em
oxidantes qumicos (cloramina-T e iodognio).
Via Electroltica
- Tem sido utilizada na radioiodao de protenas, como alternativa ao uso de reagentes qumicos
oxidantes. Baseia-se na oxidao do iodeto a iodo molecular numa clula electroltica.
- A protena a marcar dissolvida na soluo do electrlito de suporte e colocada no compartimento
andico. Em seguida, adiciona-se a quantidade de iodeto radioactivo pretendida. No compartimento
catdico ento colocada a soluo de electrlito de suporte. Por aplicao de uma diferena de
potencial adequada iniciada a electrlise e a oxidao do iodeto radioactivo a iodo.
-Este mtodo tem a vantagem de evitar a exposio das protenas a condies oxidantes, mas
requer equipamento especial.

54

Radioiodao por Permuta Isotpica

Envolve a permuta de um tomo de iodo estvel (127I) por um tomo de iodo radioactivo (123I, 125I ou
131I). A maior limitao deste mtodo a baixa actividade especfica dos produtos radioiodados
obtidos. A permuta isotpica tem sido utilizada, por exemplo, na preparao do cido orto-iodohiprico (hipurano) e da MIBG.

Permuta Isotpica em Solvente: A reaco conduzida num solvente orgnico ou em gua. A

temperatura de ebulio do solvente condiciona a temperatura a que a reaco ocorre, sendo esta a
maior limitao desta tcnica.

Permuta Isotpica Temperatura do Ponto de Fuso: A reaco ocorre temperatura do ponto

de fuso do composto a marcar. Portanto, o composto deve ser estvel a esta temperatura.
Um mtodo alternativo envolve a adio de sulfato de amnio, o que permite trabalhar a
temperaturas inferiores. Apesar do mecanismo no estar completamente esclarecido, pensa-se que
a decomposio do sulfato de amnio leva a um aumento gradual da acidez, o que facilita a reaco.
55

Permuta Isotpica assistida por catalisadores: Sais de Cu(I) ou Cu(II) tm sido utilizados como
catalisadores, diminuindo os tempos de reaco e melhorando os rendimentos das reaces de
permuta. Pensa--se que a aco destes catalisadores envolve a formao de um complexo
organometlico de cobre, via interaco com os anis aromticos do substrato a marcar.
Os mecanismos destas reaces no se encontram completamente esclarecidos. No entanto, pensa-se
que a permuta isotpica na presena de Cu(I) envolve uma substituio nucleoflica aromtica. Na
presena de Cu(II) provvel que ocorra oxidao do iodeto e que a reaco ocorra via substituio
electroflica aromtica.

A MIBG um dos exemplos dos compostos que so radioiodados eficientemente na presena de sais
de cobre:

127

131

NH
CH2NH

NH2

Na131I
Cu(I), 160 C, 15 min

NH
CH2NH

NH2

56

Radioiodao por Reaces de Desmetalao

Por vezes, no fcil introduzir o iodo na molcula a marcar por substituio electroflica directa ou
a sua introduo nos anis aromticos pode alterar consideravelmente as suas propriedades
biolgicas (por exemplo nos esterides). Nestes casos introduzem-se grupos funcionais mais
facilmente substitudos pelo I+, comparativamente ao hidrognio. Estes grupos, designados por grupos
de partida, contm usualmente metalides ou metais, como Hg, Tl, B, Sn, Si, Ge ou Pb. Este mtodo
de marcao designado por substituio electroflica indirecta via desmetalao.
A substituio electroflica indirecta via desmetalao mais rpida do que a via directa porque as
ligaes C-metal so mais fracas do que as ligaes C-H.
Os grupos de partida mais utilizados contm boro ou estanho:

57

Radioiodao por Conjugao

Outra alternativa para radioiodar compostos em que a via directa difcil de aplicar envolve a
conjugao de um grupo protstico molcula a marcar. O iodo radioactivo incorporado no grupo
prosttico que pode ser acoplado molcula-alvo antes ou depois da radioiodao. Este mtodo
designado por radioiodao por conjugao.

Quando que se recorre radioiodao por conjugao?

i) Quando os compostos a marcar no contm resduos tirosilo ou histidilo.
ii) Quando os compostos a marcar possuem grupos sulfidrilo livres(SH) que reagem mais
rapidamente com o iodo do que os resduos tirosilo ou histidilo.
iii) Quando as condies da radioiodao provocam a alterao das caractersticas biolgicas dos
compostos.

A radioiodao por conjugao tem sido utilizada essencialmente para marcar esterides e protenas.

58

Radioiodao de Esterides por Conjugao

Na marcao de esterides por conjugao os grupos prostticos mais comuns so o tirosinato de metilo
(TME), a tiramina (TA) ou a histamina (HA) que possuem grupos aromticos activados facilmente
marcados.

O grupo prosttico pode ser

marcado antes (A) ou depois (B) do
acoplamento. O acoplamento
efectuado por reaco dos grupos
amina com grupos funcionais
adequados da molcula a marcar,
atravs da formao de ligaes
amida.
59

Radioiodao de Protenas por Conjugao

Envolve uma metodologia idntica da marcao de esterides. A diferena principal reside no modo
como o grupo prosttico ligado protena a marcar. O acoplamento protena tambm envolve a
formao de uma ligao amida que efectuada pela activao do grupo prosttico com Nhidroxisuccimida (NHS), facilitando a NHS a formao da ligao amida.
Reagente de Bolton-Hunter

60

Qumica do Tecncio e Radiofrmacos de 99mTc

O 99mTc o radionuclido mais utilizado em diagnstico (cerca de 80 % nos EUA) pelas seguintes razes:

i) apresenta caractersticas fsicas (T1/2 = 6.02 h, 141 keV) ideais para a aquisio de imagens, em tempo
til e com uma minimizao da dose de radiao.

ii) facilmente acessvel e a preos relativamente econmicos, atravs do gerador 99Mo/99mTc.

iii)A preparao dos radiofrmacos de 99mTc efectuada a partir de kits por adio de pertecnetato eludo
do gerador, com procedimentos bastante simples.

iV) O tecncio apresenta uma qumica diversificada, o que tem permitido desenvolver um grande nmero
de radiofrmacos. Actualmente existem radiofrmacos de 99mTc para visualizao do rim, corao, fgado,
crebro, etc.

61

Qumica do Tecncio
O tecncio um elemento de transio d, do grupo 7 e da 2 srie de transio, que foi descoberto
em 1937 por Perrier e Segr*. O Tecncio no apresenta istopos estveis.
(*Perrier et Segr, J. Chem. Phys, 1937,5,712: 95Tc (60 d), 97Tc (90d); Seaborg et Segr, Phys. Rev.,
1940, 57, 552: 99mTc).
A qumica do tecncio dominada pela formao de complexos de coordenao, como acontece
com todos os metais de transio. Assim, a maior parte dos radiofrmacos de 99mTc so complexos de
coordenao.

O estudo da qumica de coordenao do tecncio efectuado com o 99Tc, istopo com semi-vida
longa (2x105 anos), que pode ser manipulado em quantidades macrocspicas, permitindo a
caracterizao qumica dos compostos de Tc pelas tcnicas analticas e espectroscpicas usuais em
quimica inorgnica.

Nas ltimas dcadas o estudo da qumica de coordenao do tecncio sofreu um desenvolvimento

aprecivel, permitindo um desenvolvimento mais racional de novos radiofrmacos.

62

 A identificao da estrutura qumica dos radiofrmacos-99mTc conseguida por comparao do

comportamento cromatogrfico em HPLC dos complexos de 99mTc (10-6-10-8 M) e dos complexos de 99Tc
ou Re (10-3 M) isolados qumicamente na sua forma pura.

O 99mTc analisado com um detector e o 99Tc com um detector de ultravioleta/visvel (UV/vis). Se os

complexos de 99mTc e 99Tc ou Re apresentarem tempos de reteno idnticos (tR) considera-se que se
est em presena das mesmas espcies qumicas.

63

 O que um complexo de coordenao ?

um composto formado entre um metal de transio d e dados ligandos (L) que contm tomos ou grupos
funcionais com capacidade de doao electrnica. Praticamente todos os elementos no metlicos, com
excepo dos gases raros, apresentam capacidade de se ligar a metais de transio (e.g. C, O, N, P,S,
halogenetos, etc.).
Os compostos de coordenao podem ser neutros (A) ou carregados (caties (B) ou anies (C)),
dependendo do estado de oxidao do metal e do nmero e carga dos ligandos coordenados.

+
S

H2
N

H2
N

Tc

Tc
S

SC6H5

[Tc(V)O{S(CH2CH2S)2}(SC6H5)]

N
H2

N
H2

[Tc(V)O2(en)2]+

O
Cl

Cl
Tc
Cl

Cl
[Tc(V)OCl4]-

(en = etilenodiamina)

64

Ligao qumica em complexos de coordenao

Na ligao qumica entre o metal e os ligandos tem particular importncia a interaco entre as
orbitais d do metal e orbitais s ou p dos ligandos, com energia e simetria adequadas. As ligaes
tm carcter covalente e podem ser simples, duplas ou triplas, do tipo ou . O maior ou menor
carcter covalente depende do metal e da natureza dos ligandos.
dz2

dxy

dx2-y2

dxz

dyz

x
y

+
+

- -

+
interaco

interaco
65

Tipos de Ligandos
Existe uma grande diversidade de ligandos que apresentam diferentes tomos doadores (e.g. C, O, N, P,
S, halogenetos, etc.). O tomo doador aquele que se liga directamente ao metal.
Os ligandos podem ser neutros (e.g. H2O) ou aninicos (e.g. Cl-).
O que a denticidade de um ligando? A denticidade de um ligando o nmero de tomos desse
ligando que se apresentam coordenados ao metal. Os ligandos podem ser unidentados ou polidentados
(dois ou mais tomos ligados ao metal).
unidentado

NH3
amonaco

H2N

tetradentado

tridentado

bidentado

NH2

etilenodiamina (en)

H2N

NH2

NH

HN

NH

HN

dietilenotriamina (dien)

ciclama

Os ligandos polidentados designam-se por quelantes e os respectivos complexos por quelatos. Os

quelatos so mais estveis do que os complexos similares com ligandos unidentados. Esta maior
estabilidade devida ao efeito quelante que reflecte a menor variao da entropia na formao dos
quelatos. A maior parte dos radiofrmacos-99mTc correspondem a quelatos.
66

Nmero de Coordenao e Geometria de Coordenao

O nmero de coordenao (NC) representa o nmero de tomos ligados ao metal e pode variar de 2
a 12. No caso do tecncio encontram-se descritos nmeros de coordenao de 4 a 9. Para o Tc os
mais comuns so NC=5 e NC=6.

Tc

Cl

O
Cl

2-

Tc

Cl

Cl

Cl

Cl

NC=4

Cl

Tc

Cl

Cl
Cl
NC=6

NC=5

A geometria de coordenao representa o arranjo geomtrico (poliedro de coordenao) definido pelos

tomos coordenados ao metal, variando consoante o nmero de coordenao. No entanto, para o mesmo
nmero de coordenao podem existir diferentes geometrias de coordenao. As geometrias de
coordenao mais comuns nos complexos de tecncio so a piramidal quadrangular (NC=5), a bipiramidal
trigonal (NC=5) e a octadrica (NC=6).
L
L

Tc

L
L

L
Tc
L
L

pirmide
quadrangular

bipirmide
trigonal

Tc

L
L

L
L
octaedro

67

Estabilidade dos Complexos

Termodinmica: Tendncia do complexo para se

decompr, medida pela constante de
equilbrio da reaco de dissociao:

Estabilidade

ML

Cintica:

M +L

Relaciona-se com a velocidade com

que ocorre a decomposio.

Um complexo pode ser termodinamicamente estvel mas cineticamente instvel (lbil), e vice-versa.
in vitro
Nem sempre se
correlacionam

Estabilidade
in vivo

Estudos de estabilidade in vitro e

in vivo

68

Estabilidade in vitro/in vivo

Estabilidade in vitro: condiciona o tempo til de utilizao dos radiofrmacos-99mTc, aps

reconstituio dos kits. A maior parte dos radiofrmacos da 1 gerao (e.g. gluconato, MDP) so
constitudos por complexos relativamente instveis in vitro. Esta instabilidade ultrapassada pelo
uso de um grande excesso de ligando.

Estabilidade in vivo: condiciona a qualidade das imagens obtidas, j que um complexo instvel
in vivo pode levar a um aumento significativo do fundo. No entanto, h radiofrmacos-99mTc (e.g.
99mTc-ECD) que ao serem metabolizados no rgo-alvo ficam a retidos, melhorando a imagem
desse rgo face ao fundo.

