Cromatgrafo lquido de alta resolucin (HPLC)

Equipo que permite la separacin, cuantificacin e identificacin de constituyentes de una mezcla mediante un
inyector automtico y un detector de UV de alto ndice de refraccin. Trabaja en un rango de longitudes de onda
comprendidas entre 190 y 800 nm.
Principio: En sta, un lquido (fase mvil) circula en ntimo contacto con un slido u otro lquido inmiscible (fase
estacionaria); al introducir una mezcla de substancias (analitos) en la corriente de fase mvil, cada analito avanzar a
lo largo del sistema con una velocidad diferente que depender de su afinidad por cada una de las fases. Esto
supone que despus de terminado el recorrido de la muestra por la columna, cada una de las substancias
introducidas en el sistema eluir con un tiempo diferente, es decir, estarn separadas.
*ELUIR: Extraer, mediante un lquido apropiado, una sustancia del medio slido que la ha absorbido.
Clasificacin
- Cromatografa de adsorcin (lquido-slido). La fase estacionaria es un adsorbente y la separacin se basa en
repetidas etapas de adsorcin-desorcin.
- Cromatografa de reparto/adsorcin (fases ligadas qumicamente) La separacin en este caso, se basa en un
reparto del soluto entre la fase mvil y la fase estacionaria.
- Cromatografa de intercambio inico: Este tipo de cromatografa se da cuando la fase estacionaria presenta en
su superficie grupos ionizados capaces de retener selectivamente a iones de signo contrario que circulan en la fase
mvil.
Los componentes bsicos de un cromatgrafo de lquidos son:
Dispositivo de suministro de eluyentes (bomba y dispositivo de mezclado de eluyentes).
Dispositivo de inyeccin.
Conducciones y conexiones.
Detector y registrador.
Columna.

Cromatografa de gases y su acoplamiento con la espectrometra de masas

Se describe la cromatografa de gases y su acoplamiento con la espectrometra de masas, tcnicas que constituyen
una herramienta potente para separar, identificar y cuantificar los componentes voltiles y semivoltiles de mezclas
complejas.
La cromatografa de gases presenta limitaciones en tres casos:
compuestos poco voltiles, generalmente los de peso molecular superior a 300 u.m.a.,
compuestos sensibles a una elevacin de la temperatura incluso moderada (determinados compuestos de
inters biolgico),
compuestos que se encuentran en forma inica (puesto que son en general poco voltiles).
Se emplea cuando los componentes de la mezcla problema son voltiles o semivoltiles y trmicamente estables a
temperaturas de hasta 350-400C. En cambio, cuando los compuestos a analizar son poco voltiles y/o termolbiles,
la tcnica separativa adecuada suele ser la cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC).
Tambin se utiliza la cromatografa de gases para establecer la cantidad de componentes individuales presentes en
una muestra, empleando curvas de calibracin de los correspondientes patrones.