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Hipertens riesgo vascu. 2015;32(Espec Congr):1-116
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COMUNICACIONES PSTER
20. Reunin Nacional de la Sociedad Espaola de HipertensinLiga Espaola para la Lucha contra la Hipertensin Arterial
Oviedo, 11-13 de marzo de 2015
Investigacin preclnica
1. PAPEL PROTECTOR DEL CIDO OLEICO
EN LA RESISTENCIA CARDIOVASCULAR A LA INSULINA
Y EN EL DESARROLLO E INESTABILIDAD DE LA PLACA
ATEROSCLERTICA
N. Beneit1, L. Perdomo1, Y.F. Otero1, O. Escribano1,
S. Daz-Castroverde1, N. de las Heras2, M. Benito1
y A. Gmez-Hernndez1
Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular II, Facultad de
Farmacia, CIBERDEM; 2Departamento de Fisiologa, Facultad de
Medicina, RECAVA, UCM.
1
Objetivo: Diversos estudios han identificado un papel diferencial

de los cidos grasos saturados e insaturados en relacin a sus efectos a nivel cardiovascular. Sin embargo, los mecanismos moleculares por los cuales el cido oleico protege en las clulas cardiovasculares no son tan conocidos. Por estos motivos, nos planteamos
estudiar el efecto protector del oleato y diferencial con respecto al
palmitato en la resistencia a la insulina y en el inicio, desarrollo e
inestabilidad del proceso aterosclertico.
Mtodos: Para llevar a cabo este estudio se utilizaron diferentes
lneas de clulas cardiovasculares, como cardiomiocitos neonatales
(CMs), clulas de msculo liso vascular (VSMCs) y clulas endoteliales (ECs). Para los estudios de sealizacin de insulina se han realizado Western blot e inmunoprecipitaciones, para analizar la expresin de los genes implicados en la disfuncin vascular se ha
utilizado la PCR cuantitativa a tiempo real (qRT-PCR) y para el estudio de la proliferacin y apoptosis de las VSMCs se realizaron
experimentos de incorporacin con BrdU, ciclo celular y Western
blot.
Resultados: En primer lugar, mediante Western blot demostramos que el oleato no slo no indujo resistencia cardiovascular a la
insulina sino que adems protegi frente a la resistencia a la insulina inducida por el palmitato o el TNF-a. Uno de los mecanismos
que podra estar implicado es la reduccin de la activacin de JNK1/-2 o NF-kB por el oleato. Nosotros tambin observamos que el
oleato es capaz de reducir la expresin de MCP-1 e ICAM-1 y au-
mentar la expresin de eNOS inducida por citoquinas proinflamatorias en ECs por qRT-PCR. Adems, nuestros resultados demuestran
tambin que el oleato reduce la proliferacin inducida por TNF-a,
angiotensina II o palmitato, adems de disminuir la apoptosis inducida por el TNF-a o la tapsigargina en VSMCs. Finalmente, el oleato
tambin fue capaz de reducir los niveles proteicos de PAI-1 inducidos por el TNF-a en clulas de msculo liso vascular a travs de la
reduccin de la activacin de NF-kB.
Conclusiones: Nuestros resultados sugieren un papel diferencial
entre el oleato y el palmitato a nivel cardiovascular y aportan nuevos datos que soportan el papel protector del oleato como principal
componente lipdico del aceite de oliva virgen, clave en la dieta
mediterrnea. As, el oleato protege frente a la resistencia cardiovascular a la insulina, mejora la disfuncin y activacin endotelial
y finalmente, reduce la proliferacin y apoptosis de las VSMCs contribuyendo a mejorar el proceso aterotrombtico y su estabilidad.
2. DIMORFISMO SEXUAL EN LA PROGRAMACIN FETAL

DE LA HIPERTENSIN EN LA RATA. ESTUDIO
DEL REMODELADO DE LA AORTA AL DESTETE
Y EN LA EDAD ADULTA
P. Gutirrez1, P. Rodrguez1, D. Ramiro1, A.L. Lpez de Pablo1,
P. Prachaney3, M.C. Gonzlez1, J. Regadera2 y S.M. Arribas1
Departamento de Fisiologa; 2Departamento de Anatoma,
Histologa y Neurociencia; 3Department of Anatomy.
1
Introduccin: El estrs durante la etapa fetal -por desnutricin,

hipoxia, inadecuada placentacin, entre otros- es un factor de riesgo del desarrollo de hipertensin en el adulto, fenmeno conocido
como programacin fetal. Este incremento de la presin arterial ha
sido asociado con alteraciones vasculares estructurales o funcionales y es menos acentuado en hembras. Sin embargo, no se conoce
si existe dimorfismo sexual en las alteraciones vasculares ni si se
manifiesta en etapas tempranas del desarrollo. El objetivo del presente trabajo es estudiar si la programacin fetal induce alteraciones en la estructura vascular en la etapa pre-pber que puedan
justificar las diferencias en el desarrollo de hipertensin entre machos y hembras.
1889-1837/$ - see front matter 2015 SEHLELHA. Publicado por Elsevier Espaa, S.L.U. Todos los derechos reservados
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20.a Reunin Nacional Sociedad Espaola de Hipertensin-Liga Espaola para la Lucha contra la Hipertensin Arterial
Mtodos: Se utiliz un modelo experimental de programacin

fetal en rata Sprague-Dawley. Las ratas gestantes fueron alimentadas con dieta estndar ad libitum (Control, C) o con un 50% de la
ingesta de las ratas C durante la segunda mitad de la gestacin
(Restringidas, R). Cada camada se ajust a 12 individuos que se
dividieron en dos grupos (3 machos y 3 hembras), uno para el estudio a los 21 das y otro para su estudio a los 6 meses de edad. La
presin arterial sistlica y diastlica (PAS, PAD) se midi bajo analgesia con medetomidina (0,25 mg/kg) y anestesia con ketamina
(0,75 mg/kg) mediante un catter insertado en la arteria ilaca. La
estructura de la arteria aorta se estudi en anillos y secciones longitudinales teidos con el colorante nuclear DAPI, mediante microscopa confocal de fluorescencia. Para analizar la estructura de
la aorta se midieron: el dimetro interno, el grosor de la capa media y de la adventicia y el nmero de clulas de la adventicia, calculndose el rea de la seccin de corte (ASC) y la densidad celular.
Resultados: A los 21 das de edad, las ratas R en comparacin
con las C presentaron: 1) valores de PAS y PAD similares; 2) valores
similares de dimetro interno; 3) valores similares de grosor de la
media; 4) valores similares de grosor de la adventicia, pero menor
densidad de clulas; 5) ninguno de los parmetros estudiados present diferencias significativas entre machos y hembras. A los 6
meses de edad se observ: 1) valores de PAS y PAD significativamente mayores en machos R con respecto a C y similares entre hembras
R y C; 2) dimetro interno de la aorta similar entre machos R y C,
pero mayor dimetro en hembras R que en las C; 3) mayor grosor y
ASC de la media, tanto en machos como en hembras; 4) mayor
grosor y similar densidad de clulas de la adventicia, tanto en machos como en hembras.
Conclusiones: La desnutricin fetal programa la hipertensin en
la edad adulta slo en los machos y se presenta asociada a remodelado hipertrfico de la aorta sin cambios en el dimetro interno. El
remodelado hipertrfico ourtward de la aorta que presentan las
hembras R en la edad adulta puede contribuir a que no desarrollen
hipertensin. Este dimorfismo sexual puede estar asociado, entre
otros factores, con el efecto protector de los estrgenos.
3. FACTORES MOLECULARES IMPLICADOS EN EL EFECTO

HIPOLIPEMIANTE Y DE SENSIBILIZACIN A LA INSULINA
DE UN EXTRACTO DE JENGIBRE EN RATAS
CON SOBREPESO
A. Galiana, M. Valero-Muoz, B. Martn-Fernndez, S. Ballesteros,
M. Klett-Mingo, M.B. Ruiz-Roso, V. Lahera y N. de las Heras
Departamento de Fisiologa, Facultad de Medicina, Universidad
Complutense de Madrid.
Objetivo: El objetivo del estudio fue evaluar los factores moleculares implicados en los efectos de un extracto de jengibre sobre
el perfil lipdico y la sensibilidad a la insulina en el hgado de ratas
con sobrepeso inducido por una dieta grasa.
Mtodos: Se utilizaron ratas Wistar macho divididas en tres grupos: i) ratas alimentadas con dieta estndar como grupo control
(C); ii) ratas alimentadas con dieta alta en grasa (33,5% de grasa
saturada) como grupo con sobrepeso (SBP); y iii) ratas alimentadas
con dieta alta en grasa tratadas con extracto de jengibre (Zingiber
officinale Roscoe) (SBP+JEN, 250 mg Kg-1 da-1) en el agua de bebida. El periodo de evolucin y tratamiento fue de 5 semanas. Se
determinaron las concentraciones plasmticas de glucosa, insulina,
colesterol total (Col-T), triglicridos (TG), lipoprotena de baja
densidad (LDL), leptina y adiponectina. En el hgado se valor la
expresin proteica de: el transportador de glucosa 2 (GLUT-2); glicerol 3 fosfato aciltransferasa (GPAT, enzima limitante de la sntesis de TG); colesterol 7 alfa hidroxilasa (CYP7A1, enzima limitante
de la sntesis de cidos biliares a partir de colesterol); los receptores activados por proliferadores peroxisomales (PPARa y PPARg), el
receptor X heptico (LXR), la protena de unin al elemento de

respuesta a esteroles (SREBP1c), el factor de crecimiento de tejido
conectivo (CTGF) y colgeno tipo 1.
Resultados: El peso corporal fue mayor (p < 0,05) en las ratas
SBP que en C, y el tratamiento con JEN lo redujo (p < 0,05). Los
niveles plasmticos de glucosa e insulina aumentaron en las ratas
SBP respecto a las ratas C (p < 0,05), y disminuyeron (p < 0,05) en
las ratas SBP tratadas con jengibre (SBP+JEN). Los niveles plasmticos de Col-T y TG fueron mayores (p < 0,05) en las ratas SBP que
en las C, y el tratamiento con JEN los redujo (p < 0,05). Las concentraciones plasmticas de adiponectina fueron comparables en las
ratas C y SBP, y las de leptina fueron mayores (p < 0,05) en las ratas
SBP que en las C. El tratamiento con el extracto de JEN aument
los niveles de adiponectina y redujo los de leptina (p < 0,05). La
expresin proteica en hgado de GPAT (fue mayor (p < 0,01) en ratas SBP que en C, y el tratamiento con JEN redujo (p < 0,001) su
expresin. La expresin de CYP7A1 heptica fue comparable en los
tres grupos. La expresin de PPARa, PPARg y GLUT-2 fue menor (p
< 0,05) en ratas SBP que en C, y el tratamiento con JEN aument la
expresin de estos tres parmetros (p < 0,05). La expresin de LXR
y SREBP1c aument en las ratas SBP respecto a las C, y el tratamiento con JEN lo normaliz. La expresin heptica de colgeno
tipo I y CTGF fue mayor (p < 0,01) en SBP y disminuy (p < 0,01) en
las ratas SBP+JEN.
Conclusiones: La reduccin de las concentraciones plasmticas
de lpidos y la sensibilizacin a la insulina del extracto de jengibre
en las ratas con SBP, podran atribuirse al menos en parte, a los
efectos beneficiosos ejercidos sobre los factores hepticos implicados en el metabolismo de la glucosa y los lpidos. La mejora en los
niveles de leptina, adiponectina, PPARa, PPARg, LXR, SREBP1c,
CTGF y colgeno tipo 1 parecen ser cruciales en los efectos del
extracto de jengibre. Por tanto, la utilizacin del extracto de jengibre podra considerarse una estrategia teraputica alternativa
para el tratamiento de las alteraciones metablicas y hepticas
asociadas al sobrepeso.
El estudio fue financiado por Biosearch, S.A. Proyecto PRONAOS
otorgado por el centro para el Desarrollo Tecnolgico Industrial
(CDTI) a travs del programa CENIT, iniciativa Ingenio 2010 y por
una subvencin de la Comisin Interministerial de Ciencia y Tecnologa de Espaa (SAF2011-30396).
4. EFECTO MODULADOR DE LA L-CARNITINA