69

Qumica dos Diferentes Estados de Oxidao do Tecncio

Estado de oxidao: O estado de oxidao de um dado tomo numa molcula usualmente considerado
como sendo a carga formal desse tomo. Pode ainda ser visto como o nmero de electres ganhos ou
cedidos por esse tomo relativamente ao estado de valncia 0 (e. g. Tc(0)).
Estados de oxidao do Tecncio: Como pertence ao grupo 7 o tecncio tem um configurao
electrnica d7 e a perda sucessiva dos electres d conduz a vrios estados de oxidao. Os estados de
oxidao do Tc variam entre 1 e +7.

Menos ricos em
electres

Tc(VII)- d0
Tc(VI)-d1
Tc(V)-d2 Estados de oxidao mais
Tc(IV)-d3 comuns nos radiofrmacosTc(III)-d4 99mTc em utilizao clnica

Mais ricos em
electres

Tc(II)-d5
Tc(I)-d6
Tc(0)-d7

70

Exemplos
TcO4-: O ligando oxo (O2-) tem carga 2 e o pertecnetato monoaninico, logo o Tc est no estado de
oxidao +7 (Tc(VII)).
4(-2) + x =-1 x=+7
TcOCl4-: O ligando O2- dinegativo, os ligandos cloreto so mononegativos e o
oxotetracloropertecnetato monoaninico, logo o Tc est no estado de oxidao +5 (Tc(V)).
-2+4(-1)+ x =-1 x=+5
TcNCl2(PPh3)2: O ligando N3- trinegativo, a trifenilfosfina neutra e o complexo neutro, ento o Tc
est no estado de oxidao +5 (Tc(V)).
3+ 2(-1)+x =0 x=+5
TcCl62-: A carga dos ligandos Cl- -1 e o hexaclorotecnetato dianinico, logo o Tc est no estado
de oxidao +4 (Tc(IV)).
6x(-1)+ x =-2 x=+4
O
N

O
O

Tc
S

O ligando oxo dinegativo, o ligando tetradentado diamidoditiol, doador N2S2,

dinegativo e o complexo [TcO(DADT)]- monoaninico, logo o Tc est no estado
de oxidao +5 (Tc(V)).
-2+(-4)+ x =-1 x=+5

[Tc(V)O(DADT)]]-

71

Tecncio(VII) (d0)
O Tc(VII) o estado de oxidao mximo do tecncio que se encontra, portanto, fortemente deficiente
em electres. Assim, a qumica do Tc(VII) dominada por processos de reduo.
O pertecnetato de sdio (Na99mTcO4) eludo do gerador 99Mo/99mTc um composto de Tc(VII).
O Tc(VII) pode formar complexos com ligandos orgnicos mas a sua preparao no pode ser efectuada
a partir do TcO4- ou em meio aquoso. Nas condies de preparao dos radiofrmacos o TcO4- no tende
a ser complexado. Para marcar os ligandos com 99mTc temos que reduzir o Tc a estados de oxidao
inferiores (e.g. Tc(III), Tc(IV), Tc (V)).
Tc(VII)O4- + Sn(II)+8H+
2Tc(VII)O4- + 3Sn(II)+16H+

Tc(V)+ Sn(IV)+4H20
2Tc(IV)+ 3Sn(IV)+8H20

Tecncio(VI) (d1)
A qumica de coordenao do tecncio(VI) encontra-se muito pouco explorada. Os compostos de
Tc(VI) tm tendncia a desproporcionar para compostos de Tc(VII) e Tc(V). No h radiofrmacos de
99mTc baseados em Tc(VI).

72

Tecncio(V) (d2)
O Tc(V) um estado de oxidao muito importante na preparao de radiofrmacos 99mTc. Muitos dos
radiofrmacos-99mTc so complexos de Tc(V) (ECD (NeuroliteR), HM-PAO (CeretecTM), MAG3TM, P53
(MyoviewTM)).
Como o Tc(V) relativamente deficiente em electres, os seus complexos contm frequentemente
ligandos oxo (O2-), nitreto (N3-) ou imido (RN2-) que formam ligaes mltiplas com o Tc: centros metlicos
(Tc=O)3+, (O=Tc=O)+, (Tc=NR)3+ ou (TN)2+.
Os centros metlicos (cores) (Tc=O)3+, (O=Tc=O)+, (TcN)2+ ou (Tc=NR)3+ so estabilizados com
ligandos (L), uni ou polidentados, doadores de O, N, S ou P, formando complexos de Tc(V) com nmeros
de coordenao de NC=5 ou NC=6. Existem radiofrmacos de 99mTc com os cores (Tc=O)3+, (O=Tc=O)+ ou
(TcN)2+.
O
L

O
L

Tc

Tc

L
NR
L

Tc

N
L
L

L
L

Tc

Tc
L

L
L

73

Tecncio(IV) (d3) e Tecncio(III) (d4)

O Tc(IV) e o Tc(III) podem ser considerados estados de oxidao intermdios, entre os estados de
oxidao mais ricos em electres (Tc(I) e Tc(II)) e os mais pobres em electres (Tc(V), Tc(VI) e Tc(VII)). O
Tc(III) e Tc(IV) tm tendncia a formar complexos com NC=6 e com geometria de coordenao octadrica.
Existem vrios exemplos de radiofrmacos-99mTc que correspondem a complexos de Tc(III) e Tc(IV) com
ligandos doadores de azoto e oxignio ou com ligandos doadores de fsforo (fosfinas).

Parte do Polmero [Tc(IV)(MDP)(OH)-]n

(MDP- cido metilenodifosfnico)
O

O
HO

CH2

OH

OH

HO
(MDP)
99mTc-MDP

utilizado em
visualizao ssea

74

Tecncio(II) (d5) e Tecncio(I) (d6)

O Tc(II) e o Tc(I) so estados de oxidao baixos, logo relativamente ricos em electres. O Tc(II) e o
Tc(I) tm tendncia a formar complexos com NC=6 e com geometria de coordenao octadrica.
Os isonitrilos (R-NC), o monxido de carbono (CO) e as fosfinas (PR3, R = alquilo ou arilo) so
exemplos de ligandos utilizados para preparar complexos de Tc(II) e Tc(I). Como estes ligandos tm a
capacidade de aceitar electres do metal, para alm da capacidade de dar electres, formam ligaes
fortes com o Tc(I) (d6)e Tc(II) (d5) que so ricos em electres.
Os complexos de Tc(II) so relativamente instveis e tm tendncia a sofrer oxidao a Tc(III), mas os
complexos de Tc(I) so muito estveis (inertes). Esta diferena explica o facto de no haver nenhum
radiofrmaco-99mTc que seja um complexo de Tc(II), enquanto para o Tc(I) existe o 99mTc-MIBI
(Cardiolite). O estado de oxidao Tc(I) tem vindo a assumir uma importncia crescente no
desenvolvimento de radiofrmacos com a introduo do precursor fac-[99mTc(CO)3(H20)3]+ que pode ser
obtido a partir de um kit (Isolink) e usado para preparar uma grande diversidade de complexos.

Kit Isolink

75

Preparao de Radiofrmacos 99mTc

Na sntese de complexos de
restries:

99mTc

teis como radiofrmacos h que ter em conta as seguintes

i) A sntese (marcao) efectuada para concentraes muito baixas de Tc, usualmente na ordem dos
10-8-10-6 M (1-50 mCi).
ii) Parte-se obrigatoriamente de 99mTcO4- (Tc(VII)) em meio aquoso (soro fisiolgico, NaCl 0,9 %) que
tem de ser reduzido a estados de oxidao inferiores para poder marcar os ligandos pretendidos.
iii) A sntese deve compreender procedimentos simples e ser rpida, de preferncia num tempo inferior
a 30 min.
iv) O rendimento de marcao deve ser elevado (> 95 %) para maximizar a actividade retida no rgoalvo.
v) A marcao deve ser efectuada em condies estreis e apirogneas e num meio adequado para
injeco intravenosa (solues isotnicas de soro fisiolgico).
vi) A sntese deve poder ser transposta para a forma de kits, formulaes liofilizadas e asspticas que
contm os ligandos a marcar e o redutor. Nos centros de Medicina Nuclear, a simples adio do
99mTcO - a estes kits, seguida de breve agitao e de incubao temperatura ambiente, permite
4
preparar in loco os radiofrmacos- 99mTc. Apesar da simplicidade destes procedimentos, as marcaes
com 99mTc podem envolver reaces qumicas de elevada complexidade.
76

Vias de Sntese de Radiofrmacos- 99mTc

As vias de sntese para preparar radiofrmacos-99mTc so as vias da reduo, reduo/substituio e
substituio, em funo do tipo de reaces qumicas envolvidas.

Via da reduo Envolve a reduo do

marcar.
99mTcO4-

99mTcO -,
4

usualmente com SnCl2, na presena do ligando (L) a

99mTc-L

+ SnCl2 + Ligando (L)

(Tc-complexado)

O 99mTc-MDP, 99mTc-DTPA e o 99mTc-DMSA so exemplos de radiofrmacos preparados por esta via.

Via da Reduo/Substituio um caso particular da via da reduo, em que o prprio ligando a
marcar que reduz o Tc(VII). aplicvel quando o ligando tem propriedades redutoras (e.g. tiis, fosfinas).
+

Cl
99mTcO 4

+ dpme

99mTc

P
P

P
Cl

dmpe= 1,2-bis(dimetilfosfino)etano= (CH3)2PCH2CH2P(CH3)2

77

Via da Substituio (ou da trans-quelatao) Esta via envolve a formao de um complexo de

99mTc com um ligando lbil que, em seguida, substitudo pelo ligando a marcar que mais forte e
forma complexos mais estveis. Os ligandos lbeis que tm sido utilizados para preparar os complexos
intermedirios so cidos polihdricos (tartarato,citrato, glucoheptonato) ou aminocarboxlicos (EDTA).
Na maior parte dos casos, a via da substituio tem sido utilizada para preparar radiofrmacos99mTc(V) que correspondem a oxo-complexos de 99mTc.
Exemplo da preparao de um oxo-complexos de 99mTc(V) pela via da substituio:

O
99mTcO 4

SnCl2
Tartarato

99mTc-tartarato

-2

Complexo intermedirio
N

S- benzoloMAG3

100 C, 10 min

O
Tc

N
N

CH2
COOMAG3

O
O
S-benzoloMAG3 = S-benzolomercaptoacetiltrigicina:

NH

O
Ph

CH2
COOH

78

 Porque que se utiliza a via da substituio?

- O uso da via da substituio (ou trans-quelatao) tem como objectivo principal evitar a formao de
tecncio hidrolisado (99mTcO2), que a principal impureza radioqumica nos radiofrmacos 99mTc. A
utilizao da via da substituio pode ainda evitar a reduo do tecncio a estados de oxidao
inferiores a Tc(V) que conduziriam formao de impurezas radioqumicas indesejveis.
- O tecncio hidrolisado um xido de Tc(IV), muito estvel termodinamicamente, que se pode formar
se o ligando a marcar no reage rapidamente com o tecncio reduzido, aps reduo do pertecnetato
com o Sn(II).
2 (99mTcO4- ) + 3Sn(II) +8H+

2 (99mTcO2) +3Sn(IV)+ 4H2O

- O ligando mais fraco (tartarato, glucoheptonato, etc) reage rapidamente com o Tc-reduzido, evitando
a formao do tecncio hidrolisado. O ligando fraco ento substitudo pelos ligandos mais fortes, e.g.
MAG3 ou ECD, com formao do complexo pretendido (p. ex. 99mTc-MAG3 ou 99mTc-ECD) sem
contaminao com o Tc-hidrolisado.

79

Optimizao das condies de marcao

Para qualquer das vias de sntese dos complexos de 99mTc (reduo, reduo/substituio, substituio),
necessrio proceder optimizao dos seguintes parmetros de modo a obter um rendimento de
marcao elevado: razo/molar redutor/ligando, concentrao dos reagentes, pH, temperatura,
tempo de reaco, presena de oxignio.
Preparao e Composio de kits para marcao com 99mTc
Composio dos kits liofilizados: Ligando
Redutor
Tampes
Aditivos

A introduo dos kits liofilizados para marcao com 99mTc facilitou significativamente a actividade das
radiofarmcias hospitalares. Os kits tm um prazo de validade relativamente alargado, desde que sejam
guardados em frigorfico. A marcao com 99mTc envolve a simples adio de Na99mTcO4 aos kits.

80

Como se preparam os kits liofilizados?

