http://dx.doi.org/10.5935/0104-8899.

20150055

Experimentao no Ensino de Qumica

Eletroforese de DNA: Dos Laboratrios de Biologia

Molecular para as Salas de Aula

Fernanda Romanholi Pinhati

Este trabalho visa apresentar um protocolo para montagem e execuo de um sistema eletrofortico em
sala de aula. O sistema elaborado a partir de materiais e reagentes alternativos, baratos e de fcil aquisio
em substituio aos principais componentes utilizados em laboratrios de biologia molecular. Dentre os
materiais sugeridos, esto pote de plstico, manteigueira, pente, fios de cobre e ao, fonte de impressora,
bicarbonato de sdio, corante comestvel e amido de milho. Por meio dessa prtica, o professor pode propor
aos alunos atividades em que eles podem participar tanto da confeco do sistema, quanto da aplicao
prtica de uma eletroforese de DNA de banana previamente extrado. No decorrer dessa atividade, professor
e alunos tm a chance de discutir conceitos importantes de qumica, fsica e biologia.
DNA, eletroforese, gel de amido de milho

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Recebido em 22/10/2013, aceito em 27/11/2014

s mtodos de manipulao dos cidos nucleicos

baseiam-se em suas propriedades intrnsecas, ou
seja, o fato de serem naturalmente carregados negativamente devido presena dos grupos fosfatos (Campbell;
Farrell, 2007).
A carga e o tamanho so as duas propriedades moleculares dos cidos nucleicos frequentemente utilizadas na
deteco e separao. Uma das tcnicas mais utilizadas em
biologia molecular a eletroforese em gel, que emprega
essas duas propriedades. A eletroforese baseia-se na movimentao das partculas carregadas em um campo eltrico
em funo da razo entre sua carga e sua massa. Assim,
quando uma amostra for aplicada em um suporte (gel), uma
corrente eltrica passar por esse meio e induzir a separao.
Os cidos nucleicos possuem carga negativa em pH neutro
e, quando colocados em um campo eltrico entre eletrodos,
migraro em direo ao eletrodo positivo. Os fragmentos de
cido nucleicos menores deslocam-se mais que os maiores
em uma separao eletrofortica (Campbell; Farrell, 2007).
Em sua maioria, as separaes so realizadas com um
gel de agarose submerso por tampo em uma cmara. A
agarose, comumente utilizada para confeccionar o gel,
extrada de diversos gneros e espcies de algas marinhas
vermelhas que consiste em uma mistura heterognea de
dois polissacardeos: agarose e agaropectina (Lee et al.,
2012). No entanto, devido ao seu custo elevado, inviabiliza
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muitas vezes a realizao dessa prtica em sala de aula.

Alguns trabalhos optaram por utilizar o amido de milho
em substituio agarose. O amido de milho um material barato, de fcil localizao e aquisio, o que tornaria
vivel o experimento (Martinez et al., 2008). Entretanto, os
trabalhos ainda se mantm presos a reagentes especficos
de biologia molecular, que mesmo sendo de baixo custo
em relao agarose, no atendem s dificuldades a que
muitas escolas so submetidas, de modo que a sugesto de
reagentes baratos fundamental.
O objetivo deste trabalho desenvolver um sistema de
eletroforese utilizando materiais de fcil aquisio, que possa
ser praticado em salas de aula da 3 srie do ensino mdio e
promover a interdisciplinaridade do tema, visto que o experimento aborda conceitos de biologia, qumica e fsica. Os
alunos podem participar desde a montagem do sistema at
o seu funcionamento, sempre sob superviso do professor,
visando garantir a integridade fsica dos alunos.

Materiais e mtodos
Montagem da cuba eletrofortica
Materiais necessrios: pote de plstico (24,0 x 16,0 x
3,5cm), manteigueira (17,0 x 9,0 x 2,0cm), 2 fios de cobre
(6,0cm), 2 fios de ao (14 cm), 1 pente, cola epxi, fonte e
2 presilhas tipo jacar (Figura 1).

Eletroforese de DNA

Vol. 37, N 4, p. 316-319, NOVEMBRO 2015

Figura 1: Materiais necessrios para a montagem de um sistema

de eletroforese: pote de plstico, fios de cobre e ao, manteigueira, pente, fonte e presilhas tipo jacar.

