Programme National
Chapitre I
Structure, organisation et rplication du matriel
gntique bactrien
Chromosome
Plasmide
bactriophage
Le chromosome bactrien
L appareil nuclaire des bactries (protistes procaryotes,) est constitu
d'acide dsoxyribonuclique (ADN) ( support de l'information gntique)
Le chromosome est une double hlice d'ADN circulaire- pelotonne,
surenroule dans le cytoplasme (action des topoisomrases, au nombre de
4 chez les bactries).
Dpli, le chromosome bactrien a prs de 1 mm de long (1000 fois la
longueur de la bactrie) et 3 5 nanomtres de large.
La rplication est selon le schma de Watson et Crick, chaque chane
assure la rplication de la chane complmentaire selon un mode semiconservatif.
L'analyse chimique du chromosome : 80 % d'ADN, 10 % dARN (rle de
structuration) et 10 % de protines ( ADN polymrases topoisomrases,
ADN gyrases, ARN polymrases)
Les constituants de l'appareil nuclaire sont la cible d'action de plusieurs
antibiotiques : les quinolones inhibent les topoisomrases et les
rifamycines inhibent les ARN polymrases, tandis que les nitromidazoles
entranent la fragmentation de l'ADN chez les anarobies stricts.
La structure secondaire
Une Hlice forme de deux chaines hybrides deux
deux. Caractristiques
1/ antiparallles : lextrmit 5 dune chaine est du ct
de lextrmit 3 de lautre chaine.
2/ complmentaires : les nuclotides dune chane sont
complmentaires aux nuclotides de la 2me chaine.
Les rgles de complmentarit universelles : en face la
base A on trouve la base T, en face la base C on trouve la
base G. rapports A/T, C/G constants. Cette
complmentarit est due la conjonction de deux
phnomnes :
Des contraintes sriques : la complmentarit purinepyrimidine fait que chaque paire de base ayant la mme
dimension, la structure dADN est trs rgulire.
La cration de liaisons dhydrognes: entre les bases
complmentaires., 2 liaisons entre A-T et de 3 entre C-G.
Ce nombre influe sur la stabilit de lappariement.
Pour rompre lappariement A-T, il faut une nergie de 21kj,
et 63kj pour rompre C-G.
3/ Chaines hlicodales : lADN senroule autour dun axe
central imaginaire en formant une double hlice droite
(ADN A, ADNB) . Le pas de lhlice est de 34 (10pb), la
distance entre deux bases voisine est de 3.4 et le
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diamtre de 20.
La Rplication
Dfinition: La rplication est un mcanisme de
synthse de lacide dsoxyribonuclique
(reproduction exact du gnome)
mode semi-conservatif: lADN contient un brin
drive de la molcule mre (matrice) et un brin
nosynthtis (exprience de Meselson et Stahl,
1958)
sens de la synthse: 5 vers 3.
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Elments du
mcanisme
de rplication
chez E.coli
1- Initiation de la
rplication
2- Elongation
Aprs linitiation, sur un fragment (matrice) de la fourche, llongation est continue (brin prcose), sur lautre matrice,
llongation est discontinue (fragments dOkazaki). Lavance de la rplication illustre est de droite vers la gauche. Sur
le brin continu la synthse se fait par DNA Pol III, lie DnaQ qui fourni la fonction editing. Le domaine C-terminal de
DnaQ se lie la DNApol III et le domaine N-terminal contient lactivit exonuclasique ( editing function). Le brin
retard est synthtis en fragments dADN (Okazaki) qui sont lis ensemble par la ligase aprs avoir enlev le brin
dARN par la DNA Poly I.
Correction des paires de bases dpareilles: editing function
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3-terminaison
La terminaison de la
rplication se fait quand les
deux fourches de rplication
fusionne au point oppos
OriC, le site (ter C)sous
laction de la DNA de
terminaison de la rplication
(Dnat).
La sparation des deux
molcules filles dADN se fait
grce laction de la DNA
gyrase (topoisomrase II)
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Les topoisomrases
catalysent la conversion
interne des molcules dADN
circulaires. Les molcules
dADN peuvent tre
relches ou superenroules,
noues ou dnoues,
catnaire ou non, par laction
des topoisomrases.
b) b) Deux types de
topoisomrases classes en
fonction du nombre de
coupure faite sur lADN.
Topo I : une cassure sur une des
deux molcules.
Topo II : cassures faites sur les
deux molcules.
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Plasmides naturels
Les plasmides:
lments gntiques
extrachromosomiques
capables dune
rplication autonome
(le terme plasmide est donn par
Lederberg, 1952).
A ct du chromosome, la
bactrie peut contenir des
plasmides de petite taille (0,5
5 % du chromosome
bactrien ou 5 4000 fois plus
petit que le chromosome).
b) Plasmides non-conjugatifs
ne peuvent pas mdier la conjugaison.
gnralement petits (4 6 Md)
ils leur manquent un ou plusieurs gnes
ncessaires pour le transfert dADN.
- Un plasmide non-conjugatif peut tre transfr
par conjugaison si la cellule porte aussi un
plasmide conjugatif.
- Le contrle de la rplication est de type relch
(en labsence de protine cellulaire)
Exemple de Plasmides conjugatifs: ColE1,
RSF1030, cloDF13
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2-Effets phnotypiques
a) Plasmide de fertilit (Facteur F)
b) Plasmides bactriocinogniques [
gnes de bactriocines ou colicines]
c) Plasmides de rsistance (facteurs
R) gnes de rsistance aux
antibiotiques, confrent aux
bactries la rsistance divers
antibiotiques (RSF1030).