-A uma soluo aquosa do ligando a marcar, adiciona-se uma soluo acdica de cloreto estanoso
(SnCl2) ou de outro sal estanoso.
- Em seguida, ajusta-se o valor de pH, usualmente entre 5 e 7; pode ainda adicionar-se uma soluo
tampo de modo a evitar variaes de pH. A soluo final purgada com azoto e repartida em fraces
por diferentes frascos, de acordo com a composio pretendida para cada kit individual.
- Cada fraco liofilizada (congelao/ evaporao da gua sob vcuo), obtendo-se um material seco.
Aps liofilizao, retiram-se e capsulam-se os diferentes frascos sob azoto. Estas operaes so
conduzidas com material esterilizado e sob condies asspticas numa cmara de fluxo laminar.
Exemplo de um liofilizador

Kit para marcao com 99mTc

81

 O Redutor e o Problema do Estanho Hidrolisado

Existem vrio redutores capazes de reduzir o 99mTcO4-, tais como o borohidreto (BH4-), o ditionito
(S2O42-), o dissulfito (S2O32-), o cido formamidinosulfnico (FSA) ou o io estanoso (Sn2+ ou Sn(II)).
Praticamente todos os kits comerciais usam Sn(II) como redutor, na forma de cloreto estanoso,
fluoreto estanoso, citrato estanoso ou tartarato estanoso. A praticamente exclusiva utilizao do
Sn(II) deve s seguintes vantagens:
Solubilidade em meio aquoso
Estabilidade moderada a elevada
Baixa Toxicidade
Reduo rpida e eficiente do Tc(VII) a diferentes valores de pH.
Apesar destas vantagens, o uso do Sn(II) apresenta alguns problemas tais como:
A hidrlise do Sn(II)
A incorporao do Sn(II) em complexos mistos com o tecncio.
82

 O Problema da Hidrlise do Sn(II):

- Na ausncia de um agente complexante e em meio neutro ou alcalino, o Sn(II) tem tendncia a hidrolisar
formando hidrxidos insolveis.

Sn2+(aq) + 2OH-(aq)

Sn(OH)2

- A formao dos hidrxidos insolveis de estanho tem dois inconvenientes:

i) O Sn(II) deixa de estar disponvel em soluo para reduzir o Tc(VII) e o rendimento de marcao baixo
devido presena de 99mTcO4- livre.
ii) O 99mTc-reduzido pode co-precipitar com o estanho, com formao de 99mTc-estanho coloidal ou de
outros complexos insolveis o que baixa a pureza radioqumica da preparao. Estas espcies tm um
comportamento similar ao 99mTcO2 (tecncio hidrolisado) e, na prtica, no so possveis de distinguir do
99mTcO .
2
Como Evitar a Hidrlise do Sn(II)? Durante a preparao dos kits liofilizados, e consequentemente
na marcao com 99mTcO4-, utiliza-se excesso do agente quelante (ligando) para complexar tambm o
Sn(II), evitando-se a sua hidrlise e precipitao. O ligando que complexa o Sn(II) pode ser o ligando a
marcar com 99mTc ou um ligando lbil no caso da trans-quelatao. Em regra, para ligandos mais
fracos a razo molar ligando/Sn(II) mais elevada. Esta razo molar tem que ser optimizada para cada
kit, em conjugao com outros parmetros como o pH ou a presena de oxignio (O2).
83

 Em resumo, quais so EM GERAL as possveis espcies radioqumicas presentes em soluo

aps marcao de um kit com 99mTc?

Tecncio complexado (99mTc-L)

Deve ser mximo

(> 95%)

rTecncio livre (99mTcO4-):

rTecncio hidrolisado:99mTcO2 + 99mTc-Sn hidrolisado)

Devem ser mnimos (<5%)

84

Factores que condicionam a presena de tecncio Livre

A presena de tecncio livre (99mTcO4-) pode ser devida hidrlise do Sn(II) ou devida introduo de
oxignio que oxida o Sn(II) a Sn(IV). A introduo do O2 pode ocorrer durante o armazenamento ou
durante a reaco de marcao.

2 Sn2+ + O2 +4H+

Sn4+ + 2 H2O

Durante a reaco de marcao pode ainda ocorrer oxidao do Sn(II) devido presena de espcies
radicalares oxidantes do tipo hidrxido ou perxido resultantes de processos de radilise. Essas espcies
radicalares podem ainda promover a oxidao do complexo de 99mTc pretendido a pertecnetato.

Sn2+ + 2H+ + 2OH

Sn2+ + 2H+ + 2HO2

Sn4+ + 2H2O
Sn4+ + 2H2O2

Na maior parte dos kits a quantidade de Sn(II) pode variar com o tempo e de amostra para amostra,
devido fcil oxidao do Sn(II). Por esta razo, importante determinar experimentalmente a
concentrao do Sn(II) nos kits, o que feito pelos fabricantes.
85

 Aditivos
Os kits liofilizados contm aditivos que podem ser: estabilizadores, anti-oxidantes ou substncias
inertes (excipientes).
Os anti-oxidantes so adicionados para manter a integridade dos complexos, evitando a sua reoxidao a pertecnetato. Tambm so usados para evitar a oxidao do Sn(II) a Sn(IV). A oxidao pode
ser consequncia de processos de radilise da gua que origina espcies radicalares e perxido de
hidrognio (H2O2). A formao destas espcies oxidantes mais significativa durante o perodo entre a
produo do gerador 99Mo/99mTc e a primeira eluio. Muitas vezes recomendado que no seja utilizado
o primeiro eluido de um gerador.
O
O

OH

O
H

O cido ascrbico, o cido gentsico,

citratos ou acetatos so alguns dos
estabilizadores
ou
anti-oxidantes
utilizados nos kits para marcao com
99mTc.

CHOH

ROO

OH

O
H

OH

CHOH

CH2OH

+ RO2H

.
O

CH2OH

cido Ascrbico

OH
OH

HO
cido Gentsico

O
ROO

OH

+ RO2H

HO

86

As substncias inertes (excipientes) podem ser usadas para aumentar o tamanho do liofilizado ou para
melhorar o seu aspecto, sendo o NaCl o que mais utilizado para este fim. No caso dos ligandos serem
pouco solveis em gua podem ainda ser usados agentes surfactantes para facilitar a sua dissoluo.

Os Tampes e o Controlo do pH

A pureza radioqumica dos radiofrmacos pode depender fortemente do pH. Alm disso, a natureza
qumica dos complexos formados pode ser condicionada pelo pH. Por exemplo, a marcao do cido
meso-dimercaptosuccnico (DMSA) com 99mTc a pH<6 origina um complexo adequado para estudos
renais e a sua marcao a pH>8 origina um complexo til para a deteco do carcinoma medular da
tiride.

Para controlar o pH das reaces de marcao os kits liofilizados podem conter tampes. Os tampes
so pares cido/base conjugados que em soluo aquosa sofrem apenas ligeiras variaes de pH
(poder tampo). Consoante o pH pretendido assim escolhido um tampo que no deve interferir com
as reaces de marcao.

87

 Procedimento Geral para marcao de kits com 99mTc

As seguintes operaes devem ser efectuadas sob condies asspticas, utilizando luvas impermeveis
gua e com a proteco adequada contra radiaes:
i) Inspeccionar cuidadosamente o frasco (kit) para verificar se o recipiente no se encontra danificado e se
o aspecto do material liofilizado est de acordo com as especificaes do fabricante, nomeadamente no
que diz respeito cor do liofilizado.
ii) Remover a parte superior da cpsula e limpar a superfcie do septo com toalhete anti-sptico. Colocar
uma etiqueta com o smbolo de radiaes adequado e introduza o frasco num contentor de chumbo.
iii) Com uma seringa esterilizada e blindada, adicionar a soluo de 99mTcO4- com a actividade e
concentrao radioactiva pretendidas. Sem retirar a agulha, remover um volume equivalente da atmosfera
do kit para o manter presso atmosfrica. Agite vigorosamente 5 a 10 vezes.
iv) Proceder reaco de marcao, a frio ou a quente, de acordo com as indicaes do fabricante.
v) Aps marcao, inspeccionar visualmente o kit para verificar se no existem partculas em suspenso e
se a cor da soluo est de acordo com as especificaes do fabricante.
vi) Medir a actividade no calibrador de doses e registar, em etiqueta adequada, a concentrao
radioactiva, o volume final, a data e hora da medio, o prazo de validade da preparao e o lote do kit.
Cole a etiqueta no contentor de chumbo.
vii) Armazenar a preparao nas condies indicadas pelo fabricante, antes das sua administrao ao
paciente.
88

Tipos de Radiofrmacos-99mTc
i) Radiofrmacos cuja biodistribuio determinada pelas propriedades de um complexo de coordenao
do tecncio com ligandos adequados: 99mTc-MAG3, 99mTc-ECD, 99mTc-HMPAO, 99mTc-MIBI, etc. Na
literatura de lngua inglesa so designados como radiofrmacos metal essential.
ii) Radiofrmacos cuja biodistribuio determinada pelas propriedades do vector a que foi incorporado o
99mTc, no tendo o tecncio influncia no comportamento biolgico da molcula marcada: colides e
partculas marcadas (99mTc-MAA, 99mTc-Enxofre coloidal, 99mTc-Sulfureto de Rnio), eritrcitos marcados,
etc. Na literatura de lngua inglesa so designados como radiofrmacos metal tagged. (tagged =
pendurado).
Os radiofrmacos-99mTc podem ser ainda classificados do seguinte modo:
- Radiofrmacos da 1 gerao ou agentes de perfuso: radiofrmacos cuja biodistribuio
condicionada pelas caractersticas fsico-qumicas dos complexo de 99mTc (carga, peso molecular,
lipofilia). Exemplos: 99mTc-MAG3, 99mTc-ECD, 99mTc-MIBI.
- Radiofrmacos da 2 gerao ou agentes especficos: radiofrmacos cuja localizao nos tecidosalvo envolve interaces especficas com dadas estruturas moleculares das clulas (receptores,
enzimas, genes, etc) e que por isso mesmo podem fornecer informao bioqumica, ao nvel
molecular, relacionada com o desenvolvimento das patologias. A investigao actual em radiofarmcia
encontra-se centrada no desenvolvimento deste tipo de agentes. Para alm de alguns anticorpos
marcados, os radiopptidos NeoSpect (99mTc-Depretido) e o Acutect (99mTc-apcitide) so os nicos
exemplos deste tipo de radiofrmacos de 99mTc que se encontram aparovados para uso clnico.
89

 Preparao e Propriedades de Alguns Radiofrmacos-99mTc

Agentes para Visualizao ssea
Os radiofrmacos-99mTc para visualizao ssea baseiam-se na marcao de fosfatos ou fosfonatos com
99mTc, j que este tipo de ligandos tm grande afinidade para o esqueleto
Fosfatos

O
HO

OH

OH

O
HO

OH

OH

O
O

OH

Polifosfato

OH

OH

Pirofosfato (PYP)

Fosfonatos

HO

OH CH3 OH
HEDP

OH

HO

OH H

OH

MDP

OH

HO

OH

OH OH OH
HMDP

90

 O primeiro fosfato marcado com 99mTc a ser proposto foi o 99mTc-polifosfato, em 1971 por Subramanian
et al. Seguiram-se o 99mTc-PYP, o 99mTc-HEDP (1-hidroxi-etano-1,1-difosfonato, o 99mTc-MDP (metileno
difosfonato) e o 99mTc-HMDP (hidroximetileno difosfonato).O 99mTc-polifosfato j no utilizado.
Os fosfonatos marcados tm a vantagem de serem mais estveis in vivo do que os fosfatos, j que a
ligao P-O-P facilmente hidrolisada pelas polifosfatases, ao contrrio da ligao P-C-P. Assim, os 99mTcfosfonatos (MDP, HEPD, HMDP) so mais utilizados para visualizao ssea do que o 99mTc-PYP. O mais
utilizado o 99mTc-MDP. O 99mTc-PYP tem sido usado para estudo do enfarte do miocrdio.
Existem kits comerciais de MDP, HMDP e PYP fornecidos por diferentes empresas, com composies
ligeiramente diferentes. Dado que estes ligandos so relativamente fracos existe alguma tendncia para
reoxidao dos complexos a 99mTcO4-. Este problema controlado pela adio de anti-oxidante e pelo uso
de uma concentrao de Sn(II) relativamente elevada. A razo molar ligando/Sn(II) tambm
relativamente elevada para evitar a hidrlise do Sn(II).
A estrutura molecular dos 99mTc-fosfonatos (MDP, HEPD, HMDP) e do 99mTc-PYP no conhecida,
correspondendo provavelmente a misturas de complexos de Tc(III) ou Tc(IV). A composio destas
misturas depende do pH, da razo molar Fosfonato/Sn(II) e da presena de O2. Estes parmetros devem,
portanto, ser bem controlados para no obter preparaes com um comportamento biolgico anmalo.

