UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

Escuela Acadmico Profesional de Medicina Veterinaria

INFORME N04 Y N5
MANIPULACIN, VIAS DE INOCULACIN,
SANGRIA Y PREPARACIN E INOCULACIN DE
INMUNGENOS EN CONEJOS
ASIGNATURA

Inmunologa Veterinaria

PROFESOR

Dr. Hugo Castillo Doloriert

Dra. Deyli Daz Lezama

ALUMNOS

Barrionuevo Alvarado, Patricia

Cano Rivera, Flavia
Cartagena Meza, Jessica
Diaz Revolledo, Carmen

FECHA DE PRCTICA: 27/10/15 Y

CICLO

10/11/15

IV

SEMESTRE ACADMICO: 2015 -2B

LIMA PER

INTRODUCCIN

Sin los animales de laboratorio, el conocimiento de las ciencias biolgicas no

estara al nivel que se encuentra hoy en da. Los animales de experimentacin,
como los ratones y conejos, han proporcionado modelos para la realizacin de
diferentes investigaciones en diferentes reas de las ciencias de la vida.
La inoculacin de sustancias es una prctica generalizada en la prctica veterinaria.
En el rea de la inmunologa las vacunaciones representan la prctica ms
extendida, pero tambin existen pruebas diagnsticas como la de reaccin de
tuberculina o los test alrgicos que demandan cierto conocimiento de las diferentes
vas de inoculacin. Asimismo, la toma de muestras sanguneas es un
procedimiento de rutina en la mayor parte de los laboratorios de inmunologa y en
la prctica veterinaria en general, ya que a travs de este procedimiento se obtienen
clulas, fluidos y molculas tanto para la investigacin como para el diagnstico.
La presente prctica tiene como objetivo conocer las diferentes vas de inoculacin
y sangra en conejos en congruencia con una apropiada manipulacin. Al finalizar
la prctica el alumno ser capaz de, sujetar y manipular correctamente los animales
de laboratorio, reconocer las diferentes vas de inoculacin en conejos e identificar
los mtodos de sangra ms frecuentes en la prctica inmunolgica veterinaria.

El mtodo ms efectivo de iniciar la formacin de anticuerpos consiste en la

inoculacin de un inmungeno en los tejidos o en la sangre. La va oral resulta
menos efectiva porque la mayora de los antgenos son protenas o carbohidratos
que se digieren en el tracto gastrointestinal, sin embargo en algunos casos como
en las vacunas orales contra la polio o la salmonella resulta ser una buena va de
inmunizacin. Adems en el caso de las alergias alimentarias es evidente que
esta va es la que sirve de ingreso a los alrgenos.
El mtodo ms comn para incrementar las respuestas inmunitarias frente a los
antgenos es la utilizacin de adyuvantes. Esta mejora en la inmunogenicidad que
aportan los adyuvantes a los antgenos se asocia con una prolongada presencia
en los tejidos y una estimulacin no especfica del sistema inmune. Uno de los
adyuvante ms conocidos es el adyuvante completo de Freund que consiste en
una emulsin en aceite mineral, orgnico con bacilos de Mycobacterium sp.,
muertos por calentamiento, o sin micobacterias, el cual es conocido como el
adyuvante incompleto de Freund. La preparacin completa estimula notablemente
la respuesta inmune, tanto celular como humoral, pero produce la formacin de
granulomas en el sitio de inyeccin por lo que no se utiliza en humanos y debe
vigilarse su uso en animales
En la prctica, se pueden detectar anticuerpos entre los 3 y 14 das despus de
la inoculacin, registrndose entre el noveno y el dcimo da en promedio una
tasa mxima de produccin. Los sueros pueden ser enteros o purificados, y la
concentracin de inmunoglobulina especfica es valorada a travs de pruebas de
reaccin primaria y secundaria.

OBJETIVOS

Manipular y obtener muestras de sangre de forma apropiada en animales de

experimentacin.
Reforzar los conceptos de respuesta inmune primaria y secundaria, adyuvantes, los

cuales son la base de las vacunaciones, as como familiarizar al estudiante con la

sueroterapia.

METODOLOGIA
MATERIALES Y EQUIPOS:
Animales
Conejo blanco de 3 Kg.
Materiales
Jeringas descartables de 1 y 3 ml.
Agujas de diferentes calibres (21, 23 y 25 G)
Contenedor para material punzocortante.
Promazil
Gasa y algodn
Alcohol
Albmina srica bovina (ASB)
Adyuvante completo de Freund (ACF)
Jeringas de 20 ml y de tuberculina
Agujas hipodrmicas 18G x 1.5
Placa Petri
Tubos eppendorf 2 ml
Alcohol y algodn
Balanza analtica

PROCEDIMIENTO

A) SUJECCIN DEL ANIMAL

Con la mano derecha se sujet tranquilamente al conejo de la parte trasera del cuello,

firme pero con suavidad. Luego colocar la mano izquierda debajo de las ancas del
conejo para soportar su peso. Tambin se puede sujetar la piel de los hombros con la
mano izquierda y con la derecha sujetar al conejo de la piel del lomo. Nunca levantar
al animal de las orejas, ni cargarlo slo de los hombros, esto es muy doloroso para el
animal.