Os fios de cobre e ao devem ser cortados com auxlio

de um alicate. Pressionando-se o fio de cobre contra o
canto superior e inferior de um dos lados do pote, deve-se
fix-lo na base de plstico, no deixando que o fio perfure
totalmente o pote. Aplica-se a cola epxi na base do fio de
cobre e prende-se o fio de ao em torno do fio de cobre na
extremidade mais prxima base (Figura 2). Os eletrodos
tambm podem ser formados apenas por fios de cobre ou
de ao dobrados em L, sendo necessrio no mnimo 20 cm
destes para cada eletrodo. O pente pode ser de um modelo
convencional, de hastes arredondadas. Deve-se cortar
o cabo do pente e, em seguida, marcar quais das hastes
devem ser removidas para permitir o encaixe nas bordas
da manteigueira. Outra opo de pente utilizar a lateral
da tampa da manteigueira. Tal como foi realizado com o
pente convencional, deve-se moldar a lateral da tampa da
manteigueira, tomando-se esta como referncia, e recortar
os dentes (Figura 3).

Preparao de gel e soluo tampo

Material necessrio: borato de sdio (NaBO3) ou bicarbonato de sdio (NaHCO3), amido de milho, gua, 2 copos
descartveis, copo medidor, frasco de vidro ou plstico (500
mL), bquer de 250 mL ou panela comum, suporte, grade e
bico de Bunsen ou fogo a gs, colher ou basto de vidro.
Preparo da soluo tampo: pesar 0,34g de borato de
sdio ou 3,48g de bicarbonato de sdio em copo descartvel. Com auxlio de copo medidor, medir 500 mL de gua
e solubilizar o sal. Transferir a soluo para frasco de vidro
ou garrafa descartvel.
Preparo do gel: pesar 28g de amido de milho em copo
descartvel e acrescentar 150 mL do tampo borato ou tampo bicarbonato de sdio em um bquer de 250 mL. Com
auxlio de um suporte e uma grade para bico de Bunsen ou
utilizando a panela e o fogo a gs, prepara-se o gel, mexendo
a mistura vagarosamente com o auxlio do basto de vidro at
que adquira uma consistncia firme. O gel deve ser vertido
sobre o pano do tipo multiuso que cobre a manteigueira.
Finalmente, deve-se encaixar o pente sobre o gel para criar
os poos (Figura 4). O gel deve ser levado geladeira por
2h para que adquira uma consistncia firme.
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Figura 4: Disposio do gel: este deve ser aplicado sobre o pano

do tipo multiuso que forra a manteigueira e, em seguida, deve-se
aplicar o pente.

Figura 2: Ilustrao mostrando como os fios de cobre e de ao

podem ser presos ao pote de plstico.

Figura 3: Imagens do pente convencional e da lateral da tampa

da manteigueira recortados para formar os pentes que permitiro
a formao dos poos no gel de amido.
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Preparao da amostra e aplicao no gel

Extrao do DNA de banana: o DNA de banana foi extrado conforme descrito por Rodrigues et al. (2008).
Material necessrio: corante comestvel, seringa descartvel (1 mL), copo descartvel (50 mL), palito de madeira.
No copo descartvel, deve-se acrescentar 2 gotas de tampo, 1 gota do corante e uma pequena quantidade do DNA
de banana, seguido de homogeneizao com auxlio do palito
de madeira. Diferentes amostras podem ser preparadas, caso
sejam utilizados corantes de diferentes cores. Aps a solidificao do gel, o pente deve ser retirado cuidadosamente. O gel
deve ser retirado diligentemente da manteigueira e transferido
junto com o pano do tipo multiuso para o pote de plstico. O
pano deve ficar em contato com os fios de ao. Em seguida, 3
ou 4 gotas da amostra previamente preparada (DNA + tampo
+ corante) devem ser aplicadas no gel com o auxlio da seringa.

Eletroforese de DNA

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Corrida eletrofortica
Aps a aplicao da amostra no gel, cuidadosamente 100
mL da soluo tampo deve ser vertida no pote de plstico.
importante que o tampo cubra completamente os fios de
ao, mas no deve ultrapassar a altura do gel, para que no
remova o material de dentro dos poos. As presilhas tipo
jacar devem ser presas ao fio de cobre, de modo que o fio
correspondente ao polo negativo deva ser conectado ao fio
de cobre mais prximo do material gentico e o fio correspondente ao polo positivo, na extremidade mais distante do
material gentico (Figura 5).