91

Composio de um kit de MDP

6.25 mg de medronato de sdio (Na(MDP)).
0.34 mg de SnF2
2mg de p-aminobenzoato de sdio.

Marcao do MDP
A marcao efectuada pela simples adio de 2 a 8ml (at 500 mCi) de pertecnetato (99mTc) ao kit
liofilizado, seguida de agitao e de incubao temperatura ambiente durante 15 minutos. O pH final
varia entre 5,5 e 7,5. A pureza radioqumica deve ser superior a 95% e a preparao estvel durante 6 h.
Nota: A composio e marcao dos kits dos outros fosfonatos so similares s descritas para o MDP.
Nota Importante: Ao longo dos slides indicada a composio de diferentes
kits e respectivos mtodos de marcao. Essa composio pode variar de
fabricante para fabricante. Assim, importante salientar que devero sempre
proceder marcao de acordo com as indicaes do fabricante. Nos
relatrios que redigirem nunca venham buscar a composio do kit aos
slides das aulas. A composio a considerar a que vem na bula que
acompanha os kits!
92

 Agentes Hepatobiliares
Os radiofrmacos 99mTc utilizados para estudo da funo heptica so complexos de tecncio com
ligandos derivados do cido iminodiactico (IDA). O primeiro a ser estudado foi o cido 2,6dimetilfenilcarbamoilmetiliminodoiactico (HIDA). Com o objectivo de optimizar as propriedades biolgicas
destes agentes, foram estudados outros ligandos da famlia das IDA.
X
O
Y

NH C

CH2 N

CH2COOH
CH2COOH

Lidofenin (HIDA): X = CH3, Y = H, Z = H

Etilfenin (EHIDA): X = CH2CH3, Y = H, Z = H
Disofenin (DISIDA): X = (CH3)2CH, Y = H, Z = H
Mebrofenin : X = CH3, Y = CH3, Z = Br

A estrutura molecular dos complexos 99mTc-IDA no conhecida. No entanto, pensa-se que se tratam de
complexos monoaninicos de Tc(III), do tipo [99mTc(IDA)2]-.
93

Composio de um kit de Mebrofenin

45 mg de mebrofenin
0,73 mg de SnF2
4,5 mg de metilparaben
0,5 mg de propilparaben
Marcao da Mebrofenin
A marcao efectuada pela simples adio de 1 a 5ml (at 100 mCi) de pertecnetato (99mTc) ao kit
liofilizado, seguida de agitao e de incubao temperatura ambiente durante 15 minutos. O pH final
de 4,2-5,7. A pureza radioqumica deve ser superior a 90% e a preparao estvel durante 18 h.
Nota: A composio e marcao dos kits de outros derivados IDA so similares s descritas para a
Mebrofenin.

94

 Agentes Renais
Os radiofrmacos-99mTc utilizados em cintigrafia renal so o 99mTc-glucoheptonato, o99mTc-DMSA,
o99mTc-DTPA e o 99mTc-MAG3. O tipo de exames clnicos efectuados com estes agentes depende
essencialmente do seu modo de eliminao: concentrao no parnquima renal, filtrao glomerular ou
secreo tubular.
99mTc-Glucoheptonato
- Os kits disponveis comercialmente contm glucoheptonato (GH) de sdio ou de clcio. Estes sais so
derivados do cido glucoheptnico que um cido poli-hdrico (composto com funes -COOH e OH).
-A estrutura do complexo de Tc presente nas preparaes de 99mTc-Glucoheptonato no conhecida.
Provavelmente, trata-se de um oxo-complexo de Tc(V) aninico com dois ligandos glucoheptonato
coordenados ao metal.
COOH
H

OH

HO

OH

OH

OH

OH

n-

O
O

O
Tc

H
O

cido Glucoheptnico

= Glucoheptonato

95

- Como o glucoheptonato um ligando lbil o complexo 99mTc-GH pode ser utilizado na preparao de
outros radiofrmacos por trans-quelatao. Esta labilidade faz com que a concentrao do glucoheptonato
e a razo GH/Sn(II) sejam elevadas no kit do glucoheptonato.
Composio de um kit de Glucoheptonato
150 mg de glucoheptonato de clcio.
0,15 mg de SnCl2. 2H2O

Marcao de um kit de Glucoheptonato

A marcao efectuada pela simples adio de 2 a 5ml de pertecnetato (99mTc) ao kit
liofilizado, seguida de agitao e de incubao temperatura ambiente durante 15 minutos. O
pH final de 6.0. A pureza radioqumica deve ser superior a 95%. A preparao estvel
durante 6 h.

96

99mTc-DMSA

O DMSA, cido 2,3-dimercaptosuccnico, apresenta 3 estereoismeros pois a molcula tem 2 carbonos

quirais. Por exemplo, no kit da Amersham existe cerca de 90% do ismero meso e 10 % dos ismeros d e
l.
H
HS

COOH

HS

HS

COOH

HOOC

H
COOH HOOC
SH

SH

HS

COOH
H

meso
ismeros d e l

Entre si, os ismeros d e l so enantimeros, ou seja ismeros pticos: so a imagem no espelho um do

outro e no so sobreponveis; o ismero d roda a luz polarizada para a direita (dextrgiro) e o ismero l
roda a luz polarizada para a esquerda (levgiro), portanto dizem-se opticamente activos.
Em relao aos ismeros d e l, o ismero meso um diasteremero. O meso no opticamente activo e
no a imagem no espelho do d ou do l.
Os enantimeros tm propriedades fsicas e qumicas virtualmente idnticas, mas os diasteremeros tm
propriedades diferentes. No entanto, tanto num caso como noutro, as propriedades biolgicas podem ser
diferentes (relembrar o caso dos aminocidos d e l).
97

 A marcao do DMSA conduz a diferentes complexos de

marcao:

99mTc

consoante o pH da reaco de

- A pH cido forma-se o agente renal que se pensa corresponder a um complexo de Tc(III) e que ,
usualmente designado por DMSA(III). No entanto, a sua estrutura molecular no conhecida.
- A pH alcalino formam-se os oxocomplexos
aninicos
de
Tc(V)
[TcO(DMSA)2]-1 (vrios ismeros), cuja
estrutura qumica conhecida. O DMSA(V)
utilizado na deteco do carcinoma
medular da tiride.

H
HOOC
H

H
S

Tc

0,31 mg de SnCl2. 2H2O

30 mg de Frutose

S
S

HOOC

COOH
H
COOH

Composio de um kit de DMSA(III)

1,2 mg de DMSA

HOOC
H
HOOC

COOH
S

Tc

S
S

H
COOH
H

DMSA(V)

Marcao de um kit de DMSA(III)

A marcao efectuada pela simples adio de 2 a 5ml de pertecnetato (99mTc) ao kit liofilizado,
seguida de agitao e de incubao temperatura ambiente durante 15 minutos. O pH final de
2,5-3,0. A pureza radioqumica deve ser superior a 95%. A preparao estvel durante pelo
menos 4 h.

98

 99mTc-DTPA
O DPTA o cido dietilenotriaminopentactico. A
introduo do 99mTc-DTPA em Medicina Nuclear
ocorreu nos anos 70. Para alm de ser til em
estudos renais, o 99mTc-DTPA tem sido utilizado na
visualizao do crebro e em estudos pulmonares.
Nos estudos pulmonares administrado na forma de
aerossol

HOOC

COOH
N

HOOC

N
COOH

COOH

DTPA

A estrutura molecular do complexo presente nas preparaes de 99mTc-DTPA no conhecida. No

entanto, pensa-se que se trata provavelmente de uma espcie de Tc(IV), tendo em conta estudos
efectuados com 99Tc.
Composio de um kit de DTPA
20,6 mg de CaNa3(DTPA) (sal clcio-trissdico de DTPA)
0,25 mg de SnCl2. 2H2O
0,5 mg de p-aminobenzoato de sdio.
Marcao de um kit de DTPA
A marcao efectuada pela simples adio de 2 a 8 ml (at 300 mCi) de pertecnetato (99mTc)
ao kit liofilizado, seguida de agitao e de incubao temperatura ambiente durante 30
minutos. O pH final de 3,5-5,0. A pureza radioqumica deve ser superior a 95%. A preparao
estvel durante pelo menos 8 h.

99

 99mTc-MAG3
O 99mTc-MAG3 surgiu na sequncia dos esforos de investigao do grupo de Fritzberg et al. para
arranjar complexos de tecncio que substituissem o hipurano-131I no estudo da funo renal.
O grupo de Fritzberg comeou por estudar uma famlia de complexos com ligandos do tipo
diamidoditiol (N2S2) que formam oxo-complexos de Tc(V) aninicos. No entanto, estes ligandos tm
diferentes esteroismeros e a fixao renal dos respectivos complexos diferente. Este problema foi
ultrapassado pela introduo do MAG-3 que no apresenta estereoismeros e que forma complexos
similares.
O que o MAG-3?
- O MAG-3 um tripptido (gly-gly-gly) funcionalizado com um grupo mercaptoacetilo: a sua formao
resulta da condensao de uma molcula de cido mercaptoactico com trs molculas de glicina (gly).
glicina (gly)
O
OH

O
OH

O
OH
O
OH

NH2

SH

NH2

NH2

NH

HN

SH

CH2
COOH
Mercaptoacetiltriglicina
(MAG3)

cido mercaptoactico

100

- Nos kits liofilizados o MAG-3 aparece protegido com um grupo benzolo para evidar a degradao do
ligando j que os grupos tiis (SH) so facilmente oxidveis. Durante o processo de marcao, que
efectuado a quente, h hidrlise do ligando protegido (S-benzolo-MAG3) com formao do MAG-3 no
protegido que vai complexar o 99mTc. No entanto, recentemente, foi introduzido um kit que contm o MAG3 no protegido e que pode ser marcado temperatura ambiente. Em Portugal esse kit comercializado
com a designao de Mertioscan.
Composio de um kit de MAG3 (No
Composio de um kit de MAG3
Protegido)
(Protegido)
0,2 mg de MAG3
1 mg de S-benzolo-MAG3
tartarato dissdico
16.9 mg de tartarato dissdico
SnCl2. 2H2O
40 g de SnCl2. 2H2O
Protegido
S- benzoloMAG3
100 C, 10 min

99mTcO 4

SnCl2
Tartarato

99m Tc-tartarato

N
S

MAG3
Temp. ambiente, 15 min

No Protegido

-2

O
O

Tc
N

CH2
COOMAG3

101

Marcao de um kit de MAG3

Marcao a quente (Kit que usa MAG3 protegido): A marcao efectuada por adio do pertecnetato
(99mTc) ao kit liofilizado e aquecimento a 100 C durante 10 minutos, seguido de arrefecimento
temperatura ambiente durante 15 minutos. recomendado utilizar uma agulha de respirao durante a
adio do petecnetato de modo a introduzir ar e eliminar o excesso de Sn(II). O excesso de Sn(II) pode
promover a formao de espcies radioqumicas que podem corresponder a complexos em estado de
oxidao inferior (Tc(IV)). O pH final de 5,0-6,0. A pureza radioqumica deve ser superior a 90%. A
preparao estvel durante pelo menos 6 h. A marcao do MAG-3 envolve um processo de transquelatao, formando-se um complexo intermedirio com o tartarato que actua como ligando lbil.
Marcao Temperatura ambiente (Kit que usa MAG3 no protegido): A marcao efectuada por
adio de 2 mL do pertecnetato (99mTc) ao kit liofilizado, seguida de incubao temperatura ambiente
durante 15 minutos. Aps este tempo de incubao, adiciona-se 2 mL de uma soluo de tampo fosfato.

