ANLISIS ORGNICO

MANUAL DE PRACTICAS DE
LABORATORIO
MVZ FATIMA DEL ROCO JUAREZ ALVIZU

Este documento contiene las prcticas que se llevaran a cabo dentro del
laboratorio en la materia de Anlisis Orgnico.

ANLISIS ORGNICO

No
.

1er Parcial

1
2
3
4
5
6
7

2do parcial

3er parcial

8
9
10
11
12
13
14

Nombre de la Practica

Medidas de seguridad e Higiene en la

manipulacin de muestras Biolgicas
Conocimiento y uso del Microscopio Compuesto
Tcnicas de Enfoque
Tipos de Esterilizacin
Preparacin de medios de cultivo
Tcnicas de cultivo y cultivo farngeo
Tincin de Gram
Observacin de los Cultivos de hongos y
levaduras
Inyeccin intramuscular y toma de muestra
sangunea
Tipos sanguneos
Observacin de clulas sanguneas
Examen coproparasitoscopico tcnica directa
Examen general de orina
Productos de excrecin en la Orina
Espermatobioscopa

PRACTICA No.1

MICROSCOPIA (CLASIFICACION Y CARACTERISTICAS

GENERALES DEL MICROSCOPIO)
Objetivo: El alumno conoce las partes, la clasificacin y obtiene
habilidad en la manipulacin del microscopio compuesto.
A) Explicar que es un microscopio
B) Enunciar la clasificacin de los microscopios
C) Identificar por su nombre todas las partes del microscopio, as como
su funcin.
INTRODUCCION:
Mucho antes de que se conocieran los principios de la ptica, a medida
que la tecnologa del vidrio avanzaba, comenzaron a aparecer, casi
paralelamente, los primeros instrumentos para observar tanto lo enorme
como lo diminuto: el telescopio y el microscopio. Se atribuye a los
fabricantes de anteojos el descubrimiento, con solo un par de dcadas
de diferencia, de estos dos instrumentos.
Galileo oy hablar del telescopio, y en 1609 ya haba construido el suyo
e intento alguna vez utilizarlo como microscopio. En 1625, fue el mdico
John Faber (1574-1629) quien acuo un nombre para designar el novel
artefacto Me ha complacido llamar microscopio al tubo ptico,
apegndome al termino telescopio como modelo, pero aplicndolo al
aparato destinado a observar los objetos minsculos. Probablemente la
primera vez que se utiliz el microscopio con propsitos mdicos fue en
1655, Cuando Pierre Borel expuso que haba logrado visualizar seres con
forma de gusanos en la sangre de pacientes con fiebre.
Un microscopio se define como: Aparato ptico destinado a la
amplificacin de la imagen de partculas no perceptibles a simple vista.
Mkros= pequeo Skopein= Observar.
Antonio Van Leewenhjoek (1632-1723) aficionado a la ptica
rudimentaria de su tiempo logro tallar una lente con gran poder de
aumento con la cual pudo observarse el mundo microbiano desconocido
hasta entonces. Zacarias Jansen construy el primer microscopio
compuesto combinando dos lentes: Ocular y Objetivo. Robert Hooke
introdujo el condensador. Cuff-Baker agrego los tornillos micromtrico y
micromtrico.

CLASIFICACION DE LOS MICROSCOPIOS

CONTRASTE DE FASES
SIMPLE
CAMPO CLARO
FOTONICO (LUZ CONV)------COMPUESTO
CAMPO OBSCURO
INTERFERENCIA DE FASES
FLUORESCENCIA

LUZ POLARIZADA
ELECTRONICOS
No.DE OCULARES
(ELECTRONES)
Se utilizan radiaciones de haces de corta longitud
MONOCULAR, BINOCULAR
De corta longitud de electrones, dentro de un tubo de descarga al alto vacio TRIOCULAR,
TETRAOCULAR

A las partes del microscopio las ubicamos en tres sistemas:

(1)SISTEMA MECANICO: Agrupa las piezas que permiten el manejo y
sustentacin del microscopio.
TUBO OCULAR. Conduce la imagen por medio de un sistema de espejos
internos.
REVOLVER. Disco giratorio que sostiene los objetivos y permite
seleccionarlos.
BRAZO. Sirve para sustentar al microscopio y moverlo de un lugar a otro.
PLATINA. Sobre ella se coloca la preparacin a observar.
CARRO MOVIL. Permite deslizar la preparacin en sentido vertical y
horizontal.
TORNILLO MACROMETRICO. Sirve para hacer movimientos rpidos y
acercar el objetivo a la preparacin en su enfoque.
TORNILLO MICROMETRICO. Sirve para hacer movimientos lentos y define
la imagen.
CREMALLERA. Es un engrane que permite el movimiento del tubo o
platina, se encuentra ensamblada en el brazo.
CHARNELA. En algunos modelos es un tornillo que une el brazo a la
columna y permite inclinarlo.
BASE: Es la que sostiene la estructura del microscopio.
(2) SISTEMA OPTICO. A este sistema lo forman las lentes de aumento.

OCULAR. Se llama as por estar en contacto con el ojo del investigador,

puede tener aumento de 10X, 12.5X, 15X.
OBJETIVOS. Seco dbil o 10X. Seco fuerte o 40X, estos objetivos se
llaman as porque no se usa ningn liquido de por medio entre el lente y
la preparacin. Objetivo de inmersin o 100X a este objetivo se le llama
as porque se utiliza una gota de aceite especial de pino o cedro entre el
lente y la preparacin.
(3) SISTEMA DE ILUMINACION. Este sistema proporciona y regula la
iluminacin.
FUENTE DE LUZ. Foco que proporciona la iluminacin.
CONDENSADOR. Son una serie de lentes que concentran la luz sobre el
campo de la preparacin.
DIAFRAGMA. Se encuentra junto al condensador, tiene la funcin de
regular el paso de luz y por lo tanto su intensidad.
FILTRO: Tiene la funcin de filtrar solo la luz necesaria.
REGLAS GENERALES PARA EL CUIDADO DEL MICROSCOPIO
1. Traslado. Se toma con la mano derecha el brazo del microscopio y con
la mano izquierda la base.
2. El cordn se deber enrollar sobre s mismo, no alrededor del cuerpo
del microscopio.
3. El microscopio se encender hasta que comience la observacin.
4. Ya encendido, no se apagar constantemente, sino hasta finalizar la
observacin de todas las muestras que se indiquen en la prctica,
mientras no se observe, se disminuir la intensidad luminosa.
5. Mientras permanezca encendido se evitar realizar cualquier
movimiento brusco.
6. Se evitar manejarlo con las manos hmedas o mojadas.
7. Cuando no se est observando, deber eliminarse la lente ocular con
el objeto de menor aumento.
8. El sistema ptico y de iluminacin nunca deber ser tocado con los
dedos.
9. No se debern colocar los portaobjetos mojados sobre la platina.
10. Despus de usar el lente de inmersin se deber limpiar con un pao
suave o con un papel higinico.
11. En las preparaciones en fresco siempre deber cubrirse con
cubreobjetos.
OBSERVACIONES
Realizar un esquema del microscopio indicando los sistemas que lo
componen as como el nombre de las diferentes partes con las que
cuenta.

CONCLUSIONES

Practica 2
TECNICAS DE ENFOQUE

OBJETIVOS:
1. Manejar adecuadamente las partes del microscopio
2. Aprender a enfocar correctamente en el microscopio
3. Conocer los cuidados del microscopio
4. Aprender a preparar una muestra adecuadamente para la observacin
al microscopio
INTRODUCCION
El estudio de los organismos vivos requiere de aparatos de precisin
como lo es el microscopio, en el laboratorio empleamos dos tipos:

MICROSCOPIO COMPUESTO. El cual utiliza un juego de 2 lentes (ocular y

objetivos) para ampliar la imagen, la cual se observa invertida. Las
muestras apropiadas para su observacin sern aquellas que dejen
pasar luz a travs de ellas, debern de ser monoculares.
MICROSCOPIO ESTEREOSCOPICO O LUPA BINOCULAR. La visin se
obtiene por reflexin de la luz que incide sobre la muestra, posee un
inversor que permite observar la imagen derecha. Su observacin es
generalmente de conjunto, debido a su gran campo; por ejemplo: se
puede observar una mosca completa, mientras que en microscopio
compuesto, slo sera posible
ver las alas y stas por ser muy transparentes. La visin estereoscpica
o sensacin de relieve se obtiene cuando cada ojo recibe una imagen
por separado captada por cada sistema ptico prcticamente cada
ocular constituye un microscopio compuesto independiente.
NOTA: El smbolo X (por) que aparece despus del nmero de cada
lente, significa que se deber multiplicar el aumento de la lente objetivo
por el aumento de la lente ocular, para as obtener el aumento total
alcanzado por el juego de lentes.
MATERIAL POR EQUIPO
SUSTANCIAS A UTILIZAR
1 Microscopio
Agua Sucia
3 Cubreobjetos
Agua
1 Gotero
Lugol
3 Portaobjetos
Muestras de hojas (pequeas y delgadas)
Muestras de ptalos (pequeos y delgados y no rojos)
Una Cebolla
PROCEDIMIENTO:
1.-El alumno mencionara el nombre y funcin de las partes del
microscopio compuesto
2.-Posteriormente intentara encontrar el enfoque una vez que haya
colocado la preparacin correctamente.
3.-Realizara un dibujo de sus observaciones, indicando el objetivo
utilizado, el nmero de aumentos y el nombre de las estructuras de la
muestra.
OBTENCION DE UN BUEN ENFOQUE:
l. Colocar el portaobjetos sobre la platina del microscopio.
2. Utilizar el objetivo de menor aumento.
3. Deslizar el tubo del microscopio por medio del tornillo macromtrico,
observando lateralmente hasta que el objetivo quede cerca del
portaobjetos.
4. Observar a travs de los oculares subiendo lentamente el tubo del

microscopio hasta observar la preparacin enfocada, no debe bajarse el

tubo del microscopio mientras se est observando, porque puede llegar
a chocar el objetivo con el portaobjetos y ocasionar desperfectos.
5. Afinar la imagen moviendo lentamente el tornillo micromtrico.
6. Si se desea mayor aumento, girar el revolver al objeto adecuado.7. Si
se utiliza el objeto de inmersin (100 X) colocar sobre la preparacin una
gota de aceite de inmersin y baja el tubo del microscopio hasta que la
lente del objetivo toque a la gota, observa y ajusta cuidadosamente
despus de su uso limpiar el objetivo con un tejido suave (papel seda).
CUESTIONARIO:
1.-Define que es un microscopio
2.-Describe los microscopios simple y compuesto.
4.-Describe la importancia del microscopio compuesto para el estudio de
la Biologa y Qumica.
OBSERVACIONES Y CONCLUSIONES