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Figura 5: O uso das presilhas jacar: conforme instruo no
verso da fonte, o fio correspondente ao polo negativo dever ser
conectado ao fio de cobre mais prximo do material gentico e o
fio correspondente ao polo positivo, na extremidade mais distante
do material gentico.

Resultados e discusso
O sistema de eletroforese proposto composto de materiais de fcil aquisio, baratos e muito utilizado nas cozinhas
convencionais. Os materiais fazem aluso aos equipamentos
originais utilizados nos laboratrios de biologia molecular.
A cuba eletrofortica foi substituda pelo pote de plstico,
cujos eletrodos, que conduzem a corrente, foram fixados. A
manteigueira faz o papel do suporte que enforma o gel. O
pente tem a funo de formar os poos no gel, onde devem
ser aplicadas as amostras.
Em relao aos reagentes, a agarose, substncia que se
torna gelatinosa com o aquecimento e firme aps o resfriamento, comumente utilizada nos laboratrios de biologia
molecular, foi substituda pelo amido de milho. O amido de
fcil aquisio e simulou o papel proposto pela agarose, que
seria formar uma rede para prender as molculas em razo
de sua carga/massa. Outra vantagem do amido a possibilidade de reutilizao do gel. Aps a corrida eletrofortica,
descartou-se apenas a regio do gel em que houve deposio dos corantes, todo o restante foi novamente aquecido,
acrescido de mais tampo e amido e vertido na manteigueira
para reutilizao. Em testes, o gel foi reutilizado por quatro
vezes sem prejudicar os resultados.
O tampo comumente utilizado o borato de sdio que,
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segundo alguns trabalhos, encontrado em farmcia de

manipulao (Martinez et al., 2008). Entretanto, em nossa
regio, o reagente no se encontrava venda. Um reagente
alternativo proposto o bicarbonato de sdio que, tal como
o borato de sdio, poder atuar como tampo. Quando em
soluo, o bicarbonato de sdio (NaHCO3(s)) dissocia-se
em ons, permitindo que coexista em soluo as espcies
HCO3/H2CO3, que caracterizam um sistema tampo. Devido
presena desses dois componentes, os tampes tm a propriedade de resistir s mudanas no pH (Marconato et al.,
2004). O potencial eltrico, que ser aplicado pela fonte,
promover a eletrlise da gua e de outros ons presentes
em soluo, consequentemente so gerados ons H3O+ e
OH-. Assim, para evitar alteraes bruscas no valor de pH,
adiciona-se a soluo tampo.
O azul de bromofenol (C19H10Br4O5S), corante normalmente utilizado em laboratrios de biologia molecular no
preparo da amostra de DNA, pode ser substitudo por corante comestvel, barato e de fcil aquisio. Por meio desse
corante, ser possvel monitorar a corrida eletrofortica em
funo de sua distncia percorrida no gel. A fonte utilizada
foi obtida de uma impressora em desuso, conferindo uma
voltagem de 20-30V.
Os testes mostraram que, ao se preparar o gel mais
espesso, um maior volume de soluo tampo poderia ser
utilizado, resultando em uma melhor distribuio da corrente
eltrica por todo o gel. Entretanto, no se deve deixar que o
tampo ultrapasse as bordas do gel, porque o lquido na parte
superior do gel provocaria a sada do material aplicado dentro do poo, prejudicando a corrida (Figura 6A). Tomando
esse cuidado, no h necessidade de acrescentar amostra
um reagente que aumente sua viscosidade como o glicerol.
Em sistemas de eletroforese em que o gel fica submerso, o
preparo da amostra deve conter esse reagente. Com essas
devidas observaes, em aproximadamente 50 minutos,
possvel a visualizao ntida e clara do corante percorrendo
o gel em direo ao polo positivo (Figura 6B). Nos poos
1 e 2, foram aplicadas, em duplicata, a amostra preparada
com corante comestvel e, nos poos 3 e 4, preparada com
azul de bromofenol. Em funo da maior massa molecular
do segundo corante, observa-se uma ligeira diferena na distncia percorrida entre os corantes no gel quando submetidos
mesma diferena de potencial (ddp).
O DNA, tendo carga negativa em pH neutro, migra em
direo ao polo positivo e, em razo de sua massa/carga,
ocupar uma posio especfica no gel. No entanto, no
possvel visualizar a exata localizao do fragmento de DNA
aplicado no gel por meio desse sistema. Para a visualizao
desses fragmentos, necessrio, por exemplo, a imerso do
gel, ao fim da corrida eletrofortica, em uma soluo diluda
de um corante fluorescente. Um exemplo o brometo de
etdio (EtBr) (C21H2OBrN3), que se intercala dupla hlice
do DNA. No entanto, essa visualizao somente ocorrer
aps o gel ser exposto luz ultravioleta, permitindo a observao de bandas laranja fluorescentes e destacando as
regies de alta concentrao de DNA (Carniello et al., 2008).