102

 Agentes de Perfuso do Miocrdio

- Durante mais de 15 anos o cloreto de Tlio [Tl-201] foi o nico radiofrmaco disponvel para estudos de
perfuso do radiofrmaco. Na dcada de 80, foram efectuados vrios esforos para introduzir
radiofrmacos-99mTc para este fim. Como a clula cardaca tem a capacidade de concentrar caties
monovalentes, esta investigao foi dirigida para complexos catinicos de tecncio.
- O qumico americano Edward Deutsch foi pioneiro no estudo de complexos catinicos de tecncio para
perfuso do miocrdio. Em 1981, props uma srie de compostos, nomeadamente o catio
[99mTcCl2(DMPE)2]+ (DMPE = 1,2-bis(dimetilfosfino)etano).
+

Cl
99mTcO 4

+ dpme

99mTc

P
P

P
Cl

dmpe= 1,2-bis(dimetilfosfino)etano= (CH3)2PCH2CH2P(CH3)2

- O [99mTcCl2(DMPE)2]+ permitiu visualizar o miocrdio do co com boa qualidade e chegou a ser testado
em humanos. No homem as imagens obtidas foram de m qualidade, devido reduo in vivo do
complexo, de Tc(III) a Tc(II), com formao do complexo neutro [99mTcCl2(DMPE)2]. Na sequncia destes
estudos foram testados complexos catinicos de tecncio(I) com outro tipo de ligandos (isonitrilos), com o
objectivo de obter compostos estveis in vivo.
103

 99mTc-MIBI (Cardiolite)
- O 99mTc-MIBI (MIBI: 2-metoxi-isobutiloisonitrilo) foi desenvolvido pelo grupo do Prof. Alan Davison do MIT
na dcada de 80. Foram estudados vrios ligandos isonitrilo at chegar ao MIBI, nomeadamente o TBI (tbutilisonitrilo).

N
TBI

OMe

N
MIBI
+

OMe

N
MeO

OMe

MeO

C
C

Tc
C

C
C

- O 99mTc-TBI apresentava uma ptima

fixao no corao mas o fundo era
elevado devido a uma elevada reteno no
fgado e nos pulmes. Este problema foi
ultrapassado com a introduo do MIBI
que menos lipoflico do que o TBI, o que
facilita a eliminao hepatobiliar.

OMe

- A estrutura molecular do complexo

presente nas preparaes de 99mTc-MIBI
conhecida. Trata-se de um complexo
catinico de Tc(I), hexacoordenado e
octadrico, com seis ligandos MIBI.

OMe
99mTc-MIBI

(SESTAMIBI)

104

- O desenvolvimento do kit liofilizado de MIBI para marcao com 99mTc suscitou alguns problemas,
relacionados com a natureza do ligando MIBI. Como a maior parte dos ligandos do tipo isonitrilo, o
MIBI txico, instvel e com um cheiro desagradvel.
- Estes problemas foram ultrapassados atravs da introduo do MIBI na forma do complexo
[Cu(I)(MIBI)]BF4. Este complexo de cobre relativamente estvel e evita a libertao in vivo do MIBI em
excesso, mas suficientemente lbil para ceder o MIBI necessrio para complexar o 99mTc.

Composio de um kit de MIBI

Marcao de um kit de MIBI

1 mg de [Cu(I)(MIBI)]BF4

A marcao efectuada por adio do pertecnetato (99mTc) ao

kit liofilizado e aquecimento a 100 C durante 10 minutos. O
pH final de 5,5. A pureza radioqumica deve ser superior a
90%. A preparao estvel durante pelo menos 6 h. A
marcao do MIBI efectuada a quente para garantir a
reduo do Tc(VII) a Tc(I) e para que ocorra troca do MIBI
entre o cobre e o 99mTc.

75 g de SnCl2. 2H2O
2.6 mg de Citrato de sdio
1 mg de L-cistena.HCl.H2O
Manitol

105

 99mTc-Tetrofosmina (Myoview)
O 99mTc-Tetrofosmina um agente para perfuso do
miocrdio desenvolvido pela Amersham, com base em
ligandos do tipo difosfina. O 99mTc-Tetrofosmina um
dioxo-complexo de Tc(V) cuja estrutura molecular
conhecida.

EtO
EtO

O
P

OEt
OEt

Tc
EtO
EtO

P
O

OEt
OEt

Composio de um kit de Tetrofosmina

0,23 mg de tetrofosmina

30 g de SnCl2

0,32 mg de sulfosalicilato dissdico 1 mg de d-gluconato

OEt

EtO
P

P
OEt

EtO

Tetrofosmin

(OEt = OCH2CH3)

Marcao de um kit de Tetrofosmina

A marcao efectuada por adio do pertecnetato (99mTc) ao kit liofilizado e por incubao
temperatura ambiente durante 15 minutos. O pH final de 8-9. A pureza radioqumica deve ser
superior a 90%. A preparao estvel durante pelo menos 8 h. A marcao envolve a reduo do
Tc(VII) a Tc(V) com formao do complexo intermedirio 99mTc-gluconato. Por trans-quelatao formase em seguida o 99mTc-tetrofosmina. Assim, evita-se a reduo a estados de oxidao inferiores j que
as fosfinas tm propriedades redutoras.
99mTcO 4

+ Sn(II) + gluconato

99mTc(V)-gluconato

+ tetrofosmin

99mTc(V)-gluconato

99mTc(V)-tetrofosmina

106

 Agentes de Perfuso Cerebral

- Um radiofrmaco para estudos de perfuso cerebral tem que ultrapassar a barreira hemato-enceflica
(BHE) intacta por difuso, devendo apresentar as seguintes caractersticas:
- Ter uma lipofilia moderada a elevada: 1<logP<2
- Ser neutro e apresentar fraca ionizao a pH fisiolgico.
- Ter uma massa molecular no muito elevada (inferior a 600 Dalton)
A questo da lipofilia: A lipofilia tem um papel determinante na passagem da BHE. A lipofilia medida
pelo coeficiente de partio (Poct/H2O) da molcula entre o n-octanol e a gua. Para valores de log Poct entre
1 e 2 a extraco cerebral tende a ser mxima; para log Poct > 2 a extraco diminui pois a ligao s
protenas plasmticas aumenta. A fraco ligada no consegue atravessar a BHE.

- O 99mTc-HMPAO e o 99mTc-ECD so os radiofrmacos-99mTc actualmente disponveis para estudos de

perfuso cerebral em pacientes com a BHE intacta. No entanto, radiofrmacos-99mTc hidroflicos e inicos,
como o 99mTcO4- ou o 99mTc-DTPA, podem atravessar a BHE danificada.

107

 99mTc-d,l-HMPAO (Ceretec)
- O ligando HMPAO tem trs estereoismeros: o meso-HMPAO, o d-HMPAO e o l-HMPAO. O d-HMPAO e
o l-HMPAO so ismeros pticos que existem na forma de uma mistura racmica d,l-HMPAO. O complexo
de Tc com o ismero meso tem uma fixao cerebral muito inferior do complexo com o d,l-HMPAO. Por
esta razo, os kits de HMPAO para marcao com 99mTc contm apenas d,l-HMPAO.
- O 99mTc-HMPAO um oxo-complexo de Tc(V) neutro com carcter lipoflico (log Poct=1,9) e que
atravessa a BHE intacta. A estrutura molecular do complexo conhecida.
H3C

H3C

CH3

H3C

NH HN

H3C

OH

OH

d,l-HMPAO

CH3

H3C

CH3
O

N
Tc

CH3

H3C

CH3
CH3

H
99mTc-d,l-HMPAO

- A reteno do 99mTc-HMPAO no crebro deve-se instabilidade in vivo do complexo, formando-se um

complexo hidroflico que fica retido no crebro. Esta instabilidade tambm se manifesta in vitro o que um
inconveniente deste radiofrmaco.
108

- A instabilidade in vitro do 99mTc-HMPAO tem sido atribuda aos seguintes factores:

i) elevado pH de marcao (pH = 8-9)
ii) processos de radilise que geram espcies radicalares do tipo hidrxido.
iii) Excesso de Sn(II)
-Para evitar estes problemas h kits que incluem, em separado, um estabilizador (e. g. tampo fosfato e
azul de metileno ou CoCl2) que adicionado preparao aps marcao. Na presena de estabilizador o
99mTc-HMPAO pode ser utilizado at 4 h aps marcao, enquanto na sua ausncia tem que ser utilizado
nos 30 min aps marcao.
-Nos EUA utiliza-se tampo fosfato/azul de metileno como estabilizador. O tampo fosfato diminui o pH
para pH=6. O azul de metileno elimina as espcies radicalares e oxida o excesso de Sn(II). Na Europa o
estabilizador utilizado CoCl2 que desempenha as mesmas funes que o azul de metileno.
Composio de um kit de HMPAO
0,23 mg de d,l-HMPAO

7,6 g de SnCl2

4,5 mg de NaCl
Marcao de um kit de HMPAO
A marcao efectuada por adio do pertecnetato (99mTcO4-) ao kit liofilizado e por incubao
temperatura ambiente. A pureza radioqumica deve ser superior a 80%. A preparao s pode
ser usada dentro de 30 min (sem estabilizador) ou 4h (com estabilizador) aps marcao.

109

- A baixa concentrao de Sn(II) e a instabilidade do 99mTc-HMPAO impem algumas restries no que

respeita idade, actividade especfica e concentrao radioactiva do eluido utilizado na marcao:
i) No se deve utilizar pertecnetato eludo h mais de 2 horas, para minimizar a presena de radicais
devido aos processos de radilise.
ii) Deve usar-se um eluido de um gerador que tenha sido eludo previamente nas ltimas 24 h, devido
baixa concentrao do Sn(II).
99mTc-ECD (Neurolite)
- O ECD o dmero da etilcistena e, tal como o HMPAO, tambm tem trs estereoismeros: l.l-ECD,
d,l-ECD e d,d-ECD. Estes estereismeros formam oxo-complexos de Tc(V) neutros e lipoflicos que
conseguem atravessar a BHE.
- A reteno cerebral dos complexos varia segundo a ordem 99mTc-l,l-ECD> d,l-ECD>d,d-ECD. Tal
explicado pelo facto do 99mTc-l,l-ECD sofrer um processo de hidrlise in vivo, de origem enzimtica, que
origina derivados cidos que so hidroflicos e ficam retidos no crebro. Os kits de ECD contm l,l-ECD
purificado.
EtO2C

O
Tc

N
S

99mTc-l,l-ECD

CO2Et
Hidrlise

EtO2C

O
Tc

N
S

Mono-cido

COOH

HOOC
Hidrlise

O
Tc

COOH

S
Dicido

110

- Ao contrrio do 99mTc-HMPAO, o
origem qumica mas sim biolgica.

99mTc-l,l-ECD

estvel in vitro j que a sua instabilidade no de

Composio de um kit de ECD

O kit de ECD contm 2 frascos.
Frasco 1:
0,9 mg de l,l-ECD.HCl

72 g de SnCl2

360 g de EDTA dissdico

24 mg Manitol

Frasco 2:
1 ml de Tampo fosfato a pH=7.5
Marcao de um kit de ECD
A marcao envolve a adio de pertecnetato (99mTcO4-) ao contedo do frasco 1, seguida de adio da
soluo resultante ao frasco 2. Deixa-se incubar temperatura ambiente durante 15 minutos. O pH final
de 7,5. A pureza radioqumica deve ser superior a 95%. A estabilidade do 99mTc-ECD de pelo menos 6h.
Na marcao do ECD pensa-se que se forma inicialmente um complexo 99mTc-EDTA (cido
etilenodiaminotetraactico) que, aps ajuste do pH, sofre trans-quelatao com formao do 99mTc-ECD.
111

 Marcao de colides e de partculas com 99mTc

As solues coloidais (colides) encontram-se numa situao intermdia entre as solues
verdadeiras e as suspenses, no que respeita ao tamanho das partculas dos solutos:
- Solues Verdadeiras: partculas com dimenses inferiores a 1 nm; invisveis ao microscpio.
- Solues Coloidais: partculas com dimenses entre 1 nm e 1m: visveis ao microscpio electrnico.
- Suspenses: partculas com dimenses superiores a 1m: visveis ao microscpio ptico.

Os colides so em geral constitudos por partculas carregadas cuja carga superficial compensada por
cargas de sinal oposto da camada mvel do solvente. A estabilidade dos colides depende de muitos
factores entre os quais a temperatura, o pH, a carga e dimenso das partculas, a tenso superficial, a
viscosidade e polaridade do meio dispersante (solvente).
Os colides so tambm designados por microagregados. O 99mTc-enxofre coloidal um exemplo de
um colide utilizado em medicina nuclear para obter imagens do fgado e bao, j que as partculas
coloidais so removidas pela clulas do retculo endotelial.
Partculas de maior dimenso, os macroagregados, como o
pulmonares e so utilizadas para imagem dos pulmes.