Prctica 3:
Mtodos de esterilizacin.
Planteamiento del problema
Cmo se deben esterilizar los materiales de cristal?
Cmo podemos esterilizar usando una olla express?
Objetivos
Conocer los diversos mtodos de esterilizacin.
Aprender a esterilizar por el mtodo hmedo.
Esterilizar los materiales necesarios para el cultivo de bacterias.
ACTIVIDAD PREVIA: Realizar una hiptesis del experimento
Introduccin
La esterilizacin comprende todos los procedimientos fsicos, mecnicos y
preferentemente qumicos, que se emplean para destruir grmenes patgenos.
Los sistemas de esterilizacin ms utilizados en la actualidad son los
siguientes.
ESTERILIZACIN POR VAPOR DE AGUA

Es el proceso mediante el cual se somete a los microorganismos a la

accin del calor a 121 - 134C con la inyeccin de vapor saturado y seco
a presin. El ciclo de 121C es de 15, el de 134C de 7, existe un
programa de Priones a 134C de 20.
La esterilizacin en autoclave por vapor de agua es el mtodo de
esterilizacin por excelencia al presentar una elevada eficacia por su
capacidad de penetracin, fiabilidad, facilidad de monitorizacin,
seguridad, ausencia de residuos txicos y resultar el ms econmico de
los sistemas tradicionales dentro de la esterilizacin hospitalaria.
Existe un ciclo rpido denominado Ciclo Flash, de corta duracin, que
slo se debe utilizar para material de uso inmediato y no requiere
empaquetado. Este mtodo de esterilizacin se cre para su utilizacin
en el propio punto de actividad; Su utilizacin debe quedar limitada a
situaciones de emergencia, en el transcurso de una intervencin, o
cuando no es posible la utilizacin de otro mtodo alternativo.
ESTERILIZACIN POR GAS DE OXIDO DE ETILENO

Es un proceso de esterilizacin a baja temperatura 30-60C, mediante el

cual se somete a los microorganismos a la accin qumica del xido de
Etileno. Se presenta como gas o lquido incoloro, puro o con mezcla, en
general, con fren. Penetra con facilidad a travs de materiales de goma
y plstico en estado gaseoso. Es un agente esterilizante muy eficaz.
Esteriliza todos los materiales termo sensibles que no se pueden
esterilizar con vapor. El material esterilizado requiere aireacin para que
se eliminen los residuos del gas. La duracin del ciclo es de 3 horas y el
periodo de aireacin suele ser de 12 horas.
Es inflamable, txico y reactivo, por lo que se necesita formacin
adecuada para su utilizacin, con el fin de evitar riesgos para la salud.
La limitacin ms importante de este sistema es el periodo de aireacin
necesario para eliminar la toxicidad.
ESTERILIZACIN
HIDRGENO.

POR

GAS

PLASMA

DE

PERXIDO

DE

Proceso de esterilizacin a baja temperatura que consiste en la difusin

de perxido de hidrgeno en fase plasma, estado entre lquido y gas,
que ejerce la accin bicida. El perxido de hidrgeno no deja ningn
residuo txico. Se convierte en agua y oxgeno al final del proceso. El
material no precisa aireacin. El ciclo de esterilizacin dura entre 54 y
75 minutos.
Limitaciones: no se pueden esterilizar objetos que contengan celulosa,
algodn, lquidos, humedad, madera o instrumental con lmenes largos
y estrechos. Es el mtodo de esterilizacin ms caro de entre los
descritos.
ESTERILIZACIN POR FORMALDEDO
Es un sistema que utiliza formaldehdo al 2% con vapor a baja
temperatura en vaco. Es ms txico que el xido de Etileno y no est
claramente demostrada su eficacia, por lo que es el sistema de
esterilizacin menos usado.
TRANSPORTE DEL MATERIAL ESTERIL
La integridad del envoltorio ha de estar garantizada durante el
transporte. El material voluminoso se distribuye en carros, el de
pequeo tamao en bolsas de plstico cerradas.
ALMACENAJE DEL MATERIAL ESTERIL EN LAS UNIDADES DE
ENFERMERA

Una vez fuera de la central el material se almacena en un lugar limpio,

seco y fcil de limpiar. Se almacena lo necesario y se coloca por orden
de fecha de caducidad.
Ahora bien, nos enfocaremos al estudio del mtodo de esterilizacin por
calor hmedo.
El calor hmedo destruye los microorganismos por coagulacin de sus
protenas celulares.
El principal mtodo de esterilizacin que emplea calor hmedo es la
esterilizacin por vapor a presin.
Existen otros mtodos de descontaminacin que emplean este tipo de
calor los cuales, aunque no permiten la destruccin total de los
microorganismos, disminuyen la carga microbiana que posee un
material.
Entre estos mtodos podemos citar:
Tindalizacin (esterilizacin fraccionada).
Agua hirviendo.
Pasteurizacin.
Olla de presin.
Esterilizacin por vapor a presin
La esterilizacin por vapor a presin se lleva a cabo en una autoclave.
Estos equipos emplean vapor de agua saturado, a una presin de 15
libras lo que permite que la cmara alcance una temperatura de 121C.
El tiempo de esterilizacin usualmente es de 15 minutos, sin embargo,
en algunas oportunidades, dadas las caractersticas del material, es
necesario variar el tiempo de esterilizacin.
Cuando se utiliza este mtodo es importante controlar en el autoclave la
relacin entre la temperatura, la presin y el tiempo de exposicin, ya
que stos son factores crticos en el proceso.
Slo cuando el vapor se coloca bajo presin, es cuando su temperatura
aumenta por encima de los 100C y esto permite alcanzar las
temperaturas de esterilizacin (121C).
Entre las ventajas de este mtodo de esterilizacin tenemos que no deja
residuos, las autoclaves modernas son sencillas de manejar y es un
mtodo rpido de esterilizacin. ste es el mtodo de eleccin para
esterilizar materiales termoestables y no sensibles a la humedad como
medios de cultivo, cultivos de microorganismos para descartar, lencera,
uniformes, instrumentos quirrgicos, etc.

Entre sus desventajas estn que no permite la esterilizacin de

materiales sensibles al calor y materiales no miscibles con el agua como
es el caso de polvos, aceites y grasas.
Precauciones:
Antes de comenzar el proceso de esterilizacin es necesario remover
todo el aire de la cmara de la autoclave, porque de lo contrario no se
podrn alcanzar las condiciones de esterilizacin requeridas debido a
que la cmara interna del equipo no podr ser saturada por el vapor de
agua.
El tiempo de esterilizacin se debe comenzar a contar una vez que se
han alcanzado los 121C en la cmara interna de la autoclave.
Si se van a esterilizar materiales tales como instrumentos quirrgicos,
equipos, etc. no se deben cubrir con materiales impermeables al agua
como por ejemplo el papel de aluminio, porque ste no permite que el
vapor tenga acceso al material y por lo tanto no se lograr la
esterilizacin.
Cuando se coloca el material a esterilizar en el interior del equipo se
debe garantizar la libre circulacin del vapor de agua alrededor de todo
el material.
Para controlar la esterilizacin por vapor a presin se emplean
indicadores fsicos tales como medidores de presin, termmetros, o
termgrafos.
Entre los indicadores biolgicos ms utilizados para controlar el proceso
de esterilizacin por vapor a presin, se encuentran las esporas de
Bacillus stearothermophilus que son altamente resistentes a este
proceso.
Con la informacin que se ha estudiado, podremos
adecuadamente la esterilizacin de nuestro material.
MATERIAL POR EQUIPO

Una olla de presin.

Un metro de lino o cabeza de Indio
Una cinta para curaciones.
1 cajas de petri.
3 tubos de ensayo.
1 tubos de ensayo con tapn.
2 mecheros Bunsen.
2 tripis.

PROCEDIMIENTO DEL EXPERIMENTO

realizar

Sustancias
Agua.

1.-Cortar el lino de tal manera que se ajuste a la medida de los

materiales a esterilizar.
2.- Colocar los materiales sobre un pedazo de tela, envolver el material y
ajustar con cinta para curaciones.
3- Colocar agua en la olla de presin.
4.- Colocar el material dentro de la olla de presin y cerrar la olla.
5.- Encender los mecheros que calentarn la olla de presin.
6.- Medir 15 minutos despus de que comience a burbujear el contenido
de la olla de presin.

ANALISIS DE LOS RESULTADOS

CONCLUSIONES

PRACTICA: 4
PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO
OBJETIVOS:
1. Establecer los fundamentos tericos para la preparacin de medios de
cultivo.
2. Aprender la clasificacin y uso de los medios de cultivo.
3. Preparar medios de cultivo y manejar adecuadamente la autoclave.
ACTIVIDADES PREVIAS
a) Haz un diagrama de flujo del procedimiento a seguir en esta prctica.
b) Haz un esquema de una autoclave, indicando como funciona.
En una hoja aparte (por equipo), haz los clculos necesarios para
preparar 200 mL del medio empleado en la clase.
ELABORAR SU HIPOTESIS
INTRODUCCIN:
Un medio de cultivo es un material alimenticio que se usa en el
laboratorio para el desarrollo de los microorganismos. Una vez que ha
sido preparado, un medio de cultivo puede ser inoculado (es decir, se
le aaden organismos) y a continuacin incubado en condiciones que
favorezcan el crecimiento microbiano. El crecimiento de los
microorganismos es el cultivo. Un cultivo axnico o puro contiene un
nico tipo de microorganismos.
Los medios de cultivo deben contener los nutrientes y factores de
crecimiento necesarios y deben estar exentos de cualquier
microorganismo contaminante.

