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BIOQUIMICA

31 de Enero de 2016

Felipe de Jess Prez Vzquez


Tarea 1. Tema ENZIMAS: FOSFOLIPASA A2 de secrecin tipo ll (FLA2s-ll).
Introduccin.
Las fosfolipasas A2 (FLA2) constituyen un diverso grupo
de enzimas con respecto a secuencia, funcin y
localizacin, son importantes para el metabolismo de
cidos grasos en el recambio de los fosfolpidos de
membrana y en la generacin de mediadores lipdicos de
la inflamacin (1-3). La FLA2 reciben su clasificacin
debido a que hidroliza el enlace ster entre el segundo acilo y el glicerol (2,4).
Clasificacin.
Existen dos grandes clasificaciones de FLA2 por su funcionalidad y localizacin
celular y tisular: las FLA2 intracelulares o citoslicas (FLA2c) con un alto peso
molecular de 40-85kDa y las FLA2 de secrecin (FLA2s) con un menor peso
molecular de 14-18 kDa, que a su vez se diferencian entre s por su
dependencia de calcio en calcio-dependientes y calcio-independientes (2,3).
Sin embargo, existen ms de 20 isoformas de FLA2s, representando mayor
abundancia en las secreciones de las glndulas exocrinas del ser humano (1).
Estructura.
Las FLA2s presentan una homologa estructural, son de
baja masa molecular con estructura terciaria muy rgida
debido a la presencia de 5-8 enlaces disulfuro. Esto le
confiere estabilidad contra protelisis y resistencia a la
desnaturalizacin. Estructuralmente
las FLA2s comparten el mismo tipo de
a hlice, amino terminal anfipatico,
un mismo sitio de unin al Ca y un mismo sitio activo, el
cual incluye una triada cataltica clsica de Serina
estearasa en la que se encuentran puentes disulfuro.
Adicionalmente son relativamente termoestables y
necesitan concentraciones de Ca a nivel uM para su actividad (2,4).
Propiedades.
En nuestra especie se conocen cinco genes y un pseudogen que estn
relacionados con las FLA2 (3). Estudios enzimogenos demuestran que la FLA2s
es una hidrolasa-lipasa, la cual utiliza Histidina como sitio activo, acompaada
de una Asparagina a fin de polarizar un enlace H2O el cual ataca el grupo

carbonilo (4). La FLA2s principalmente acta sobre los fosfolpidos localizados


en la hoja interna de las membranas, desencadenando prdida de la asimetra
fosfolipidica. En la nomenclatura por IUBMB (International Unin of
Biochemistry and Molecular biology), las FLA2 se clasifican como EC 3.1.1.4.
(2,3).
Funcin Enzimtica.
Adicionalmente, las FLA2s humanas estn implicadas en numerosas funciones
biolgicas, y basados en su estructura primaria las FLA2s pueden ser de 7
tipos: l, ll, lll, V, Vll, lX y X; siendo los grupos l y ll los ms estudiados (4).
Profundizando en los dos primeros grupos, el grupo l o pancretica se localiza
en Jugo pancretico, pulmn, hgado, rin, bazo y suero, siendo su funcin en
la digestin de fosfolpidos, contraccin muscular lisa, proliferacin celular y
migracin celular. Mientras el Grupo ll o inflamatoria se localiza en el fluido
sinovial, plasma, pulmn, hgado, plaquetas, macrfagos y polimorfo nucleares,
actuando como mediador lipdico de inflamacin, activacin de linfocitos T,
eliminacin de bacterias, migracin celular y degranulacin de mastocitos
(2,5).
Mecanismos de regulacin.
Estudios recientes puntualizan en el estudio del grupo ll sugiriendo que la
funcin de hidrolizar a los cidos grasos poliinsaturados como el cido
araquidnico y el cido decosahexaenoico, media una amplia variedad de
respuestas inflamatorias por medio de la produccin de eicosanoides y
prostanoides derivados del cido araquidnico y la mediacin de respuestas
anti-inflamatorias por medio del cido decosahexaenoico (1). Sin embargo, el
mecanismo de regulacin fisiolgica de estas enzimas as como el origen de las
FLA2s-ll que circulan en el plasma sanguneo en enfermedades inflamatorias es
desconocido (4). Por otra parte, se han encontrado ensayos clnicos con el uso
de antioxidantes botnicos con resultados favorables en la disminucin de los
niveles plasmticos de estas enzimas (1) y un gran nmero de reportes
describiendo las propiedades de algunos inhibidores farmacolgicos como
antimalaricos, aminoglicosidos, alcoholes y poliaminas, que no inhiben las
FLA2s per se, sino que actan en otros sustratos que modifican los niveles de
calcio, por lo que existe una falta de especificidad que impide puedan ser
usados como inhibidores de las FLA2s (4).
Aplicacin Mdica.
Tomados en conjunto, estos estudios sugieren la implicacin del PLA2s en vas
oxidativas y de sealizacin inflamatoria. Por lo que actualmente la medicin
de los niveles de FLA2s en el pasma tiene un valor diagnstico y pronostico en
pacientes con shock sptico, pancreatitis, artritis reumatoide, estado terminal
de SIDA, siendo la relacin entre la variacin analtica y la evolucin de la
enfermedad corroborando su disminucin con la remisin clnica, por lo que se
considera que esta enzima constituye un buen marcador bioqumico en el
monitoreo y terapia de la enfermedad