SOBRE LA ACTIVACIN DE LA NADPH OXIDASA
POR ENDOGLINA SOLUBLE EN CLULAS ENDOTELIALES
DE LA VENA UMBILICAL HUMANA
C.M. Vzquez1, C. Martnez2, R. Fernndez2, A.J. Blanca1,
M.V. Ruz1, J.L. Miguel1, A. Leiva3, R. Salsoso3, L. Sobreva3
y A. Mate1
Departamento de Fisiologa, Facultad de Farmacia, Universidad
de Sevilla. 2Departamento de Ginecologa y Obstetricia, Hospital
Quirn Sagrado Corazn. 3Laboratorio de Fisiologa Molecular y
Celular, Divisin de Obstetricia y Ginecologa, Facultad de
Medicina, Pontificia Universidad Catlica de Chile.
1
Objetivo: La preeclampsia (PE) es una alteracin hipertensiva

del embarazo que cursa con un deficiente remodelado de las arterias uterinas durante el desarrollo placentario y con la aparicin de
disfuncin endotelial en la unidad materno-fetal. Existen diversos
mecanismos relacionados con la patogenia y fisiopatologa de la
disfuncin endotelial subyacente en la PE. Entre ellos destacan el
aumento de estrs oxidativo mediado por la enzima NADPH oxidasa, as como la liberacin de factores antiangiognicos que inhiben
la produccin de xido ntrico, como el soluble fms-like tyrosine
kinase-1 (sFlt-1) y la endoglina soluble (sEng). Estudios previos de
nuestro grupo han mostrado que la L-carnitina (LC) tiene propieda-
des antioxidantes en modelos animales de hipertensin arterial,
modulando la funcin de la enzima NADPH oxidasa. Puesto que se
han descrito tambin alteraciones en el metabolismo de la LC en
mujeres preeclmpticas, el objetivo de este trabajo es evaluar la
actividad y expresin de las diferentes isoformas de la enzima
NADPH oxidasa, en clulas endoteliales de vena umbilical humana
(HUVEC, human umbilical vein endothelial cells) incubadas con
sEng, estudiando su modulacin por parte de la LC y las rutas de
sealizacin implicadas.
Mtodos: Las HUVEC se han obtenido a partir de cordones umbilicales procedentes de embarazos normales, mediante el empleo
de colagenasa. Las clulas se han cultivado en medio M-199 suplementado con 20% de suero y 1% de penicilina/estreptomicina.
Cuando alcanzan confluencia, se incuban en presencia de medio
M-199 mnimo (4% suero) con sEng (10 ng/mL, 24h) y, en su caso,
L-carnitina (1 mM, 24h + 30 min. preincubacin). Se han realizado
medidas de actividad NADPH oxidasa mediante quimioluminiscencia y utilizando lucigenina (5 mM), NADPH (0,1 mM) y homogeneizados de HUVEC (en cantidad equivalente 30 mg de protena), en
presencia y ausencia de inhibidores especficos de distintas fuentes
productoras de anin superxido. La expresin gnica y proteica de
las subunidades de la NADPH oxidasa se ha evaluado por PCR a
tiempo real y Western blotting, respectivamente. Tambin se han
analizado las vas de sealizacin intracelulares implicadas en el
efecto de la sEng, mediante el empleo de inhibidores especficos.
Resultados: La produccin de anin superxido est aumentada
en el grupo de clulas incubadas con sEng. Esta alteracin se debe
a una mayor actividad y expresin de la enzima NADPH oxidasa. La
LC revierte completamente estos parmetros. Adems, la protena
quinasa C (PKC) parece estar involucrada en la sobreproduccin de
anin superxido inducida por sEng.
Conclusiones: La endoglina soluble (sEng, factor antiangiognico relacionado con la fisiopatologa de la preeclampsia) produce un
aumento de estrs oxidativo, a travs de la activacin de la enzima
NADPH oxidasa, en HUVEC procedentes de embarazos sanos. La
preincubacin con L-carnitina previene esta alteracin, lo que podra justificar el uso de este producto en la investigacin de la fisiopatologa y teraputica de la preeclampsia.
Agradecimientos: Consejera de Igualdad, Salud y Polticas Sociales, Junta de Andaluca (PI-0060/2012).
5. EL EJERCICIO AERBICO MODERADO PREVIENE

LAS ALTERACIONES EN LA FUNCIN DE LA INERVACIN
PERIVASCULAR PRODUCIDA POR UNA DIETA RICA
EN GRASA EN ARTERIA MESENTRICA DE RATA
E. Sastre1, L. Caracuel1, N. de las Heras2, G. Balfagn1
y J. Blanco-Rivero1
Autnoma de Madrid. 2Departamento de Fisiologa, Facultad de
Medicina, Universidad Complutense de Madrid.
1
Introduccin: El objetivo fue analizar si la obesidad inducida por

una dieta rica en grasa se asocia con cambios en la funcin de la
inervacin perivascular mesentrica, los mecanismos implicados
as como la posibilidad de evitar estos efectos a travs del ejercicio
aerbico moderado sobre esos cambios.
Mtodos: Se utilizaron ratas Wistar macho (250-300g) divididos
en tres grupos: (i) ratas alimentadas con dieta estndar (grupo control); (ii) ratas alimentadas con dieta rica en grasa (33,5% grasa)
durante 8 semanas (grupo HFD); (iii) ratas HFD simultneamente
sometidas a entrenamiento aerbico moderado (8 semanas, 5 veces a la semana durante 50 min). Se extrajo la arteria mesentrica
superior y se analiz la vasoconstriccin inducida por estimulacin
elctrica (EE) en presencia del antagonista a-adrenrgico, fentolamina; del antagonista purinrgico, suramina; y del inhibidor ines-
pecfico de la xido ntrico sintasa (NOS), N(v) nitro-L-arginine

methyl ester (L-NAME). Se analizaron las respuesta vasomotoras a
noradrenalina (NA) y al donante de xido ntrico (NO) DEA-NO. Se
valor la liberacin inducida por EE de NA, ATP y NO, as como la
expresin de la NOS neuronal (nNOS) y la forma fosforilada (PnNOS).
Resultados: La vasoconstriccin inducida por EE fue mayor en el
grupo HFD en comparacin con el control. La fentolamina redujo la
contraccin inducida por EE en mayor grado en el grupo HFD, mientras que la suramina nicamente disminuy la respuesta inducida
por EE en el grupo control. La liberacin de NA aument y la de ATP
disminuy en el grupo HFD. El L-NAME increment la respuesta inducida por EE en mayor medida en el grupo control. La expresin
de nNOS y P-nNOS disminuy en el grupo HDF en comparacin con
el control. Ninguno de los cambios observados en el grupo HFD se
observaron en el grupo HFD sometido a entrenamiento. Las respuestas vasomotoras a NA y DEA-NO fueron similares en todos los
grupos experimentales.
Conclusiones: El incremento en la liberacin de NA y el descenso
en la liberacin de NO de origen neuronal, contribuyen al incremento en la respuesta vasoconstrictora inducida por EE en arteria
mesentrica de ratas HFD. El ejercicio fsico moderado previene
todos esos cambios, indicando que el entrenamiento fsico evita las
alteraciones en la funcin de la inervacin perivascular producidas
por una dieta rica en grasa.
Subvencionado por Fundacin Mapfre y Ministerio de Economa y
Competitividad (SAF2012-38530).
6. PAPEL DE LA GALECTINA-3 EN EL REMODELADO

CARDIACO ASOCIADO A LA HIPERTENSIN EN RATA
E. Martnez-Martnez1, M. Miana2, M. Luaces3, F. Islas3,
R. Jurado-Lpez2, E. Rousseaus4, A. Fernndez1, P. Rossignol4,
V. Cachofeiro2 y N. Lpez1
Navarrabiomed-Fundacin Miguel Servet. 2Universidad
Complutense de Madrid. 3Hospital Clnico San Carlos. 4Universit
de Lorraine And CHU de Nancy.
1
Objetivo: La hipertensin arterial (HTA) predispone a la aparicin de cambios tanto en la estructura como en la funcin cardiaca, siendo considerada como una de las principales causas que favorecen la aparicin de insuficiencia cardiaca. En los ltimos aos,
la galectina-3 (Gal-3) ha emergido como un mediador de dao cardiaco en diferentes modelos de insuficiencia cardiaca. El objetivo
de este estudio fue estudiar los efectos de un inhibidor de la actividad de la Gal-3 (el MCP), sobre las alteraciones cardiacas en un
modelo de hipertensin en rata, as como los posibles mecanismos
involucrados.
Mtodos: Se utilizaron 4 grupos de ratas macho: 1) Wistar-Kyoto
(WKY), 2) ratas espontneamente hipertensas (SHR), 3) WKY tratadas con MCP (100 mg/kg/da) en el agua de bebida, y 4) SHR tratadas con MCP. El tratamiento se mantuvo durante 6 semanas, en las
cuales se monitoriz la presin arterial. Al final del tratamiento, se
valor la funcin cardiaca mediante ecocardiografa. La fibrosis
miocrdica se cuantific mediante tincin con rojo Sirio, y la expresin proteica de mediadores de fibrosis e inflamacin (colgeno
I, TGF-b, CTGF, Gal-3, OPN y MCP-1) mediante RT-PCR y western
blot.
Resultados: El grupo de animales hipertensos mostr un aumento en los niveles de Gal-3 a nivel cardiaco, as como un aumento del
peso relativo del corazn respecto al grupo WKY. Los datos ecocardiogrficos muestran presencia de hipertrofia concntrica en el
grupo SHR, acompaada de una hipertrofia de cardiomiocitos a nivel histolgico. No se observaron diferencias en la funcin sistlica
en ninguno de los grupos estudiados. El tratamiento con MCP no
tuvo ningn efecto sobre la funcin, la histologa o los marcadores
de fibrosis e inflamacin en las ratas WKY. En las ratas SHR, el tratamiento con MCP no modific la presin arterial ni la hipertrofia
cardiaca. Sin embargo, la inhibicin de la Gal-3 previno la fibrosis
intersticial observada en el grupo SHR. Junto con esta disminucin
en los niveles de colgeno total, el bloqueo de Gal-3 redujo los niveles cardacos de colgeno tipo I, as como distintos mediadores
profibrticos (TGF-b y CTGF) y marcadores proinflamatorios (OPN y
MCP-1) que estaban aumentados en los animales hipertensos.
Conclusiones: Los datos muestran que el aumento de los niveles
cardiacos de Gal-3 en un modelo de hipertensin se acompaa con
un aumento de la fibrosis miocrdica, la cual podra predisponer a
alteraciones estructurales y funcionales. El bloqueo de Gal-3 inhibe
especficamente la fibrosis miocrdica en los animales hipertensos,
independientemente de los niveles de presin arterial. La Gal-3
emerge como una nueva diana teraputica en el proceso fibrtico
asociado a patologas cardiacas.
cin de factores como P100/p52, IKK-a o rel B, y de citoquinas reguladas exclusivamente por NFkB2, como CCL19 y CCL21. Estos resultados se han confirmado in vitro en clulas tubuloepiteliales
estimuladas con TWEAK en presencia o no de Paricalcitol.
Conclusiones: Nuestros resultados muestran que la modulacin
de la va alternativa de NFKB es un nuevo mecanismo de las acciones anti-inflamatorias del anlogo de la vitamina D paricalcitol en
el dao renal.
8. INVESTIGACIN DEL PAPEL DE LA QUIMIOQUINA CCL-8

EN EL DAO RENAL Y VASCULAR ASOCIADO A
INFLAMACIN
M. Orejudo1, R. Rodrigues1, A.B. Garca1, M. Alique1, T. Belln2,
J. Egido1, R. Selgas2 y M. Ruiz1
1
2
7. PARICALCITOL PRESENTA EFECTOS

ANTIINFLAMATORIOS A TRAVS DE LA MODULACIN
DE LA VA NO CLSICA DE NFKB EN ENFERMEDADES
RENALES EXPERIMENTALES
S. Rayego1, J.L. Morgado1, A.B. Sanz2, J.M. Valdivielso3, J. Egido2,
A. Ortiz2 y M. Ruiz1
IIS Fundacin Jimnez Daz, Universidad Autnoma de Madrid.
IIS Fundacin Jimnez Daz. 3Departamento de Nefrologa
Experimental, Universidad de Lleida, Institut de Recerca
Biomdica de Lleida.
1
2
Objetivo: La enfermedad renal crnica (ERC) est caracterizada

por una prdida progresiva de la funcin renal que frecuentemente
deriva en una enfermedad renal terminal y una elevada mortalidad. La deficiencia en vitamina D y sus metabolitos activos es una
situacin comn en la patogenia de la ERC. Datos en modelos experimentales confirman el efecto de la vitamina D ms all del metabolismo mineral y seo, demostrando que la vitamina D y sus anlogos pueden revertir la progresin de la ERC a travs de la
prevencin de la proliferacin, inflamacin y fibrosis. Sin embargo,
los mecanismos implicados en sus acciones antiinflamatorias no son
bien conocidos. Estudios previos han demostrado la contribucin de
la va clsica de NFkB1 en el dao renal, sin embargo apenas hay
datos sobre la va alternativa NFkB2. Nuestro objetivo ha sido evaluar en diferentes modelos experimentales de dao renal si el efecto antiinflamatorio de paricalcitol es debido a la modulacin de la
va clsica NFkB1 o de su alternativa NFkB2.
Mtodos: El efecto de paricalcitol in vivo fue estudiado en distintos modelos de dao renal en ratones C57BL6. El efecto de
TWEAK (citoquina inductora de apoptosis semejante al factor de
necrosis tumoral) fue evaluado 24 horas despus de la inyeccin
intraperitoneal de TWEAK (0,5 mg/por ratn). El modelo de obstruccin unilateral del urter (UUO) consiste en la ligacin del urter izquierdo y el corte del mismo para evitar infecciones del tracto urinario. En ambos modelos, los animales fueron tratados con un
anlogo de la vitamina D (paricalcitol) (25 ug/kg/da) comenzando
48 horas antes de la intervencin. In vitro se realizaron experimentos en clulas tubulares, ya que se ha descrito que expresan los
componentes de la va alternativa NFkB2.
Resultados: En ambos modelos experimentales (UUO y dao renal por TWEAK) el tratamiento con Paricalcitol disminuy la respuesta inflamatoria renal, determinada por la disminucin de infiltrado inflamatorio y de la expresin de genes proinflamatorios
(IL-6, MCP-1; RANTES), como era esperado. Sorprendentemente
paricalcitol no modific la activacin renal de la va clsica de
NFkB1 (evaluada por cambios en niveles de fosforilacin de IkB-a y
translocacin nuclear de p65). Sin embargo, en ambos modelos se
inhibi la activacin de la va de NFkB2 caracterizada por la regula-
Instituto de Investigacin Sanitaria Fundacin Jimnez Daz.

