Elaboracin de micropreparados para la visualizacin de tejidos y

estructuras celulares (Laboratorio 2)

Junior O. Pinzn*, Cristian C. Romero*, Nicolle Motta*, Erika L. Jimnez*, Kelly
Y. Leal*
*

Departamento de Biologa. Universidad Pedaggica Nacional

OBJETIVOS

Comprender el uso de micropreparados

como instrumentos que permiten conocer la
estructura y funcin de los tejidos y las
clulas
Acercar al estudiante a la identificacin de
estructuras tisulares y celulares
Reconocer prcticas de laboratorio que
puedan ser utilizadas como mtodo de
aprendizaje de los fenmenos biolgicos

INTRODUCCIN
La utilizacin de los micropreparados junto con
el microscopio permite apreciar la existencia de
seres y estructuras que el ojo humano por s solo
no es capaz de ver, adems se transforma en una
herramienta para el maestro de biologa en su
afn de transmitir el conocimiento de lo vivo,
brindndole al estudiante la oportunidad de
conocer de primera mano el mundo de los
microorganismos como el caso de las clulas. La
clula es la unidad funcional y estructural de
todos los seres vivos (Campbell & Reece, 2007)
y su conocimiento es fundamental para todas las
ciencias biolgicas y otro tipo de aplicaciones
tales como la agricultura, la biotecnologa y la
medicina (Cooper & Hausman, 2005). Por otra
parte la formacin de tejidos altamente
organizados y con funciones especficas es
caracterstica de clulas eucariotas como las
clulas vegetales o las clulas animales quienes
poseen un ncleo definido, mayor tamao y
mayor complejidad estructural, con presencia o
ausencia de ciertos orgnulos o la diferenciacin
en sus funciones como el caso de la vacuola,
caractersticas que las diferencian de las clulas
procariotas. En estos niveles de organizacin
existen tambin propiedades emergentes que
responden al orden estructural y su correlacin
con la funcionalidad de las mismas (Campbell &
Reece, 2005) y de cuyo entendimiento

depender la comprensin de gran parte de los

fenmenos biolgicos.
MATERIALES Y MTODOS
Materiales
Equipos
Microscopio ptico Elctrico
Microscopio ptico (Advance Optical)
Cmara Fotogrfica
Porta y cubre objetos
Cuchillo
Material Orgnico
Muestra de Sangre
Muestra de Saliva
Zanahoria
Cebolla
Hoja
Reactivos
Agua
Azul de Metileno

Procedimiento

Elaboracin de micropreparados
1. En el caso de la zanahoria (Daucus
carota) se tom la raz pivotante y en de
la cebolla (Allium cepa) se tomo el
bulbo de la misma. Luego se realizaron
cortes laterales muy finos con un
cuchillo a cada especimen tomando la
muestra con el ndice y pulgar
izquierdos y la cuchilla con ndice y
pulgar derechos. Despus de realizar
varios cortes se seleccionaron los
mejores y se montaron en la placa porta
objetos (3 por cada material). Luego a
un micropreparado por material se le
adicion una gota de agua y a otro una
gota de azul de metileno y se cubrieron
con la laminilla cubre objetos, es decir,
se
obtuvieron
en
total
seis
micropreparados en esta etapa, tres de

cebolla, tres de zanahoria y por cada

material uno sin reactivo, otro con agua
y otro con azul de metileno.
2. Para el caso de la hoja se seleccion
una hoja de coloracin morada intensa
de un ejemplar de Bougainvillea
spectabilis (Fig.1). Al ser una hoja muy
delgada no se le realizaron cortes
transversales ni laterales, por lo que
solo se tom una porcin de la hoja
para cada micropreparado, uno sin
agua, otro con adicin de una gota de
agua y otro con adicin de una gota de
azul de metileno. Finalmente se
cubrieron con el cubre objetos.
3. Los micropreparados de los fluidos
corporales (Sangre y saliva) se
realizaron tomando una pequea
muestra de cada fluido y colocndola en
el Porta Objetos. En total se obtuvieron
cuatro micropreparados, dos de sangre
y dos de saliva, a uno de cada uno de
stos se les adicion una gota de azul de
metileno y a los dos restantes no se les
adicion ningn reactivo. Luego se
cubrieron con el cubre objetos.

RESULTADOS
En la prctica realizada los materiales orgnicos
utilizados provenan de diferentes organismos
que se pueden agrupar en plantas (rganos
vegetativos) y animales (fluidos corporales)
rganos Vegetativos
Se observaron micropreparados de cuatro
rganos vegetativos de diferentes especies entre
los que se incluyen hojas, raz y tallo.

Hojas

Se observa una clara diferencia entre el

micropreparado acuoso y el no acuoso,
logrndose un mayor nivel de detalle con el
primero en el que se logran distinguir fibras en
las venaciones de la hoja que se distinguen
claramente del resto del tejido epidrmico de la
hoja (Fig. 2). En el micropreparado con adicin
de azul de metileno el tejido epidrmico se tie
con facilidad a excepcin de las fibras de las
venas foliares. Con una mayor resolucin (10x)
se logra percibir que las paredes celulares son
quienes se tien y se logra una clara distincin
entre esta y el citoplasma, con el lente 40x se
alcanza a observar lo que probablemente es el
ncleo de las clulas que tambin se tie y lo
diferencia del contenido citoplasmtico (Fig. 3).

