FACULTAD DE INGENIERA

DEPARTAMENTO DE INGENIERA QUMICA

LABORATORIO DE BIOLOGA PARA INGENIEROS

Ttulo de la prctica
Actividad cataltica de la -amilasa y variables que la afectan
Objetivos alcanzados

Se experiment sobre los diferentes aspectos de la actividad enzimtica y se

comprendi la manera en la cual diversos factores como el pH y la
temperatura influyen sobre la actividad enzimtica de la -amilasa.
Se evalu la dependencia que puede presentar una reaccin enzimtica con
respecto a la acidez del medio y a la temperatura.

Resultados (modelos de clculo y resultados grficos o tablas):

Elaboracin de la curva estndar de glucosa:

Concentraci
n (g/L)
0
0,0625
0,125
0,25
0,375

Absorba
ncia
0
0,082
0,151
0,476
0,694

Tabla 1. Absorbancia de la solucin de glucosa y sus diferentes concentraciones.

Absorbancia vs Concentracin de glucosa

0.8
0.7
0.6

f(x) = 1.93x - 0.03

R = 0.99

0.5
Absorbancia 0.4

Linear ()

0.3
0.2
0.1
0
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4
Concentracin (g/L)
Grfica 1. Curva estndar de glucosa: absorbancia vs. concentracin.

Se determin la concentracin de azcares reductores teniendo en cuenta la

ecuacin de la recta encontrada con la curva de calibracin de glucosa (grfica 1).

pH
Blanc
o
3,6
6,3
9

Efecto del pH
Absorbanci Absorbanci
Absorbancia
a1
a2
promedio
0
0,0420
0,0430
0,0290

0
0,0340
0,0430
0,0280

0
0,0380
0,0430
0,0285

Concentracin
(g/L)
0
0,3708
0,3966
0,3216

Tabla 2. Absorbancia y concentracin para efectos del cambio de pH.

Efecto de la temperatura
T
Absorbanci Absorbanci
Absorbancia
(C)
a1
a2
promedio

Concentracin
(g/L)

Blanc
o
25
60
90

0
0,0350
0,0260
0,0170

0
0,0320
0,0240
0,0170

0
0,0335
0,0250
0,0170

0
0,3475
0,3035
0,2622

Tabla 3. Absorbancia y concentracin para efectos del cambio de temperatura.

Clculo de concentraciones por medio de la Ley de Beer

Se utiliz la siguiente ecuacin para determinar las concentraciones en g/L:

[ C ] =10

|
,
(|(0.0337)
1.9339 )

(1)

donde el valor de 10 corresponde al factor de dilucin.

Clculo de la actividad enzimtica

Para el clculo de la actividad enzimtica de la -amilasa en diferentes

condiciones se utiliz la siguiente ecuacin:
AE=

mol de azcares reductores

Volenzima t

(2)

donde el volumen de la enzima (Vol. enzima) est en L y el tiempo (t) est

en minutos.
Efecto del pH
pH

Actividad
enzimtica
(mol/L min)

Blanco
3,6
6,3
9

0
343,10
367,03
297,64

Tabla 4. Actividad enzimtica bajo diferentes condiciones de pH.

Efecto de la
temperatura
T (C)

Actividad
enzimtica
(mol/L min)

Blanco
25
60
90

0
321,57
280,89
242,61

Tabla 5. Actividad enzimtica bajo diferentes condiciones de temperatura.

Concentracin vs pH
0.5
0.4

f(x) = - 0.01x^2 + 0.08x + 0.18

R = 1

0.3
Concnetracin (g/L)

Polynomial ()

0.2
0.1
0
3

9 10

pH
Grfica 2. Concentracin vs. pH de acuerdo a la actividad enzimtica.

Concentracin vs. Temperatura

0.4
f(x) = - 0x + 0.38
R = 1

0.3
Concentracin (g/L) 0.2

Linear ()

0.1
0
20

40

60

80

100

Temperatura (C)
Grfica 3. Concentracin vs. temperatura de acuerdo a la actividad enzimtica.

Anlisis de resultados
Al analizar la actividad de la -amilasa con respecto a la variacin de pH se
identific un valor mximo en la absorbancia correspondiente a un pH 6,3, lo cual
indica que hay una menor concentracin de sustrato porque se form mayor
cantidad de producto, y que adems a estas condiciones de pH se presenta una
mayor actividad enzimtica.
Se evidenci que el pH y la concentracin presentan un comportamiento
polinmico. El factor de correlacin, el cual dio 1, garantiza esta afirmacin de
manera contundente.
Para la actividad de la -amilasa con respecto a la variacin de temperatura se
identific un valor mximo en la absorbancia correspondiente a 25C, lo cual indica
que hay una menor concentracin de sustrato a esta temperatura porque se form
mayor cantidad de producto, lo que quiere decir que a estas condiciones de
temperatura se presenta una mayor actividad enzimtica, tal y como se comprueba

numricamente y se muestra en la tabla 5.

De acuerdo a la grfica 3, la concentracin presenta una relacin lineal de
pendiente negativa con respecto a la temperatura. El factor de correlacin permite
evidenciar rigurosamente esto.
Conclusiones

La -amilasa present una mayor actividad a pH 6,3, como se muestra en la

grfica 2. Por el contrario, a un pH bsico, como lo es 9,0, present la menor
actividad enzimtica. Basndonos en las soluciones trabajadas, son estos
dos valores de pH los que presentan mayor diferencia en actividad
amiloltica.
La -amilasa logra su mayor actividad a 25C ya que a esta temperatura
existe mayor cantidad de producto. Siguiendo el mismo razonamiento, a
90C present el mnimo valor ya que la cantidad de sustrato es mayor.
Existen varios factores que pueden afectar el desempeo de una enzima y
su actividad cataltica, principalmente el pH y la temperatura. En esta
prctica experimental se determin que el pH fue la variable ms importante
en el proceso enzimtico.