Referencias Bibliogrficas.
1.- Sun GY, Chuang DY, Zong Y, Jiang J, Lee JCM, Gu Z, et al. Role of cytosolic
phospholipase A2 in oxidative and inflammatory signaling pathways in different
cell types in the central nervous system. Mol Neurobiol. 2014;50(1):6-14.
2.- Yolanda VR, Miguel BD, Jose LA, Francisco MG, et al. Origen e Importancia de
la Fosfolipasa A2 de Secrecin. Rev Cubana Farm 2001;36(2):121-8.
3.- Gregory AG, Anamias GC, et al. Fosfolipasas A2: Grandes Familias y
Mecanismos de accin. Repert.med.cir.2009;18(4):199-209.
4.- Rafael B, Jorge GM, et al. Fosfolipasas A2 y su importancia clnica. Rev. de la
Facultad de Medicina Universidad Nacional de Colombia 2002; 50(1):26-35.
5.- Jairo TG, Samuel DA, et al. Fosfolpidos: Propiedades y efectos sobre la
salud. Nutr Hosp. 2015;31(1):76-83.
Tarea1.Enzima alosterica glutamato deshidrogenasa 1
Introduccin
La enzima glutamato deshidrogenasa cataliza reversiblemente la desaminacin oxidativa
del glutamato -cetoglutarato. Est implicada en la regulacin de los aminocidos. En el
ser humano se sabe que existen dos iso-enzimas de la glutamato deshidrogenasa, la
GLUD1 y GLUD2, ambas son hexmeros y se localizan en la matriz mitocondrial
Clasificacin
-Glutamato deshidrogenasa 2
La GLUD2 es la segunda glutamato deshidrogenasa humana que se expresa
principalmente en la retina, testculos y en un menor nivel en el cerebro. Es importante
para reciclar el principal neurotransmisor excitatorio, el glutamato, durante la
neurotransmisin. El gen de la GLUD2 se encuentra en el cromosoma X y al contrario que
la GLUD1 es un gen sin intrones.
-Glutamato deshidrogenasa 1 (GLUD 1)
Est localizada en el cromosoma 10q23,3 y posee 13 exones. Esta enzima se encuentra
en altos niveles en el hgado, cerebro, pncreas y riones y tiene un rol fundamenta en el
metabolismo del nitrgeno, glutamato y de la homeostasis energtica. En las clulas
pancreticas participa en los mecanismos de secrecin de insulina. En los tejidos
nerviosos participa en el catabolismo de glutamato y en la detoxificacin del amoniaco,
est relacionada con el aprendizaje ya que incrementa la produccin del neurotransmisor
glutamato.
Estructura

La GLUD es un homohexmero. Cada monmero tiene: Dominio N-terminal de unin del


glutamato (Glu-BD), que est casi totalmente compuesto de filamentos . Dominio de
unin del NAD+ o NADP+ (NAD-BD). 48 residuos parecidos a una antena que se extienden
desde la parte superior de cada NAD-BD. La antena consiste en una hlice ascendiente y
un filamento descendiente que contiene una pequea -hlice que se dirige hacia el lado
C-terminal del filamento.