(Fig. 1. Bougainvillea spectabilis)

Observacin al microscopio
1. Cada micropreparado fue llevado al
microscopio ptico usando los lentes
del revolver 5X y 10X para la
observacin de cada muestra. Se
hicieron anotaciones y grficos de las
estructuras observadas.
2. Para la observacin en el microscopio
Advance Optical se seleccion la
muestra de cebolla al considerar que era
la que presentaba mayor calidad en la
definicin de sus estructuras celulares.
3. Por ltimo con la cmara fotogrfica se
capturaron algunas imgenes de los
micropreparados vistos al microscopio.

Fig. 2. Tejido epidrmico de hoja

Fig. 3. Tejido epidrmico de hoja

Fig. 4. Micropreparado de cebolla sin agua (5x)

Cebolla

En la figura 4 se demuestra la capa delgada de la

cebolla (epidermis) que fue observada al
microscopio en un enfoque de 5x sin agua
puesta sobre el portaobjeto y encima el
cubreobjetos para tener un enfoque ms claro
frente al microscopio. Se ve en la imagen las
clulas formando el tejido, aunque no se ven
muy definidas se pudo observar la membrana de
estas.

Fig. 5. Micropreparado de cebolla con agua

En la figura 5 se observa la epidermis del bulbo

de la cebolla, cabe recordar que al adicionar
agua permiti la observacin ms clara de las
clulas de esta capa, aclarando la visin de la
membrana, ya que esta se pudo ver ms
definida.
En esta parte del proceso se observ como
gracias a la tincin con azul de metileno
(compuesto qumico aromtico que se emplea
como colorante para la ayuda de la tincin de las
clulas) las clulas de la epidermis de la cebolla
se diferenciaban ms en su forma y tamao, ya
que se pudo observar la membrana celular con
ms claridad (Fig. 6)
Por otra parte los micropreparados de Allium
acepa fueron llevados al microscopio ptico
Optical Advance logrando una mejor
resolucin de la imagen en los objetivos 5x, 10x
e incluso 40x. Se identific claramente la pared
celular de cada clula y el ncleo de cada una de
las mismas, siendo el micropreparado teido con
azul de metileno el que arroj la mejor
resolucin ptica (Fig. 7)

Fig. 6. Micropreparado de cebolla con azul de metileno

Fig. 7. Micropreparado de cebolla con azul de metileno vista al

microscopio Optical Advance (10x).

Zanahoria

A este micropreparado se le agrego una gota de

agua, visualizado en el microscopio con un
objetivo de 10x, fue posible observar muy
detalladamente
la
estructura
de
este
micropreparado, de igual manera se observaban

algunas gotas de agua, pero esto no fue

impedimento para suponer que en la parte
izquierda se visualizaban posibles clulas (Fig.
8).
En la figura 8 a la derecha se visualizan unas
estructuras un poco ms detalladas, esto porque
se le agrego una gota de azul de metileno que.
Este micropreparado fue observado con un
objetivo de 10x, donde se pudieron visualizar un
posible
ncleo. Los
cromoplastos
que
almacenan
grandes
cantidades de
pigmentos,
aparecen
como
grnulos de coloracin anaranjada en la
zanahoria.
Fig. 8. Derecha, micropreparado de zanahoria con agua.
Izquierda, micropreparado con azul de metileno.

Fluidos Corporales

Saliva

La primera muestra fue colocada sin ningn tipo

de colorante, en ella se pudieron observar unas
pequeas manchas de formas irregulares (Fig.
9), a parir de all se formul la hiptesis de que
estas pequeas manchas podran ser clulas,
pero para tener ms seguridad, se observ la
segunda muestra de saliva teida con azul de
metileno.
En la segunda muestra se pudo evidenciar que el
azul de metileno ayud a que las pequeas
manchas se vieran con mayor claridad (Fig. 10)
y por consiguiente esto le dio peso a la hiptesis
de que las pequeas manchas efectivamente eran
clulas.

Fig.

9.

Micropreparado

de

saliva

sin

reactivo

Fig. 10. Micropreparado de saliva con azul de metileno

Sangre

En el momento de la observacin se pudo ver

una cantidad enorme de clulas, con ms detalle
se pudo ver que algunas de ellas seguan en
movimiento a lo largo de la muestra de sangre.
Al momento de realizar una comparacin entre
las dos muestras se puede ver que el azul de
metileno solo le dio un tono azul pero no mejor
la posibilidad de observar con ms detalle la
muestra a diferencia de la que no tena el tinte.
Al microscopio se vieron con un dominio
predominante los glbulos rojos teidos de color
rojo. No tienen ncleo y son ms delgados por el
centro que por los bordes (Fig. 11)