99mTc-MAA

ficam retidas nos capilares

112

 99mTc-Enxofre Coloidal
A preparao do 99mTc-Enxofre Coloidal envolve o aquecimento de uma mistura de 99mTcO4- e
tiossulfato de sdio (Na2S2O3), em meio cido, a 100 C durante 5 a 10 min. Em seguida o pH
ajustado a pH=6-7 com um tampo adequado. A marcao do enxofre coloidal envolve duas reaces:
2 Na99mTcO4 + 7Na2S2O3 + 2HCl

Na2S2O3 + 2HCl

99mTc

2S7

+ 7Na2SO4 + H2O + 2NaCl (1)

H2SO3 + S + 2NaCl (2)

A formao do 99mTc-Enxofre Coloidal (99mTc2S7, eqn. 1) mais rpida do que a formao de enxofre
coloidal (enxofre elementar coloidal, eqn. 2). As preparaes que contm partculas com maior
dimenses apresentam maior quantidade de enxofre coloidal (eqn 2).
Na preparao do 99mTc-Enxofre Coloidal no necessrio usar redutor porque o hepta-sulfureto de
tecncio (99mTc2S7, eqn. 1) um composto de Tc(VII).

113

 Existem kits comerciais de enxofre coloidal para marcao com 99mTc. Esses kits contm tiossulfato de
sdio e um cido, gelatina como estabilizador do colide e EDTA. O tamanho das partculas obtidas aps
marcao varia entre 0,1-1 m, com um valor mdio de 0,3 m. A presena do Al3+, ou de outros ies
polivalentes, pode provocar a floculao do colide com formao de partculas de maior dimenses. O
EDTA complexa o alumnio evitando a floculao.
O 99mTc-Enxofre Coloidal utilizado para imagem do fgado e do bao e, por vezes, do sistema linftico.

99mTc-Estanho Coloidal
O 99mTc-Estanho coloidal outra alternativa para imagem do fgado e bao. Existem kits comerciais
para a preparao do estanho coloidal nomeadamente o kit Amerscan Hepatate II, cuja composio
a seguinte: fluoreto estanoso (0.125 mg), fluoreto de sdio (1.0 mg) e Poloxamer 188 (0.5 mg). A marcao
destes kits efectuada por adio de 99mTcO4- seguida de incubao temperatura ambiente durante 20
min.
O 99mTc-Estanho coloidal contm partculas de hidrxido de estanho (Sn(OH)2), resultantes da hidrlise
do Sn(II) a pH=5-6, marcadas com 99mTc reduzido. A dimenso dessas partculas varia entre 0,4-1m.

114

 99mTc-Sulfureto de Rnio Coloidal

O 99mTc-Re2S7 como tem partculas com menor dimenso do que o 99mTc-SC e o 99mTc-estanho coloidal
utilizado em visualizao do sistema linfo-ganglionrio. O tamanho de partculas do 99mTc-Re2S7 coloidal
varia entre 4 e 10 nm.
O Re2S7 pode ser preparado in situ por oxidao do rnio com H2O2, seguida de reaco com cido
sulfdrico, como indicado nas reaces seguintes:
2Re + 7H2O2
2HReO4 + 7H2S

2 HReO4 + 6H2O
Re2S7 + 8H2O

Aps formao do Re2S7 e de ajuste a pH=5, a marcao efectuada adicionando o 99mTcO4- e um

redutor adequado.

115

99mTc-MAA (Macroagregados de Albumina)

Os macroagregados de albumina (MAA) so preparados por aquecimento de uma mistura de albumina

do soro humano e de um sal estanoso (cloreto ou tartarato) em tampo acetato a pH=5 que corresponde
ao ponto isoelctrico da albumina. As partculas so, em seguida lavadas, com soro fisiolgico para
remover o Sn(II) livre. Finalmente, so de novo suspensas em soro fisiolgico e repartidas por vrios
frascos e as diferentes fraces so liofilizadas.

Encontram-se disponveis vrios kits de MAA para marcao com 99mTc. A marcao desses kits
envolve a adio de 99mTcO4- e incubao temperatura ambiente durante 10 a 15 min. O rendimento de
marcao superior a 90 %. A estabilidade da preparao de 6 h, devendo ser guardada entre 2-8 C
at administrao.

O tamanho das partculas aps reconstituio dos kits de MAA varia entre 10-90 m. O
usado essencialmente em estudos de perfuso pulmonar.

99mTc-MAA

116

 Controlo de Qualidade de Radiofrmacos

Como os radiofrmacos so administrados em humanos obrigatrio que sejam sujeitos a um rigoroso
controlo de qualidade.
Os mtodos de controlo de qualidade aplicveis aos frmacos em geral so tambm aplicveis aos
radiofrmacos (qualidade das matrias primas, identificao qumica, toxicidade, etc.). A maior parte
destes testes so feitos pelo fabricante ou por Laboratrios de Controle de Qualidade devidamente
credenciados.
Os radiofrmacos contm radionuclidos logo necessrio proceder determinao da pureza
radionucldica e radioqumica. A introduo de kits para a preparao in situ de radiofrmacos faz com que
estes testes tenham que ser efectuados pelo utilizador antes da administrao humana.

Testes Fsico -Qumicos

Controle de Qualidade

Caractersticas Fsicas
pH e Fora inica
Pureza Radionuclidica
Pureza Radioqumica
Pureza Qumica
Determinao da Dose

de Radiofrmacos
Testes
Biolgicos

Esterilidade
Apirogeneidade
Toxicidade
117

 Caractersticas Fsicas
O utilizador deve estar familiarizado com o aspecto fsico dos vrios radiofrmacos, nomeadamente no
que respeita cor da soluo. Uma alterao da cor pode indicar alterao do radiofrmaco, com
consequente obteno de resultados biolgicos anmalos.
As solues coloidais e os macroagregados devem conter partculas com dimenses adequadas para
as respectivas aplicaes clnicas. A verificao do tamanho das partculas das solues coloidais (1 nm
-1 m) feito por microscopia electrnica. O tamanho das partculas dos macroagregados pode ser
verificado com um hemocitmetro e microscpio ptico. Por exemplo, as preparaes de 99mTc-MAA
devem apresentar partculas com dimenses entre 10-100 m. As preparaes de 99mTc-MAA com
partculas cuja dimenso superior a 150 m devem ser rejeitadas pois podem provocar bloqueio das
artrias pulmonares e, em consequncia, embolia.
pH e Fora inica
O pH um parmetro importante das preparaes de radiofrmacos j que pode condicionar a sua
estabilidade bem como a natureza das espcies radioqumicas formadas. Idealmente o pH de um
radiofrmaco deveria ser o pH fisiolgico, pH = 7,4. Contudo so tolerveis valores de pH entre 2 e 9,
devido ao elevado poder tampo do sangue.
A fora inica das solues de radiofrmacos deve ser compatvel com a administrao em humano e,
idealmente, estas solues deveriam ser isotnicas. Para a fora inica de uma soluo contribui a
concentrao de todos os caties e anies presentes em soluo.
118

 Pureza Radionucldica
A pureza radionucldica definida como a fraco da actividade devida ao radionuclido em causa face
actividade total. Para a maior parte dos radiofrmacos a determinao da presena de radionuclidos
contaminantes efectuada pelos fabricantes, atravs de espectrometria . Como j foi visto, no caso dos
geradores 99Mo/99mTc deve ser determinada pelo utilizador a contaminao com 99Mo

Pureza Radioqumica
A pureza radioqumica de um radiofrmaco definida como a fraco da actividade total na forma
qumica pretendida. A presena de impurezas radioqumicas num radiofrmaco pode resultar de uma
marcao deficiente, devido a factores como o pH, presena de oxignio ou temperatura inadequadas.
Pode tambm resultar de processos de radilise devidos, nomeadamente, ao uso de actidades especficas
e concentraes radioactivas no recomendadas. O 99mTcO4- (Tc-livre) ou o 99mTcO2 (Tc-hidrolisado) so
exemplos de eventuais impurezas radioqumicas em radiofrmacos-99mTc e o iodeto livre (I-) em produtos
radioiodados.

119

 A determinao da pureza radioqumica dos radiofrmacos efectuada usualmente atravs de

mtodos cromatogrficos.
Mtodos Cromatogrficos mais comuns para determinao da pureza radioqumica de radiofrmacos:
Cromatografia planar:

Cromatografia em papel
Cromatografia em camada Fina (TLC e ITLC)
Electroforese

Cromatografia em Coluna:

Permeao Gel
Permuta Inica
HPLC (Cromatografia Lquida de Alta Presso)

Os mtodos utilizados na determinao da pureza radioqumica de radiofrmacos so mtodos de

cromatografia lquida em que os diferentes componentes so separados pela diferena nas suas
interaces com uma fase estacionria e com uma fase mvel. A fase estacionria pode ser slida (TLC ou
ITLC) ou lquida (na maior parte dos sistemas de HPLC). A fase mvel sempre lquida.
O tipo de interacces utilizadas para separar os diferentes componentes podem ser do seguinte tipo:
Adsoro superficial; Partio entre solventes; Permuta inica; Tamanho Relativo das Molculas
120 do
Soluto.

 Cromatografia em Papel e ITLC

A utilizao de suportes slidos planares (tira de papel ou placa de ITLC) como fase estacionria a
caracterstica comum a estes mtodos.
Cromatografia em Papel: Os suportes mais comuns so o Papel Whatman n1, Papel Whatman 31ET
e Papel Whatman 3MM. As diferenas entre eles relacionam-se essencialmente com as suas propriedades
mecnicas. O Whatman n1 tende a dobrar em contacto com o solvente o que obriga ao uso de um
suporte onde pendurado para que possa ser colocado na tina cromatogrfica altura pretendida. O 3MM
e o 31ET so mais rgidos e podem ser colocados directamente na tina cromatogrfica. As cromatografias
com 31ET so mais rpidas do que com 3MM, mas o 3MM tem maior resoluo.
ITLC: O ITLC a abreviatura de Cromatografia em Camada Fina Instantnea. Para ITLC existem
disponveis comercialmente vrios suportes. Os mais comuns so as placas ITLC-SG e ITLC-SA que
consistem em fibra de vidro impregnada com slica-gel (SG) ou cido silcilico (SA), respectivamente. O
ITLC mais rpido e tem melhor resoluo do que a cromatografia em papel.
O ITLC e a cromatografia em papel separam os componentes de uma mistura devido s diferenas nas
interaces com a fase estacionria e s diferenas de solubilidade nos vrios solventes

121

 Cada soluto caracterizado por um Rf que a razo entre a

distncia percorrida pelo soluto e a distncia percorrida pelo
solvente (frente de solvente). O Rf varia entre 0 e 1.
No Controlo de qualidade de radiofrmacos por cromatografia
em papel ou ITLC podem utilizar-se tiras de papel ou placas de
ITLC de reduzidas dimenses ( p.ex. at 7,5 cm) para reduzir o
tempo necessrio para desenvolver o cromatograma. Normalmente
escolhem-se sistemas cromatogrficos em que as espcies a
separar apresentam valores de Rf bastante diferentes.
Procedimento: Todas as operaes devem ser efectuadas com luvas impermeveis e com pinas.
i) Numa tina cromatogrfica ou num frasco rolhado com dimenses adequadas colocar o solvente, at uma altura de
cerca de 1 cm. Fechar o frasco e esperar alguns minutos para saturar a atmosfera do recipiente com o solvente.
ii) Com uma seringa e agulha adequadas aplicar uma pequena gota da preparao radioactiva na tira de papel ou placa
de ITLC, no ponto de aplicao previamente assinalado com lpis.
iii) Colocar a tira ou placa no recipiente com o solvente, tendo o cuidado de no mergulhar a gota no solvente.
Desenvolver o Cromatograma.
iv) Retirar a tira ou papel e assinalar a lpis a frente de solvente. Secar com secador ou com lmpada de infravermelhos.
v) Proceder leitura da radioactividade ao longo da tira ( radiocromatgrafo, cmara de ionizao, contador )
122

Cromatografia em Papel e ITLC de radiofrmacos-99mTc

- Nas preparaes de radiofrmacos-99mTc podem existir as seguintes espcies radioqumicas: 99mTc-complexado (o
complexo de 99mTc pretendido), 99mTc-hidrolisado (99mTcO2) e 99mTc-livre (99mTcO4-). Os sistemas cromatogrficos
devem separar 99mTc-complexado das impurezas radioqumicas mais comuns 99mTc-hidrolisado e 99mTc-livre, para se
poder determinar a pureza radioqumica da preparao.
- A separao das diferentes espcies radioqumicas atravs de um nico sistema cromatogrfico pode no ser possvel,
sendo necessrio conjugar dois sistemas.
Os sistemas ITLC-SG/Metiletilcetona (MEK) e ITLC/NaCl 0,9 %