Hospital Universitario La Paz-Idipaz.
Objetivo: La inflamacin crnica es una caracterstica comn a

las enfermedades renales y de sus complicaciones cardiovasculares. Las protenas quimiotcticas de monocitos (MCPs) engloban
una de las principales familias de citoquinas con motivo C-C, implicadas en la regulacin de la respuesta inflamatoria. En estas protenas se ha descrito diferencia de homologa entre especies, lo
que complica el abordaje de su estudio. La isoforma murina de
MCP-2, tambin denominada CCL8, es una protena quimioatrayente para monocitos, clulas T activadas y clulas dendrticas. La
isoforma humana de CCL8 se une al receptor CCR2, mientras que la
murina utiliza CCR8. Nuestro objetivo ha sido estudiar si CCL8 puede contribuir al dao vascular y renal.
Mtodos: Se cuantific la expresin gnica de CCL8 y CCR8 en
modelos animales de inflamacin; obstruccin unilateral de urter
de 5 das y administracin sistmica de Angiotensina II (100 mg/kg/
min subcutneo, estudio a 3, 7 y 14 das). Para evaluar la modulacin de la respuesta inmune, se bloque la respuesta Th17 (con un
anticuerpo neutralizante de su citoquina efectora IL-17A). In vitro
se utilizaron clulas endoteliales de ratn (lnea Mile Sven-1). Se
realiz un modelo de administracin de CCL8 (dosis 550 ng/g ratn;
i.p), estudindose a las 48 horas. Adems, un grupo se trat con el
inhibidor de NF-kB parthenolide (3,5 mg/g, i.p diario, 24 horas antes). La expresin gnica se evalu por PCR cuantitativa.
Resultados: En todos los modelos animales de inflamacin evaluados la expresin gnica tisular de CCL8 aumenta cuando se produce el dao, comparado con el grupo control respectivo. Adems,
este aumento se revierte con el bloqueo de IL-17A. En el modelo de
administracin sistmica de angiotensina II detectamos un aumento de la expresin gnica del receptor CCR8 con respecto al grupo
control. Experimentos in vitro realizados en clulas endoteliales
demostraron que CCL8 induce la expresin de algunos genes proinflamatorios y profibrticos. Hemos observado que la dosis de 100
ng/ml produce su mayor efecto proinflamatorio, observado a tiempos cortos (3-6 horas). In vitro observamos tambin que la expresin gnica de CCR8 es mnima en estas clulas, pero en presencia
de CCL8 los niveles de RNA mensajero aumentan exponencialmente. Finalmente, en el modelo de administracin sistmica de CCL8
se analiz la expresin gnica de los riones de los ratones y se
observ un incremento en los niveles de mRNA de MCP-1, IL-6,
ICAM-1, osteopontina, TNF-a, el receptor CCR8 y el marcador de
dao N-GAL. El bloqueo de NF-kB, utilizando parthenolide, disminuy la sobreexpresin de estos genes causada por CCL8, a niveles
de los ratones control.
Conclusiones: In vitro e in vivo CCL8 regula genes proinflamatorios va NF-kB. En modelos de dao vascular y renal aumenta el eje
CCL8/CCR8 asociado con inflamacin indicando su importancia en
estas patologas.
9. NOR-1 PREVIENE LA ACTIVACIN DE NFKB Y MODULA
LA RESPUESTA INFLAMATORIA DE LAS CLULAS
MUSCULARES LISAS VASCULARES
I. Mart-Pmies1, R. Rodrguez-Calvo1, O. Calvayrac1, J. Alonso1,
B. Ferrn1, S. Aguil1, J. Crespo1, A. Rodrguez-Sinovas2,
C. Rodrguez1 y J. Martnez-Gonzlez1
Centro de Investigacin Cardiovascular (CSIC-ICCC). 2Hospital
Universitario e Instituto de Investigacin del Vall dHebron, UAB.
1
Objetivo: Estudios recientes han evidenciado el papel de los receptores NR4A en la aterosclerosis y en la inflamacin. Sin embargo, en la proliferacin de las clulas musculares lisas vasculares
(CMLV), NOR-1 (NR4A3) ejerce efectos antagnicos a los de Nur77
(NR4A1) y Nurr1 (NR4A2). El objetivo de este estudio fue analizar
el efecto de NOR-1 en la respuesta inflamatoria en las CMLV.
Mtodos: El estudio se llev a cabo en CMLV humanas en cultivo
transducidas o no con lentivirus para sobre-expresar NOR-1, y en
aorta de ratones transgnicos que sobre-expresan NOR-1 en las
CMLV (TgNOR-1). La expresin gnica se analiz mediante PCR a
tiempo real, Western-blot e inmunocitoqumica. La activacin de
vas de sealizacin se analiz mediante Western-blot. Para determinar la actividad transcripcional se realizaron transfecciones
transitorias y ensayos de retardo de la movilidad electrofortica.
Resultados: Se evalu el efecto de la ganancia de funcin de
NOR-1 en la respuesta de las CMLV a estmulos inflamatorios. En
CMLV humanas, la sobre-expresin de NOR-1 redujo la expresin de
citoquinas (IL-1b, IL-6 y IL-8) y quimiocinas (MCP-1 y CCL20) inducidas por el tratamiento de LPS. Se obtuvieron efectos similares en
las clulas estimuladas con TNFa o LDL oxidadas. Por el contrario,
la inhibicin de NOR-1 mediante siRNA aument la expresin de
dichos mediadores pro-inflamatorios. En aortas de ratones transgnicos que sobre-expresan NOR-1 humano en las CMLV, el aumento
de expresin de citoquinas y quimiocinas en respuesta a tratamiento con LPS fue inferior al de animales control. Resultados similares
se obtuvieron en las CMLV de los animales transgnicos. NOR-1 disminuyo la actividad transcripcional de promotores regulables por
NFkBy la unin de NFkB a su elemento de respuesta. Adems, NOR1 impidi la activacin de la va de NFkB a travs de la disminucin
de la fosforilacin y degradacin de IkBa y de la inhibicin de la
fosforilacin y posterior translocacin de p65 en el ncleo. Estos
efectos se asociaron con una menor fosforilacin de las vas de sealizacin implicadas en la activacin de NFkB (ERK1/2, p38 MAPK
y JNK). Estos resultados se confirmaron in vivo en aorta de los animales TgNOR-1 tratados con LPS.
Conclusiones: Nuestros resultados indican que NOR1 acta como
modulador negativo de la respuesta inflamatoria inducida por estmulos inflamatorios agudos a nivel vascular.
10. REEXPRESIN DEL GEN DE DESARROLLO GREMLIN

EN SITUACIONES DE DAO VASCULAR ASOCIADO
A LA PRESENCIA DE FIBROSIS
R. Rodrigues1, A.B. Garca1, M. Orejudo1, C. Lavoz1, S. Mezzano3,
J. Egido1, R. Selgas2 y M. Ruiz1
IIS Fundacin Jimnez Daz. 2Unidad de Investigacin, Servicio de
Nefrologa, Hospital Universitario de la Paz. 3Unidad de
Nefrologa, Instituto de Medicina, Facultad de Medicina,
Universidad Austral de Chile.
1
Introduccin: Gremlin es un miembro de la superfamilia de nudo

de cistena que incluye al factor TGF-b. Gremlin fue identificado
como uno de los genes de desarrollo expresado en clulas mesangiales expuestas a altas concentraciones de glucosa. Recientemente hemos descrito que Gremlin es un mediador de las acciones profibrticas de TGF-b en clulas renales, actuando a travs de la ruta
de sealizacin de Smad, y se ha sugerido que puede ser un media-
dor del dao renal en la nefropata diabtica. En clulas endoteliales, Gremlin induce migracin, invasin y angiognesis mediante su
unin al receptor VEGFR2, pero apenas hay datos a nivel vascular.
Objetivo: Investigar si Gremlin est expresado en situaciones de
dao vascular y su posible papel en la regulacin de la fibrosis vascular.
Mtodos: Modelo de restenosis vascular en arteria femoral
acompaado de infusin sistmica de angiotensina II (AngII) (minibombas osmticas subcutneas 1.000 ng/kg/min) durante 2 semanas. Los estudios in vitro se realizaron en cultivo primario de clulas vasculares de msculo liso de ratn obtenidas por el mtodo de
la colagenasa. Los resultados fueron analizados por diferentes tcnicas (PCR en tiempo real, Western blot e inmunohistoqumica).
Resultados: En la aorta de los ratones infundidos con AngII se indujo un aumento en la expresin gnica de Gremlin con respecto al
grupo control. El aumento en la expresin de Gremlin se correlacion
con la expresin gnica de otros factores profibrticos y protenas de
matriz extracelular. Mediante tcnicas de inmunohistoqumica observamos la aparicin de tincin positiva para Gremlin localizada principalmente en clulas vasculares de msculo liso, mientras que no encontramos tincin en las aortas de los animales control. El aumento
en la sntesis vascular de Gremlin en respuesta a AngII se correlacion
con la presencia de fibrosis, determinado por tincin de fibronectina.
En respuesta al dao en arteria femoral se observ restenosis vascular, caracterizada por aumento del grosor de la pared y acumulacin
de matriz extracelular. En la zona de lesin detectamos tincin positiva para Gremlin, en diferentes tipos celulares. En clulas de msculo liso vascular provenientes de cultivo primario la estimulacin con
Gremlin durante 48 horas indujo un aumento en la liberacin de protenas de matriz extracelular, fibronectina y colgeno.
Conclusiones: Estos datos sugieren que Gremlin se expresa en
situaciones de dao vascular experimental, asociado a la presencia
de fibrosis. Futuros estudios son necesarios para investigar si Gremlin puede ser considerado como una diana teraputica antifibrtica en enfermedades cardiovasculares.
11. LA ACTIVIDAD NADPH OXIDASA EN CLULAS

FAGOCTICAS PERIFRICAS ES DEBIDA EXCLUSIVAMENTE
A LA ISOFORMA 2 DE LA NADPH OXIDASA (NOX2)
P. Saldanha1, A. Pejenaute1, O. Beloqui2, M. Fortn Landecho2,
A. Fortuo3 y G. Zalba1
Departamento de Bioqumica y Gentica, Universidad de
Navarra. 2Departamento de Medicina Interna, Clnica Universidad
de Navarra. 3rea de Ciencias Cardiovasculares, CIMA,
Universidad de Navarra.
1
Objetivo: El estrs oxidativo asociado a la activacin de la familia de las NADPH oxidasas (NOXes) se asocia con la la hipertensin
arterial y la enfermedad vascular. Los cambios en la actividad
NADPH oxidasa obedecen a variaciones en la regulacin y/o expresin de la isoforma NOX2. Recientemente, se ha descrito que NOX4
puede aumentar su expresin y actividad en macrfagos, en la aterosclerosis humana. En este estudio pretendemos analizar el perfil
de expresin de las NOXes en las clulas fagocticas circulantes.
Mtodos: El estudio se llev a cabo en una poblacin de individuos asintomticos (n = 220), y en una poblacin de pacientes con
enfermedad arterial coronaria (N = 20). En ambas poblaciones se
determin la actividad NADPH oxidasa en las clulas mononucleadas de sangre perifrica, por luminiscencia. As mismo, se determinaron los niveles de mRNA de las isoformas NOX2, NOX4 y NOX5, en
clulas mononucleadas de sangre perifrica, mediante PCR en
tiempo real. Se determinaron los niveles de LDL oxidadas y de longitud de telmeros, mediante ELISA y PCR, respectivamente. Se
realizaron estudios de asociacin de estos parmetros, entre si, y
con las variables clnicas analizadas.
Resultados: En la poblacin asintomtica, los niveles de expresin ms altos entre las NOXes analizadas correspondieron a los de
la isoforma NOX2, siendo casi indetectables los niveles de expresin de NOX4 y NOX5. En esta poblacin, la actividad NADPH oxidasa correlacionaba positivamente con los niveles de expresin de la
NOX2 y con los valores de presin arterial sistlica. De hecho, cuando analizbamos la poblacin asintomtica encontramos que la actividad NADPH oxidasa y la expresin de NOX2 eran mximas en los
pacientes con hipertensin arterial, no encontrando diferencias
para NOX4 ni NOX5. Como era de esperar, los sujetos hipertensos
comparados con los normotensos exhiban niveles ms altos de LDL
oxidadas, y longitudes ms cortas de los telmeros. En la poblacin
sintomtica, la actividad NADPH oxidasa y la expresin de NOX2
eran significativamente ms altas que las encontradas en la poblacin asintomtica. Los niveles de expresin de NOX4 y NOX5 fueron
similares, casi indetectables, a los descritos en la poblacin asintomtica. Finalmente, en la poblacin sintomtica, los niveles de LDL
oxidadas y la longitud de los telmeros fueron mximos y mnimos,
respectivamente.
Conclusiones: La actividad NADPH oxidasa determinada en clulas fagocticas de sangre perifrica est determinada exclusivamente por el grado de activacin y los niveles de expresin de
NOX2, en situaciones fisiolgicas, siendo despreciable la participacin en esta actividad de las isoformas NOX4 y NOX5.
12. EFECTO DEL RESVERATROL SOBRE MARCADORES

OXIDATIVOS E INFLAMATORIOS EN CORAZN DE RATA
EN RELACIN AL ENVEJECIMIENTO
R. Torregrosa1, M. Miana1, E. Vara2, J.A. Fernndez1 y R. Gredilla1
Departamento de Fisiologa; 2Departamento de Bioqumica y
Biologa Molecular, Facultad de Medicina, Universidad
1
Diferentes estudios apoyan que varios aspectos del estilo de

vida, incluyendo la dieta o la exposicin a txicos ambientales, son
importantes factores de riesgo en el desarrollo de enfermedades
cardiovasculares, tales como cardiopata isqumica, insuficiencia
cardiaca, infarto e hipertensin. Sin embargo, el factor de riesgo
ms importante en la aparicin de patologas asociadas al sistema
cardiovascular es el envejecimiento. As, el determinante ms importante de la salud cardiovascular de una persona es su propia
edad. Debido al incremento en la esperanza de vida de la poblacin
en pases occidentales, es de gran relevancia entender los mecanismos que subyacen al desarrollo de tales patologas durante el
envejecimiento. Dos de los mecanismos que se consideran determinantes del envejecimiento son los procesos oxidativos e inflamatorios, que parecen tambin jugar un papel determinante en el desarrollo de enfermedades cardiovasculares asociadas al mismo. En la
actualidad varias rutas de sealizacin se consideran relevantes en
el desarrollo de enfermedades cardiovasculares durante el envejecimiento, entre ellas, las mediadas por el sistema SIRT1-AMPK o
por mTOR. La activacin o inactivacin, respectivamente, de estas
dos vas han demostrado tener efectos beneficios y protectores a
nivel cardiovascular. Una de las maneras clsicas de activar la va
de sealizacin por sirtuinas es la administracin del fitoestrgeno
resveratrol. El objetivo del presente estudio fue analizar si los
efectos protectores a nivel cardiovascular del resveratrol estn, al
menos en parte, mediados por cambios en los procesos oxidativos
e inflamatorios asociados al envejecimiento. Para ello se trat con
resveratrol (10 mg/Kg/da) durante 10 semanas a animales viejos
(22 meses) y se analiz el efecto del envejecimiento (animales jvenes de 2 meses versus animales viejos de 24 meses) y del tratamiento con resveratrol (animales de 24 meses tratados versus animales de 24 meses sin tratar) sobre los niveles de parmetros
oxidativos (HO1, HO2 e iNOS) e inflamatorios (INFgamma, TNFalfa
e IL-10). Los resultados mostraron que en corazn los niveles de

marcadores de estrs oxidativo y de inflamacin se incrementaron
con la edad. Adems, este aumento se asoci a unos mayores niveles de marcadores apoptticos (AIF, XIAP). Por otro lado, la administracin de resveratrol a animales de 22 meses redujo de manera
significativa los niveles de marcadores oxidativos, inflamatorios y
apoptticos, confirmando el papel cardioprotector del resveratrol
y la relevancia que este fitoestrgeno puede tener en el mantenimiento de la salud cardiovascular durante el envejecimiento.
13. LA INHIBICIN DEL RECEPTOR DE LA LIPOPROTENA