Eletroforese de DNA

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Figura 6: (A) Visualizao do material aplicado no poo. (B) Visualizao das bandas no gel aps 50 minutos de corrida eletrofortica.
Linhas: 1 e 2 DNA de banana com corante comestvel (roxo); 3 e 4 DNA de banana com corante de biologia molecular (azul de
bromofenol).

Entretanto, o EtBr um agente altamente mutagnico e a

radiao ultravioleta utilizada para visualizar o DNA pode
causar queimaduras severas, alm no estarem disponveis
na maioria das escolas.
Entretanto, mesmo que a posio precisa do DNA no
seja confirmada com essa prtica, o professor pode utilizar
esse experimento para abordar uma srie de contedos
importantes, contemplando a biologia, a qumica e a fsica.
Visto que vrios temas podem ser abordados no experimento, o professor pode iniciar com a discusso sobre os
nucleotdeos, destacando os grupamentos fosfatos, e como os
nucleotdeos se polimerizam para dar origem dupla fita de
DNA, local em que o EtBr se intercala para demarcar o DNA.
Em outra etapa, os alunos podem se dividir em grupos
para realizar a montagem do sistema eletrofortico. A fsica
, nesse momento, o foco principal de discusso, buscando
abordar como os eletrodos devem ser montados para que
ocorra a passagem de corrente eltrica, inserindo importantes conceitos como campo eltrico, diferena de potencial,
corrente contnua etc. Finalmente, a discusso qumica, em

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LEE, P.Y.; COSTUMBRADO, J.; HSU, C.Y.; KIM, Y.H. Agarose gel electrophoresis for the separation of DNA fragments.

que o professor pode, ao apresentar os reagentes, abordar

a estrutura qumica dos reagentes, discutir sobre soluo
tampo e pH, preparo de solues qumicas etc.

Concluses
A elaborao de um sistema de eletroforese a partir de
elementos alternativos abre uma grande oportunidade para
os professores discutirem conceitos importantes nas reas
de biologia, qumica e fsica. Por meio das vrias etapas,
extrao do DNA, confeco do sistema e execuo da corrida, o professor ter uma oportunidade de atrair a ateno
dos alunos e at mesmo cultivar neles a busca por novas
metodologias moleculares.
Fernanda Romanholi Pinhati (fernandaromanholi@yahoo.com.br), farmacutica

e bioqumica pela Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF), mestre e doutora

em Cincias (Bioqumica) pela Universidade Federal de Rio de Janeiro (UFRJ),
professora visitante do Departamento de Qumica e Ambiental da Universidade
do Estado do Rio de Janeiro (UERJ), Resende RJ, BR.

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Abstract: DNA Electrophoresis: from molecular biology labs to classrooms. This paper presents a protocol for construction and implementation of an electrophoretic run of biological material in the classroom. The system is built with cheap and easy to obtain alternative materials, such as plastic pot, butter dish,
printer fonts, sodium bicarbonate, cakes dye and cornstarch to substitute the major components used in a molecular biology lab. Through the experiment, the
teacher can propose activities to the students where they can participate in the system construction, perform an eletrophoretic run using bananas DNA previously extracted. Along the class, teacher and students will discuss important concepts of chemistry, physics and biology.
Keywords: DNA, electrophoresis and corn starch gel

Qum. nova esc. So Paulo-SP, BR.

Eletroforese de DNA

Vol. 37, N 4, p. 316-319, NOVEMBRO 2015

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