MICROBIOLOGA

AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE Campylobacter jejuni DE LA POBLACIN

CANINA QUE HABITA EN LA UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR SEDE
SABANA Y HURTADO

INTEGRANTES:
SHIRLEY MILENA HERRERA CARVAJAL
SAIRA SAIDETH PIMIENTA DURAN

ASESOR:
PATRICIA HERRERRA

UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR

FACULTAD DE SALUD
MICROBIOLOGA
2015

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INTRODUCCION

Campylobacter spp es la principal causa de infecciones intestinales usualmente de

origen zoontico. El cuadro clnico se manifiesta por una diarrea aguda, que puede o
no ir acompaada de vmitos, dolor abdominal, dolor de cabeza y malestar general. El
perodo de incubacin es de 1 a 10 das, el cuadro clnico es muy autolimitado y dura
entre 2 a 5 das.
Hay estudios que indicaran que Campylobcter es la primera causa de diarrea en
pases

desarrollados,

por

delante

de

otros

patgenos

como Salmonella, Shigella y Escherichia coli. [cita requerida]

Desde los aos noventa y a pesar del aumento en las exigencias sanitarias a la
industria de alimentos de Europa Occidental, Estados Unidos, Australia y Nueva
Zelanda los casos de infecciones producidas por Campylobacter lejos de disminuir
han aumentado, sin existir una explicacin para esto. Se destaca el caso
de Dinamarca, en el que entre 1990 y 2000 casos se triplicaron
El diagnostico de Campylobacter indica que alrededor del 95% de las infecciones por
campylobater son causadas por la especie jejuni junto con la especie coli
http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis106.pdf
El gnero campylobater se compone de bacilos Grampositivos, pleomorfos, curvados
en espiral. Son mviles gracias a un flagelo polar, son microaerofiloss ya que toleran
pequeas cantidades de oxigeno (de 3 a 15% de O 2 ), son anaerobios y positivos a
oxidasa. No fermentan carbohidratos.
Campylobacter jejuni habita en vas intestinales de animales domsticos y silvestres,
los perros y gatos excretan con frecuencia el microorganismo y se afirma que puede
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causar una enteritis febril en estos animales. Tambin produce abortos en perras y
vaquillas y es causa importante de enteritis en el hombre.

OBJETIVOS
Objetivo general
Aislar e identificar la especie Campylobacter jejuni de la poblacin canina que
habita en la Universidad Popular del Cesar en las sedes Sabanas y Hurtado

Objetivos especficos
Identificacin de la especie Campylobacter jejuni mediante aislamiento
bacteriolgico y pruebas serolgicas

MARCO TEORICO
Las primeras observaciones de bacterias semejantes a campylobacter
fueron realizadas por Escherich, en 1886, a partir de materia fecal de nios
y gatos con diarrea. Aunque no pudo realizar los aislamientos Escherich,
denomino

Vibrio

felinus,

las

bacterias

observadas

solo

microscpicamente.
Los primeros aislamientos del genero campylobacter fueron realizados en el
rea de microbiologa veterinaria en 1909 y 1913. Mac Fadyean y Stokmam
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y posteriormente Smit, en 1918, establecieron la participacin de una

bacteria microaerofila, en el aborto de ganado bovino y ovino de morfologa
similar a las especies de genero Vibrio, por lo que se le denomino Vibrio
fetus.
En 1931, jones y Little aislaron a partir de bovinos con disturbios
intestinales un vibrin microaerofilo al que denominaron Vibrio jejuni.
En 1994 Doyle descubri un vibrin aislado del intestino de cerdos con
diarrea y lo denomino Vibrio coli.
La primera asociacin entre estas bacterias curvas y diarrea en el hombre
fue sugerida por Levi, en 1946. En 1957 E. King estudiando las
caractersticas de estos vibrios estableci que no todos corresponden a
Vibrio fetus, determinando 2 grupos con caractersticas serolgicas y
bioqumicas diferentes. Mientras algunos eran capaces de crecer a 25 y 37
grados centgrados, otros lo hacan a 42.
En 1963, Sebald y veron, proponen la creacin del geenero campylobacter
para incluir esta bacteria en la dcada de los 70, Butzler y Skirrow, Bolton y
Robertson, Blaser y col, desarrollaron medios selectivos que permitieron
aislar estos microorganismos y establecer su participacin en diferentes
cuadros infecciosos en el hombre y animales.
http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis106.pdf