Los medios de cultivo contienen como mnimo: carbono, nitrgeno,

azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos casos sern necesarias
ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento. Tambin
se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por
ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de
unas bacterias y no de otras. El agar es el principal agente solidificante
utilizado en medios bacteriolgicos. Se disuelve completamente a 100C
y se solidifica al enfriarse a 40C.
De acuerdo a su consistencia, los medios de cultivo pueden clasificarse
en:
Lquidos: Se utilizan para el crecimiento de cultivos puros en lote.
Se denominan caldos de cultivo y no tienen agar en su formulacin.
Semislidos: Contienen 0.5% de agar en su formulacin. Se utilizan
para estudiar la movilidad de las bacterias (presencia o ausencia de
flagelo).
Slidos: Contienen de 1.5 a 2% de agar en su formulacin. Estos
medios inmovilizan a las clulas, permitindoles crecer y formar masas
aisladas visibles llamadas colonias. Las colonias permiten al
microbilogo reconocer la pureza del cultivo; las placas que contengan
ms de un tipo de colonia no provienen de un cultivo puro. Las placas de
agar tambin se utilizan para la determinacin de clulas viables
(recuento en placas).
De acuerdo a su composicin, los medios de cultivo pueden clasificarse
en:
Definidos: es aqul medio de cultivo del cual se conoce su
composicin exacta. Son muy utilizados en estudios fisiolgicos. Los
medios mnimos son medios definidos que nicamente le proporcionan
al microorganismo los nutrientes necesarios para crecer, pero no para
desarrollarse ptimamente.
Complejos: es aqul del cual no se conoce la composicin exacta
del medio. A menudo, los medios complejos emplean sangre, leche,
extracto de levaduras, extracto de carne u otras sustancias muy
nutritivas pero de las cuales se desconoce la composicin qumica
exacta. Estos medios son muy utilizados para cultivar bacterias
desconocidas o bacterias de requerimientos nutricionales muy
complejos.
De acuerdo a su funcin, los medios de cultivo se clasifican como:
Medios selectivos: Son aqullos que poseen uno o ms
componentes aadidos, los cuales inhibirn o prevendrn el crecimiento
de ciertos tipos de especies de bacterias y/o promovern el crecimiento
de las especies deseadas. Uno puede ajustar las condiciones fsicas de
un medio de cultivo tales como el pH, la temperatura, para hacerlo
selectivo para los organismos de inters.
Medios diferenciales: Permiten al investigador distinguir entre
diferentes tipos de bacterias con base en alguna caracterstica
observable en su patrn de crecimiento en el medio, ya sea por

produccin de algn pigmento o por cambios de color en el medio

debido a indicadores de pH, o por halos de degradacin de algn
componente en el medio de cultivo.
Medios de enriquecimiento: Contienen algn componente que
permite el crecimiento de cierto tipo especfico de bacteria, pero no
contienen sustancias inhibidoras.
Medios enriquecidos: Se emplean para cultivar microorganismos
que requieren un gran nmero de factores de crecimiento.
Generalmente contienen extractos biolgicos poco usuales como sangre,
suero en polvo, extracto de cerebro de res, yema de huevo, etc.
MATERIAL POR EQUIPO:
- 2 mecheros
- olla de presin.
- 1 agitador
- 1 matraz de 250 mL
- 1 balanza
- 1 esptula
- 1 probeta de 250 mL
- 3 cajas de Petri estriles desechables
- Masking tape
- Plumn indeleble
- Algodn y gasa
- Reactivos para el medio de cultivo
PROCEDIMIENTO:
1. Pesar los reactivos necesarios para preparar 200 mL de medio (por
equipo).
Ponerlos en el matraz.
2. Con la probeta, medir 200 mL de agua destilada y aadirla al matraz
con el polvo.
3. Disolver muy bien con el agitador con una para que la suspensin se
mezcle homogneamente.
4. introduce tu matraz en el interior de la olla de presin. Cirrala
siguiendo las indicaciones de la maestra.
5. Tapa el matraz. Tiene que llegar hasta 15 lb/in2. A partir de este
momento, debers tomar el tiempo de 20 minutos. Debers tener
cuidado de que la presin de la olla, nunca rebase los 20 lb/in2, ni est
por debajo de los 15 lb/in2. Esto se puede controlar acercando y
retirando el mechero, segn te indique la maestra.
6. Transcurridos los 15 minutos, apaga los mecheros. Dejar enfriar la olla
por unos minutos, si es posible llevarla a la tarja y abrir la llave del agua
para que se enfre. La olla puede abrirse nicamente cuando el
manmetro marque cero. Antes no ya que podra explotar!

7. La olla se abre utilizando guantes de asbesto, procurando que nadie

quede de frente hacia donde se abre la tapa, ya que saldr mucho vapor
caliente que causa quemaduras. Una vez que se abri con cuidado, con
ayuda de la franela y los guantes, sacar el matraz.
8. Vaciar el medio en las cajas de Petri estriles siguiendo la tcnica
asptica. Las cajas no pueden ser destapadas. Las tapas no se tocan por
dentro con los dedos, ni se sacan del rea de esterilidad.
9. Ya slidas, se cierran adecuadamente y se etiquetan con el tipo de
medio, equipo, grupo y fecha de elaboracin. Guardar en el refrigerador
para utilizar la siguiente prctica.
10. Vaciar el agua de la autoclave con cuidado de no quemarse.
CUESTIONARIO:
a) Glosario. (Define los siguientes trminos).
1. Factor de crecimiento
2. Elemento traza
3. Macronutrientes
4. Micronutrientes
5. Peptona
6. Triptona
7. Extracto de levadura
8. Indicador de pH
9. Autoclave
10. Campana de flujo laminar
b) Haz un diagrama de flujo del procedimiento a seguir en esta prctica.
c) Haz un esquema de una autoclave, indicando como funciona.
En una hoja aparte (por equipo), haz los clculos necesarios para
preparar 250 mL del medio empleado en la clase.
ANALISIS DE RESULTADOS
CONCLUSIONES

Prctica no.5
Tcnicas de cultivo y Cultivo farngeo
COMPETENCIAS: Realiza algunas de las tcnicas de cultivo utilizadas
en el laboratorio de bacteriologa: estras, picadura y agitacin.
Identifica algunas especies que conforman la flora patgena que se
pueden desarrollar en la regin farngea.

ACTIVIDAD PREVIA:

Investiga la forma correcta de tomar la caja de Petri para realizar la

siembra y la distancia a la que se debe trabajar del mechero Bunsen.
Realiza un esquema de las diferentes tcnicas de siembra.
MATERIAL:
Medios de cultivo estriles (en placa, tubo inclinado, caldo o tubo
vertical).
Asa bacteriana y aguja de inoculacin.
Mechero Bunsen.
Placa de agar sangre
Placa de agar eosina azul de metileno
Hisopos estriles
Asa bacteriolgica
Abate lenguas estriles
INTRODUCCIN
La utilizacin de cultivos es fundamental para determinar las
caractersticas fsicas, qumicas y bioqumicas de los microorganismos;
en este caso, principalmente de las bacterias. Para ellos contamos con
un gran nmero y tipo de ellos, as como diversas tcnicas de cultivo
que nos facilitan el trabajo. El mdico, con base en un examen
cuidadoso del paciente, puede sospechar que hay una enfermedad
infecciosa. Entonces se recolectan muestras de los tejidos o de los
lquidos infectados para anlisis microbiolgico entre otros estudios.
Hay un gran inters en la importancia de identificar con precisin el
patgeno, para el tratamiento apropiado de la enfermedad infecciosa.
Generalmente los laboratorios clnicos son capaces de aislar, identificar
y determinar la sensibilidad a antibiticos de la mayor parte de las
bacterias patgenas encontradas rutinariamente dentro de las 48 horas
de haber tomado la muestra.
Los cultivos de garganta se obtienen principalmente para detectar
estreptococos beta-hemolticos del grupo A.
Clnicamente puede sospecharse una faringitis estreptoccica si se
observa una mucosa difusamente enrojecida en un paciente que
experimenta dolor y dificultad para deglutir. La flora comensal est
compuesta por una variedad de bacterias facultativas y ciertas
levaduras. Normalmente, en la oro faringe se hallan combinaciones y

concentraciones variables de estreptococos alfa-hemolticos, especies

de Neisserias (no N. gonorrhoeae), estafilococos coagulasa negativos,
ciertas enterobacterias, etc.
TECNICA POR ESTRAS EN PLACA
1.- Prende el mechero Fisher para crear un rea estril y as evitar que te
contamines o se contaminen los medios de cultivo. Coloca las placas en
posicin invertida sobre la mesa de trabajo para que se facilite
manipularlas mejor.
2.- Esteriliza el filamento del asa de siembra y toma la parte de la caja
de petri que contiene el medio de cultivo sembrado. Cerca del mechero
espera que se enfre el asa y toma una colonia de la placa. Regresa la
caja a su tapadera.
3.- Ahora, toma una placa con agar estril (donde vayas a sembrar) y
con cuidado de no romper el agar, inocula la muestra en un extremo de
la placa y con el asa en posicin ligeramente horizontal realiza las
estras (muy juntas), oscilando el asa de siembra sobre la superficie de
una porcin pequea del agar; mediante un balanceo sucesivo y rpido
de la mueca.
4.- Esteriliza el asa de nuevo y djala enfriar. Rozar una vez con el asa
de siembra las estras sembradas la primera vez y realiza sobre una
porcin virgen del agar una segunda tanda de estras que no toque la
primera.
5.- Repetir exactamente la operacin descrita en el punto anterior, pero
rozando al empezar la segunda tanda de estras, hasta completar 3 o 4.
No hagas ms presin sobre el agar que la debida al propio peso del asa
y su mango. Es importante emplear un asa de siembra en buen estado,
pues una rota o deteriorada rasgar el agar.
6.- Lleva a la incubadora y deja en posicin invertida 24 horas al trmino
de las cuales se puede observar ya el desarrollo de colonias aisladas.
SEMBRADO POR ESTRAS EN TUBO INCLINADO
1.- Esteriliza el filamento del asa de siembra y toma la parte de la caja
de Petri que contiene el medio de cultivo sembrado. Cerca del mechero
espera que se enfre el asa y toma una colonia de la placa. Regresa la
caja a su tapadera.

2.- Ahora toma el tubo de agar en pico de flauta (agar inclinado) y cerca
del mechero retira el tapn de algodn ayudndote con los dedos
meique y anular y flamea la boca del tubo.
3.- Introduce el asa con la muestra (cuidando de no tocar las paredes del
tubo) y empezando en el rea del fondo del agar realiza una estra hacia
fuera hasta terminar en la punta del agar. Retira el asa.
4.- Flamea la boca del tubo de nuevo y coloca el tapn de algodn bien
firme. Esteriliza el asa y djala enfriar.
5.- Lleva a incubar y observa el desarrollo a las 24 o 48 horas despus
de la siembra.
OTRAS TECNICAS:
SEMBRADO POR AGITACIN EN CALDO
1.- Esteriliza el filamento del asa de siembra y toma la parte de la caja
de Petri que contiene el medio de cultivo sembrado. Cerca del mechero
espera que se enfre el asa y toma una colonia de la placa. Regresa la
caja a su tapadera.
2.- Ahora toma el tubo con el caldo estril y cerca del mechero retira el
tapn de algodn ayudndote con los dedos meique y anular, flamea la
boca del tubo.
3.- Introduce el asa con la muestra (cuidando de no tocar las paredes del
tubo) y por agitacin dentro del caldo, siembra el inculo. Retira el asa y
flamea de nuevo la boca del tubo y coloca el tapn de algodn
firmemente. Esteriliza el asa y djala enfriar.
4.- Lleva a incubar y observa el desarrollo a las 24 o 48 horas despus
de la siembra.
SEMBRADO EN PICADURA EN TUBO VERTICAL
1.- Esteriliza el filamento de la aguja de inoculacin y toma la parte de la
caja de petri que contiene el medio de cultivo sembrado. Cerca del
mechero espera que se enfre la aguja de inoculacin y toma una colonia
de la placa. Regresa la caja a su tapadera.
2.- Ahora toma el tubo con el medio de cultivo y cerca del mechero retira
el tapn de algodn ayudndote con los dedos meique y anular, flamea
la boca del tubo.