Radiocromatogramas de 99mTc-MDP

- Estes sistemas so muito usados na determinao da pureza

radioqumica dos radiofrmacos-99mTc hidroflicos e carregados. So
aplicveis ao MDP, PYP, DTPA, GH.
Rf =1

Rf = 1

L
99mTc-complexado

99mTc-livre

C+ H

Rf = 0

ITLC/MEK

C+L
99mTc-hidrolisado

Rf= 0

C +H

(C)

(H)

0,0

1,0
C+L

(L)

ITLC/NaCl 0,9%
ITLC-SG/Acetona

ITLC-SG/NaCl 0,9 %
H

Pureza Radioqumica = C x100/C+H+L

0,0

1,0

123

Exemplos de Sistemas Cromatogrficos para Controlo de Qualidade de Outros Radiofrmacos-99mTc

- Para radiofrmacos-99mTc menos hidrossolveis necessrio recorrer a outros sistemas cromatogrficos.
Nas bulas fornecidads pelos fabricantes e nas Farmacopeias Portuguesa e Europeia encontram-se
descritos sistemas cromatogrficos para os vrios radiofrmacos.
Colides e Macroagregados - S se determina o 99mTc-livre (99mTcO4-) atravs de ITLC ou
cromatografia em papel. O 99mTc-livre migra e os colides ficam no ponto de aplicao.
99mTc(III)-DMSA - ITLC-SA/n-butanol+HCl 0.3M: 99mTc-livre (Rf = 1,0); 99mTc-hidrolisado (Rf = 0,0);
99mTc-complexado (R = 0,5).
f
99mTc(V)-DMSA Slica-gel/n-butanol+HCl 0.3M: 99mTc-livre (Rf = 0,7); 99mTc-hidrolisado (Rf = 0,0);
99mTc-complexado (R = 0,5).
f
99mTc-HIDA :
1) ITLC-SA/20 % NaCl: 99mTc-livre (Rf = 1,0); 99mTc-hidrolisado (Rf = 0,0); 99mTc-complexado (Rf = 0,0).
2) ITLC-SG/H2O: 99mTc-livre (Rf = 1,0); 99mTc-hidrolisado (Rf = 0,0); 99mTc-complexado (Rf = 1,0).
99mTc-Sestamibi :
Placas de alumina (Etanol): 99mTc-livre (Rf = 0,0); 99mTc-hidrolisado (Rf = 0,0); 99mTc-complexado
(Rf = 1,0).

124

 99mTc-Tetrofosmina :
ITLC-SG (Acetona/diclorometano (35:65 v/v):
complexado (Rf = 0,5).

99mTc-livre

(Rf = 1,0);

99mTc-hidrolisado

(Rf = 0,0); 99mTc-

99mTc-HMPAO :
1) ITLC-SG/MEK (Metiletilcetona): 99mTc-livre (Rf = 1,0); 99mTc-hidrolisado (Rf = 0,0); 99mTc-complexado (Rf
= 1,0). Neste sistema o complexo secundrio (decomposio do 99mTc -HMPAO) tem Rf = 0.
2) ITLC-SG/NaCl 0,9%: 99mTc-livre (Rf = 1,0); 99mTc-hidrolisado (Rf = 0,0); 99mTc-complexado (Rf = 0,0).
Neste sistema o complexo secundrio (decomposio do 99mTc -HMPAO) tem Rf = 0.
99mTc-ECD :
Whatman 3MM (Acetato de etilo): 99mTc-livre (Rf = 0,0); 99mTc-hidrolisado (Rf = 0,0); 99mTc-complexado (Rf =
1,0).

125

Artefactos em Cromatografia em papel e ITLC

Em radiocromatografia podem surgir artefactos ou resultados no reprodutveis devido s seguintes causas:
1. Reaco com o suporte, em particular quando se procede secagem das gotas com aquecimento aps a aplicao.
2. Contaminao da tira ou placa, fora do ponto de aplicao.
3. Contacto das tiras ou placas com as paredes hmidas da tina cromatogrfica ou de outro recipiente em que se
desenvolve o cromatograma.
4. Contaminao com outros radiofrmacos durante a aplicao.
5. Uso da fase mvel incorrecta.
6. Uso da fase mvel correcta, mas contaminada.
7. Volume insuficiente da Fase Mvel.
8. Contaminao das pinas ou tesouras utilizadas na manipulao das tiras ou placas de cromatografia.
9. Mistura deficiente dos Componentes da Fase Mvel.
10. Deficiente aplicao da amostra (p.ex. aplicao de mais do que uma gota em posies longitudinais diferentes).
11. Uso de um volume excessivo de fase mvel que pode extrair a amostra.
12. Evaporao selectiva de um dos componentes da fase mvel com alterao da sua composio (p. ex. maior
126
evaporao do diclorometano em misturas de acetona/diclorometano).

Problemas
1 Procedeu-se determinao da pureza radioqumica de uma preparao de 99mTc-MDP por ITLC, utilizando os
sistemas ITLC-SG/acetona e ITLC-SG/NaCl 0,9 %. No sistema ITLC-SG/acetona verificou-se que a actividade na
frente de solvente era de 1500 cpm e no ponto de aplicao de 38000 cpm. No sistema ITLC-SG/NaCl 0,9 % a
actividade no ponto de aplicao era de 2800 cpm e na frente de solvente de 45000 cpm.
1.1 Calcule a pureza radioqumica da preparao, identificando a percentagem das diferentes impurezas
radioqumicas.
1.2 Diga se esta preparao pode ser utilizada clinicamente.
2 Uma preparao de 99mTc-tetrofosmina foi analisada por cromatografia ITLC, utilizando o sistema ITLCSG/Acetona:Diclorometano (35:65 v/v). Aplicou-se uma alquota da preparao numa placa de ITLC/SG e deixou-se
correr o cromatograma at a frente de solvente percorrer 10 cm. A medida da actividade ao longo da tira mostrou
que no ponto de aplicao ficou retida uma actividade correspondente a 0,5 Ci, a 5 cm do ponto de aplicao uma
actividade de 10 Ci e na frente de solvente uma actividade de 0,2 Ci. Calcule a pureza radioqumica da
preparao e a percentagem das diferentes impurezas radioqumicas.
Dados: No sistema ITLC-SG/Acetona:Diclorometano (35:65 v/v) observam-se os seguintes valores de Rf:
Rf (99mTcO4-) = 1,0
Rf (99mTc-Tetrofosmina) = 0,5
Rf (99mTcO2) = 0,0
127

Electroforese
A electroforese uma tcnica de separao cromatogrfica que se baseia na diferente velocidade de
migrao de espcies carregadas num suporte (p. ex. tira de papel) saturado com uma soluo de
electrlito, mediante aplicao de de uma diferena de potencial que cria um gradiente de campo elctrico.
A electroforese pode ser conduzida a intensidade constante (I) ou a potencial constante (V). A
electroforese a potencial constante a mais comum (100-1000 mV).
O sentido da migrao depende da carga das espcies a separar: espcies catinicas migram em
direco ao ctodo (elctrodo negativo) e as espcies aninicas em direco ao nodo (elctrodo positivo).
As espcies neutras no migram mas podem ser arrastadas ligeiramente do ponto de aplicao devido ao
fluxo do electrlito. A distncia percorrida depende da mobilidade inica, que funo da razo carga/
volume da molcula.
Electrlito de Suporte: As solues do electrlito de suporte garantem que um fluxo de corrente
aceitvel e estabelecem um gradiente uniforme do campo elctrico. Em geral utilizam-se solues tampo
como electrlito (p.ex. tampo acetato 3M)
Suportes: Os suportes utilizados em electroforese podem ser papel (e. g. Whatman n1), acetato de
celulose ou gel de poliacrilamida. O suporte previamente saturado com a soluo do electrlito de
suporte.
128

Equipamento em electroforese: Tina de electroforese

Em geral o equipamento para electroforese contm: :

-um reservatrio (tina) com dois compartimentos para os elctrodos.
-Uma ponte para suportar as tiras de papel.
-Uma cobertura transparente para evitar perda de solvente devido ao aquecimento por efeito de Joule.
-Uma fonte de tenso.
Aplicao da electroforese em qumica radiofarmacutica: A electroforese no em geral utilizada em
rotina para controlo de qualidade de radiofrmacos; tem sido utilizada, por exemplo, para estudar a
marcao de protenas ou para avaliar a carga de complexos com radiometais (p.ex. 99mTc, 111In, 67Ga).
Ao aplicar a electroforese na anlise de radiofrmacos h que ter em conta eventuais processos de
decomposio, por aco do aumento da temperatura, da elevada concentrao de electrlito e da
diferena de potencial aplicada.

129

Modo de Procedimento
Radiofrmacos:

na

Electroforese

de

1- Saturar as tiras de papel, ou outro suporte, no electrlito de

suporte. Remover o excesso de soluo de electrlito.
2 Colocar as tiras na tina, fechar a tina e aplicar durante 510 min a diferena de potencial a que se pretende trabalhar,
para uma prvia estabilizao do sistema.
3 Abrir a tina e aplicar um aliquota da preparao radioactiva
no centro das tiras, sem as retirar da tina (Verificar que a
diferena de potencial nula).
4- Aplicar a diferena de potencial (V) de trabalho e deixar
correr a electroforese durante o tempo pretendido
(usualmente 20-30 min).
5 Retirar as tiras, assinalando a lpis o plo positivo e o plo
negativo (Verificar que a diferena de potencial nula). Secar
as tiras.
6 Medir a actividade ao longo das tiras tal como na
cromatografia em papel ou ITLC.
130

Cromatografia de Permeao-Gel
Nesta cromatografia enche-se uma coluna com um gel (Sephadex ou Biorad) e, aps inchar e
equilibrar o enchimento com o solvente de trabalho, aplica-se uma alquota da preparao no topo
da coluna. Elui-se com o solvente, por gravidade. Consoante, as suas dimenses as molculas
podem ou no penetrar nos poros do enchimento, o que permite a sua separao. As molculas de
menor dimenso penetram nos poros e demoram mais tempo a sair da coluna, enquanto as
molculas de maior dimenso no os penetram e so eludas mais rapidamente.
(b)

Pelas suas caractersticas a permeao-gel muito adequada

para o estudo da marcao de macromolculas ou para
determinar a percentagem de ligao s protenas. Por exemplo,
no ensiao de determinao s protenas do 99mTc-DTPA a
seguinte:

(a)

-primeiro eludo o 99mTc-DTPA ligado s ptotenas (a)

-em segundo lugar o 99mTc-DTPA no ligado (b)

131

Cromatografia de Permuta Inica

Nesta cromatografia coloca-se uma aliquota da amostra a analisar no topo de uma coluna que contm
uma resina inica e elui-se com um solvente adequado. A separao dos componentes da amostra
baseia-se na troca entre os ies da soluo e a resina inica.

Tipos de Permuta:

Permuta catinica: R-H + Na+

R-Na + H+

Permuta aninica: R-OH + Cl-

R-Cl + OH-

132

Tipos de Resinas
As resinas so electrlitos polimricos, de elevado peso molecular. Consistem em dois componentes: uma
matriz polimrica inica e contra-ies de carga contrria que trocam com os ies presentes em soluo.
Resinas Catinicas: Contm grupos carboxilato, silicato ou sulfonato na matriz e pequenos caties (H+ ou
Na+) como contra-ies. A Dowex-50 um exemplo deste tipo de resinas.

Resinas Aninicas: Contm grupos de amnio quaternrio (NR4+) na matriz e pequenos anies (OH- ou
Cl-) como contra-ies. A Dowex-1 um exemplo deste tipo de resinas.

A cromatografia de permuta inica til no controlo de qualidade de radiofrmacos que apresentem

impurezas radioqumicas carregadas. Para alm disso, a permuta inica pode servir para purificar
preparaes radioactivas. Por exemplo, a MIBG-131I pode ser separada do 131I- por cromatografia de
permuta inica, usando resinas aninicas. O iodeto fica retido na resina e a MIBG eluda.
133

Cromatografia de HPLC

O HPLC (Cromatografia Lquida de Alta Presso) tem uma grande capacidade de resoluo, sendo de
grande utilidade no desenvolvimento de radiofrmacos. Permite separar e identificar praticamente todas as
eventuais impurezas radioqumica.

Os princpios do HPLC so idnticos aos da cromatografia lquida convencional. A maior diferena

relaciona-se com o tipo de colunas utilizadas. No HPLC utilizam-se colunas com partculas de slica de
pequenas dimenses (5-10 m) revestidas com a fase estacionria. Em geral, as colunas de HPLC so
um tubo de ao, com 2-5 mm de dimetro e 15-30 cm de comprimento, que contm o enchimento.