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JUSTIFICACION
La campilobacteriosis es una enfermedad causada por Campylobacter una bacteria
que causa enfermedad en animales y humanos, la mayora de casos se relacionan
con manejo e ingesta de alimentos contaminados con dicha bacteria, predominando
aquellos alimentos proveniente de carne de corral cruda o sin coccin adecuada, esta
bacteria termotolerante, reconocen como reservorios naturales una gran variedad de
especies de animales domsticos y silvestres (Blaser, 1983; Yogasundram y col.,
1989; Giacoboni y col., 1993).
Los perros y gatos son portadores y, por su estrecha relacin con el ser humano al ser
utilizados como mascotas, se describen como una fuente probable de infeccin, por
contacto directo con mascotas infectadas, es importante resaltar que las especies
varan de acuerdo al hospedador susceptible a la enfermedad por lo cual es
indispensable

el

conocimiento

de

las

especies

prevalentes,

as

como

la

individualizacin e identificacin de las cepas aisladas ya que estas proveen

informacin epidemiolgica y permite relacionar las fuentes de contagio y el modo de
transmisin. Los mtodos de tipificacin convencionales, basados en las pruebas
bioqumicas, resistencia a varios agentes y tolerancia a diferentes temperaturas, son
pruebas fenotpicas que se utilizan para caracterizar las cepas aisladas.
En la Universidad Popular del Cesar, sedes Sabanas y Hurtado, existe una poblacin
canina bastante densa, de animales jvenes y adultos, que presentan adems
infecciones respiratorias, digestivas, etc y que podran ser importantes focos de
diseminacin para Campylobacter, ya que estos animales se encuentran en contacto

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directo con otros animales susceptibles y con la poblacin estudiantil, docentes y

cuerpo administrativo del claustro acadmico.

HIPOTESIS

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MATERIALES Y METODOS
Hisopos
Medios Selectivos, diferenciales y de enriquecimiento (BHI, Durfty y Clark, y
Agar Sangre)
Kit Enzimoinmunoensayo ELISA
Tirillas de Oxidasa
Jarra de Anaerobiosis
Tirillas de Oxidasa

DIAGNOSTICO DE LABORATORIO
Puede realizarse el diagnstico por la demostracin del microorganismo en examen
directo o a travs del cultivo. El uso de los mtodos serolgicos para el diagnstico
tiene valor para la investigacin, ya que en pases en vas de desarrollo los ttulos en
la poblacin suelen ser altos. El examen de las muestras fecales diarreicas utilizando
microscopio de campo oscuro o contraste de fase, dentro de las 2 horas de
evacuacin, puede permitir un diagnstico presuntivo rpido si se observa la rpida
motilidad de las especies de Campylobacter en su mayora acompaadas por
eritrocitos y neutrfilos. Para cultivo y aislamiento a partir de materia fecal se requiere
de una atmsfera microaerfila, medios de cultivo selectivos para inhibir la flora

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acompaante, temperatura ptima de desarrollo (42-43C), aunque pueden

desarrollar a 37C, pH ptimo de crecimiento (6,5-6,9
MUESTRAS
Las muestras de deposiciones pueden ser tomadas con hisopo rectal o bien por
evacuacin espontnea, pudiendo mantenerse a temperatura ambiente, por algunas
horas, evitando su desecacin. La refrigeracin de las muestras prolonga por varios
das la sobrevida del microorganismo. Si es necesario usar un medio de transporte,
debe utilizarse el medio Cary Blair modificado por la reduccin de la concentracin de
agar en un 0,12%
EXAMEN MICROSCOPICO DIRECTO
Las muestras de materia fecal pueden ser examinadas a travs de una tincin simple
como Gram utilizando carbolfucsina como colorante de contraste, o azul de metileno
para identificar leucocitos y formas bacilares curvas. La observacin en microscopio
ptico o de campo oscuro de bacilos curvos y/o espirilados con gran motilidad en
forma circular o de sacacorchos nos permite un diagnstico presuntivo rpido.
CULTIVO EN MEDIOS SELECTIVOS
Las placas se siembran en forma directa con hisopo o con 2-3 gotas de deposiciones
acuosas, se disemina por estra. Se incuban con una atmsfera microaerfila que
tenga 5- 10% de oxgeno y 3 a 10% de dixido de carbono. Dado que en una diarrea
el nmero de Campylobacter es alto, no es necesario realizar enriquecimiento. Se
recomienda solo en caso de esperar un bajo nmero de microorganismos
(manipuladores, convalecientes).

