AISLAMIENTO, CULTIVO E IDENTIFICACIN MORFOLGICA Y MOLECULAR DE HONGOS

ENTOMOPATGENOS.
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Marily Gonzlez Castillo , Ral Rodrguez Herrera , Ismael Amaya Rivera .

Departamento de Investigacin en Alimentos, Facultad de Ciencias Qumicas, Universidad Autnoma de Coahuila.
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Saltillo, Coahuila, Mxico. C.P. 25282 . GreenCorp Biorganiks de Mxico, S.A. de C.V. Saltillo, Coahuila, Mxico
E-mail: marily7@hotmail.com
Palabras clave: Hongos entomopatgenos, suelos cultivados, PCR.
Introduccin. En la presente investigacin se realiz la
identificacin morfolgica y molecular de cepas de
hongos caracterizados como entomopatgenos y de
otros que fueron aislados de suelos cultivados a travs
de la infeccin del insecto tenebrio molitor. La
identificacin morfolgica se llev a cabo por observacin
microscpica y macroscpica. Para la identificacin
molecular, se recurri a la tcnica de PCR (Reaccin en
Cadena de la Polimerasa) para posteriormente detectar
variaciones en las secuencias nucleotdicas de los
productos amplificados y poder diferenciar el gnero y la
especie de los hongos analizados.

Fig. 2.- Productos de la amplificacin de ADN.- 1.- Ma: Metarrizum

anisopliae 2.- Bb: Beauveria bassiana, 3.- Pf: Paecilomyces
fumosoroseus, 4.- Vl: Verticillium lecanii 5.- Pl: Paecilomyces lilacinus,
6.- Nr: Nomurea rileyi
Tabla1. Caractersticas morfolgicas de los hongos utilizados

Metodologa. El aislamiento de los hongos presentes en

suelos agrcolas se realiz a travs de la contaminacin
inducida de insectos, principalmente usando larvas de
tenebrio molitor. Los hongos aislados fueron cultivados
en placas de PDA, incubadas a 25C por un periodo de 7
das (1). Despus se realiz la caracterizacin
morfolgica por observacin macroscpica (2) y
microscpica realizando tinciones con azul de algodn
(3). Los hongos se propagaron en caldo de papa en un
periodo de incubacin de 5 das a 25C en agitacin
continua (1). Para obtener el ADN fngico se utiliz la
tcnica de extraccin de CTAB (4). Posteriormente se
recurri a la tcnica de PCR amplificando el gen que
codifica para la regin ribosomal 18s (rDNA), utilizando
los iniciadores PN3 (5-CCG TTG GTG AAC CAG CGG
AGG GAT C-3) y PN10 (5-TTC GCT TAT TGA TAT
GCT TAA G-3). La reaccin se llev a cabo en 35 ciclos
utilizando una temperatura de alineacin de 54C (4).
Finalmente se obtuvieron las secuencias de cada
muestra amplificada a travs de un proceso basado en la
reaccin de PCR asimtrico (BIG Dye); estas secuencias
fueron depuradas y analizadas en la base de datos del
NCBI para su identificacin.
Resultados.

Fig1.- Productos de extraccin de ADN.- 1. Ma: Metarhizium anisopliae

2. Vl: Verticillium lecanii, 3. Pl: Paecilomyces lilacinus 4. Bb: Beauveria
bassiana 5. Nr: Nomurea rileyi 6. Pf: Paecilomyces fumosoroseus.

Hongo

Caractersticas

Paecilomyces
fumosoroseus

Consistencia algodonosa, color caf

cremoso, crecimiento expandido.

Verticillium lecanii

Consistencia algodonosa, color blanco,

crecimiento expandido y plano.
Consistencia polvosa, color verde,
crecimiento expandido.
Consistencia firme, color blanco y verde
en la periferia, crecimiento longitudinal.
Consistencia algodonosa polvosa, color
blanco cremoso, crecimiento expandido.
Consistencia algodonosa, color liliceo,
crecimiento expandido.

Metarhizium anisopliae
Nomurea rileyi
Beauveria bassiana
Paecilomyces lilacinus

Conclusiones: Es posible el aislamiento de hongos

entomopatgenos de suelos cultivados as como su
reproduccin
en
medios
convencionales.
Su
caracterizacin morfolgica macroscpica concuerda con
la identificacin molecular a la que fueron sometidos al
presentar una identidad de casi un 100% con los hongos
registrados en la base de datos del NCBI.
Bibliografa.
1.- Javier Giraldo. Uso de hongos entomopatgenos en el control de
ectoparsitos. Julio 2009.
2.- Arnulfo Monzn. Produccin, uso y control de calidad de hongos
entomopatgenos en Nicaragua. Avances en el Fomento de Productos
Fitosanitarios No-Sintticos. Manejo Integrado de Plagas (Costa Rica)
No. 63, p. 95 -103, 2001.
3.- Caedo V., Ames T. Manual de Laboratorio para el Manejo de
Hongos Entomopatgenos.62 pp. Octubre 2004.
4.- Ral Rodrguez Herrera. Manual de Biologa Molecular. pp, 7,12, 1519. 2009.
5.- Fabin Echeverra Beirute. Caracterizacin biolgica y molecular de
aislamientos del hongo entomopatgeno Beauveria bassiana (Blsamo)
Vuillemin. Enero 2006.