3.- Introduce la aguja con el inculo y sin tocar las paredes del tubo,
inocula en el centro del medio de cultivo sin llegar hasta el fondo del
tubo. Retira la aguja de inoculacin en la misma direccin de la siembra.
Retira el asa y flamea de nuevo la boca del tubo y coloca el tapn de
algodn firmemente. Esteriliza el asa y djala enfriar.
4.- Lleva a incubar y observa las caractersticas del desarrollo a las 24 o
48 horas despus de la siembra.
DESARROLLO
1.- Prende el mechero Fisher para crear un rea estril y as evitar que te
contamines o se contaminen los medios de cultivo. Coloca las placas en
posicin invertida sobre la mesa de trabajo para que se facilite
manipularlas mejor.
2.- Es muy importante el mtodo apropiado para obtener una muestra
de la garganta:
3.- Con una luz brillante desde por encima del hombro de la persona que
obtiene la muestra debe enfocarse en la cavidad oral abierta para guiar
el hisopo hacia la parte posterior de la faringe. Se instruye al paciente
para que respire profundamente y se deprime la lengua con suavidad
con un abate lenguas.
4.- Luego se extiende el hisopo entre los pilares amigdalinos y detrs de
la vula.
Debe tenerse la precaucin de no tocar las paredes laterales de la
cavidad oral.
5.- Hacer que el paciente diga ah sirve para levantar la vula y ayudar
a reducir el reflejo de arcadas (asco). El hisopo debe moverse hacia
atrs y hacia delante a travs de la parte posterior de la faringe para
obtener una muestra adecuada.
6.- Tomar un segundo hisopo siguiendo las mismas instrucciones y toma
la parte de la caja de petri que contiene el medio de cultivo.
7.- Inocula en un extremo de cada uno de los medios de cultivo (AS, EMB
y ASM) con los hisopos impregnados con la muestra farngea (recuerda
hacer todo el proceso cercas de la llama del mechero) y coloca los
hisopos en un medio de transporte como caldo estreptocel o Stuart, y
resrvalo.

8.- Esteriliza el filamento del asa de siembra en la llama del mechero y

djala enfriar. Con el asa en posicin ligeramente horizontal realiza las
estras (muy juntas), oscilando el asa de siembra sobre la superficie de
una porcin pequea del agar; mediante un balanceo sucesivo y rpido
de la mueca.
9.- Esteriliza el asa de nuevo y djala enfriar. Rozar una vez con el asa
de siembra las estras sembradas la primera vez y realiza sobre una
porcin virgen del agar una segunda tanda de estras que no toque la
primera.
10.- Repetir exactamente la operacin descrita en el punto anterior, pero
rozando al empezar la segunda tanda de estras, hasta completar 3 o 4.
No hagas ms presin sobre el agar que la debida al propio peso del asa
y su mango. Es importante emplear un asa de siembra en buen estado,
pues una rota o deteriorada rasgar el agar.
11.- Lleva a la incubadora y deja en posicin invertida 24 horas al
trmino de las cuales se puede observar ya el desarrollo de colonias
aisladas. Con ayuda de tu profesor trata de identificar las colonias
bacterianas desarrolladas en cada uno de los medios de cultivo.
CUESTIONARIO
1.- Menciona en qu casos se utilizan cada una de las tcnicas que
desarrollaste e indica las ventajas y desventajas de cada uno de los
cultivos.
2.- Cules son las medidas de seguridad que debes manejar durante el
proceso de ste tipo de tcnicas?
3.- Por qu es tan importante la deteccin de estreptococos betahemolticos en cultivos farngeos?
4.- Escribe los nombres de las bacterias de la flora normal de la
garganta, as como de la flora patgena, indicando en este ltimo caso
el tipo de enfermedad o complicacin para el paciente infectado.
Observaciones:
Conclusiones:

Prctica no.6
Tincin de Gram
COMPETENCIA: Realiza la tcnica de tincin de Gram para clasificar las
bacterias.
MATERIAL:

Cultivo bacteriano de 24 horas

Asa bacteriana
Colorante cristal violeta o violeta de genciana
Solucin de yodo-lugol o yodo gram
Alcohol-acetona (1:1)
Colorante de safranina

INTRODUCCIN
Esta coloracin, ideada por Hans Chistian Gram a fines del siglo XIX,
permite dividir a las especies bacterianas en dos grandes grupos:
aquellas que toman el colorante bsico, cristal violeta (gram positivas) y
aquellas que son decoloradas por el alcohol-acetona (gramnegativas). El
procedimiento clsico de la coloracin de Gram incluye la fijacin del
material, ya sea por calor en la llama del mechero o por accin del
alcohol. Luego de la fijacin, el primer paso de la coloracin de Gram es
la aplicacin del cristal violeta; a continuacin se agrega como
mordiente la solucin de yodo de Gram que fija qumicamente el
colorante alcalino a la pared bacteriana. La etapa de decoloracin
permite distinguir los grmenes Gram positivos de los Gram negativos.
Es probable que por el mayor contenido en lpidos de las paredes
celulares de las bacterias gram negativas, el alcohol o la acetona
aumenten la permeabilidad de la pared y el colorante sea eliminado.
Adems, la presencia de un mayor nmero de residuos de cido teicoco
con uniones cruzadas en las bacterias Gram positivas es posible que
aumente la fijacin del cristal violeta. Los microorganismos gram
positivos que han perdido la integridad de su pared celular debido a un
tratamiento con antibiticos, envejecimiento o accin de enzimas auto
lticas tambin permiten el escape del cristal violeta en la etapa de la
decoloracin. A esta altura de la coloracin, los organismos gram
positivos retienen el cristal violeta mientras que las gram negativas

permanecen sin teir. El agregado de un colorante de contraste como

safranina teir a estos microorganismos y clulas (leucocitos y
eritrocitos) de un color rosado o rojo. Las levaduras tambin son gram
positivas, aunque el micelio de los hongos toma la coloracin de Gram
en forma variable.

DESARROLLO
1.- Sobre un portaobjetos limpio y seco, se coloca una gota de solucin salina
fisiolgica o una gota de agua.
2.- Se esteriliza el filamento del asa de siembra a la llama del mechero y se
deja enfriar. Se toma una pequea cantidad de un cultivo bacteriano y se le
suspende en la gota de agua o solucin salina del portaobjetos. Tambin puede
ser utilizada una aguja de inoculacin estril para tomar la muestra bacteriana.
3.- Se deja secar al aire y luego se fija a la llama del mechero, pasndolo de 4 a
5 veces sobre esta; teniendo cuidado de no calentar demasiado pues el
portaobjetos puede romperse (no es vidrio pyrex). Tener cuidado al fijar el frotis
para evitar quemaduras.
4.- Tambin se pueden realizar frotis del material directo de las muestras
clnicas (exudados farngeos, heridas). Se hace rodar el hisopo con que se tom
la muestra sobre el portaobjetos limpio y se fija con calor para proceder a la
tincin.
a.- Cubrir el frotis bacteriano con cristal violeta durante 1 minuto. Enjuagar con
agua.
b.- Aplicar el yodo gram y dejarlo reaccionar durante 1 minuto. Escurrir.
c.- Ahora, decolorar con la solucin de alcohol-acetona, agregando gota a gota
en el portaobjetos inclinado sobre el fregador (o tarja), hasta que deje de salir
colorante. Enjuague.
d.- Finalmente cubrir el frotis con la solucin de safranina y dejarla actuar
durante 1 minuto. Lavar el exceso de colorante y dejar secar al aire.
e.- Coloca aceite de inmersin al frotis seco y teido para observarlo al
microscopio, con el objetivo de 100X.
f.- Realiza esquemas de lo observado e indica la forma, agrupacin y
caracterstica tintorial de los microorganismos observados.

CUESTIONARIO
1.- Por qu es necesario fijar el frotis antes de teirlo?
2.- Puede una bacteria Gram positiva teirse de Gram negativa? Por
qu?

3.- Qu otras tcnicas de tincin son utilizadas comnmente en el

laboratorio de bacteriologa? En qu casos se utilizan?
Observaciones:
Conclusiones.

PRACTICA No. 7
OBSERVACION DE HONGOS Y LEVADURAS
Objetivos:
1.-Que el alumno prepare el medio para el crecimiento de levaduras y
las identifique en el microscopio
2.-El alumno realizara las preparaciones e identificara a los hongos
sembrados y en general clulas eucariotas del reino de los hongos.
ACTIVIDADES PREVIAS
Preparacin de la levadura:
Para realizar una solucin acuosa de levadura, pon agua con azcar en
un recipiente. Agrgale un poco de levadura del comercio y agtalo hasta
que quede totalmente disuelta y con un aspecto lechoso homogneo.
Reparte la solucin en dos vasos. Coloca uno de ellos en un lugar
caliente a 37 grados durante 24 horas para que la levadura se divida por
gemacin.
BUSCAR IMGENES DE DIFERENTES TIPOS DE HONGOS
MICROSCOPICOS PARA QUE PUEDAN IDENTIFICAR LOS QUE
SEMBRARON.
Introduccin
El inters de esta prctica radica en que las levaduras son hongos
unicelulares muy abundantes en la naturaleza. Los podemos encontrar
tanto sobre las semillas, las frutas y las flores como en el suelo y en el
intestino de los animales.
Las levaduras tienen gran inters para la vida del hombre tanto por su
participacin en mltiples procesos de naturaleza industrial y
econmica, como la fermentacin del pan, de la cerveza y del vino; la
sntesis de algunas vitaminas, grasas y protenas, a partir de azucares
sencillos y nitrgeno amoniacal, as como en la produccin de
alteraciones patolgicas en los organismos animales (las candidiasis
producidas por la Candida albicans, en la piel y mucosas del hombre)
como vegetales (la Nematospora coryli puede infectar y destruir frutas y
verduras).