B) SANGRA A PARTIR DE LA OREJA MARGINAL

Tranquilizar al animal mediante el uso de acepromazina va intramuscular (0.5

1 mg/kg).
Esperar de 5 a 10 minutos para que el tranquilizante haga efecto

 Desinfectar la zona con alcohol

Inducir la hemostasia de la vena e introducir suavemente una aguja 21G x 1.5
hasta que la sangre empiece a fluir
Realizar la colecta inmediatamente en un tubo con EDTA.

C)

PREPARACIN DE INMUNGENO - ALBMINA SRICA BOVINA (ASB).

Disolver la ASB a razn de 50 mg en 2 ml de solucin salina fisiolgica.
Verter en una placa petri o en un tubo plstico, 2 ml del ASB disuelto y 2 ml de
adyuvante completo de Freund.
Con una jeringa de 20 ml y una aguja 18G x 1.5 proceder a cargar y descargar
la mezcla repetidas veces hasta obtener una solucin cremosa.
Confirmar que la emulsin ha sido completada colocando una gota de la
suspensin sobre un recipiente con agua. Si la gota no se diluye y flota o
permanece intacta, la emulsin estar lista para usarse, caso contrario repetir el
paso 3.
Para preparar la emulsin con adyuvante incompleto de Freund repetir los
mismos pasos cambiando el adyuvante completo de Freund por el incompleto.

D) INOCULACIN DE INMUNGENOS
Inocular a los conejos la suspensin inmunognica emulsionada con adyuvante
completo de Freund por va intramuscular (0.25 ml) subcutnea e intradrmica
(0.05 - 0.1 ml, en 8 sitios diferentes sobre el dorso).

VIA INTRAMUSCULAR

0,2 ml

VIA SUBCUTANEA (2 veces)

0,1 ml

VIA INTRADRMICA (2 veces)

0,05 ml

 A los 14 das post inoculacin se aplicar, va intramuscular (0.2 ml) y

subcutnea (0.2 ml), la segunda dosis de inmunizacin de las mismas
suspensiones inmunognicas pero esta vez emulsionadas con adyuvante
incompleto de Freund.

ANESTESIA CON
PROMAZIL

VIA INTRAMUSCULAR

0,2ml

VIA SUBCUTANEA (2 veces)

0,1 ml

VIA INTRADRMICA (2 veces)

0,05 ml

RESULTADOS Y DISCUSIN

Tras la prctica realizada el conejo no presento ninguna complicacin despus

de las inyecciones.

El resultado que se obtuvo fue que despus de la primera inmunizacin solo se

present un pequeo abultamiento.

En la segunda prctica se tornaron ms granulomas sobre la epidermis a

diferencia de la primera, el conejo se volva ms sensible en ese aspecto

CONCLUSIONES

Como resultado del trabajo de investigacin es posible decir que la inoculacin de

dicho inmnogeno en los tejidos produjo anticuerpos.
Por otro lado, gracias a la realizacin de la prctica realizada se logr aprender las
diferentes vas de inoculacin y sangra en conejos en congruencia con una apropiada
manipulacin se aprendi sujetar y manipular correctamente los animales de
laboratorio.

Un antgeno suele ser una molcula ajena o txica para el organismo (por ejemplo,
una protena derivada de una bacteria) que, una vez dentro del cuerpo, atrae y se une
con alta afinidad a un anticuerpo especfico. Cada anticuerpo es capaz de lidiar
especficamente con un nico antgeno gracias a la variabilidad que le otorga la regin
determinante de complementariedad del anticuerpo dentro de la fraccin Fab de los
mismos.
El mtodo ms comn para incrementar las respuestas inmunitarias frente a los
antgenos es la utilizacin de adyuvantes. Esta mejora en la inmunogenicidad que
aportan los adyuvantes a los antgenos se asocia con una prolongada presencia en
los tejidos y una estimulacin no especfica del sistema inmune. Uno de los adyuvante
ms conocidos es el adyuvante completo de Freund que consiste en una emulsin en
aceite mineral, orgnico con bacilos de Mycobacterium sp., muertos por
calentamiento, o sin micobacterias, el cual es conocido como el adyuvante incompleto
de Freund.

Debido al trabajo realizado se puedo concluir la formacin de granulomas (la

respuesta inmune demora en detectar anticuerpos entre 3 y 14 das) gracias a la
inoculacin inicial del antgeno. En la prctica se aprendi sobre la respuesta inmune
primaria y secundaria, los cuales son la base de las vacunaciones, as como
familiarizar al estudiante con la sueroterapia.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

Inmunologa. Fundamentos (Novena edicin). Buenos Aires: Editorial

Mdica Panamericana (1998).
Fundamental Immunology (4 edicin), Philadelphia y Nueva York:
Lippincott y Raven Publishers, (1999)
Inmunologa celular y molecular
Interamericana-McGraw Hill (1999).