DE BAJA DENSIDAD TIPO 1 INDUCE DISFUNCIN
CARDIACA EN UN MODELO DE RATAS ESPONTNEAMENTE
HIPERTENSAS
A. Ortega1, L. Nasarre2, P. Muoz-Pacheco1, A. Fernndez-Cruz3,
L. Badimn2, V. Llorente2 y D. Gmez-Garre1
Laboratorio de Biologa Vascular, Hospital Clnico San Carlos.
Cardiovascular Research Center, CSIC-ICCC, IIB-Sant Pau.
3
Departamento de Medicina, Facultad de Medicina, UCM.
1
2
Introduccin: En la insuficiencia cardiaca (IC) se produce una alteracin del metabolismo energtico del corazn, el cual pasa de
utilizar glucosa y cidos grasos de cadena libre a utilizar principalmente glucosa, ocasionando una acumulacin de steres de colesterol y triglicridos en el miocardio. Numerosos estudios demuestran
que este incremento de lpidos favorece la aparicin de disfuncin
cardiaca y a la progresin de la IC. El principal responsable de la
acumulacin de steres de colesterol procedentes de las lipoprotenas es el receptor de la lipoprotena de baja densidad tipo 1 (LRP1),
cuyo papel en la arteriosclerosis ha sido ampliamente establecido.
Sin embargo, se desconoce su posible implicacin en la insuficiencia
cardiaca hipertensiva. El objetivo principal de este trabajo ha sido
analizar la relacin entre los niveles de LRP1 y de steres de colesterol en el miocardio y la funcin cardiaca en un modelo experimental de ratas espontneamente hipertensas (SHHF).
Mtodos: Utilizamos ratas SHHF de 2 meses de edad que se separaron en dos grupos: ratas no tratadas y ratas tratadas con la
combinacin de quinapril, (20 mg/kg/da), torasemida (3 mg/kg/
da) y carvedilol (3 mg/kg/da) (SHHF+TC). A todos los animales se
les realiz un seguimiento mediante eco-doppler hasta los 19 meses de edad. Como control, se utilizaron ratas Wistar normotensas
de la misma edad. En el momento del sacrificio de los animales
obtuvimos muestras de ventrculo izquierdo para el anlisis de la
expresin gnica y proteica utilizando ensayos de PCR a tiempo
real y Western blot, respectivamente, y para la cuantificacin de
los lpidos, que se realiz utilizando tcnicas de cromatografa en
capa fina tras la extraccin de los lpidos.
Resultados: En comparacin con las ratas wistar, las ratas SHHF
mostraron una mayor expresin de LRP1 (protena: 3,0 1,2 vs 1,2
0,2; P < 0,05) y 1,5-veces ms cantidad de steres de colesterol.
Los niveles de la protena de unin a elementos reguladores de
esterol 2 (SREBP-2) activa, factor de transcripcin que regula la
expresin de LRP1 negativamente, se encontraron significativamente reducidos (2,5 0,5 vs 25 10; p < 0,05). La fraccin de
eyeccin (marcador de disfuncin cardiaca) se asoci negativamente con los niveles de LRP1 (r = -0,886; p < 0,01) y de steres de
colesterol (r = -0,771; p < 0,05), y positivamente con los de SREBP-2
(r = 0,854; p < 0,01). El tratamiento farmacolgico de las ratas
SHHF durante 17 meses, normaliz la tensin arterial, atenu la
dilatacin del ventrculo izquierdo y mejor la funcin cardiaca.
Con respecto a las ratas SHHF sin tratamiento, las ratas SHHF-TC
presentaban unas disminucin significativa en la expresin LRP1 (10
veces menos) y en la cantidad de steres de colesterol (5 veces
menos), as como un incremento en de la cantidad de SREBP-2 activo (unas 10 veces).
Conclusiones: Nuestros datos demuestran que el receptor LRP1
media la acumulacin de steres de colesterol en el miocardio de
las ratas SHHF, pudiendo contribuir al desarrollo de a la disfuncin
cardiaca en las ratas SHHF. La modulacin de la expresin del receptor LRP1 y de las protenas SREBPs podra ser una buena diana
teraputica en el tratamiento de la insuficiencia cardiaca hipertensiva
15. POLIMORFISMOS COMUNES EN EL GEN PCSK9

SE ASOCIAN CON MAYOR PRESIN ARTERIAL SISTLICA
Y DIASTLICA EN POBLACIN DE ALTO RIESGO
CARDIOVASCULAR
J.V. Sorl1, F. Francs1, O. Coltell2, D. Godoy3, E.M. Asensio1,
R. Barragn-Arnal1, F.J. Valderrama1 y D. Corella1
Departamento de Medicina Preventiva y Salud Pblica,
Universidad de Valencia y CIBER Fisiopatologa de la Obesidad y
Nutricin, ISCIII, Madrid. 2Departamento de Lenguajes y Sistemas
Informticos, Universitat Jaume I y CIBER Fisiopatologa de la
Obesidad y Nutricin. 3Servicio de Medicina Interna, Hospital
General Universitario de Valencia.
1
14. EFECTO VASOMOTOR DE LA SECUENCIA TDD,

HOMLOGA A LA RGD HUMANA
L. Gamella1, M.A. Sevilla1, M.J. Montero1, C. Bernabeu2
y J.M. Lopez1
Departamento de Fisiologa y Farmacologa, Universidad de
Salamanca. 2Centro de Investigaciones Biolgicas, Consejo
Superior de Investigaciones Cientficas.
1
Objetivo: Los pptidos conteniendo la secuencia arginina-glicina-asprtico (RGD) estn implicados en la unin celular a travs de
integrinas. Se ha descrito que pptidos conteniendo la secuencia
RGD pueden causar una vasodilatacin independiente de endotelio
a travs de la interaccin entre el dominio RGD y la integrina avb3
presente en el msculo liso vascular (Mogford et al, Circ. Res.
1996;79:821-6). En ratones, la secuencia homloga a RGD en algunas protenas de membrana como endoglina o ADAM (A Disintegrin
And Metalloproteinase)-15 es treonina-asprtico-asprtico (TDD),
secuencia que tambin puede unirse a integrinas (Eto et al., J.
Biol. Chem. 2000;275:34922-30; Rossi et al, Blood 2013;121:40315). Debido a la importancia que el ratn est adquiriendo en el
estudio de la fisiologa cardiovascular, el objetivo del presente estudio es valorar si el pptido TDD tiene efectos vasomotores similares a los descritos para el fragmento RGD.
Mtodos: Para llevar a cabo el estudio se ha utilizado la arteria
torcica de ratones C57Bl/6, Una vez limpias se cortaron en anillos
de 2 mm, y en algunos de ellos se elimin el endotelio mediante
una ligera friccin con una aguja rugosa. Los anillos se montaron en
un migrafo de alambres y tras el proceso de normalizacin (Mulvany et al, Circ. Res. 1977;41:19-26) se sometieron a una tensin
de 5 mN. La reactividad del tejido se comprob con una solucin de
Krebs con 120 mM de potasio y la presencia/ausencia de endotelio
mediante la respuesta a acetilcolina (10-7 M). Posteriormente se
indujo la contraccin con fenilefrina (PE 10-6 M), y cuando se alcanz una meseta de contraccin estable se realizaron curvas de relajacin concentracin-respuesta con el pptido (10-5 -10-3 M). En otra
serie de experimentos los anillos se incubaron con 10-3 M de TDD
durante 30 minutos y se valor el efecto sobre la respuesta contracturante a PE (10-8 -10-3 M) y la respuesta relajante a nitroprusiato sdico (NTP, 10-8 -10-4 M).
Resultados: La secuencia peptdica TDD produjo un efecto vasodilatador rpido y, dependiente de la concentracin, tanto en anillos con endotelio como sin l. La relajacin mxima alcanzada fue
similar en ambos tipos de anillo (87,5 1,7% y 91,8 1,6% en anillos
con y sin endotelio). La incubacin con TDD no alter las curvas de
respuesta contrctil a a PE ni tampoco las de relajacin inducida
por NTP.
Conclusiones: La secuencia TDD presente en algunas glicoprotenas murinas parece tener un efecto vasodilatador similar al descrito para la secuencia RGD. Este efecto es independiente de la presencia de endotelio.
Objetivo: La protena PCSK9 (Proprotein convertase subtilisin/

kexin type 9) es una proteasa srica que se produce a nivel heptico y regula el nmero de receptores de LDL en las clulas hepticas, unindose a los mismos y facilitando su degradacin. Mutaciones en el gen PCSK9 (situado en 1p32.3) que resultan en hiperfuncin
se han relacionado con hipercolesterolemia familiar. Mientras que
aquellas variantes relacionadas con hipofuncin se han asociado
con menores concentraciones de colesterol-LDL (c-LDL). Actualmente, la inhibicin farmacolgica de PCSK9 est siendo considerada una va teraputica novedosa para la hipercolesterolemia. Sin
embargo, poco se sabe de la asociacin de polimorfismos en dicho
gen con presin arterial, aunque existen trabajos previos que han
asociado concentraciones plasmticas de PCSK9 con presin arterial sistlica (PAS) y diastlica (PAD) y se ha demostrado que regula
los canales epiteliales de sodio. Por ello nuestro objetivo es estudiar la asociacin entre polimorfismos en el gen PCSK9 y presin
arterial.
Mtodos: Estudio transversal en 860 participantes de alto riesgo
cardiovascular en el estudio PREDIMED-Valencia (media de edad 67
7 aos). La presin arterial se obtuvo por medicin directa por
mtodos estandarizados. Mediante un array de alta densidad (Human Omni Express, Illumina) se determinaron 28 polimorfismos en
el gen PCSK9. Se obtuvieron datos clnicos adicionales y de variables del estilo de vida. Se realizaron anlisis estadsticos uni y multivariantes.
Resultados: Varios de los polimorfismos analizados mostraron
asociaciones significativas con la PAS y/o PAD. Entre ellos los ms
relevantes fueron el rs662145 A > G (frecuencia del alelo menor G;
MAF: 0.24) y el rs557435G > A (MAF A: 0.19), ambos intrnicos y sin
asociaciones significativas con concentraciones de c-LDL. El
rs662145 se asoci tanto con la PAS (AA: 146 20; AG: 147 21 y
GG: 153 20 mmHg, p = 0,031) como con la PAD (AA: 81 10; AG:
83 11 y GG: 85 14 mmHg, p = 0,010), mientras que el rs557435
se asoci fundamentalmente con la PAD (GG: 81+/-10; GA: 83 11
y AA: 86 13 mmHg, p = 0,008). Estas asociaciones permanecieron
significativas tras ajuste multivariante por sexo, edad, diabetes,
frmacos e ndice de masa corporal.
Conclusiones: Variaciones en el gen PCSK9 parecen asociarse
tambin con presin arterial en poblacin de alto riesgo cardiovascular.
16. DIFERENTE MODULACIN DE LA ANGIOGNESIS

POR LOS DOMINIOS EXTRACELULAR E INTRACELULAR
DE ENDOGLINA
E. Nez, C. Ollauri, A. Rodrguez, M. Pericacho y J.M. Lpez
Departamento de Fisiologa y Farmacologa, Universidad de
Salamanca. Instituto de Investigacin Biomdica de Salamanca.
Objetivo: Endoglina (Eng, CD105) es una glicoprotena transmembrana caracterstica del endotelio relacionada con diferentes
procesos vasculares, siendo uno de los ms importantes la regulacin de la angiognesis. Se ha demostrado que la expresin de esta
protena aumenta en tejidos con una angiognesis activa. Adems,