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METODO DE FILTRACION PARA LA DETECCION DE CAMPYLOBACTER EN

HECES
El mtodo se basa en la separacin de Campylobacter del resto de la flora microbiana
presente en las heces, como por ejemplo los coliformes, que quedan retenidos en la
superficie de una membrana de celulosa de 0,45 o 0,66 m; los bacilos que logran
penetrar o transponer la membrana van a depositarse sobre un medio rico con sangre
que actuar como sustrato para el crecimiento del microorganismo. De esta manera
se obtiene un cultivo selectivo, situacin que reemplaza a la adicin de antibiticos,
para eliminar la flora acompaante.
TEMPERATURA DE INCUBACIN
Las especies termfilas de Campylobacter crecen mejor a 42-43C que a 37C.
EXAMEN DE LAS PLACAS
El tiempo de incubacin ideal es de 48 horas, aunque si el caso lo requiere, se
pueden examinar a las 18-24 horas. Las colonias sospechosas pueden observarse
planas, no hemolticas de aspecto acuoso, grisceas, con bordes irregulares y con
tendencia a diseminarse. Muchas veces se pueden ver incoloras. Se les debe realizar
una identificacin presuntiva para su posterior confirmacin y tipificacin.
IDENTIFICACION PRESUNTIVA
Tincin de Gram: debido a que este microorganismo no se tie bien con safranina, se
recomienda el uso de carbolfucsina al 0,8% como coloracin de contraste. Teniendo
en cuenta la morfologa caracterstica, es posible realizar solo la coloracin simple con
este colorante. Catalasa: se debe colocar sobre un portaobjetos limpio una colonia de
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un cultivo fresco, agregar una gota de perxido de hidrgeno al 3 %. Una reaccin

positiva se evidencia por la 13 formacin de burbujas producto de la liberacin de
oxgeno a partir de la reduccin del perxido de hidrgeno. Oxidasa: se debe utilizar
un buen inculo que se coloca en un tubo de hemlisis conteniendo 0,2 ml de agua
destilada a la que se le introduce un disco impregnado en la solucin de oxalato de paminodimetilamina. La enzima, citrocromo oxidasa es convertida a su forma activa por
la transferencia de electrones al oxigeno molecular. En presencia de oxigeno
molecular un gran nmero de electrones pueden ser transferidos por el sistema
citocromo oxidasa a una cantidad de compuestos orgnicos, entre ellos a la
paminodimetilamina.Una reaccin positiva se evidencia por el desarrollo de color rojo.
Motilidad: se realiza por microscopa ptica, de contraste de fase o campo oscuro
donde se observa microorganismos espiralados o con forma de S.
http://www.cdc.gov/ncidod/dbmd/gss/publications/documents/ArgentinaLevelI/ManualProcedimientos_Campylobacter.pdf
PRUEBAS SEROLGICAS
Los mamferos colonizados, as como los humanos infectados, desarrollan respuestas
con anticuerpos circulantes a C.jejuni. No existen pruebas serolgicas validadas para
la deteccin de infecciones por Campylobacter, sino que se pueden utilizar en
enzimoinmunoensayo preparaciones simples de antgenos complejos incluyendo
protenas superficiales extrables por cido.
CONFIRMACIN

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Se necesita un cultivo puro para pruebas confirmativas, pero se puede obtener una
confirmacin preliminar mediante examen microscpico directo del material con
colonias sospechosas.
Las pruebas confirmativas de la presencia de Campylobacter termfilos y su
interpretacin se proporcionan en el Cuadro siguiente. Los resultados de las pruebas
de confirmacin se confirman utilizando controles positivos y negativos.

Examen microscpico de morfologa y movilidad: el material de una colonia

sospechosa se suspende en solucin salina y se evalan, preferiblemente mediante
un microscopio de contraste de fases, sus caractersticas, como bacilos delgados
curvos o espirales con movilidad en forma de sacacorchos. Los cultivos ms viejos
muestras formas cocoides menos mviles.
Deteccin de oxidasa: Obtener material de una colonia sospechosa y colocarlo en
papel de filtro mojado con reactivo de oxidasa. La aparicin en 10 segundos de color
violeta o azul intenso significa que la reaccin es positiva.

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Fermentacin de azcares y produccin de sulfhdrico: El medio de agar con

hierro y triple azcar (TSI) se inocula por extensin longitudinal sobre la superficie del
agar inclinado y por picadura en la base (el extremo del medio TSI en el tubo). Incubar
microaerbicamente a 42C durante 24-48 horas.

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