Les gnes peuvent tre organiss
dans le plasmide au sein de
transposons (Tn)
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Exemples
Les staphylocoques portent un gne qui code
pour la production d'une pnicillinase qui inactive
la pnicilline G et les pnicillines du groupe A
(ampicilline) ce qui rend la bactrie rsistante
ces pnicillines (idem chez E.coli, gonocoque,...).
Plasmide RSF1010
code toutes les
protines
initiatrices
(RepA, RepB et
RepC) et
nutilise pas les
protines de
lhte pour
commencer sa
rplication.
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Plasmide ColE1
utilise une
molcule
dARN pour
ouvrir et
initier la
synthse
dADN.
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a) la Rpartition
ingale dun nombre
lev de copies au
hasard dans les
cellules filles sera
rsolu par la
rplication
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Plasmides incompatibles
Deux plasmides
sont dits
incompatibles sils
portent la mme
origine de
rplication et dans
ce cas la cellule fille
finira par nen
gard quun des
deux.
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LES BACTERIOPHAGES
Un phage est une particule qui infecte une
bactrie.
Le phage est compose essentiellement dun
matriel gntique (ADN ou ARN) protg par
une enveloppe appel capside constitue de
protines.
Le phage lambda
Le phage lambda
() est un phage qui
infecte Ecoli
La tte du phage
renferme lADN
viral.
La queue renferme
des protines. Elle
permet la fixation
du phage sur la
cellule-hte
bactrienne
(protine J).
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La multiplication lytique
1- Infection : liaison du phage E.coli par la protine J, qui se lie une
porine la membrane dE.coli.
2- Adsorption et pntration : injection de lADN phagique par diffusion
passive travers la membrane. LADN virale se circularise
immdiatement par complmentarit des extrmits cohsives
(squences cohsives) formant un site cos. Une ligase bactrienne scelle
les brins.
3- La multiplication du
phage expression des
gnes codants divers
protines pour la
rplication de lADN
phagique, pour la
synthse des protines
de la tte et la queue.
Formation dun
concatmre.
4-Empaquetage dune
molcule dADN dans la
tte puis assemblage
tte et queue.
5-Libration des phages :
lyse bactrienne par
action de deux protines
du phage (endolysine et
holine), 200 phages sont
produits par bactrie.
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La multiplication lysognique
Le bactriophage M13
Infecte E.coli
Le matriel gntique du phage:
- un simple brin de DNA circulaire,
- de longueur 6.4kb appel brin +.
- Il comprend 10 gnes et 2petites
rgions intergniques .
- Le DNA est recouvert de
protines donnant un phage en
forme de batonnt filamenteux
.
La transfection
La transfection des bactries par M13 et
lexpression du phage dpendent de la
prsence dun chromosome surnumraire
bactrien (pisome F): la prsence de cet
pisome permet le cycle normal du phage :
synthse dun brin dADN complmentaire,
rplication et en fin de cycle synthse
spcifique dun seul des deux brins de lADN
(brin +) qui sera pourvu dune membrane et
scrt hors de la cellule.
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Cycle lysognique
Lorsque lpisome ne contient pas les gnes
permettant le cycle lytique (pisome F), lADN
du phage sincorpore sous la forme dun ADN
double brin capable dexprimer les gnes quil
contient
rsum
Les procaryotes (bactries) possdent un matriel nuclaire
appel le chromonme et des lments gntiques
extrachrachromosomiques que sont les plasmides. Les
bactries sont infectes par des bactriophages qui sont
des particules virales constitues dADN ou dARN protgs
par une enveloppe, la capside. Le chromonme, le
plasmide et le bactriophage, peuvent changer des
fragments dADN par des mcanismes de transfert
attribuant la bactrie de nouveaux phnotypes
contribuant la diversit chez les procaryotes. Les
plasmides et les phages sont modifis par les chercheurs
(gni gntique) et servent de vecteurs de transfert de
matriel gntique.
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Exercice 3 :
J. Cairns (1963) a prouv que lADN dE.coli est circulaire (ferm) et que le mode de rplication est semi
conservatif en utilisant la thymidine tritie.
R Rodriguez a utilis la mthode de Cairns et observa que la rplication est bidirectionnelle. Les bactries
sont places pendant un temps variable dans un milieu contenant de la thymidine tritie faible niveau de
radioactivit puis fort niveau de radioactivit.
Daprs vos connaissances, actuelles schmatiser les chromosomes observs par les deux chercheurs.
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Exercice 6
La figure ci-dessous reprsente un mcanisme ayant lieu in vivo ou in vitro. De quel
mcanisme sagit-il ? Complter la lgende en citant les lments indispensables intervenant
dans ce mcanisme.
Exercice 7
Certaines souches bactriennes ont dvelopp une rsistance un antibiotique (gentamycine).
Quel est le mcanisme classiquement voqu pour expliquer cette rsistance ? Un tel
mcanisme est-il envisageable dans le cas ou la rsistance est trs rapidement acquise dune
part et dautre part elle saccompagne de rsistance trois autres types dagent antibactriens
(le chloramphnicol, lampicilline et la sulfamide) ?
Exercice 8
Analyser les proprits de certains plasmides rsums dans le tableau suivant. Que pouvezvous dduire ?
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plasmide
Taille
Intervient dans
Nombre de
(mgadaltons)
la conjugaison
copies de
ou non
plasmides
Phnotypes
/cellule
R1
65
1-3
Rsistance de
multiples drogues
R6
65
1-3
Rsistance de
multiples drogues
Ent P 307
65
1-3
Production
dentrotoxines
Col E 1
4.2
10-15
Production de colicine
E1
RSF 1030
5.6
20-40
Rsistance
lampicilline
Clo DF 13
10
Production de
cloacine
Exercice 9 : Dans quel tat topologique est chaque plasmide schmatis ci dessous ? a quelle
bande, sur le gel dagarose, correspondre chaque tat ?
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