A pequena dimenso das partculas faz com que a rea superficial disponvel para a permuta seja maior,
o que leva a uma maior resoluo. No entanto, a queda de presso numa coluna de HPLC considervel
(at 600 psi), o que obriga ao uso de bombas e de injectores especiais.

134

O cromatograma de HPLC: No HPLC trabalha-se usualmente com um caudal constante de solvente (QS),
usualmente 1 ml/min. Os vrios componentes da amostra saiem da coluna a diferentes tempos, sendo
identificados pelo correspondente tempo de reteno (tR) e volume de reteno (VR = QS.tR). O tempo de
reteno de um componente o intervalo de tempo entre a injeco e a sua deteco pelo detector.

Cromatgrafo de HPLC:
-Bomba (b)
- Injector (Loop) (c)
- Coluna (d)
- Detector (e)
- Integrador (f)

135

Sistema de HPLC com detectores gama e UV-vis

Coluna

Cromatograma

Injector

Detector

Detector UV-vis

Bomba

Injeco de uma amostra

136

Os mtodos de HPLC mais usuais so o HPLC de fase normal e o HPLC de fase reversa.
HPLC de Fase Normal
No HPLC de fase normal utilizam-se colunas com uma fase estacionria polar. A fase estacionria
polar preparada por reaco dos grupos silanol (Si-OH) da superfcie da slica com reagentes que
possuem funes polares (amina, nitrilo, diol, etc.).
No HPLC de fase normal utiliza-se como eluente uma mistura de um solvente pouco polar (hexano,
acetona) e de um mais polar (acetonitrilo, metanol), utilizando-se uma maior percentagem do solvente
menos polar.
HPLC de Fase Reversa
No HPLC de fase reversa utilizam-se colunas com uma fase estacionria apolar. As mais comuns
so a C8 (octil) e a C18 (octadecil ou ODS). Estas fases estacionrias so cadeias alqulicas, com 8
tomos de carbono (C8) ou dezoito tomos de carbono (C18), ligadas qumicamente slica.
No HPLC de fase reversa utiliza-se como eluente uma soluo tampo em meio aquoso e um
solvente orgnico (acetonitrilo, metanol), em pequena percentagem, que designado por modificador.
Para alm do HPLC de fase normal e de fase reversa no HPLC podem ainda utilizar-se outros
mtodos tais como a permeao-gel e a permuta inica.
137

HPLC de radiofrmacos

O HPLC utilizado frequentemente no controle de qualidade e no desenvolvimento de radiofrmacos,

usualmente no modo de fase reversa com colunas C18.
No caso dos radiofrmacos-99mTc o HPLC a tcnica utilizada para identificar a estrutura qumica dos
complexos, por comparao dos tempos de reteno dos complexos de 99Tc ou de Re e dos complexos
preparados ao nvel n.c.a (99mTc). No entanto, no HPLC de radiofrmacos-99mTc h que ter em conta os
seguintes problemas:
- O Tc-hidrolisado fica retido no topo da coluna e no contabilizado nas impurezas radioqumicas.
Nestas condies, o cromatograma obtido sobrevaloriza a pureza radioqumica da preparao.
importante controlar a actividade injectada e a actividade eluda, para verificar se no h reteno na
coluna.
- O Sn(II) pode ficar retido na coluna e nas anlise seguintes pode haver reduo adicional do 99mTcO4livre, obtendo-se uma pureza radioqumica sobrevalorizada. Este problema minimizado pelo uso de
pr-colunas colocadas antes da coluna de trabalho.

138

Extraco em Fase Slida

A Extraco em Fase Slida (EFS) apresenta um princpio similar ao HPLC utilizando cartuchos
(minicolunas) que so eludas com uma fase mvel. Existem disponveis comercialmente diferentes
mini-colunas, sendo as mais comuns as SEP-Pak (cartridges SEP-PAK). Estas mini-colunas so
usadas em geral na preparao de amostras (p.ex. purificao e concentrao de amostras) mas
tambm podem ser utilizadas para fins analticos.
Em geral, a anlise de uma amostra com cartridge Sep-Pak envolve os seguintes passos:
1) Condicionamento e equilibrao da cartrigde
2) Aplicao da amostra

3) Lavagem
4) Eluio

139

Extraco em Fase Slida: Exemplo do MAG-3

A Bula do MAG-3 recomenda que a pureza radioqumica deste radiofrmaco seja determinada por
Extraco em Fase Slida (EFS) com uma cartridge de fase reserva Sep-Pack C18, de acordo com o
seguinte procedimento
1) Condicionamento: A cartrigde equilibrada com um solvente orgnico
moderadamente polar como etanol, metanol ou acetonitrilo e, em seguida, com um
solvente mais polar com polaridade similar soluo da amostra. Para o 99mTc-MAG-3
Cartridge C18 fazem-se passar atravs da cartridge 10 mL de etanol seguidos de 10 mL de HCl 0,001
N. De seguida, utilizando uma seringa vazia passam-se 5 mL de ar para secar a coluna.
2) Aplicao da amostra e lavagem: Se o soluto menos polar deve ficar retido na
adsorvente C18 e os contaminantes mais polares devem ser eludos, a cartridge deve
ser lavada com um solvente polar em que o soluto tem uma solubilidade limitada. Para o
MAG-3 aplica-se 0,1 mL da preparao e em seguida lava-se com HCl 0,001 N. O 99mTcMAG3 fica retido na coluna enquanto os contaminantes mais polares(99mTcO4- e 99mTctartarato) so eludos.
3) Eluio do soluto: Eluio do soluto com um solvente moderadamente polar. No
caso do 99mTc-MAG3 utiliza-se uma mistura etanol/NaCl 0.9% (1:1 ) para eluir o 99mTcMAG3.
4) No caso do 99mTc-MAG3, aps as sucessivas eluies a cartridge ainda contm o
99mTcO2 que pode ser quantificado medindo a actividade retida na cartridge.
140

Extraco em Fase Slida: Exemplos de Aplicao a Outros Radiofrmacos

Radiopharmaceutical

Type of
cartridge

Prepar-ation A
solvent

99mTc-sestamibi

alumina N

0.5 mL
ethanol

10 mL
ethanol

cartridge
residue

99mTc-

C18

2 mL saline

2 mL saline

5 mL ethanol

cartridge
residue

B/total

C18

2 mL saline

2 mL saline

5 mL ethanol

cartridge
residue

B/total

silica

5 mL saline
10
cartridge
then 1 mL air mL methano residue
l-water
(70:30) over
2 minutes

silica

5 mL saline
10
then 1 mL air mL methano
l-water
(70:30) over
2 minutes

sestamibi
99mTc-

tetrofosmin
99mTc-

tetrofosmin

99mTc-

tetrofosmin

10 mL
methanolsaline
(80:20)

Purity

A/total

B/total

cartridge
residue

B/total

141

Radiopharmaceutical

Type of
cartridge

Preparation
solvent

99mTc-MAG3

C18

10 mL
1 mM HCl

10 mL
1 mM
HCl

10 mL 50%
ethanol

cartridge
residue

99mTc-MAG3

C18

10 mL
1 mM HCl

5 mL
1 mM
HCl

5 mL 0.5%
ethanol in
PB

10 mL 7%
ethanol in
PB

99mTc-

C18

5 mL saline 5 mL saline cartridge

residue

C18

5 mL saline 5 mL saline 5 mL
ethanol

cartridge
residue

B/total

C18

10 mL
water

5 mL water

5 mL
methanol

cartridge
residue

B/total

123I-ioflupane

C18

5 mL water

5 mL water

5 mL
ethanol

cartridge
residue

B/total

123/131I-MIBG

C18

5 mL water

5 mL water

10 mL PBTHF (3:1)

cartridge
residue

B/total

123/131I-MIBG

C18

5 mL water

5 mL
10 mM
NaOH

cartridge
residue

exametazime
99mTc-

exametazime
111In-

octreotide

Purity

B/total

cartridge
residue

C/total

B/total

B/total
142

Desvantagens da Extraco em Fase Slida

As cartridges SEP-Pak podem separar as diferentes espcies radioqumicas mas a sua utilizao
no controlo de qualidade de radiofrmacos apresenta alguns inconvenientes:
i) Podem ocorrer erros tcnicos durante a execuo do ensaio; por exemplo, a cartridge deve ser
eluda lentamente com o solvente adequado de modo a eluir completamente o radiofrmaco. Se
tal no acontecer pode subestimar-se a pureza radioqumica.
ii) Maior exposio radiao dos operadores em comparao com os mtodos cromatogrficos
clssicos (papel, ITLC).
iii) Aplicao de um volume maior de amostra: maior perda de radiofrmacos em comparao
com a cromatografia em papel ou com o ITLC.

143

Testes Biolgicos: Esterilidade e Apirogenia

A maior parte das preparaes radiofarmacuticas so administradas por via parentrica pelo que
devem ser estreis e apirognicas:
i) Uma soluo estril aquela que est isenta de microorganismos viveis.
ii) Uma soluo apirognica aquela que est isenta de endotoxinas bacterianas.
endotoxinas bacterianas no so os nicos compostos designados de pirognios, mas so
consideradas as de maior significado nos produtos estreis.
O que so endotoxinas bacterianas?
As endotoxinas bacterianas so lipopolissacardeos da superfcie da membrana de bactrias Gramnegativas (ex. Escherichia coli, Pseudomonas spp). As endotoxinas podero provir de bactrias vivas
ou de fragmentos de bactrias mortas.
Quais os efeitos clnicos da presena de endotoxinas bacterianas?
Febre; Alteraes hematolgicas, nas quais se inclui leucocitose
Hiperglicmia; Diminuio da resistncia s infeces;Perturbaes circulatrias
144

Como se procede destruio das endotoxinas ?

As endotoxinas presentes nas bactrias e nos seus fragmentos so substncias muito estveis, sendo os
processos usuais de esterilizao ineficazes para a sua destruio. Para degrad-las quimicamente devem
ser usados cidos ou bases fortes, ou um processo de pirlise ( 180 C por 3 horas , ou 250 C por 30
minutos ). Por tal motivo, para obter solues apirognicas devero ser tomadas medidas preventivas para
evitar a contaminao por endotoxinas bacterianas.

Teste da Esterilidade
Utilizando os procedimentos descritos na farmacopeia, o teste da esterilidade implica a observao
durante vrios dias de meios cultura aos quais foram adicionados as preparaes em anlise.
O curto perodo de semi-desintegrao da maior parte dos radionucldeos utilizados em Medicina Nuclear
faz com que o resultado do teste s seja conhecido aps utilizao do radiofrmaco. Por outro lado, h que
esperar pelo decaimento do radionucldeo antes de realizar o teste.

Teste de Esterilidade = Controlo de Qualidade da Produo

145

Como se pesquisam as endotoxinas bacterianas?

O ensaio de endotoxinas bacterianas destina-se deteco ou quantificao das endotoxinas
produzidas por bactrias Gram-negativas por meio de um lisado de amebcitos de lmulo (LALLIMULUS AMOEBOCYTELYSATE ).
O ensaio pode ser realizado por trs tcnicas:
1) Gelificao induo da formao de um gel (tcnica no quantitativa);

2) Turbidimetria- desenvolvimento de uma turvao por libertao de um

substrato endgeno (tcnica quantitativa);

3) Colorimetria- desenvolvimento de uma colorao por libertao de um complexo peptdeo

cromognico sinttico (tcnica quantitativa).
As referidas tcnicas vm descritas na Farmacopeia Portuguesa

146

Em que se baseia o princpio do LAL?

- O princpio biolgico do teste do LAL foi observado no Limulus polyphemus, vulgo caranguejo ferradura.
Quando o sangue entre em contacto com as bactrias Gram-negativas ocorre a coagulao dos
amebcitos (clulas sanguneas).
- Sabe-se hoje, que a reaco que produz a formao de um gel (gelificao) uma reaco em cascata
de activao enzimtica. A protena de coagulao (coagulognio) clivada por um enzima coagulante
activado. Os produtos insolveis da clivagem ligam-se por interaco inica para formar o gel,
caracterstico da positividade do teste do LAL.
Caractersticas do Teste de LAL:
i) um teste in vitro;
ii) Pode ser realizado com equipamento simples;
iii) O volume da amostra pode ser to pequeno como 0,1 mL;
iv) O teste fica completo ao fim de 1 h;
v) relativamente barato e os reagentes podem ser armazenados
at ser necessria a sua utilizao;
vi) A sensibilidade do teste de LAL permite uma diluio significativa
da amostra

147