alteraciones en el gen de Eng o en la expresin del mismo conllevan
disfuncin endotelial y defectos en la angiognesis, el desarrollo de
las clulas murales y la maduracin de los vasos sanguneos. Tradicionalmente, se ha considerado que estas alteraciones se deben al
papel de Eng como correceptor de TGF-b. As, se sabe que en las
clulas endoteliales Eng modula la interaccin de TGF-b con determinados miembros de su complejo de receptores, regulando as la
seal intracelular que se transmite. Sin embargo, recientemente se
ha propuesto que el dominio extracelular de Eng es capaz de interaccionar directamente con integrinas, lo que abre la posibilidad a
nuevos efectos de Eng independientes de la sealizacin de TGF-b.
Se conocen dos isoformas de Eng ancladas a la membrana que se
diferencian exclusivamente en su dominio intracelular y que parecen tener efectos sobre la angiognesis opuestos. La isoforma larga
(L-Eng) es la mayoritaria y ms estudiada, y parece favorecer el
proceso angiognico. Sin embargo, existe una segunda isoforma,
S-Eng o isoforma corta, que carece de gran parte dominio citoplasmtico y a la que se le han atribuido propiedades antiangiognicas.
Nuestra hiptesis es que si las isoformas de Eng modulan de manera distinta la angiognesis, tiene que deberse a efectos en los que
est implicado el dominio intracelular, pero que puede haber aspectos de la angiognesis en los que las respuestas de una y otra
isoforma sean iguales. En ese caso se tratara de efectos mediados
exclusivamente por el dominio extracelular. Por lo tanto, el objetivo que nos planteamos con este trabajo es analizar qu funciones
desempean los dominios intracelular y extracelular de endoglina
en la modulacin de los distintos procesos implicados en la angiognesis.
Mtodos: Analizamos la respuesta angiognica in vivo en ratones
C57Bl6 que sobreexpresan L o S-Eng evaluando la tasa de reperfusin de la pata posterior tras ligadura completa de la arteria femoral. Adems, cuantificamos la invasin endotelial en angiorreactores (tubos rellenos de Matrigel y factores proangiognicos)
implantados subcutneamente en estos animales. Finalmente, analizamos el nmero y las caractersticas de los pseudocapilares que
crecen a partir de anillos de aorta de estos ratones incubados en
Matrigel.
Resultados: Hemos observado que la sobreexpresin de S-Eng
conlleva un retraso significativo en la reperfusin postisqumica as
como una reduccin de lainvasin endotelial en angiorreactores. La
sobreexpresin de la isoforma larga no conlleva diferencias en estos procesos respeto a los ratones wild type. Analizando los experimentos con anillos de aorta, en los ratones que sobreexpresan SEngno se observan diferencias con los wild type en el proceso de
gemacin (sprouting).
Conclusiones: El dominio extracelular de Eng parece tener un
efecto antiangiognico in vivo que no se debe a una inhibicin del
sprouting,y que se revierte cuando est presente el dominio intracelular.
tencia en algunos pacientes tal que no se llega a impedir un progreso de la enfermedad. La microalbuminuria es uno de los predictores
de dicha evolucin y est descrito que determinados pacientes con
tratamiento crnico de SRAA presentan una alta prevalencia de albuminuria, llegando a aparecer microalbuminuria de novo en un
elevado porcentaje de individuos normoalbuminricos. Actualmente, no se conocen marcadores capaces de predecir la evolucin
clnica de estos pacientes.
Objetivo: Obtener una huella molecular en orina asociada al desarrollo y evolucin de la albuminuria en pacientes hipertensos crnicamente tratados, tal que permita evaluar la respuesta teraputica a la accin de los inhibidores de SRAA (i-SRAA).
Mtodos: Mediante estrategias micas, se han investigado cambios en el proteoma de la orina y de sus microvesculas exosomales.
Se ha reclutado una primera cohorte de 21 individuos sanos y 53
pacientes hipertensos en tratamiento con i-SRAA, clasificados
como a) normoalbuminricos que se mantuvieron como tal (N),
b) normoalbuminricos que desarrollaron microalbuminuria de
novo (NM) y c) microalbuminricos que se mantuvieron estables en
esa condicin (M), incluyendo diabticos y no diabticos, durante
un periodo de 3 aos. Se llev a cabo un anlisis diferencial por
DIGE y (iTRAQ)LC-MS/MS en las muestras de orina y exosomas. En
una segunda cohorte de 18 controles sanos y 90 pacientes se confirmaron los marcadores moleculares respondedores a albuminuria
de novo, hipertensin y microalbuminuria por una metodologa
complementaria de espectrometra de masas (SRM).
Resultados: El anlisis diferencial y posterior confirmacin revel la existencia de un panel de 5 protenas respondedoras a la condicin de hipertensin per se o a la existencia de albuminuria (de
novo y mantenida). El anlisis de exosomas de la orina ha permitido
identificar adicionalmente una huella molecular proteica especficamente respondedora tanto al desarrollo de microalbuminuria de
novo en pacientes normoalbuminricos como a la existencia de microalbuminuria prolongada en el tiempo.
Conclusiones: Hemos identificado una huella molecular especfica
de protenas de la orina y exosomales que reflejan el distinto comportamiento clnico de los pacientes hipertensos con distintos grados
de afectacin renal y distinta respuesta al tratamiento farmacolgico con inhibidores del SRAA. La monitorizacin de estas dianas moleculares en pacientes normoalbuminricos podra servir para identificar aquellos pacientes con tendencia a desarrollar albuminuria de
novo y por tanto predecir su resistencia al tratamiento.
17. PERFILES PROTEICOS ESPECFICOS EN ORINA

Y EXOSOMAS RESPONDEN AL DESARROLLO
DE ALBUMINURIA DE NOVO Y SU EVOLUCIN
EN PACIENTES HIPERTENSOS TRATADOS
CON BLOQUEANTES DEL SRAA
L. Gonzalez-Calero1, M. Martn-Lorenzo1, M. Baldn-Martn2,

F. de la Cuesta2, G. Ruiz-Hurtado3, J. Segura4, M.G. Barderas2,
L.M. Ruilope3, F. Vivanco1 y G. lvarez-Llamas1
IIS-Fundacion Jimnez Daz, UAM. 2Hospital Nacional
de Parapljicos, SESCAM. 3Instituto de Investigacin i+12,
Hospital 12 de Octubre. 4Hospital 12 de Octubre.
1
Introduccin: A pesar del efecto beneficioso del bloqueo del sistema renina-angiotensina-aldosterona (SRAA), existe cierta resis-
18. EFECTOS DEL EJERCICIO FSICO CRNICO

SOBRE LOS FACTORES Y MECANISMOS IMPLICADOS
EN EL PROCESO DE PARDEAMIENTO DEL TEJIDO ADIPOSO
BLANCO EN RATAS
M. Klett-Mingo1, B. Martn-Fernndez1, S. Ballesteros1, E. Sastre2,
L. Caracuel2, J. Blanco-Rivero2, A. Galiana1, V. Lahera1
y N. de las Heras1
Complutense de Madrid. 2Departamento de Fisiologa, Facultad
de Medicina, Universidad Autnoma.
Objetivo: El objetivo del estudio fue evaluar en ratas con sobrepeso inducido por una dieta rica en grasa saturada, los efectos del
ejercicio fsico crnico sobre las alteraciones metablicas y la disfuncin del tejido adiposo blanco (TAB) y marrn (TAM), as como
los factores y mecanismos implicados en el proceso de pardeamiento del TAB y en la funcin del TAM.
Mtodos: Para llevar a cabo el estudio se utilizaron ratas macho
Wistar (250-275 g) alimentadas con una dieta estndar (C) o con
alto contenido calrico (33,5% de grasa saturada) para inducir sobrepeso (SBP). La mitad de los animales de cada grupo realiz 30
minutos diarios de ejercicio en tapiz rodante (+E) durante 8 sema-
nas (5 veces a la semana durante 50 min). Al final del periodo de
evolucin se determinaron las concentraciones plasmticas de glucosa, colesterol total, triglicridos e irisina. Se valor la expresin
proteica de los principales factores implicados en el pardeamiento
del TAB y en la funcin del TAM: FNDC5/irisina en TAB, y protena
desacoplante-1 (UCP1) en TAB, TAM y msculo esqueltico.
Resultados: El peso corporal y el peso de los paquetes de TAB
lumbar y epididimal, fueron mayores en las ratas SBP (p < 0,05) que
en C y disminuyeron (p < 0,05) en estas ratas tras las 8 semanas de
ejercicio fsico crnico (SBP+E). En las ratas con SBP el peso del
gastrocnemio y del sleo fueron mayores (p < 0,05) que en las ratas
C, y el ejercicio fsico los normaliz. Los niveles plasmticos de
glucosa, colesterol total y triglicridos fueron mayores (p < 0,05)
en las ratas SBP que en las C, y el ejercicio fsico los redujo (p <
0,05). La concentracin plasmtica de irisina fue menor (p < 0,05)
en las ratas SBP que en C, y el ejercicio fsico tendi a aumentarla.
La expresin proteica de FNDC5/irisina en TAB fue comparable entre las ratas C y con SBP, y el ejercicio fsico crnico aument significativamente su expresin. En las ratas SBP la expresin proteica
de la UCP1 fue menor (p < 0,05) en TAB, TAM y msculo esqueltico
(gastrocnemio) que en C. El ejercicio aument su expresin significativamente.
Conclusiones: El ejercicio fsico crnico en ratas con SBP mejora
el perfil metablico, y aumenta la concentracin circulante de irisina y la expresin de FNDC5/irisina en TAB. Esto se asocia a un
aumento de la expresin de UCP1 en TAB, TAM y msculo esqueltico, lo que sugiere pardeamiento del TAB y mejora de la funcin
del TAM.
aldosterona. La expresin gnica de SGK-1, junto con la de los mediadores de fibrosis, inflamacin y oxidacin, aumentados por la
aldosterona disminuy significativamente con EPRO. La actividad
transcripcional del RM aumentada por la estimulacin con aldosterona disminuy significativamente con la co-incubacin con EPRO a
dosis crecientes. El anlisis del extracto mediante HPLC confirm
que son las PROA las responsables de los efectos observados. La
actividad transcripcional del RM en clulas estimuladas con aldosterona y co-incubadas con la fraccin correspondiente a las proantocianidinas disminuy significativamente hasta normalizar sus valores. Los efectos producidos por el tratamiento con EPRO fueron
comparables a los producidos por el antagonista del RM, espironolactona.
Conclusiones: Los efectos observados con el tratamiento con
EPRO en las ratas tratadas con aldosterona + sal sugieren que el
extracto de almendras rico en proantocianidinas se encentra actuando como un antagonista del RM. Dentro de los componentes de
dicho extracto, las proantocianidinas son los compuestos responsables de los efectos beneficiosos observados.
20. EL EJERCICIO INDUCE EL DESARROLLO

DE LA CARDIOMIOPATA ARRITMOGNICA DE VENTRCULO
DERECHO EN RATONES QUE EXPRESAN PLACOFILINA-2
MUTANTE
J.A. Bernal, F.M. Cruz, D. Sanz, M. Roche, J. Garca, G. Pizarro,
J. Garca, J. Ruiz y B. Ibez
CNIC.
19. EFECTOS DE LAS PROANTOCIANIDINAS

SOBRE LAS ALTERACIONES CARDIACAS PRODUCIDAS
POR LA ALDOSTERONA EN RATAS A TRAVS DEL BLOQUEO
DEL RECEPTOR DE MINERALOCORTICOIDES
B. Martn1, N. de las Heras1, M. Valero1, S. Ballesteros1, Y.Z. Yao2,
A. Galiana1, M. Klett1, P. Stanton2, P. Fuller2 y V. Lahera1
Complutense de Madrid. 2Prince Henrys Institute of Medical
Research, Clayton, Australia.
1
Objetivo: Estudiar los efectos de un extracto de almendra rico

en proantocianidinas (EPRO) en las alteraciones cardiacas producidas por la aldosterona y su efecto sobre la actividad del receptor
de mineralocorticoides (RM). Confirmar que las proantocinidinas
son las responsables de dichos efectos.
Mtodos: Se utilizaron ratas macho Wistar que recibieron una
dosis diaria de aldosterona (1 mg/Kg/da s.c.) + NaCl al 1% en el
agua de bebida. Un grupo de animales recibi aldosterona y fue
tratado con EPRO (100 mg/Kg/da) en el agua de bebida y otro
grupo fue tratado con espironolactona (ES, 200 mg/Kg/da s.c.),
simultneamente. Como controles se utilizaron animales a los que
se les administr el vehculo de la aldosterona y dos grupos fueron
tratados con EPRO o con ES. El periodo de evolucin fue de 21 das.
Se analiz la hemodinmica cardiaca, la expresin gnica de factores fibrticos, inflamatorios, pro-oxidantes y del mediador de las
acciones de la aldosterona; quinasa regulada por suero tipo 1 (SGK1). Para valorar la capacidad de EPRO para actuar como un antagonista del RM se realiz un ensayo de transactivacin en clulas
transfectadas con un vector para el RM estimuladas con aldosterona y co-incubadas con EPRO o ES. Con el fin de confirmar que las
PROA eran las responsables de los efectos observados se realiz una
cromatografa lquida de alta eficacia (HPLC). Adems se obtuvieron distintas fracciones del extracto con las que posteriormente se
co-incubaron las clulas estimuladas con aldosterona.
Resultados: El tratamiento con EPRO disminuy significativamente la hipertensin y la disfuncin diastlica producidas por la
Introduccin: Se ha propuesto que el ejercicio induce el desarrollo de la cardiomiopata de ventrculo derecho (ARVC); sin embargo la investigacin en este campo est limitada por la falta de
modelos animales que expresen mutaciones asociadas con esta patologa.
Objetivo: Estudiar el empato del ejercicio en el desarrollo de
ARVC en ratones que expresan un mutante un gen mutante de
placofilina-2 (PKP2) usando virus adeno-asociados (AAV).
Mtodos: Hemos desarrollado un nuevo modelo animal transgnico especfico de tejido cardiaco basado en el uso de AAV para
comprobar si la combinacin de una mutacin encontrada en pacientes con AVRC y el ejercicio disparan el desarrollo de la enfermedad.
Resultados: La expresin estable del mutante de PKP2 (c.2203C
> T), que codifica la protena mutante R735X, se consigue despus
de tan solo 4 semanas tras una sola inyeccin intravenosa con virus
AAV-R735X. El estudio de resonancia magntica (MRI) en animales
que expresan la protena durante ms de 10 meses demostr que
estos animales no desarrollan ningn fenotipo relacionado con
ARVC. Por el contrario, cuando estos animales se sometieron a protocolos de entrenamiento 4 semanas despus de ser inyectados con
AAV-R735X se observ una disfuncin del ventrculo derecho (VD)
similar al observado en pacientes con ARVC: reduccin de la funcin sistlica del VD y anormalidades en el movimiento de la pared
libre del VD. A nivel histolgico el VD de los animales entrenados
que han sido infectados con AAV-R735X muestran deslocalizacin de
la protena de unin entre cardiomiocitos conexina 43 (Cx43), cambio que no se observa en animales sedentarios.
Conclusiones: El ejercicio dispara el desarrollo de un fenotipo
similar al de ARVC en animales infectados con el mutante de PKP2
R735X. Esta mutacin parece que acta como un dominante negativo. Este nuevo sistema basado en la expresin de variantes mutantes de distintos genes usando AAVs en ratones silvestres tiene un
gran potencial para el estudio del efecto de mutaciones en cardiomiopatas complejas.
10
21. JQ1 MODULA LAS RESPUESTAS INFLAMATORIAS