Las levaduras pueden buscarse tanto en su hbitat natural (flores,frutas,

etc.) o comprarla en aquellos establecimientos donde se vende para la
fabricacin del pan o la cerveza. Se trata de levaduras que pertenecen al
gnero Saccharomyces. En las farmacias se pueden comprar cpsulas
(Ultra- Levura) con la cepa Saccharomyces boulardii, donde se expenden
para
Los hongos son un grupo de seres vivos diferentes de las plantas y de
los animales, razn por la cual se clasifican en un reino aparte llamado
Fungi. La ciencia que los estudia se llama Micologa (Mykes=Hongo y
Logos=Estudio). Poseen gran capacidad de adaptacin y pueden
desarrollarse sobre cualquier medio o superficie, tanto en los bosques
como en las ciudades. Se reproducen por medio de esporas, las cuales
son diseminadas principalmente por el viento y por el agua.
Juegan un papel descomponedor, ya que transforman la materia
orgnica en sustancias ms simples y asimilables por otros seres vivos.
Pero tambin pueden desarrollarse formando asociaciones de beneficio
mutuo con races de plantas (micorrizas) y con algas dando origen a los
lquenes que son organismos totalmente diferentes a las plantas y a los
mismos hongos, mientras que algunos crecen sobre otros seres vivos
producindoles enfermedad o incluso la muerte.
Material por Equipo
(1) Microscopio
(2) Mechero de alcohol
(3) Portaobjetos
(4) Cubreobjetos
(5) asa de platino (asa microbiolgica) o una pipeta Pasteur.
(6) Frasco lavador
(7) Solucin de azul de metileno al 1%
(8) Pinzas para portaobjetos
(9) Frascos con soluciones de levadura
Procedimiento
1.-Con la ayuda de una pipeta Pasteur toma una gota de la solucin
Preparada y ponla sobre el portaobjetos limpio.
2.-Colcale un cubreobjetos encima y observa al microscopio. Si has
tomado la muestra del frasco con levaduras en gemacin, podrs ver
este fenmeno.
La misma muestra con colorante:
1.-Coloca una gota de la muestra en el portaobjetos y en seguida una
gota de colorante y djala as durante 15 minutos (azul de metileno al
1%). Lava la preparacin con agua destilada para arrastrar el exceso de

colorante y scala con papel de filtro o bien, al aire o con un chorro de

aire caliente.
2.-Colocale un cubreobjetos encima y observa al microscopio
3.-Identifica el tipo de hongo, aydate con el manual verde.
PARA LA OBSERVACION DE HONGOS, CAMBIAREMOS EL COLORANTE,
USAREMOS SAFRANINA.

CUESTIONARIO:
1.- Los hongos que se desarrollan sobre frutos almacenados o en
productos elaborados presentan las mismas caractersticas?
2.- Qu similitudes pueden apreciarse en los diferentes tipos de hongos
que se presentan sobre frutos y los productos almacenados?
3.- Presentan las mismas caractersticas los hongos que se desarrollan
sobre la materia orgnica muerta?

4.- Qu diferencias puedes enumerar entre levaduras y hongos?

ANALISIS DE RESULTADOS
CONCLUSIONES

Practica No. 8
INYECCIN INTRAMUSCULAR
COMPETENCIA: que el alumno sea capaz de aplicar una inyeccin
intramuscular en la zona adecuada puesto que es de vital importancia
para la vida cotidiana.
INTRODUCCION:
Una inyeccin intramuscular (IM) es una inyeccin de medicamento que
se administra en el msculo. Ciertos medicamentos necesitan
administrarse en el msculo para que funcionen correctamente.
Hay 3 partes en una jeringa: la aguja, el cilindro y el mbolo. La aguja se
introduce en el msculo. El cilindro contiene el medicamento y tiene
marcas como una regla. Las marcas estn en mililitros (ml). El mbolo se
usa para introducir y extraer el medicamento de la jeringa.

Las siguientes son las reas seguras para aplicar una inyeccin IM:

Msculo vasto lateral (muslo): El muslo es un buen lugar para

aplicar una inyeccin porque es fcil de verse. Tambin es un buen
lugar para los nios menores de 3 aos de edad.

Msculo ventrogluteal (cadera): La cadera es un buen lugar para

una inyeccin en los adultos y los nios mayores de 7 meses de
edad.

Msculo deltoides (msculo de la parte superior del brazo):

Descubra completamente la parte superior del brazo. Usted
aplicar la inyeccin en el centro de un tringulo invertido. Sienta
el hueso que atraviesa la parte superior del brazo. Este hueso
recibe el nombre de acromion. La parte baja de este hueso forma
la base del tringulo. La punta del tringulo queda directamente
bajo la mitad de la base cerca del nivel de la axila. El rea correcta

para aplicar la inyeccin es en el centro del tringulo, de 1 a 2

pulgadas debajo de la parte inferior del hueso acromion. Este lugar
no debera usarse si la persona es muy delgada o si el msculo es
muy pequeo.

Msculo dorsogluteal (glteos): Descubra un lado de los glteos.

Con una toallita de alcohol, dibuje una lnea desde la parte alta de
la hendidura que existe entre los glteos hasta el lado del cuerpo.
Encuentre la mitad de esa lnea y vaya 3 pulgadas hacia arriba.
Desde ese punto, dibuje otra lnea hacia abajo y cruce la primera
lnea, terminando en la mitad del glteo. Usted debe haber
dibujado una cruz. En el cuadro superior externo usted sentir un
hueso curvado. La inyeccin se aplicar en el cuadro superior
externo que est debajo del hueso curvado. No use este lugar para
los bebs o nios menores de 3 aos de edad. Los msculos no se
han desarrollado lo suficiente.

Es importante usar diferentes reas cada vez que administre una

inyeccin. Esto ayuda a evitar cicatrices y cambios en la piel. Las reas
en donde se apliquen las inyecciones deben estar separadas al menos 1
pulgada de la otra. Consulte con su mdico si usted necesita aplicar la
inyeccin en un rea especfica.
MATERIAL:

Una toallita con alcohol

Una aguja y jeringa nuevas del tamao correcto

Guantes desechables, si los tiene

PROCEDIMIENTO:

Lvese las manos con jabn y squelas completamente. Pngase

guantes si es necesario.

Abra la toallita con alcohol: Limpie el rea en dnde planea aplicar

la inyeccin. Deje que se seque. No toque el rea hasta que
aplique la inyeccin.

Prepare la aguja: Sostenga la jeringa con la mano que escribe y

jale la cubierta con la otra mano. Coloque la jeringa entre el dedo
pulgar y el ndice. Deje el cilindro de la jeringa en el dedo medio.

Sostenga la piel alrededor de donde vaya a aplicar la inyeccin:

Presione y jale cuidadosamente la piel con su mano libre para que
el muslo se tense un poco.

Introduzca la aguja en el msculo: Sostenga el cilindro de la

jeringa fuertemente y use la mueca para inyectar la aguja en la
piel y en el msculo en un ngulo de 90 grados.

Revise la aguja: Suelte la piel con la otra mano. Sostenga la jeringa

para que apunte directamente. Jale el mbolo un poco para
asegurase de que no toque un vaso sanguneo. Si sale sangre,
retire la aguja inmediatamente. No inyecte el medicamento.
Deseche la jeringa y el medicamento. Ponga medicamento nuevo
en una jeringa nueva. Cuando usted vaya a aplicar la segunda
inyeccin, hgalo en el otro lado.

Inyecte el medicamento: Empuje el mbolo para inyectar el

medicamento. No force el medicamento empujando fuertemente.
Algunos medicamentos provocan dolor. Usted puede inyectar el
medicamento lentamente para reducir el dolor.

Retire la aguja: Una vez que se inyecta el medicamento, retire la

aguja en el mismo ngulo en que se introdujo. Coloque una gaza
en el rea en donde se aplic la inyeccin.

Es importante deshacerse de las agujas y las jeringas

correctamente. No tire las agujas en la basura.
CUESTIONARIO:
1. Cules son las zonas seguras para aplicar una inyeccin
intramuscular?

2. Qu distancia debemos dejar entre una zona de aplicacin y otra?

3. Haga un dibujo de la forma correcta de aplicacin de una inyeccin
4. Qu porcin de la aguja debe ser introducida para una inyeccin
intramuscular profunda?

OBSERVACIONES:
CONCLUSIONES:
MUESTRA SANGUIENEA
COMPETENCIA: extraccin de sangre y uso de anticoagulantes.
INTRODUCCION:
Las muestras venosas son comnmente obtenidas por puncin directa
en el rea antecubital. Tambin se pueden obtener de un acceso venoso
central instaurado en el paciente.
Se recomienda recolectar la muestra de una vena independiente de la
vena perifrica que se est utilizando para terapia intravenosa mediante
tcnica cerrada usando el set Vacutainer o tubos VENOSAFE, lo cual
mejora la calidad de la muestra (cantidad apropiada, disminucin de
hemlisis) y disminuye el riesgo de contaminacin.
Evite la puncin en el brazo que presente fstulas arteriovenosas,
heridas, quemaduras y reas con edema o eritema.
Responsable de la toma de la muestra: Auxiliar de Laboratorio
Clnico/ Auxiliar de Enfermera/ Bacteriloga o Enfermera segn el tipo
de muestra.
MATERIAL:
Lanceta
Jeringa
Tubo capilar
Torniquete
Tubo de ensaye con tapn
(Vacutainer, Venosafe)
Torundas de algodn
Guantes
Gafas

Gradilla
Gasas

REACTIVOS:

EDTA
Alcohol
Sangre

PROCEDIMIENTO:
Muestra con lanceta:
1. Con una torunda de algodn sumergida en alcohol desinfecte el
rea donde se ve el oreja o en el pulpejo del dedo ndice o en el
dedo medio.
2. Rompa la envoltura de la lanceta para evitar con ella pincharse,
nunca debe dejar la lanceta al aire libre, la sangre debe de fluir
perpendicularmente, de no ser as, verifique las causas.
3. Puede ser que por puncin defectuosa la sangre no fluya
perpendicularmente y as que la regin no llegue a la puncin
capilar, si ya se us la lanceta se debe usar otro dedo y otra
lanceta. Evite contaminacin antes de usar la lanceta y no
puncione como si fueran banderines.

Muestra de sangre venosa:

1. Por el riesgo de exposicin a fluidos y contacto con los mismos se
deben implementar todas las precauciones estndar definidas en
el manual de bioseguridad institucional (Gorro, gafas, mascarilla,
bata y guantes).
2. Se debe preparar todo el material para la extraccin sangunea y
rotular el tubo, poner nombre, fecha, examen, tipo de
anticoagulante.
3. Lavarse las manos.
4. Ponerse los guantes.
5. El paciente debe estar tranquilo.
6. Se deben de localizar el sitio de puncin ms adecuado, en
pacientes ambulatorios, la vena antecubital es la ideal.