(Tercera

edicin).

Madrid:

Ed.

Advanced Immunology (Tercera edicin) Londres: Mosby (1996).

REFERENCIAS ELECTRNICAS

http://www.Crystal structure of the Varkud satellite ribozyme Source:

Nature Chemical Biology
http://www.Multivariate dynamic prediction of ischemic infarction and
tissue salvage as a function of time and degree of recanalization Source:
Blood Flow & Metabolism
http://www.Transcriptome analysis reveals a classical interferon signature
induced by IFN4 in human this content is FREE Source: Genes and
Immunity

CUESTIONARIO

1. Realice un esquema comparativo entre las vas de inoculacin IM, SC

e ID. Brinde 2 ejemplos de sustancias que son inoculadas por esas
vas.

IM
SC
ID

liberacion es lenta, agujas de 22 a 23 g, 1

pulgada
facil de inocular, agujas de 20 a 23 g, 1 pulgada
frmacos o sueros
inyeccion dificil, liberacion lenta, Emplearnos
una jeringa de 1 cm. Con aguja # 26.

2. Qu cantidad de volumen sanguneo se puede obtener de un conejo

adulto y con qu frecuencia?
En un solo sangrado se puede obtener de 25 a 50 ml de un conejo y cantidades
similares se pueden recolectar en intervalos de cuatro semanas

3. Cul es la diferencia entre suero y plasma sanguneo?

Plasma: sangre sin coagular, contiene fibringeno , viscoso
Suero sanguneo: sangre coagulada, no contiene fibringeno, no viscoso

4. Cul es el mecanismo de accin de los adyuvantes que conduce a una

mejor respuesta del sistema inmunitario?
Pueden actuar a travs de dos mecanismos principales:
Actuando a travs del sistema de liberacin de antgeno, aumentando la
disponibilidad de antgeno en las clulas presentadoras de antgeno. Se
consigue un retraso en el aclaramiento antignico y aumento de la respuesta al
antgeno en localizaciones fisiolgicas especficas.
Se incluyen en este grupo de adyuvantes las sales insolubles de aluminio,
liposomas, virosomas, micropartculas (PLG), emulsiones y partculas virus-Like.
Inmunopotenciadores: Activan directamente los receptores celulares e inducen
la liberacin de citokinas. Actan como inmunopotenciadores el MPL y
derivados, MDP y derivados, oligonucletidos (CpG), RNA de doble cadena,
patrones alternativos moleculares asociados a patgenos.

5. Describa brevemente 5 adyuvantes empleados en vacunas de uso

veterinario
Los adyuvantes son sustancias qumicas, materiales de origen microbiolgico o
mezclas que administradas conjuntamente con el antgeno contribuyen a la
produccin de una mayor respuesta inmunitaria.
Sales de aluminio y calcio: Retrasa la liberacin del antgeno desde el punto
de inoculacin y permite obtener respuestas inmunitarias ms prolongadas.
Las sales ms usadas son el fosfato e hidrxido de aluminio y fosfato clcico.
Inmunoestimulantes: aumentan o reestablecen las defensas inmunitarias.
Pueden ser materiales de origen biolgico o qumico
a) Fracciones bacterianas
b) Substancias vegetales
c) Qumico
Emulsiones: Adyuvante Freund es una emulsin de agua-aceite ms
micobacterias completas o una fraccin denominada muramyl dipptido.

6. Cules son las diferencias entre los anticuerpos policlonales y

monoclonales?
Los anticuerpos pueden utilizarse para muchas funciones (medicamentos,
qumica, biologa, estudios de laboratorio, etc).
Anticuerpo monoclonal: procede de una sola clula madre, quiere decir que
los clonas son idnticas. Al ingreso de una sustancia extraa (antgeno) se
inyecta en el cuerpo de un ratn o un humano, las clulas B que tiene su
sistema inmune se transformarn en clulas plasmticas y comenzaran a
producir anticuerpos que se unirn a ese antgeno. Los monoclonales son
especficos a diferencia de los policlonales.

Anticuerpos policlonales: Las clula B (un tipo de linfocitos) llegan a producir

un solo tipo de anticuerpo, pero diferentes linfocitos B producirn anticuerpos
estructuralmente diferentes que se unen a distintas partes del antgeno. Toda
esta mezcla fisiolgica natural de anticuerpos es conocida como 'anticuerpos
policlonales'. los policlonales solo reconocen una porcin del complejo
proteico, por lo tanto son ms inespecficos, sin embrago stos son los que
se utilizan en estudios de inmunohistoquimica, tambin en
inmunofluorescencia, ya que los policlonales necesitan la mxima unin de
anticuerpos para asegurar la completa adhesin en su objetivo.