Y FIBRTICAS EN EL RIN MEDIANTE LA INHIBICIN
DE LOS BROMODOMINIOS BET
22. LA DELECIN DE -SECRETASAS PROTEGE FRENTE

A LA HIPERTROFIA CARDIACA INDUCIDA POR
ANGIOTENSINA-II EN UN MODELO MURINO
J.L. Morgado1, B. Surez2, S. Rayego1, R.M. Rodrguez2, C. Lavoz1,

C. Lpez2 y M. Ruiz1
J. Rivera1, G. Guzmn2, R. Villa1, J. Orbe3, C. Gonzlez1,

M. Serrano4, J. Dez3, V. Andrs1 y A. Maraver5
Cellular Biology of Renal Diseases Laboratory, Instituto de

Investigacin Sanitaria Fundacin Jimnez Daz. Universidad
Autnoma. 2Department of Immunology, Hospital Universitario
Central de Asturias.
Objetivo: La familia de protenas BET (bromodomain and extraterminal, BRD2, BRD3, BRD4 y BRDT) reconocen especficamente
residuos de lisina acetilados, una modificacin post-traduccional
clave en la regulacin de la expresin gnica. Estudios recientes
han demostrado el papel fundamental de estas protenas en la modulacin de la respuesta inflamatoria, y el gran potencial teraputico de sus inhibidores en el tratamiento de procesos inflamatorios
agudos y crnicos. Nuestro objetivo ha sido investigar el papel de
las protenas BET en el dao renal experimental, determinando su
papel en la regulacin de la expresin de genes pro-inflamatorios y
pro-fibrticos. Para ello, se evalu el efecto de la inhibicin de los
bromodominios BET, mediante el empleo del inhibidor JQ1.
Mtodos: Los estudios in vivo se han realizado en el modelo de
obstruccin unilateral del urter (UUO) en ratones C57BL/6, y los
estudios in vitro en clulas tubuloepiteliales renales humanas (HK2)
y fibroblastos murinos estimuladas con TNF-alfa, o TGFbeta.
Resultados: El modelo de dao renal por UUO se caracteriza
principalmente por infiltrado intersticial y fibrosis. El tratamiento
con JQ1 disminuy la presencia de infiltrado inflamatorio (neutrfilos, monocitos/macrfagos y linfocitos T CD4+) en los riones obstruidos alcanzando valores similares a los controles. El aumento en
la expresin de varios genes proinflamatorios (IL-6, MCP-1, RANTES) fue bloqueado tras tratamiento con JQ1 tanto en el modelo in
vivo, como en experimentos in vitro en la lnea renal HK2. El silenciamiento gnico de BRD2 y BRD4, mediante siRNA, disminuy parcialmente la expresin de estos genes. Posteriormente, mediante
tcnicas de immunoprecipitacin de la cromatina (ChIP) demostramos que BRD4 se une especficamente a las histonas acetiladas presentes en la regin promotora de los genes inflamatorios IL-6, MCP1, RANTES regulando as su expresin gnica. Estudios adicionales
en la ruta NF-kB, demostraron que el tratamiento con JQ-1 bloquea
la translocacin nuclear de p65. Esta protena se activa por acetilacin de la lisina 310, sugiriendo un efecto antiinflamatorio de JQ1
por un mecanismo independiente de la remodelacin de la cromatina. Por ltimo, en el UUO hemos observado que JQ1 bloque el
aumento en la expresin renal de los marcadores de dao (KIM-1 y
NGAL), de factores profibrticos y de protenas de matriz extracelular. Adems en fibroblastos murinos la estimulacin al alza de
protenas de matriz extracelular (fibronectina y colgeno tipo I)
inducida por TGF-beta se inhibi por JQ-1, sugiriendo una implicacin adicional en los procesos pro-fibrticos.
Conclusiones: Nuestros resultado muestran que la inhibicin de
los bromodominios BET utilizando JQ1 disminuye la respuesta inflamatoria renal, a travs del remodelamiento de la cromatina en las
regiones promotoras de genes especficos o adicionalmente inhibiendo la ruta de activacin del NF-KB. Estos resultados demuestran que el tratamiento con inhibidores de las protenas BET podran tener importantes aplicaciones teraputicas en la inhibicin
de las respuestas inflamatorias y pro-fibrticas producidas en la
enfermedad renal.
Departamento de Epidemiologa, Aterotrombosis e Imagen,

Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares (CNIC).
2
Unidad de Imagen Cardiaca, Departamento de Cardiologa,
Hospital Universitario La Paz, Idipaz. 3Divisin de Ciencias
Cardiovasculares, Centro de Investigacin Mdica Aplicada
(CIMA), Universidad de Navarra. 4Grupo Supresin Tumoral,
Centro Nacional de Investigaciones Oncolgicas (CNIO). 5Instituto
de Investigacin Oncolgica de Montpellier (IRCM).
Objetivo: Aunque existen evidencias que demuestran la relacin
entre hipertensin pulmonar y la va de sealizacin de Notch, su
papel en la hipertensin sistmica y los procesos patolgicos asociados a la misma estn poco estudiados. Por tanto, nuestro principal objetivo consisti en analizar el papel que desempea dicha va
en el desarrollo y mantenimiento de la hipertensin y la hipertrofia
cardiaca asociada. Igualmente, analizamos el potencial de los inhibidores de g-secretasas (GSI) como agente teraputico.
Mtodos: Hemos generado un modelo murino inducible en el que
es posible eliminar de un modo controlado la expresin del complejo de g-secretase. Dicho modelo nos ha permitido estudiar la actividad de la ruta de Notch in vitro en respuesta al tratamiento con
angiotensina-II (Ang-II) en clulas de musculatura lisa vascular
(VSMC) aisladas de las aortas de estos animales. De forma complementaria hemos analizado in vivo las consecuencias de la supresin
del complejo de g-secretasas en hipertensin e hipertrofia cardiaca, en un modelo de angiotensina, mediante vas alternativas (delecin gnica y el uso de GSI). Por ltimo, hemos analizado y comparado muestras de tejido vascular procedente de individuos
hipertensos con y sin hipertrofia cardiaca.
Resultados: El tratamiento de VSMC con Ang-II induce la activacin de la ruta de sealizacin de Notch tanto en ensayos in vitro
como in vivo. La supresin de la actividad g-secretasa mediante supresin gnica en animales adultos produjo una disminucin significativa en los valores de hipertensin e hipertrofia sin mostrar efectos
adversos. Adems, el tratamiento con GSI redujo la hipertrofia cardiaca inducida por Ang-II tanto in vitro como in vivo. Finalmente,
hemos identificado niveles elevados de Notch5, un target especfico
en la cascada de sealizacin, en tejido vascular obtenido de pacientes hipertensos con hipertrofia de ventrculo izquierdo.
Conclusiones: La ruta de sealizacin de Notch se encuentra
activada en tejido vascular de ratones hipertensos con hipertrofia
cardiaca, y su inhibicin, mediante eliminacin gnica del complejo de g-secretasas, protege frente ambas situaciones. En ratones
salvajes, el tratamiento con GSI protege frente a la hipertrofia del
ventrculo izquierdo sin afectar la presin arterial. Estudios preliminares sugieren el potencial uso de GSI en pacientes con hipertensin e hipertrofia cardiaca refractarios a los tratamientos convencionales.
23. PAPEL DE CD163 EN ANEURISMA ARTICO ABDOMINAL

A. Rubio1, J.M. Amaro1, I. Buenda1, J. Egido1, L.M. Blanco1,
J.B. Michel3, O. Meilhac3, J.L. Martn1 y J.A. Moreno1
Laboratorio de Patologa Vascular y Renal, IIS-Fundacin Jimnez
Daz, Universidad Autnoma de Madrid. 2Centro de Investigacin
Biomdica en Red de Diabetes y Enfermedades Metablicas
Asociadas (CIBERDEM). 3INSERM U698, Hpital Bichat.
1
Objetivo: El aneurisma artico abdominal (AAA) es una enfermedad inflamatoria crnica, caracterizado por la presencia de macr-
fagos infiltrantes, los cuales juegan un papel muy importante en el
desarrollo y evolucin de la enfermedad. Se ha observado que en la
capa adventicial del AAA existe una acumulacin de hemoglobina
(Hb) y hemosiderina. CD163 es un receptor de superficie presente
en macrfagos encargado del aclaramiento tisular de Hb. Nuestro
objetivo fue investigar el papel de la Hb en el reclutamiento de
monocitos y en su posterior diferenciacin a macrfagos que expresen CD163, in vitro y en AAA humanos. Adems, se estudi el estado
de activacin de los monocitos circulantes de pacientes con AAA.
Mtodos: La presencia de macrfagos en la pared arterial de
pacientes con AAA fue determinada por inmunohistoqumica. Los
experimentos se realizaron en monocitos purificados de sangre de
voluntarios sanos estimulados con Hb y medio condicionado procedente de AAA humano. Mediante citometra de flujo se analizaron
las subpoblaciones CD14++CD16-, CD14++CD16+ y CD14+CD16+ de monocitos de sangre perifrica procedente de pacientes con AAA y
voluntarios sanos. Adems, se determinaron los niveles de expresin de CD163 en cada una de estas subpoblaciones.
Resultados: Se encontraron niveles de expresin de CD163 superiores en la pared del AAA en comparacin con la pared de aorta de
sujetos sanos. CD163 se encontr en la capa adventicial de AAA,
coincidiendo con zonas de acumulacin de Hb, hemosiderina, marcadores de estrs oxidativo y adyacentes a microvasos. Adems se
observ que el secretoma de AAA mostraba niveles superiores de
CD163 soluble (sCD163) en comparacin con los encontrados en el
secretoma de aorta sana. La capa de AAA que mayor secrecin present fue la adventicia. Tanto el medio condicionado, como la Hb
promovieron la quimiotaxis de monocitos in vitro. Este efecto fue
mayor en monocitos procedentes de pacientes con AAA. Tanto la
Hb, como el medio condicionado de AAA promovieron la diferenciacin hacia macrfagos CD163high y HLA-DRlow, los cuales presentaron
una gran capacidad de internalizacin de Hb y de secrecin de IL10. Los pacientes con AAA mostraron niveles elevados de
CD14++CD16+, en comparacin con los voluntarios sanos. La expresin de CD163 en el total de la poblacin de monocitos no mostr
cambios significativos. Sin embargo, los monocitos CD14++CD16+
mostraron niveles de expresin de CD163 superiores en pacientes
con AAA.
Conclusiones: La presencia de Hb promueve la migracin y diferenciacin de monocitos, lo que podra explicar el aumento de la
presencia de macrfagos CD163high en la pared de la adventicia de
AAA. Estos macrfagos podran ayudar a la eliminacin del exceso
de Hb libre presente en el AAA, evitando sus efectos pro-inflamatorios y pro-oxidantes.
11
perivascular de la arteria mesentrica en la descendencia adulta

de ratas diabticas.
Mtodos: Se utilizaron ratas macho Wistar descendientes de ratas control (O-CR) y diabticas (O-DR). La diabetes se indujo en el
7 da de gestacin mediante una nica inyeccin de estreptozotocina (50 mg/kg peso corporal) A los 6 meses de edad, se midi la
presin arterial mediante pletismografa de la arteria caudal y se
sacrificaron los animales, se extrajo la arteria mesentrica superior
y se analiz la respuesta vasoconstrictora inducida por estimulacin elctrica (EE) en presencia del antagonista a-adrenrgico,
fentolamina; del inhibidor inespecfico de la xido ntrico sintasa
(NOS), (L-NAME); del antagonista del receptor para el pptido relacionado con el gen de la calcitonina (CGRP), 8-37CGRP. Se analiz
las respuestas vasomotoras a noradrenalina (NA) y al donante de
xido ntrico (NO), DEA-NO. Se valor la liberacin inducida por EE
de NA, ATP y NO; y la expresin de la NOS neuronal (nNOS) y su
forma fosforilada (P-nNOS).
Resultados: La presin arterial fue mayor en el grupo O-DR. La
respuesta vasoconstrictora inducida por EE fue mayor en el grupo
O-DR. La fentolamina redujo la respuesta constrictora inducida por
EE en mayor medida en el grupo O-DR. El L-NAME increment la
respuesta vasoconstrictora en mayor grado en el grupo O-DR. El
8-37CGRP no modific la respuesta vasoconstrictora en ningn grupo experimental. Las respuestas vasomotoras a NA, y DEA-NO no se
modificaron con respecto al control. La liberacin inducida por EE
de NA, ATP y NO se increment en el grupo O-DR. La expresin de
nNOS fue similar en ambos grupos, mientras que la de P-nNOS aument en el grupo O-DR.
Conclusiones: El ambiente hiperglicmico durante el embarazo,
incrementa las funciones vasoconstrictora simptica y vasodilatadora nitrrgica en arteria mesentrica de rata. El efecto neto es un
incremento en la respuesta vasoconstrictora inducida por EE. Estas
alteraciones contribuyen al incremento en la presin sangunea en
las ratas O-DR.
Subvencionado por Ministerio de Economa y Competitividad
(SAF2012-38530), y Fundacin MAPFRE.
25. INSULINA RESTAURA EL TRANSPORTE DE L-ARGININA

REQUIRIENDO DE LA ACTIVACIN DEL RECEPTOR
DE ADENOSINA A2A EN ENDOTELIO DE VENA UMBILICAL
HUMANA EN PREECLAMPSIA TARDA
R. Salsoso1, T. Sez1, C. Sanhueza1, F. Pardo1, A. Leiva1, A. Mate2,
C.M. Vzquez2 y L. Sobrevia1,2
Laboratorio de Fisiologa Celular y Molecular (CMPL), Divisin de
Obstetricia y Ginecologa, Escuela de Medicina, Facultad de
Medicina, Pontificia Universidad Catlica de Chile. 2Departamento
de Fisiologa, Facultad de Farmacia, Universidad de Sevilla.
1
24. ALTERACIONES EN LA FUNCIN DE LA INERVACIN