7. Limpie el rea de puncin con Alcohol al 70 % ejerciendo presin y

en una direccin del centro a la periferia, sin devolverse o en
sentido de las manecillas del reloj, evite tocar nuevamente el rea
a puncionar, deje secar.
8. Coloque el torniquete 4 5 cm por encima del sitio a puncionar.
9. El paciente debe ayudar abriendo y cerrando la mano.
10.
Puncione la vena seleccionada.
11.
Retire el torniquete.
12.
Extraiga la sangre necesaria insertando el bisel de la aguja
haca arriba aspirando lentamente.
13.
Retire la jeringa y haga presin sostenida en el sitio de la
puncin con una torunda de algodn seca.
14.
Retire la aguja de la jeringa e inmediatamente deseche en el
recipiente de corto punzante (Guardin).
15.
Deposite la sangre por las paredes del tubo.
16.
Coloque la sangre en el recipiente y desinfecte el rea.
17.
El bisel de la aguja debe estar hacia arriba.
18.
Si se utiliza tubos vacutainer o tubos VENOSAFE, la
muestra va directamente al tubo, sin retirar la aguja.
19.
Tape el tubo y agite por inversin si ste contiene
anticoagulante.

Observaciones
CONCLUSIONES.

PRACTICA No. 9
TIPOS SANGUINEOS Y RH
OBJETIVOS:
OBJETIVO GENERAL:
Analizar la importancia que tienen los grupos sanguneos del sistema
ABO y del factor Rh en las transfusiones sanguneas de persona a
persona.
OBJETIVOS ESPECIFICOS:
Utilizar correctamente los diferentes sueros para identificar en el
laboratorio los grupos de sangre y el factor Rh.
Identificar los mecanismos genticos que regulan la herencia de
grupos de sangre y del Rh.
INTRODUCCIN.
El trabajo de G. Kahler y C. Milstein el ao de 1975, en el departamento
de Biologa Molecular del Consejo de Laboratorio de Investigacin
Mdica en Cambridge Gran Bretaa. Describen el desarrollo del primer
Hibridoma productor de anticuerpos monoclonales. Esta abri un campo
en las reas de Investigacin y Diagnstico.
La funcin in vitro de una clula plasmtica maligna con otra normal,
productora de un anticuerpo determinado (hibridoma), origina una lnea
celular permanente capaz de sintetizar una poblacin perfectamente
homognea e ilimitada de dicho anticuerpo.
El reactivo hemoagrupador monoclonal anti - A, B, y AB se prepara
inmunizando ratones con substancias especficas de grupo. Cuando la
respuesta inmunolgica es demostrada, y el ttulo obtenido es el
adecuado, se extrae el bazo para obtener linfocitos productores de
fusin con plasmacitoma.
Los linfocitos fusionados o hibridomas, se preparan en clonas. Cada
clona se prueba en su potencia y en su especificidad. Posteriormente se
seleccionan clonas hasta obtener las ptimas, que se hacen crecer en
medios de cultivos de tejidos, enriquecidos con Crecel (marca
registrada del suero fetal de ternera ORBI). El anticuerpo se obtiene del
sobrenadante del medio.
En 1900 Landsteiner descubri la aglutinacin que se produca al
mezclar los glbulos rojos de un sujeto con los de otro.
Este descubrimiento lleva a Landsteiner a aceptar la existencia de tres
fenotipos distintos en 1902.
Estas clasificaciones mencionadas reciben en la actualidad el nombre de
sistema de grupo sanguneo ABO. Landerstein vio tambin que
solamente se necesitaban dos antgenos para explicar los 4 grupos:

El primero tena un antgeno (A), el segundo tena el otro (B), el tercero

tena los dos (AB) y el cuarto tena ningn antgeno (O).
El sistema ABO es el nico en el sentido en que la sangre de los
individuos a los que les falta uno o ambos antgenos A/B posee el (los)
anticuerpo(s) correspondiente(s). La presencia de solucin salina
concentrada que aglutine los anticuerpos anti A y/o anti B en plasma
o en suero sdulto convierte al sistema ABO en el sistema de grupos
sanguneos ms importante en la terapia de transfusin.
Tambin reconoci la relacin recproca en una muestra de
sangre entre los anticuerpos del suero y los antgenos de los glbulos
rojos. En cada caso son muy pocas excepciones solamente se
encuentran anticuerpos anti-A, anti-B, o ambos en el suero cuando los
glbulos rojos carecen del antgeno correspondiente

MATERIALES:
Placas de grupo sanguneo o porta objetos
Lancetas desechables estriles
Algodn
Alcohol antisptico
Palillos
Sangre
Sueros: Anti A, Anti B y Anti D
12.3 PROCEDIMIENTO:
a. Tome dos porta objetos limpios y secos (porta No. 1 y porta No. 2). En
un extremo del porta No. 1 anote la frase anti A, y en el otro
extremo anote anti B. En el porta No. 2 anote la frase anti - D o anti
Rh.
b. Limpie la yema de uno de los dedos de la mano, con un algodn
empapado con alcohol y djelo secar. Permita que su instructor le
pinche el dedo con una lanceta desechable estril. Apretando
ligeramente el dedo, deposite una gota de sangre en cada extremo
del porta objeto No. 1 y una gota en el porta objeto No. 2. Con
algodn estril comprima la pequea herida para impedir la salida de
ms sangre.
c. Rpidamente antes que se coagule la sangre, agregue en el extremo
correspondiente del porta objeto No.1 una gota de suero anti A y en
el otro extremo una gota de suero anti B. Al porta objeto No. 2,
agrguele una gota de suero anti D. En las anteriores operaciones
evite que la punta de los goteros de los sueros toque las gotas de
sangre.
d. Usando un palillo diferente, agite cada una de stas mezclas y
observe si se produce o no aglutinacin y registre los resultados.

S la sangre aglutina con el suero anti A, es del grupo A.

S la sangre aglutina con el suero anti B, es del grupo B.
S la sangre aglutina con ambos sueros anti A y anti B, entonces
pertenece al grupo AB
S la sangre no aglutina con el suero anti A, ni con el anti B, es del
grupo O.
Sanguneo B
Observe el porta objeto No. 2:
S se presenta aglutinacin con el suero anti - Rh, es factor Rh
positivo.
S no aglutina la sangre con el suero anti Rh, entonces es Factor Rh
negativo.

12.4 CUESTIONARIO:
Qu es un antgeno?
Qu es un anticuerpo?
En qu consiste una reaccin antgeno anticuerpo?
Cul es la importancia de la determinacin de los grupos sanguneos
y su factor Rh, en una transfusin?
Cul es su grupo de sangre?
Cul es su factor Rh?
En qu consiste la eritroblastosis fetal?
Cmo podra evitarse?
Qu sucedera si en una transfusin sangunea, se transfunde sangre
Rh+ a una persona con sangre A
B
Rh tipo Rh -?

PRACTICA No. 10
OBSERVACION DE CELULAS
SANGUINEAS
OBJETIVOS:
AL FINALIZAR LA PRCTICA EL ALUMNO SERA CAPAZ DE:
Enunciar las principales diferencias entre la sangre humana, la de
un ave y la de rana.
Reconocer los glbulos rojos
Reconocer las plaquetas
Reconocer los distintos tipos de leucocitos
Enunciar las funciones de las clulas de la sangre
ACTIVIDADES PREVIAS: Investigar los tipos de glbulos blancos y
como identificarlos, realiza un esquema de ellos.
Investigar cmo preparar el EDTA como anticoagulante en la sangre.
INTRODUCCION:
La sangre est constituida por un lquido llamado plasma en el que estn
suspendidos 3 tipos de clulas: Los glbulos rojos, los glbulos blancos y
las plaquetas.
El plasma es un lquido compuesto por agua, protenas, carbohidratos,
sales minerales y muchos otros elementos.
Los glbulos rojos en el humano sano son las clulas ms numerosas de
la sangre, ya que hay 5,000,000 por cada milmetro cubico de
sangre(micro litro, mcl.) tienen forma de disco bicncavo cargado de
hemoglobina que es la protena encargada de transportar oxgeno y
bixido de carbono; carecen de ncleo. En muchos animales (aves,
batracios y reptiles) son ovalados, y tienen ncleo y son capaces de
dividirse por mitosis.
Los glbulos blancos se encuentran en menor cantidad que los rojos, ya
que hay de 5,000 a 10,000 por cada microlitro de sangre, son clulas
completas y existen de diversos tipos: las que contienen grnulos en el
citoplasma (granulocitos) y las que carecen de estas granulaciones

(agranulocitos)Los granulocitos son de tres tipos segn se tian con las

coloraciones para sangre; los que toman el colorante acido (eosina) se
denominan eosinofilos, y tienen que ver con las alergias, los que se tien
con el colorante bsico se denominan basolfilos (sus granos contienen
heparina) su funcin no est bien definida. Los granulocitos que no
toman ninguno de los colorantes se denominan neutrolfilos, son los ms
numerosos y su funcin es defendernos comindose las bacterias que
nos infectan.
Los agranulocitos son de dos tipos: Los linfocitos y los monocitos.
Los linfocitos son los encargados de la defensa inmunolgica de nuestro
cuerpo, tienen que ver con la formacin de anticuerpos.
Los monocitos son grandes macrfagos que salen de los vasos
sanguneos, donde permanecen vigilantes y prestos a defender ese
tejido de cualquier bacteria.
Las plaquetas son fragmentos citoplasmticos de una gran clula
denominada Megacariocito, esta se encuentra en la medula sea; la
funcin de las plaquetas es intervenir en la hemostasia COAGULACION.
Observacin al microscopio
Neutrfilos : Ncleo multilobulado, citoplasma que se tie muy poco con
el colorante de May Grunwald, granulaciones finas violceas.
Eosinfilos : Ncleo multilobulado y grnulos que se tieron de un color
rojizo intenso.
Basfilos : Ncleo lobulado y grnulos ms bien azulados, oscuros.
Monocitos : Ncleo con forma de rin., granulacin fina azurfira.
Linfocitos : Ncleo grande y esfrico, citoplasma basfilo y reducido.
Plaquetas : Pequeos fragmentos ovales a alargados.
ANTICOAGULANTES:
Existen mltiples factores involucrados en el proceso de coagulacin de
la sangre. Los anticoagulantes son sustancias que previenen la
formacin de cogulos. Existen diferentes tipos de ellos en polvo o
lquidos. Debe seleccionarse siempre el anticoagulante apropiado segn
el estudio que se quiera realizar.
Los tres anticoagulantes habitualmente usados son:

EDTA (ETILEN-DIAMINO-TETRA-ACETATO): Es el anticoagulante

preferido para los recuentos celulares y los estudios morfolgicos.