Fig. 11. Micropreparado de sangre sin reactivo

DISCUSIN

Se observan tanto diferencias como similitudes

en los distintos micropreparados. Diferencias
dadas por el tipo de clula y tejido observado,
donde se distinguen claramente la pared celular
y la disposicin de clulas dentro del tejido de
las clulas vegetales a diferencia de las clulas
animales de fluidos corporales que evidencian la
ausencia de pared y no se encuentran tan
cohesionados, tal vez por el mismo tipo de
clula observada, es decir que no es igual por
ejemplo observar tejido conectivo a observar el
tejido del torrente sanguneo o de la epidermis
bucal.
En cuanto a clulas vegetales se refiere se
infiere que la diferenciacin de los tipos
celulares de las hojas de Bougainvillea
spectabilis corresponde a la diferencia de las
funciones de las estructuras, sin embargo
probablemente las dos constituyan tejido
epidrmico. Si se pudiera hacer un corte
transversal de la hoja probablemente se
alcanzara a apreciar los haces vasculares y el
clornquima que constituye el mesfilo de la
hoja. Vale aclarar que las hojas utilizadas no son
precisamente hojas en el sentido estricto de la
palabra, estas son brcteas que recubren la flor
de la planta, aunque de todas maneras presenta
la anatoma, morfologa y fisiologa de una hoja
comn con diferencia en la pigmentacin y el
grosor de las hojas.
En el caso de la cebolla y la zanahoria, al ser la
membrana celular una estructura laminar
formada por lpidos y protenas que cumplen
funciones como recubrir la clula y por ende
definir sus lmites, as mismo como la pered
celular se pudo observar en el laboratorio esta
estructura con ms claridad dependiendo de los
reactivos que se emplearon.
Cuando se realiz el primer experimento sin
agua no se observ tan claramente la estructura
celular de la capa epidrmica de la cebolla y las
estructuras celulares de la zanahoria, pero en el
siguiente paso que requera la aplicacin de agua
se reflej con mayor claridad la distincin entre
clulas puesto que se observ un tejido
evidenciando la estructura de la membrana
celular, que define los lmites de cada clula.

En el tercer paso llevado a cabo con la ayuda del

reactivo azul de metileno se observ ms
claramente y se evidenci la separacin de cada
clula por la membrana, tindose esta de color
azul rey /violeta, lo que conllevo a una visin
sobre las clulas ms amplia y despejada.
En el caso de los fluidos corporales se puede
determinar que La saliva humana est
compuesta por agua en cerca del 99 %, mientras
que el 1 % restante lo constituyen compuestos
inorgnicos, protenas, carbohidratos, lpidos,
clulas epiteliales descamadas, bacterias y sus
productos, virus y hongos, restos de alimentos".
Martnez et al. (2014). As que con base en la
descripcin anterior y en la asesora de la
profesora Mnica Torres, se dedujo que
probablemente las clulas observadas fueran
clulas epiteliales, ya que el interior de nuestra
boca est cubierto por tejido epitelial, que al
mismo tiempo est compuesto por las clulas ya
mencionadas, estas clulas se desprenden del
tejido epitelial y terminan en la saliva, por
ltimo para poder ver con ms detalle las clulas
sanguneas es necesario un tinte o qumico
especializado.
La mayor parte de las estructuras subcelulares,
los organelos, son demasiado pequeos para la
resolucin del microscopio ptico (Campbell &
Reece, 2007, p.95), pero con el proceso de
tincin se refuerza el contraste de lo observado,
estos procesos exigen que las clulas sean
fijadas, que en este laboratorio fue posible llevar
a cabo para observar clulas y posiblemente su
ncleo.
CONCLUSIONES
El uso del microscopio es indispensable para la
observacin de las clulas y estructuras
tisulares.
Existen diferentes tipos de reactivos como el
azul de metileno que permite la claridad y mejor
resolucin de las estructuras celulares
especialmente de las membranas y paredes
celulares, y del ncleo, el ncleo, por ser la
estructura principal de las clulas es ms fcil de
ser observado por su tamao. Sin embargo se
requieren de otros tipos de reactivos como

aceites de inmersin que permitan en primer

lugar
la
observacin
del
contenido
citoplasmtico y en segundo lugar que faciliten
la utilizacin de los lentes 40 y 100x
respectivamente, el azul de metileno clarifica la
visin de ciertas estructuras pero dificulta la de
otras, por lo que es pertinente revisar literatura
que permita optimizar su uso.
Finalmente el laboratorio se ha llevado a cabo
con xito al cumplir sus objetivos, ya que se ha
comprobado que por medio de la observacin
de micropreparados se puede llegar al
conocimiento de la clula, tan importante para la
biologa.

LITERATURA CITADA

4.

Campbell, N. A. & Reece, J. B. (2007).

Biologa.
Madrid:
Editorial
Mdica
Panamericana
Cooper, G. M. & Hausman, R. E. (2005). La
clula. Marsban
Martnez et al. (2014). Caractersticas
fisicoqumicas y microbiolgicas de la saliva
durante y despus del embarazo. Rev. Salud
pblica.
Recuperado
de
http://www.scielosp.org/pdf/rsap/v16n1/v16n1a1
1.pdf
http://www.juntadeandalucia.es/averroes/ies_tor
re_del_aguila/webccnn/praclab/observacion
%20sangre.htm

5.