Propiedades
La glutamato deshidrogenasa utiliza tanto los cofactores del nucletido de nicotinamida;
NAD+ en la direccin de la liberacin del nitrgeno y NADP + para la incorporacin del
nitrgeno. En la reaccin haca adelante como se muestra la glutamato deshidrogenasa
es importante en la conversin de amonaco libre y -KG a glutamato, formando uno de
los 20 aminocidos requeridos para la sntesis de protenas. Sin embargo, se debe
reconocer que la reaccin reversa es un proceso crucial anapletrico que enlaza el
metabolismo del aminocido con la actividad del ciclo del acido tricarboxilico . En la
reaccin reversa, la glutamato deshidrogenasa proporciona una fuente de carbono
oxidable usada para la produccin de energa as como un reducido portador de
electrones, NADH. Segn lo esperado para un punto de ramificacin de la enzima con un
importante acoplamiento al metabolismo energtico, la glutamato deshidrogenasa es
regulada por la carga de energa celular. El ATP y el GTP son efectores alostricos
positivos de la formacin de glutamato, mientras que el ADP y el GDP son efectores
alostricos positivos de la reaccin reversa. As, cuando el nivel de ATP es alto, la
conversin de glutamato a -KG y a otros intermediarios del ciclo del TCA es limitada;
cuando la carga de energa celular es baja, el glutamato es convertido a amoniaco y a
intermediarios oxidables del ciclo cido tricarboxilico . El glutamato es tambin un principal
donante amino para otros aminocidos en reacciones de transaminacin subsecuentes.
Los mltiples papeles del glutamato en el balance del nitrgeno lo convierten en una
puerta entre el amonaco libre y los grupos aminos de la mayora de los aminocidos.

Funcin enzimtica
La GLUD1 cataliza la desaminacin oxidativa del glutamato a 2-oxoglutarato
e ion amonio (NH4) usando NAD+ o NADP+ como cofactor. La reaccin se desarrolla con
la transferencia de un ion hidruro desde el carbono del glutamato al NAD (P) +,
formndose 2-iminoglutarato, que es hidrolizado a 2-oxoglutarato y NH 4. El equilibrio de
reaccin en condiciones standard favorece la formacin de glutamato frente al NH 4. Por
esta razn, se piensa que la enzima tiene un papel importante en la detoxificacin del
amoniaco; esta posicin de equilibrio ayuda a mantener la concentracin de NH4 baja.

Aplicacin medica
La glutamato deshidrogenasa, adems de los sitios de unin para sustratos y productos,
tiene sitios alostricos. La unin de leucina, ADP y succinil CoA a los sitios alostricos
incrementa la actividad de la enzima y la polimerizacin de la cadena polipeptdica;
mientras que la unin a estos sitios de GTP, palmitoil CoA y algunas drogas
antiesquizofrnicas como el haloperidol disminuye la actividad enzimtica y causa la
disociacin de las cadenas polipeptdicas. Se ha sugerido que la GLUD1 asume en su
estado basal una configuracin (ranura cataltica abierta) que permite la actividad
cataltica con independencia de si sus sitios alostricos son funcionales. La regulacin de
la GLUD1 es de particular importancia biolgica, ejemplificado por las observaciones de
que las mutaciones regulatorias de la GLUD1 estn asociadas con manifestaciones
clnicas en los nios.
La deficiencia en GLUD1 es causa del Sndrome de hiperinsulinismo-hiperamonemia
(HHS), caracterizado por una elevada velocidad de oxidacin de glutamato a alfacetoglutarato que estimula la secrecin de insulina en las clulas beta pancreticas,
mientras que no existen una detoxificacin adecuada del amonio en el hgado.
La concentracin GLDH en la sangre puede aumentar en las siguientes enfermedades:
La enfermedad heptica asociada con la destruccin de las clulas hepticas, por
ejemplo, Hepatitis. La ictericia, que es debido a un cierre de los pequeos conductos
biliares
en
el
hgado
(ictericia
obstructiva
llamada)
intoxicacin aguda, el dao del tejido del hgado, por ejemplo, una intoxicacin con
hongos Amanita. Circulatoria aguda trastornos del hgado, por ejemplo con una trombosis
de las venas hepticas o debilidad aguda del ventrculo derecho (en este caso, la no
producida por el hgado a la sangre del corazn que fluye hacia atrs y se acumula en el
hgado)

Referencias

1. Fahien LA y MacDonald MJ. 2011. The complex


mechanism of glutamate dehydrogenase in
secretion insulin. Diabetes 60: 2450-2454.
2. Smith TJ y col. 2002.The structure of apo human glutamate
dehydrogenase details subunit communication and allostery. J Mol
Biol. 3;318(3):765-77.
3. Michael W King PhD | 19962016 themedicalbiochemistrypage.org,
LLC | info @ themedicalbiochemistrypage.org
4. George A. 1980. Effects of adenosine 5'-diphosphate on bovine glutamate
dehydrogenase: diethyl pyrocarbonate modification. Biochemistry.
23;19(26):6057-61.
5. Peterson
PE.
1999.The
structure
of
bovine glutamate
dehydrogenase provides insights into the mechanism of allostery. Structure.
15;7(7):769-82.