PERIVASCULAR EN ARTERIA MESENTRICA
EN LA DESCENDENCIA ADULTA DE RATAS DIABTICAS
E. Sastre1, D.B. de Queiroz2, L. Caracuel1, M. Vallejo1, V. Lahera3,
F.E. Xavier2, J. Blanco-Rivero1 y G. Balfagn1
Autnoma de Madrid. 2Departamento de Fisiologia e
Farmacologia, Universidade Federal de Pernambuco, Brasil.
3
1
Introduccin: La exposicin intrauterina a una ambiente hiperglicmico induce el desarrollo desrdenes metablicos, incluyendo
diabetes e hipertensin en la vida adulta. En hipertensin se incrementa la resistencia vascular perifrica que est controlada por
diversos factores: humorales, endoteliales y neuronales; es bien
conocida la participacin de los factores endoteliales en este incremento, mientras que poco se sabe de la participacin de la inervacin perivascular. El objetivo de este estudio ha sido analizar si la
diabetes materna puede provocar alteraciones en la inervacin
Objetivo: Preeclampsia es un sndrome hipertensivo especfico

del embarazo, clsicamente definido como hipertensin arterial y
proteinuria diagnosticada por primera vez a partir de las 20 semanas de gestacin. La preeclampsia est asociada a una disminucin
en la vasodilatacin placentaria, as como en la actividad de la
xido ntrico sintasa endotelial (eNOS) y el nivel plasmtico de Larginina en vena umbilical (Mate et al, Drug Discov Today.
2012;17:1307-15). Insulina y adenosina causan vasodilatacin en la
vena umbilical humana involucrando la activacin del receptor de
adenosina A2A (A2AAR) y aumento del transporte de L-arginina va
hCAT-1 en clulas endoteliales de vena umbilical humana (HUVECs)
de embarazos normales (Guzmn-Gutirrez et al, PLoS ONE.
2012;7:e41705); sin embargo, este fenmeno es desconocido en
preeclampsia. La preeclampsia temprana (< 34 semanas de gestacin), se asocia a alteraciones graves en la vasculatura placentaria
conduciendo a alteraciones en el crecimiento y desarrollo fetal; no
obstante, no se conoce si la preeclampsia tarda (34 semanas de
12
gestacin) (LOPE) altera la vasculatura fetoplacentaria. El objetivo

de este estudio fue determinar el papel de la activacin de A2AAR
en la ruta L-arginina/NO en respuesta a insulina en HUVECs de
LOPE.
Mtodos: La reactividad vascular en respuesta a insulina (0,11.000 nmol/L, 5 min) en ausencia y presencia de adenosina
(1mmol/L, 5 min) y ZM-241385 (antagonista A2AAR) (10 nmol/L) fue
determinada en anillos de vena umbilical humana pre-contrados
con KCl (62,5 mmol/L) de embarazos normales oLOPE. Mediante
western blot se determin la abundancia de la protena del transportador de aminocidos catinicos tipo 1 (hCAT-1), A2AAR, eNOS
total (t-eNOS) y fosforilada en Ser1177 (PxasiSer-eNOS) o Thr495 (PxasiThr-eNOS). El transporte de L-arginina (0-1.000 mmol/L, 3 mCi/
mL L-[3H]arginine, 20 s, 37 oC) fue medido en ausencia o presencia
(8 h) de insulina (1 nmol/L) y/o ZM-241385 en HUVECs de embarazos normales o LOPE.
Resultados: LOPE aumenta la capacidad mxima de transporte
de L-arginina, y la expresin y actividad de hCAT-1 y eNOS comparado con embarazos normales. Sin embargo, el efecto de LOPE fue
bloqueado por ZM-24385 (antagonista de A2AAR). Insulina revierte el
efecto de LOPE en la capacidad mxima de transporte requiriendo
de la activacin de A2AAR. La relajacin en respuesta a insulina de
anillos de vena umbilical humana provenientes de embarazos LOPE
fue menor que en embarazos normales, efecto que fue restaurado
por ZM-241385.
Conclusiones: La reduccin en la respuesta vascular fetoplacentaria a insulina podra resultar de la activacin del receptor de
adenosina A2A en embarazos que cursan con LOPE.
Agradecimientos: Fondo Nacional de Desarrollo Cientfico y Tecnolgico (FONDECYT 1110977, 11110059, 3130583, 3140532). RS
posee una Beca PUC-PhD de la Facultad de Medicina; TS posee una
Beca CONICYT-PhD.
26. LA FIBULINA-5 ES INHIBIDA EN EL ANEURISMA

DE AORTA ABDOMINAL: PARTICIPACIN DE MECANISMOS
EPIGENTICOS
M. Orriols1, I. Mart1, A. Guadall1, J.R. Escudero2, J.B. Michel3,
J.L. Martn4, M. Camacho2, J. Martnez1 y C. Rodrguez1
Centro de Investigacin Cardiovascular (CSIC-ICCC), IIB-Sant Pau.
Laboratorio de Angiologa, Biologa Vascular e Inflamacin y
Servicio de Ciruga Vascular, Instituto de Investigacin Biomdica
(IIB-Sant Pau). 3INSERM U698. 4Fundacin Jimnez Daz.
1
2
Objetivo: El aneurisma de aorta abdominal (AAA) es una patologa inflamatoria crnica caracterizada por un remodelado destructivo de la pared vascular. La fibulina-5 (FBLN5) es una protena
elastognica que participa en el remodelado vascular y que modula
la adhesin, motilidad, proliferacin y supervivencia de las clulas
vasculares. Nuestro objetivo ha sido analizar la regulacin de la
FBLN5 en el AAA y caracterizar los mecanismos implicados.
Mtodos: Se analizaron muestras de aorta aneurismtica y sana,
secretomas vasculares y clulas musculares lisas de aorta humana
(CMLV). Se analiz la expresin gnica vascular por RT-PCR, Western-blot e inmunohistoqumica. Tambin se realizaron ensayos de
transfeccin transitoria e inmunoprecipitacin de cromatina
(ChIP). Se analiz el efecto de la administracin de lipopolisacrido
(LPS) en ratones C57BL/6J (LPS, 0,5 mg/Kg, 24 horas).
Resultados: Muestras aneurismticas humanas muestran una reduccin de la expresin y secrecin de la FBLN5 en comparacin
con aortas sanas. En CMLV de aorta humanas, el tratamiento con
estmulos inflamatorios redujo el nivel de expresin (ARNm y protena) de la FBLN5 y, de modo similar, la expresin de FBLN5 fue
inhibida en la aorta de ratones tratados con LPS. El pre-tratamiento con inhibidores de histonas deacetilasas (HDAC) previno estos
efectos. Los estmulos inflamatorios disminuyeron la actividad
transcripcional de la FBLN5. Estudios de delecin seriada y mutagnesis dirigida identificaron dos elementos de respuesta al factor de
transcripcin SOX9 crticos para la actividad transcripcional basal
del promotor de FBLN5. La expresin de SOX9 est disminuida en el
AAA humano, y su sobre-expresin en CMLV previno la inhibicin de
la expresin de la FBLN5 provocada por estmulos inflamatorios.
Ensayos de ChIP mostraron que el tratamiento con TNFa disminuy
tanto la asociacin de la histona H3 acetilada al promotor de la
FBLN5 como la unin de SOX9 a sus elementos de respuesta. Finalmente, la inhibicin de HDAC previno estos efectos induciendo la
expresin de SOX9, y aumentando la unin de SOX9 al promotor de
la FBLN5, normalizado as la expresin vascular de la FBLN5.
Conclusiones: La disminucin de la expresin FBLN5 podra contribuir al remodelado vascular en el AAA. La inhibicin de la actividad HDAC puede normalizar la expresin FBLN5 vascular a travs
de un mecanismo dependiente de SOX9. Estos resultados sugieren
un potencial uso teraputico de los inhibidores de HDAC en el AAA.
27. LA GALECTINA-3, UNA NUEVA DIANA

EN LA CALCIFICACIN VALVULAR EN LA ESTENOSIS
ARTICA SEVERA
E. Martnez1, R. Sadaba2, V. lvarez2, V. Arrieta2, A. Fernndez1,
A. Melero1, J. de Diego2 y N. Lpez1
Navarrabiomed-Fundacin Miguel Servet. 2rea del Corazn del
Complejo Hospitalario de Navarra.
1
Introduccin: La estenosis artica severa degenerativa (EA) es

una enfermedad muy prevalente, cuya incidencia se incrementar
en los prximos aos debido al envejecimiento de la poblacin. La
EA se caracteriza por la inflamacin, fibrosis y calcificacin de la
vlvula artica. La galectina-3 (Gal-3) es un mediador de inflamacin y fibrosis cardiovascular, y regula la osteognesis en la aterosclerosis, siendo su inhibicin beneficiosa.
Objetivo: Analizar si la Gal-3 puede ser una nueva diana teraputica en la calcificacin valvular asociada a la progresin de la
EA.
Mtodos: Se utilizaron vlvulas control (n = 8) y vlvulas de pacientes con EA (n = 68). Los niveles de Gal-3, as como de los marcadores de inflamacin, fibrosis y calcificacin fueron cuantificados
en el suero y el tejido valvular mediante ELISA, RT-PCR, western
blot, coloraciones histolgicas e inmunohistoqumicas.
Resultados: Los niveles de Gal-3 en suero se correlacionaron
con los niveles de Gal-3 en vlvula. La expresin de Gal-3 estaba
aumentada en las vlvulas de pacientes con EA respecto a las
vlvulas control. Adems, las vlvulas de pacientes con EA presentaban mayores niveles de molculas proinflamatorias (interleuquina-6, interleuquina-1 beta) y de molculas profibrticas (colgeno tipo I, colgeno tipo III, TGF-b, CTGF). El grado de
calcificacin y las molculas osteognicas (BMP-2, BMP-4, osteopontina) tambin fueron mayores en las vlvulas de pacientes con
EA que en las vlvulas control. La expresin de Gal-3 en suero y
en vlvula se correlacion directamente con los marcadores de
calcificacin BMP-2 y BMP-4.
Conclusiones: Los niveles de Gal-3 en suero se asocian con los
niveles de Gal-3 en vlvula. La Gal-3 est aumentada en el tejido
valvular de pacientes con EA, y se asocia a marcadores de calcificacin valvular. La Gal-3 podra jugar un papel en la calcificacin
valvular y por tanto ser una nueva diana teraputica en la EA.
28. LOS RECEPTORES NR4A INCREMENTAN LA EXPRESIN
DE LA ANTIPROTEINASA ALPHA-2-MACROGLOBULINA
EN CLULAS MUSCULARES LISAS VASCULARES
Y MODULAN LA ACTIVIDAD DE LAS METALOPROTEINASAS
DE MATRIZ
B. Ferrn, R. Rodrguez, O. Calvayrac, J. Alonso, I. Mart,
C. Rodrguez y J. Martnez
Centro de Investigacin Cardiovascular, CSIC-ICCC, IIB-Sant Pau.
Objetivo: Las metaloproteinasas de matriz (MMP) estn implicadas en el remodelado vascular. Recientemente, los receptores nucleares de la familia RN4A han sido involucrados en la represin
transcripcional de las MMP en tejidos no vasculares. En este estudio
se analizan otros mecanismos que relacionan dichos receptores con
las MMP en clulas musculares lisas vasculares (CMLV).
Mtodos: Los estudios se realizaron en CMLV humanas en cultivo y
se utiliz un modelo animal transgnico que sobre-expresa NOR-1 en
las CMLV (TgNOR-1). Los receptores NR4A (NOR-1, Nurr1 y Nur77) se
sobre-expresaron en CMLV mediante transduccin lentiviral. La actividad de MMP-2 y MMP-9 fue evaluada mediante zimografa y DQgelatin assay. Los niveles de expresin y de protena fueron analizados mediante PCR a tiempo real, Western blot, inmunocitoqumica e
inmunohistoqumica. La actividad transcripcional se analiz mediante transfeccin transitoria de vectores reporteros, y se realizaron
ensayos de retardo de la movilidad electrofortica (EMSA) y de inmunoprecipitacin de cromatina (ChIP). La actividad migratoria de las
CMLV se evalu mediante el mtodo de reparacin de herida.
Resultados: La sobre-expresin de los receptores NR4A redujo los
niveles de ARNm de la MMP-2, pero no de la MMP-9 en las CMLV; sin
embargo, en los sobrenadantes de dichos cultivos disminuyeron tanto
los niveles de protena como de actividad de ambas MMP. En aorta de
animales TgNOR-1 se confirm la reduccin de los niveles de expresin
de MMP-2 mediante PCR, Western blot e inmunohistoqumica. Los niveles de expresin de los inhibidores de MMP (TIMP-1 y TIMP-2) permanecieron invariables; en cambio, aument significativamente la expresin (ARNm y protena) de la alpha-2-macroglobulina (A2M).
Mediante Western blot e inmunohistoqumica se detectaron niveles
significativos de A2M en arterias humanas no aterosclerticas. El silenciamiento de los receptores NR4A redujo los niveles de expresin basal
de A2M en las CMLV. Se identific un elemento de respuesta a estos
receptores (NBRE) en la regin promotora de la A2M, cuya funcionalidad se demostr mediante mutagnesis dirigida, EMSA y ChIP. El bloqueo de la A2M con un anticuerpo especfico o mediante siRNA redujo
parcialmente la inhibicin de la actividad MMP observada. La reduccin de la actividad MMP en clulas que sobre-expresan los receptores
NR4A se asoci con una menor capacidad migratoria de estas clulas.
Conclusiones: Los resultados obtenidos demuestran que la A2M
se expresa en la pared vascular y que los receptores NR4A regulan
su expresin en CMLV. Este nuevo mecanismo de modulacin de la
actividad MMP por medio de la A2M confirma la relevancia de los
receptores NR4A en el remodelado vascular.
29. ESPECIES REACTIVAS DE OXGENO Y PROSTANOIDES

