INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS

INGENIERA EN SISTEMAS AMBIENTALES
BIOQUMICA FUNDAMENTAL
PRCTICA N 2
CURVA TIPO DE AZCARES REDUCTORES

PROFESORES:
QFI. ROCO DEL CARMEN GUZMN IBARRA
M. EN C. PEDRO ANTONIO LOYOLA ABITIA
DRA. DORIS NERI CORTS
DR. CARLOS WONG BAEZA
ALUMNAS:
ALVAREZ SNCHEZ NERI GUADALUPE
RODRGUEZ HERNNDEZ SARA ITZEL
ROSAS SNCHEZ DIANA VIANNEY
FECHA DE ENTREGA:
MARTES 29 DE MARZO DEL 2016

INTRODUCCIN
La cintica enzimtica es la disciplina que estudia la velocidad en las reacciones qumicas en las que
Intervienen enzimas. El estudio de esta velocidad y de la dinmica de la enzima, nos permite conocer a fondo
el mecanismo de accin de dicha enzima, el rol que cumple en el metabolismo, y la regulacin de su actividad
por
inhibidores
naturales,
frmacos,
venenos
u
otro
tipo
de
sustancias.
Las enzimas son protenas que son capaces de manipular a otras macromolculas, llamadas sustratos. Un
sustrato es capaz de unirse al sitio activo de una enzima, es decir, se une a una determinada zona de la
enzima, diseada especialmente para unirse a un sustrato. Una vez que esta unin se ha dado, se produce la
catlisis, es decir, la obtencin de productos a partir del sustrato, gracias a la accin enzimtica.
Algunas enzimas son capaces de unirse a distintos sustratos y obtener a partir de ellos, distintos productos, por
ejemplo una proteasa puede actuar sobre distintas protenas para obtener una variedad de polipptidos. En
algunos casos, la enzima es capaz de unirse a dos sustratos a la vez, como por ejemplo la ADN polimerasa,
que se une a la hebra de ADN y a un nucletido, para agregarlo a la cadena.
La velocidad de la reaccin catalizada enzimticamente, es directamente proporcional a la concentracin de
sustrato, hasta cierto punto. Cuando la concentracin del sustrato es baja, una parte de las molculas
enzimticas tienen su sitio activo libre. Si aumentamos la cantidad de sustrato, estos sitios activos libres se
unirn a l, acelerando la velocidad de la reaccin sustrato a productos. Si continuamos aumentado la cantidad
de sustrato, llegar un momento en donde ya no habr ms sitios activos libres, entonces la velocidad de la
reaccin ya no puede aumentar ms. Cuando se llega a este punto se dice que la enzima est saturada.
En la cintica enzimtica, las dos propiedades de mayor importancia son: el tiempo que tarda una enzima en
llegar a su punto de saturacin y la velocidad mxima que puede alcanzar la reaccin catalizada por dicha
enzima.
La velocidad de una reaccin enzimtica puede ser medida en el laboratorio. Como la enzima no se consume
en el proceso de catlisis de la reaccin, se suele medir la disminucin de la concentracin de sustrato en el
tiempo, o el aumento de concentracin del producto. Estas concentraciones se pueden medir por
espectrofotometra o radiometra.
OBJETIVO
Obtener una curva de calibracin de azcar reductor, mediante la cual se puedan transformar las lecturas de
absorbencia obtenidas en los experimentos de cintica enzimtica, en micromoles de azcar reductor, para de
esta manera obtener la actividad de la enzima invertasa en Unidades Internacionales (UI).

RESULTADOS EN FORMA DE TABLA

Tubo No.
Glu 0.005 M Fru 0.005 M (mL)

Blanco
T
0

2
0.2

Problemas
3
0.4

1
0.1

4
0.8

5
1.0

Sacarosa 0.2 M (mL)

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

Reg. De Acetatos 0.05 M, pH 4.7 (mL)

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

Agua (mL)

1.0

0.9

0.8

0.6

0.2

0.0

3,5 DNS (mL)

Desarrollo de color

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

5 minutos a 92 C ( en bao mara)

Dilucin

Colocar en bao con hielo y diluir con 2 mL de agua destilada

Leer en un espectrofotmetro a 540 nm.
Absorbencia = 540 nm
0
0.082
0.227
0.487
0.810
1.224
(moles) Azcar reductor/ 2.0 mL
0
1
2
4
8
10

CLCULOS
Glucosa 0.005M
Fructosa 0.005M
0.010M

0.010 moles AR1000 mL

X---0.1 mL
X= 1 mol AR / 2.0 mL

0.010 moles AR1000 mL

X---0.2 mL
X= 2 mol AR / 2.0 mL

0.010 moles AR1000 mL

X---0.4 mL
X= 4 mol AR / 2.0 mL

0.010 moles AR1000 mL

X---0.8 mL
X= 8 mol AR / 2.0 mL

0.010 moles AR1000 mL

X---1.0 mL
X= 10 mol AR / 2.0 mL

Tabla 2. Resultados de Concentracin y

Absorbancia
X
Y
(mol AR / 2.0 mL) (Absorbancia
= 540 nm)
0

0.082

0.227

0.487

0.810

10

1.224

Grfica 1. Curva tipo de azcares reductores.

(moles Azcar reductor/ 2.0 mL)

D- gluconato

REACCIN QUMICA LLEVADA A CABO, CON FRMULAS

DISCUSIN
La prctica tiene como finalidad la estimacin de la actividad de la enzima invertasa total, expresndose tales
valores de actividad en unidades apropiadas (Unidades Internacionales).
En nuestras muestras problema hubo diferentes tonalidades que viraban desde color amarillo intenso a un rojo
opaco.
En nuestra muestra testigo se observ un color amarillo ya que no haba en el medio glucosa y fructosa, esto
quiere decir que no hubo una reaccin con el DNS.
De la muestra 2 a la 6 se observ el aumento gradual de la coloracin esto se debe a que en cada muestra
hubo ms concentracin de glucosa y fructosa o AR. Como sabemos el DNS reacciona con la glucosa
haciendo que esta se oxide ya que DNS solo reacciona con el grupo aldehdo que en este caso est presente
en la glucosa y el DNS se reduce, dando como resultado sales de salicilato que presentan una coloracin roja
y una mayor absorbancia de acuerdo la concentracin aadida de glucosa y fructosa para cada tubo.
A mayor absorbancia mayor concentracin de glucosa esto se debe a que el DNS reacciona con el grupo
aldehdo de la glucosa.
La absorbancia est en funcin de la concentracin del analito (glucosa), es decir que son directamente
proporcionales, si la concentracin del analito varia, la absorbancia tambin tendr variaciones.
CONCLUSIN
BIBLIOGRAFA
Bello Gil, Daniel; Carrera Bocourt, Emilia; Daz Maqueira, Yuset Determinacin de
azcares reductores totales. Sobre los Derivados de la Caa de Azcar, vol. XL, nm. 2,
mayo-agosto, 2006, pp. 45-50.

CIBERGRAFA

Tomado el da 24 de Marzo del 2016.

http://quimica.laguia2000.com/conceptos-basicos/cinetica-enzimatica
http://www.ehu.eus/biomoleculas/enzimas/enz3.htm