HEPARINA: Se utiliza tanto en estudios de rutina como

especializados. Su presentacin puede incluir heparina con
concentraciones de sodio o litio. En general la heparina con litio es

utilizada para estudios de qumica y la heparina sdica se utiliza

para estudios de linfocitos.

CITRATO DE SODIO : Generalmente en concentraciones al 3.8% y

se utiliza principalmente en estudios de coagulacin..

MATERIAL
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.

POR EQUIPO
microscopio con objetivo de inmersin
Frotis de sangre humana (laminilla fija)
Preparacin de sangre de paloma
Preparacin de sangre de rana
Portaobjetos
Cubreobjetos
Algodn
Aceite de inmersin

PROCEDIMIENTO:
1.-Realice sus preparaciones del frotis de sangre de ave
2.-Haga sus observaciones buscando las diferencias entre un frotis
sanguneo humano y las de ave y rana.
3.-Busque las plaquetas y anote sus caractersticas
4.-Identifique los distintos tipos de leucocitos
CUESTIONARIO:
1.-Haga un esquema de cada una de las preparaciones observadas
(con objetivo de inmersin) e indique el nombre de los elementos
dibujados.
2.-Mencione las diferencias ms importantes que haya observado
entre las preparaciones (humano y ave o rana)
3.-Mencione la funcin ms relevante de los eritrocitos.
4.-Mencione la funcin ms relevante de los leucocitos.
5.-Mencione la funcin ms relevante de las plaquetas.

OBSERVACIONES
CONCLUSIONES

Prctica no.11
Examen Coproparasitoscpico, tcnica directa
COMPETENCIA: Realiza un examen Coproparasitoscpico (cps), a una
muestra de heces con el fin de buscar e identificar formas parasitarias.
MATERIAL:

Aplicadores de madera
Papel de estraza
Portaobjetos
Cubreobjetos
Solucin de lugol
Tubos de ensaye de 13x100
Microscopio
Sol. Salina fisiolgica

INTRODUCCIN
Un examen Coproparasitoscpico es el estudio de la materia fecal para
la bsqueda e identificacin de formas parasitarias. Los mtodos
Coproparasitoscpico, se pueden dividir en: cualitativos y cuantitativos;
los primeros se usan para saber que formas parasitarias existen y los
segundos en qu nmero se encuentran; estos ltimos se utilizan sobre
todo en las helmintiasis

Los mtodos cualitativos pueden ser de dos tipos: los mtodos de

concentracin y el examen directo. El examen directo es el ms antiguo
que se conoce por los datos histricos que se tienen en relacin a los
primeros microscopios, probablemente Antonio Van Leewenhoek en el
siglo XVIII, fue de los primeros en utilizarlo, al encontrar y observar en
sus propias heces fecales trofozotos de Giardia lamblia.
El mtodo tiene entre sus caractersticas, la sencillez y rapidez para
llevarlo a cabo, adems de lo econmico que resulta realizarlo, pues es
el que requiere menos material.
Ha sido el mtodo indicado como excelente para la bsqueda de
trofozotos. En la prctica ha demostrado su eficacia cuando se utiliza
lugol, para la bsqueda e identificacin de quistes, huevecillos y larvas.
Pero tiene una limitante: la muestra utilizada es tan pequea, que es
poco representativa.

PROCEDIMIENTO
1. En un portaobjetos se colocan, separadamente (en cada extremo),
una gota de solucin salina fisiolgica y otra de lugol.
2. Con uno o dos aplicadores de madera, se toma una muestra de 1 a 4
mg de heces y se mezcla con la solucin salina, haciendo una
suspensin homognea.
3. Con el mismo aplicador se retiran las fibras y otros fragmentos
gruesos.
4. Se coloca el cubreobjetos.
5. Se efecta la misma operacin en la gota de lugol.
6. Se observa al microscopio, primero con objetivo seco dbil y despus
con el seco fuerte.
7. La preparacin con solucin salina, sirve para identificar y reportar el
hallazgo de trofozotos. La preparacin con lugol sirve para reportar el
hallazgo de quistes, huevos y larvas.
8. Realiza el dibujo de lo observado.

RECUERDA: la materia fecal es potencialmente infectante, por lo que se

tendrn los cuidados necesarios para su manejo que garanticen la
correspondiente bioseguridad.
CUESTIONARIO
1. Explica que son los protozoarios, estadios que presentan y cules son
las especies patgenas ms comunes para el hombre
2. Indica la clasificacin de los helmintos, sus caractersticas principales
y los que parasitan con ms frecuencia al hombre
3. Por qu se dice que la preparacin con solucin salina fisiolgica
sirve para identificar trofozotos de los parsitos?
4. Adems del intestino, donde ms pueden los parsitos infectar al
hombre?
Da algunos ejemplos
5. A qu se refiere cuando decimos que el inconveniente de esta
tcnica es que es poco representativa? Explica e indica cmo podemos
disminuirla
Observaciones:
Conclusiones:

PRACTICA No.12
EXAMEN GENERAL DE ORINA (UROANALISIS)
Las muestras de orina son biopsias lquidas de los tejidos del tracto
urinario, recolectadas en forma indolora que permiten tener informacin
rpida y econmica.
Objetivo:
Determinar las sustancias qumicas presentes en una muestra de orina,
as como su densidad y pH, a travs de las zonas de reaccin presentes
en una tira reactiva. Observar microscpicamente en el sedimento
urinario elementos celulares, cilindros, cristales, parsitos, filamentos
mucoides y bacterias. Con el fin de sugerir una patologa del tracto
urinario u otras enfermedades que estn en diferente localizacin
ACTIVIDAD PREVIA: Realizar un diagrama de flujo de la prctica.

INTRODUCCIN
Un examen general de orina, tambin llamado anlisis de orina o
uroanlisis, consiste en una serie de exmenes efectuados sobre la
orina, constituyendo uno de los mtodos ms comunes de diagnstico
mdico.[1] Un examen completo consta de varias determinaciones: un
examen macroscpico, un examen fsico-qumico, un examen
microscpico y, si fuera necesario, un urocultivo. El anlisis fsicoqumico se puede efectuar mediante tiras reactivas cuyos resultados se
leen de acuerdo a los cambios de color.
Ya en la antigedad era comn el diagnstico de enfermedades con
base en la observacin de la orina. El mtodo, denominado uroscopa,
basado en la observacin de las propiedades organolpticas de la orina
fue descrito por Galeno y su aplicacin tuvo lugar por muchos siglos en
el contexto de la teora de los cuatro humores apoyada por Hipcrates.
Aunque la tecnologa de anlisis qumico cualitativo y cuantitativo
permiti desde finales del siglo XIX la superacin del mtodo uroscpico,
las propiedades organolpticas, tpicamente olor y color, permiten
todava un diagnstico inmediato de numerosas enfermedades.
La orina es de color amarillo claro y en funcin de su concentracin
puede adoptar una coloracin amarillo clara, si est diluida, y amarillo
oscuro, si est concentrada; sin embargo, puede tener una apariencia
turbia si en ella existen clulas o cristales. Si el paciente est tomando
ciertos medicamentos, la orina podra ser teida por ellos

MATERIAL POR EQUIPO

UTILIZAR
-Recipiente plstico para muestra.
-1 Microscopio compuesto
-Tubos de ensayo
.
para orina
- portaobjetos.
- cubreobjetos.
- Marcador para vidrio.
- 1 Gradillas para 6 tubos.
-Guantes descartables
-papel absorbente

SUSTANCIAS A
Muestra de orina
Tiras reactivas

Recoleccin de la muestra:

La muestra se recoge normalmente por miccin espontanea, tener en

cuenta que se debe recoger la primera de la maana, el
paciente debe levantarse, asearse muy bien los genitales y en un
recipiente
estril
recoger
la
miccin
intermedia.
ltimamente se est utilizando el estudio del parcial de orina
fraccionado que consiste en pedir al paciente que recoja la primera
orina de la maana fraccionada en tres muestra que deben llegar al
laboratorio correctamente marcadas: Fraccin I, II, II. Este tipo de
examen es principalmente para descartar hematurias. Cuando se
presenta hemoglobina en la fraccin I indica sangrado a nivel uretral,
si hay hemoglobina en las tres fracciones el sangrado es a nivel renal,
pero si solo se encuentra hemoglobina en la muestra III el sangrado
es a nivel vesical.

Examen Fsico:

Aspecto: Es considerado como normal un aspecto transparente, pero es

aceptado hasta un aspecto ligeramente turbio ya que este puede ser
debido
a
contaminaciones.
El aspecto de una orina turbia ya es considerado como anormal, esto
puede ser debido a presencia de leucocitos, glbulos rojos, bacterias,
cristales,
grasa
(Por
obstruccin
de
linfticos).
Color: En condiciones normales el color de la orina va de amarillo hasta
mbar. Se pueden encontrar colores anormales debido a la presencia de
elementos anormales en la orina como por ejemplo sangre,
medicamentos,
alimentos
y
otros
pigmentos.
Una orina incolora se conoce como HIDRURICA caracterstica de una
diabetes inspida se presenta por baja en la produccin de Hormona
antidiurtica.
Rosado o Rojo: Se presenta por la presencia aumentada de
Urobilinogeno,
porfobilinogeno.
Azul: Despus de procesos quirrgicos.
Amarillo intenso: Pigmentos biliares.
Negro: Melanomas productores de melanina.
pH: Es el reflejo de la capacidad del rin para mantener la
concentracin normal de hidrogeniones. El pH normal va de 5.5 - 6.5.
Influyendo
el
rgimen
diettico
de
cada
paciente.
En una alcalosis metablica y respiratoria se produce una orina alcalina
mientras que en una acidosis se produce una orina cida.
Densidad: Esta varia en razn directa a la cantidad de slidos,
principalmente cloruros, urea, sulfatos, la densidad normal va de 1.015 1.025.