PARTICIPAN EN LA PRODUCCIN DE ALDOSTERONA
POR ADIPOCITOS EN HIPERTENSIN. PAPEL DE LA KINASA
DE RECEPTORES ACOPLADOS A PROTENAS G (GRK2)
R. Aras1, A. Nguyen2, S. Martnez1, R. Vila3, C. Murga3, R. Touyz2,
M. Salaices1 y A. Briones1
Facultad de Medicina, Universidad Autnoma de Madrid.
Institute of Cardiovascular and Medical Sciences, University of
Glasgow. 3Centro de Biologa Molecular, Universidad Autnoma de
Madrid.
1
2
Objetivo: Estudios preliminares indican que 1) los adipocitos son

una fuente de aldosterona en respuesta a Angiotensina II (AngII);
13
2)las especies reactivas de oxgeno (ROS) median la produccin de

aldosterona en respuesta a AngII en clulas adrenales; 3) la hipertensin est asociada con una relaccin recproca entre ROS derivadas de la NADPH oxidasa y/o de la mitocondria y con la
cicloxigenasa(COX-2) y la sintasa microsomal de prostaglandina E
tipo 1 (mPGES-1) los cuales participan en el dao vascular; 4) la
kinasa de receptores acoplados a protenas G GRK2 juega un papel
importante en el dao vascular asociado a la hipertensin y regula
la adiposidad. Evaluaremos el papel de ROS y de prostanoides derivados de COX-2/mPGES-1 en la liberacin de aldosterona de los
adipocitos en hipertensin y el papel de GRK2 en este proceso.
Mtodos: Los estudios se realizaron en tejido adiposo visceral
y/o adipocitos maduros aislados de los siguientes modelos animales: 1) ratones no tratados e infundidos con AngII en ausencia y
presencia del inhibidor de la COX-2 celecoxib o los antioxidantes
apocinina o mito-TEMPO; 2) ratones COX-2-/-, mPGES-1-/- y GRK2+/- y
sus correspondientes ratones wild type infundidos o no con AngII;
3) se usaron tambin adipocitos de las lneas 3T3-L1 y SW872 estimulados con AngII.
Resultados: 1) La infusin de AngII increment la expresin gnica de GRK2, COX-2, Nox1, Nox4 y aldosterona sintasa (Cyp11b2) as
como la actividad NADPH oxidasa y la produccin de H2O2, PGE2 y
aldosterona en el tejido adiposo visceral y/o en los adipocitos maduros. La mayor parte de estos efectos se previnieron por el tratamiento con celecoxib, apocinina o mito-TEMPO y por la delecin de
COX-2, mPGES-1 o GRK2. 2) En las lneas celulares de adipocitos
3T3-L1 y/o SW872, AngII increment la expresin gnica de Cyp11b2
y la produccin de aldosterona que se abolieron por celecoxib, apocinina y mito-TEMPO.
Conclusiones: La relacin entre estrs oxidativo y prostanoides
es responsable de la produccin de aldosterona de los adipocitos en
animales hipertensos, al menos en parte, a travs de GRK2. El exceso de estos mediadores derivados del tejido adiposo podra contribuir al dao vascular observado en hipertensin.
30. PAPEL DE LAS METALOPROTEINASAS 2 Y 9

EN EL DESARROLLO DE ALBUMINURIA BAJO LA INHIBICIN
CRNICA DEL SISTEMA RENINA ANGIOTENSINA
H. Pulido1, L. Agudo2, C. Fernndez3, B. Somoza3, I. Arnguez4,
J. Segura5, R. Kreutz6, M. Fernndez4, L.M. Ruilope5 y G. Ruiz1
Instituto de Investigacin i+12, Hospital 12 de Octubre, Instituto
Pluridisciplinar y Facultad de Farmacia, UCM. 2Consejo Superior
de Investigaciones Cientficas. 3Departamento de Ciencias
Farmacuticas y de la Alimentacin, Facultad de Farmacia,
Universidad CEU-San Pablo. 4Instituto Pluridisciplinar y Facultad
de Farmacia, UCM. 5Instituto de Investigacin i+12. Hospital 12 de
Octubre. 6Department of Clinical Pharmacology and Toxicology,
Charit-Universittsmedizin.
1
Objetivo: Se ha descrito que tanto la metaloproteinasa (MMP)2

como la MMP9 tienen un papel importante en la fisiopatologa de la
enfermedad cardiovascular y renal. El objetivo del estudio fue analizar la actividad de estas enzimas en el plasma de pacientes hipertensos que, a pesar de estar controlados con inhibidores del sistema renina angiotensina, desarrollan albuminuria como indicador de
dao renal.
Mtodos: La concentracin plasmtica de las MMPs se determin
por ELISA y su actividad por zimografa. Para estudiar la interaccin
entre MMP2 y su inhibidor endgeno (TIMP)2 y entre MMP9 y TIMP1
se desarroll un novedoso ensayo con la tecnologa AlphaLISA. Se
utiliz el plasma de 17 pacientes hipertensos controlados normoalbuminricos (albmina/creatinina 20 mg/g) y 22 pacientes albuminricos, que se separaron en dos grupos: i) 14 con albuminuria
moderada (albmina/creatinina 200 mg/g) ii) 8 con albuminuria
severa (albmina/creatinina > 200 mg/g). El estudio de la activi-
14
dad de las MMPs en rin se realiz en el modelo de rata normotensa y espontneamente albuminrica MWF, y se compar con ratas
normoalbuminricas y espontneamente hipertensas (SHR) y ratas
controles Wistar Kyoto (WKY) de 12 semanas (n = 6 por grupo).
Dado que la albuminuria es atribuible a un locus localizado en el
cromosoma 8, se utilizaron adems, ratas MWF en las que se sustituy este cromosoma por el respectivo de SHR, dando lugar a las
ratas consmicas MWF-8SHR.
Resultados: Los pacientes con albuminuria tanto moderada
como severa, no presentan diferencias significativas en la concentracin plasmtica de las MMPs en comparacin con los normoalbuminricos. Sin embargo, muestran un incremento significativo en
su actividad. Este incremento fue del 75% para MMP2 en pacientes
con albuminuria moderada y del 84% en pacientes con albuminuria
grave. El incremento de actividad de MMP9, fue del 55% en pacientes con albuminuria moderada y del 49.3% en pacientes con albuminuria grave. Adems se observa una correlacin positiva entre el
grado de albuminuria de los pacientes y la actividad tanto de MMP2
(r = 0,47; p = 0,0031), como de MMP9 (r = 0,53; p = 0,0008). La interaccin entre MMP2/TIMP2 y MMP9/TIMP1 fue significativamente
inferior en los pacientes albuminricos. Los resultados en el modelo experimental muestran que la actividad enzimtica en plasma y
rin de MMP2 y MMP9 fue significativamente mayor en las ratas
MWF en comparacin con las WKY. Adems, para las ratas MWF
existe una correlacin directa entre la actividad de la MMP9 renal
y sistmica. Este aumento en la actividad de las MMPs se ve reducido hasta niveles basales en las ratas consmicas MWF-8SHR.
Conclusiones: El aumento de la actividad de las MMPs es especfico del desarrollo de albuminuria en pacientes hipertensos, incluso
cuando existe un buen control de la presin arterial con inhibidores
del SRA. El incremento de la actividad de las MMPs a nivel sistmico
podra reflejar un incremento la actividad de estas enzimas a nivel
tisular. En la prctica clnica, la exclusiva determinacin de la concentracin sistmica de las MMPs, podra no estar reflejando su
actividad real.
Agradecimientos: Ministerio de Economa y Competitividad
(BFU2011-25303), Grupos UCM (GR921641), Deutsche Forschungs
Gemeinschaft (DFG KR1152-3-1) y la Fundacin Mutua Madrilea.
lisis del proteoma de las microvesculas circulantes en sangre de

pacientes con albuminuria prolongada o desarrollada de novo, en
comparacin con un grupo normoalbuminrico de pacientes hipertensos con bloqueo del SRA, con el fin de aportar nuevos biomarcadores de riesgo cardio-renal y de eficiencia teraputica.
Mtodos: En este estudio, se ha analizado el contenido proteico
de las microvesculas circulantes mediante marcaje isobrico
iTRAQ por cromatografa lquida acoplada a espectrometra de masas (LC-MS/MS), en pacientes con albuminuria, prolongada o desarrollada de novo, frente a pacientes normoalbuminricos con HTA,
con el fin de identificar biomarcadores con valor pronstico. Las
microvesculas han sido aisladas mediante un protocolo de ultracentrifugacin optimizado para evitar la contaminacin de protenas del plasma. La pureza de la fraccin aislada ha sido verificada
mediante microscopa electrnica y confocal, western blot y citometra de flujo.
Resultados: El anlisis protemico de microvesculas circulantes
ha permitido definir un grupo de 23 protenas cuya expresin aparece alterada en un contexto de ineficacia del tratamiento teraputico antihipertensivo. Algunas de estas protenas reflejan fenmenos de disfuncin endotelial, inflamacin y un entorno
pro-trombtico en los pacientes albuminricos.
Conclusiones: El estudio realizado ha mostrado el valor del proteoma de microvesculas circulantes como fuente no-invasiva de
biomarcadores alternativa al plasma. Adems, presenta la ventaja
de evitar el elevado rango dinmico de concentracin de este ltimo. Las protenas diferencialmente expresadas por las microvesculas evidencian una mayor disfuncin endotelial, inflamacin y
riesgo trombtico asociados con el desarrollo de albuminuria, lo
que muestra su potencial valor en el seguimiento de pacientes con
HTA.
32. UNA ISOFORMA ALTERNATIVA DEL GEN P22PHOX

DISMINUYE LA ACTIVIDAD NADPH OXIDASA
Y SU EXPRESIN SE ASOCIA CON LAS CIFRAS DE PRESIN
ARTERIAL SISTLICA
A. Pejenaute1, G. San Jos2, P. Saldanha3, M. Fortn Landecho3,
O. Beloqui3, A. Fortuo2 y G. Zalba1
31. EL PROTEOMA DE LAS MICROVESCULAS

CIRCULANTES CONSTITUYE UNA NUEVA FUENTE
DE BIOMARCADORES PARA LA EVALUACIN
DE LA RESPUESTA TERAPUTICA EN PACIENTES
MICROALBUMINRICOS CON BLOQUEO DEL SISTEMA
RENINA-ANGIOTENSINA
F. de la Cuesta1, M. Baldan-Martn1, L. Mourino-lvarez1,
G. lvarez-Llamas2, L. Gonzlez-Calero2, G. Ruiz-Hurtado3,
J. Segura4, F. Vivanco2, L.M. Ruilope3 y M.G. Barderas1
Laboratorio de Fisiopatologa Vascular, Hospital Nacional de
Parapljicos, SESCAM. 2Departamento de Inmunologa,
IIS-Fundacin Jimnez Daz. 3Departamento de Riesgo
Cardiovascular e Hipertensin, IIS-Hospital 12 de Octubre.
4
Unidad de Hipertensin, Hospital 12 de Octubre.
1
Objetivo: La albuminuria es un potente predictor de eventos

cardiovasculares y renales. La ineficiencia de la supresin del sistema renina-angiotensina (SRA) est asociada con la aparicin de albuminuria. Las microvesculas son liberadas al torrente circulatorio
por determinados tipos celulares a consecuencia de procesos de
transporte, activacin o muerte celular. El recuento de microvesculas circulantes de origen plaquetario y endotelial ha demostrado
tener un importante papel como biomarcador cardiovascular. Por lo
tanto, el proteoma de estas microvesculas podra reflejar los procesos subyacentes en pacientes con hipertensin arterial (HTA) y
albuminuria. El objetivo principal del presente estudio fue el an-
Departamento de Bioqumica y Gentica, Universidad de

Navarra. 2rea de Ciencias Cardiovasculares, CIMA, Universidad
de Navarra. 3Departamento de Medicina Interna, Clnica
Universidad de Navarra.
1
Objetivo: La activacin de la familia de las NADPH oxidasas (NOXes) se asocia con la hipertensin arterial (HTA) y la enfermedad
vascular. Una mayor expresin de p22phox, una subunidad comn
del citocromo de NOX1, NOX2 y NOX4, as como la presencia de
ciertas variantes allicas, se asocian con una mayor actividad de
las NOXes, con la HTA y con el riesgo cardiovascular. El presente
estudio pretende identificar nuevas isoformas de p22phox, y estudiar su relevancia en la activacin de las NOXes, y en la fisiopatologa de la HTA y de la enfermedad vascular.
Mtodos: Las potenciales isoformas de p22phox se identificaron
mediante un screening en genotecas de cDNA-Marathon. Las isoformas identificadas fueron clonadas en un vector de expresin adenoviral. La expresin proteica de p22phox, la actividad NADPH oxidasa y la actividad caspasa, se analizaron en clulas endoteliales
de aorta bovina, por Western blot, luminiscencia y colorimetra,
respectivamente. La expresin del mRNA de las isoformas de
p22phox se determin mediante PCR, en clulas blancas mononucleadas obtenidas de una poblacin de individuos asintomticos
(n= 220).
Resultados: El screening por PCR de una genoteca cDNA-Marathon identific, adems de la isoforma salvaje, una isoforma alternativa de p22phox que careca del exn 4. La delecin del domi-
nio codificado por este exn no alteraba el marco de lectura de
esta isoforma alternativa, que generaba una protena de menor
tamao de 19 kDa. En comparacin con los efectos obtenidos al
expresar la isoforma salvaje de p22phox, la expresin de la isoforma alternativa se asoci con una menor actividad NADPH oxidasa y
con una menor activacin de caspasas. En el estudio en humanos
encontramos que los niveles de mRNA de la isoforma salvaje eran
sustancialmente mucho ms altos que los de la isoforma alternativa. Es interesante resaltar que la expresin de la p22phox alternativa correlacionaba positivamente con las cifras de presin arterial
sistlica; sus niveles tambin correlacionaban con los niveles de
expresin de la isoforma salvaje y con los valores de actividad
NADPH oxidasa.
Conclusiones: Nuestros resultados nos permiten especular con la
posibilidad de que la isoforma alternativa sea un reflejo de situaciones de estrs oxidativo crnico, que pudiera actuar como un
modulador de la activacin de las NOXes y de sus efectos deletreos. La caracterizacin de los mecanismos que favorecen la expresin de esta isoforma permitira en un futuro disear nuevas acciones teraputicas encaminadas a prevenir la activacin de las NOXes
y sus efectos oxidantes en la HTA.
15

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