Examen Qumico:

Protenas: Se pueden encontrar varias clases de protenas pero la ms

importante es la albmina. Hay proteinurias llamadas fisiolgicas
asociadas a fiebres, exposicin al fro, stress emocional, ejercicio
intenso.
Hemoglobina: Es una protena sangunea que no se debe encontrar en
orinas normales, su presencia puede ser causada por procesos
hemoliticos, agentes txicos, accidentes transfusionales, quemaduras,
etc. Fisiolgicamente puede presentarse por ejercicio intenso. La
presencia de hemoglobina y protenas ambas altas indican que hay un
dao
glomerular.
Glucosa: En condiciones normales se elimina por la orina cantidades no
detectables por los mtodos usuales, cuando el nivel de glucosa
sobrepasa el umbral renal (180 mg/dl ) de detecta. En el sindrome de
cushing se presentan glucosurias.
Cetonas: Cuando el metabolismo heptico se acelera por carencia de
glucsidos, exceso de grasas o en diabetes, los cuerpos cetnicos
aparecen en abundancia en la orina y sangre. La prueba se basa en la
reaccin
del
cido
acetoacetico
con
el
nitraprusiato.
La presencia aumentada de cetonas y glucosa se presenta en una
acidosis
diabtica.
Bilirrubina y Urobilinogeno: La bilirrubnina es un producto resultante
de la descomposicin de hemoglobina. Normalmente no se encuentra,
su eliminacin se presenta por ictericia obstructiva intra y extrahepatica
aguda o crnica, cirrosis. En Colestasis se presenta aumento de
bilirrubinas con un urobilinogeno normal, en ictericias hepticas se
presenta aumento de bilirrubinas menor que en las colestasis con un
urobilinogeno aumentado o normal, en las ictericias producidas por
anemias hemolticas se presenta una bilirrubina normal con un
urobilinogeno
aumentado.
Nitritos: Se deben analizar en orinas recin emitidas para que su valor
tenga algn significado clnico.
* Antes de comenzar los anlisis del da compruebe que la bandeja de
anlisis de tiras este limpia.
* La muestra de orina debe ser fresca, estar bien mezclada y no
centrifugada.
* Sumergir completamente la tira reactiva asegurndose que todas las
reas reactivas se hayan humedecido.
* Retire inmediatamente la tira reactiva de la muestra de orina
deslizando su borde por el canto del recipiente para as eliminar el
exceso de orina. Al mismo tiempo pulse la tecla iniciar.
*Secar la tira tocando su borde con una toalla de papel secante.
* Coloque la tira en el canal de la bandeja de tiras de anlisis con las
reas reactivas hacia arriba. Deslice la tira a lo largo de la bandeja hasta que
toque el extremo del canal. La tira debe colocarse mientras que en la pantalla

se muestra el mensaje secar y colocar la tira que se visualizara por 10

segundos.
*La bandeja se introduce automticamente en el equipo para su anlisis.

Valores de referencia:
PH: de 5.5 a 6.5
DENSIDAD: de 1.005 a 1.010.

Prctica 13
PRODUCTOS DE EXCRECION EN LA ORINA
OBJETIVOS:
a) Definir la Orina

b) Enunciar los principales catabolitos que se excretan en la orina.

c) Explicar el trmino de Insuficiencia Renal
d) Explicar el principio en que se fundamenta la investigacin de urea
PROCESOS PREVIOS:
Preparar la ureasa a partir de la semilla de soya
INTRODUCCION:
Para que las clulas de nuestro cuerpo se mantengan vivas, necesitan
recibir de la sangre sus nutrientes y oxigeno que utilizan para obtener
energa, la que a su vez canalizan en la sntesis de las substancias que le
hacen falta, durante estos procesos tambin producen substancias de
desecho que vierten a la sangre, estas substancias le son toxicas y
nuestro organismo las elimina por los riones (disueltas en la orina) y
por los pulmones (el Co2).
De las mltiples substancias de excrecin que se producen en las
clulas, las ms importantes son: Urea, Creatinina y cido rico. Estas
substancias se excretan por los riones, siempre que estn sanos,
cuando los riones no son capaces de eliminar estas substancias, estas
se empiezan a acumular en la sangre causando una intoxicacin, que si
no se resuelve a tiempo termina matando al individuo. La incapacidad
para eliminar los catabolitos y regular el equilibrio de agua y electrolitos
se denomina insuficiencia renal.
En esta prctica demostraremos la presencia de urea en la orina.
La Urea es uno de los productos finales de la utilizacin de las protenas
por la clula. Qumicamente est constituida por dos molculas de
amoniaco que es un gas toxico e hidrosoluble, la urea tiene un Ph acido,
a diferencia del amoniaco que es alcalino. Si a una solucin de urea le
ponemos unas gotas de azul de bromotimol, veremos que se convierte
en color amarillo; agregndole ureasa (Enzima que rompe la molcula de
urea, convirtindola en dos molculas de amoniaco) recupera su color
azul ya que el medio se vuelve alcalino por el amoniaco.
MATERIAL POR EQUIPO
5 Tubos de ensaye con sus tapones de goma
Ureasa en polvo
Solucin de azul de bromotimol al 5%
Orina
1 Mechero de Bunsen
Solucin acida de Urea
1 Punzas para tubo de ensaye
2 Vasos de precipitado de 250 ml.
PROCEDIMIENTO:
1.-Coloque orina en tres tubos de ensaye, hasta la mitad.

2.-Numerelos del 1 al 3. Al tubo No.1 Agrguele 5 gotas del colorante

indicador y observe el color que toma.
3.-A cada uno de los tubos 3 y 4 agrgueles 20 mg de ureasa, mzclelos
energticamente
4.-Calientelos a la llama solo para tibiarlos, agtelos energticamente
cada minuto por aproximadamente 10 a 15 minutos.
5.-Al tubo No.3 agrguele 5 gotas del indicador y observe sus tres tubos.
6.-En los tubos restantes coloque solucin acida de urea y numrelos
como 4 y 5.
7.-Al tubo No.4 agrguele 5 gotas de indicador y al tubo No.5. 20 mg de
ureasa; observe los cambios de color.
8.-Si se desea, el tubo No.5 puede procederse en forma similar al 3.
NOTA.
El Tubo Ni.1 es un testigo que indica cmo reacciona el indicador con la
orina.
El Tubo No.2 es un testigo de cmo reacciona la ureasa con la orina sin
desarrollar color.
El Tubo No.3 nos sirve para poner de manifiesto que en la orina hay urea
y que esta fue convertida en amoniaco.
El Tubo No.4 es el testigo de solucin de urea con iindicador.
El Tubo No.5 es el testigo de solucin de urea con ureasa.
PREPARACION DE UREASA A PARTIR DE EXTRACTO DE SOYA
1.-Poner a remojar 1 g de granos de soya (dejar toda la noche)
2.-Mezclar las semillas en una licuadora de alimentos con 10 ml de agua
por gramo de materia seca de soya (el agua para el remojo de los
granos de soya puede ser utilizada) hasta que la mezcla este suave
(unos 5 min)
3.-Filtre el pure, en un colador de orificio cerrado o con una gasa doble.
4.-Reunir y conservar el filtrado, que contiene ureasa.
CUESTIONARIO:
1.- Qu es la Orina?
2.- Menciona 2 Catabolitos que se excretan por la orina
3.- Qu es la Urea?
4.- Qu hace la ureasa con la urea?
5.- Adems de la excrecin de catabolitos, Qu otros elementos
regulan los riones?
HIPOTESIS
ANALISIS DE RESULTADOS

CONCLUSIONES

Practica No. 14
ESPERMATOBIOSCOPIA
COMPETENCIA: Observacin y conocimiento de la morfologa de las
clulas espermticas y evaluacin del semen.
ACTIVIDAD PREVIA: Investigar los valores de referencia de un examen
de Espermatobioscopia y los principales usos clnicos de ste examen.

INTRODUCCION:
El objetivo principal del examen del lquido seminal es determinar en
caso de esterilidad dela pareja, si la causa reside en alteraciones de los
ms frecuente de ello es la infeccin de los conductos genitales, aunque
a veces los tubos seminferos testiculares pueden ser destruidos total o
parcialmente por Parotiditis, Radiacin por rayos X o Nuclear. Algunos
varones tienen testculos con deficiencia congnita, y son incapaces de
producir espermatozoides normales. Tambin puede ocurrir esterilidad
masculina cuando el nmero de espermatozoides eyaculado es
demasiado bajo (oligozoospermia), aunque todos ellos sean normales.
Suele ocurrir esterilidad cuando hay menos de 150 millones de
espermatozoides en el eyaculado, y evidentemente cuando hay
azoospermia total. La Espermatobioscopia incluye tcnicas que se basan
en la posibilidad que existe de estudiar en forma ms o menos exacta el
nmero, la morfologa, la motilidad y la vitalidad de los zoospermos,
directamente en el eyaculado masculino.
Obtencin de la muestra
Se le indica al paciente que recoja el semen eyaculando (por
masturbacin) despus de abstinencia sexual de 3-7 das (de preferencia
una semana). La muestra se recoge en un frasco de boca ancha, limpio y
seco, preferiblemente estril.
MATERIAL:
1 pipeta de 10ml
2 tubos de ensayo
Gradilla

Micropipeta
Tiras reactivas
Porta objetos
Cubre objetos
Cmara de New Bawer
1 regla
Contador

SUSTANCIAS:
Muestra de semen
Rosa de bengala

PROCEDIMIENTO:
1. Lave sus manos y coloque el equipo de proteccin personal
adecuado
2. Rena el equipo necesario
3. Con la pipeta vaciar la muestra en un tubo de ensayo y al mismo
tiempo medir el volumen de la muestra.
4. Observar la muestra y realizar el examen fsico (motilidad, color,
olor)
5. Antes de extraer muestra del tubo se mide el pH con las tiras
reactivas.
6. Una vez anotadas las observaciones continuamos con la
viscosidad, pones entre dos laminillas una gotita de semen y
tratas de despegarla y mides la liguita que se forme.
7. Luego pones 10 micro litros de semen en un lado de la laminilla y
10 en otro, en el primero lo vas a ver directo, vas a ver la
movilidad contando 100 clulas y clasificndolas en movimiento
rpido, lento, cuando solo se mueve en su eje y nulo.
8. En el otro lado pones una gota de rosa de bengala diluida con
solucin salina, esta va a teir las paredes celulares de los
espermas que ya estn muertos y va a dejar sin teir los vivos,
cuentas 100 clulas y sacas el porcentaje de vivos y muertos, y
tambin vas a ver las anormalidades de los espermas, (doble cola,
doble cabeza, etc.)
9. Por ultimo haces una dilucin 1:20 con salina y cuentas en la
cmara de New Bawer.

VALORACIN
MORFOLGICA
DEL
ESPERMATOZOIDESPBADE MACOMBER

ESPERMARECUENTO

DE

1. Homogeniza la muestra por la presencia de espermatozoides mviles

e inmviles
2. Pipeta thoma (G.B) se carga hasta 0.5 con lquido seminal y luego con
lquido de dilucin de macomber hasta la marca 11
3. Se agita homogneamente la pipeta hasta que sea homogneo en la
porcin ampular
4. Se desechan 2 primeras gotas
5. Se cuentan espermas en 1 mm cuadrado y se multiplica por dilucin y
por la correccin de la profundidad de la cmara, para obtener la cifra
por mmm3 y x1000 para obtener la cifra por ml. # espermatozoides: N
(10) (20) (1000) / 4 = N espermatozoides
VALORES DE REFERENCIA:
eyaculacin completa.
Observaciones:
Conclusiones:

150

millones

de

espermatozoides

en