IMPORTANCIA

Los organismos anaerobios o anaerbicos son los que no utilizan oxgeno

(O2) en su metabolismo, ms exactamente que el aceptor final de
electrones es otra sustancia diferente del oxgeno.1 Si el aceptor de
electrones es una molcula orgnica (piruvato, acetaldehdo, etc.) se trata
de metabolismo fermentativo; si el aceptor final es una molcula
inorgnica distinta del oxgeno (sulfato, carbonato, etc.) se trata de
respiracin anaerbica. El concepto se opone al de organismo aerobio, en
cuyo metabolismo se usa el oxgeno como aceptor final de electrones.

Aquellos organismos unicelulares que no pueden vivir o desarrollarse con

la presencia de oxgeno se denominan anaerobios estrictos. Algunos
microorganismos aerbicos, que pueden desarrollarse en ausencia de
oxgeno, por medio de la fermentacin se denominan anaerobios
facultativos.

Herbert Caldern Prez

OBJETIVOS

Conocer las condiciones y exigencias para el cultivo de bacterias

anaerobias.
Conocer los riesgos y precauciones durante el procesamiento de

muestra con micobacterias.

Conocer el procesamiento de las muestras para el estudio de
micobacterias

DISCUSIN MARCO TEORICO

1. MICROORGANISMO ANAEROBIO

Herbert Caldern Prez

Los organismos
que

no

anaerobios son

los

utilizan oxgeno (O2)

en

su metabolismo, ms exactamente que

el aceptor final de electrones es otra
sustancia

diferente

el aceptor

del oxgeno.

de

Si

electrones es

una molcula orgnica

(piruvato, acetaldehdo,
de metabolismo

etc.)

se

fermentativo;

trata
si

el

aceptor final es una molcula inorgnica

distinta del oxgeno (sulfato, carbonato,
etc.) se trata de respiracin anaerbica.
El concepto se opone al de organismo
aerobio, en cuyo metabolismo se usa el oxgeno como aceptor final de
electrones.
Aquellos organismos unicelulares que no pueden vivir o desarrollarse con la
presencia

de

oxgeno

se

denominan anaerobios

estrictos.

Algunos

microorganismos aerbicos, que pueden desarrollarse en ausencia de

oxgeno,

por

medio

de

la fermentacin se

facultativos.

2. NARANJA DE ACRIDINA (HEMOCULTIVO)

Herbert Caldern Prez

denominan anaerobios

El fluorocromo naranja de acridina

se une al cido nucleico ya sea en
su
forma
nativa
o
desnaturalizada.
En
algunas
preparaciones de naranja de
acridina,
el
color
de
la
fluorescencia
puede
variar,
dependiendo del pH y de la
concentracin. El naranja de
acridina ha sido empleado como
colorante vital, que da una
fluorescencia
verde
si
el
microorganismo est vivo y roja si
est muerto. De todos modos, como el colorante se intercala en el cido
nucleico, el germen viable se inactivar poco tiempo despus de la tincin.
El uso de naranja de acridina para detectar la presencia de bacterias en los
hemocultivos ha sido ampliamente aceptado. De hecho, una gran cantidad de
estudios han demostrado que la tincin de hemocultivos con naranja de
acridina es tan sensible como el subcultivo ciego para la deteccin inicial de
hemocultivos positivos.

3. JARRA DE ANAEROBIOSIS

APLICACIN:
El control de bacterias como los Clostridios debe hacerse en
condiciones de ausencia de oxgeno. La jarra de anaerobiosis es un
recipiente ideal para realizar incubaciones en anaerobiosis ya que
en su soporte de acero inoxidable se pueden instalar las bolsas de
generacin de atmsfera libre de oxgeno.

VENTAJAS:
Fabricada en policarbonato de alta transparencia que facilita
el control de las placas.
Capacidad hasta 12 placas de Petri de 90 mm.
Fcil de desmontar y limpiar.
Se puede usar con generadores de anaerobiosis que no
requieran catalizador.

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 Tapa asegurada mediante un anillo de goma y un cierre con

rosca de presin ajustable.

MODO DE USO:

4. MEDIOS DE CULTIVO PARA ANAEROBIOS

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Agar sangre para anaerobios con L-cistina, hemina y vitamina K:

Medio no selectivo de uso general.

Agar chocolate: Utilizado principalmente para aislar especies de Neisseria

y Haemophilus; sin embargo, se puede requerir tambin para el
aislamiento de anaerobios exigentes.

Agar alcohol fenil etlico con sangre: Aislamiento de anaerobios

obligados Gram positivos.

Agar Columbia con colistina y cido nalidxico (CNA): Aislamiento de

anaerobios obligados Gram positivos.

Agar KVLB (kanamicina, vancomicina, sangre lacada): Aislamiento

selectivo de bacilos Gram negativos anaerobios.

Caldo de carne picada: Caldos de enriquecimiento que se pueden usar

como suplemento de medios slidos particularmente si la muestra escasa
(se pueden aadir unas gotas de parafina lquida para mantener mejor la
atmsfera anaerobia). Subcultivar en medio para anaerobios.

5. GNERO Mycobacterium:
El gnero Mycobacterium est integrado por bacilos largos de 3 a 5m de longitud
o curvos en forma de maza, inmviles, no esporulados, con abundantes grnulos
citoplasmticos, que poseen una resistencia mayor a la tincin por los colorantes
comunes, pero una vez teidos son resistentes a la decoloracin con una mezcla
de alcohol cido. Desde el punto de vista de los requerimientos atmosfricos
algunos son aerobios y otros microaerfilos. En cuanto a la velocidad de
crecimiento algunas especies son de crecimiento rpido y otras lento. Se destaca
en su estructura una gran riqueza en lpidos (20-60%). El contenido de bases de
guanina ms citosina en la molcula de ADN es de 62 a 70 moles %. El gnero
comprende 50 especies, entre ellas patgenos primarios, oportunistas y
saprofitas. La especie tipo es Mycobacterium tuberculosis (M.tuberculosis), la cual
vamos a utilizar como modelo al referirnos a las principales caractersticas del
gnero.

Herbert Caldern Prez

6.

MUESTRA DE ESPUTO BAAR (+) CON TINCIN DE ZIEHL NEELSEN

Esta tincin demuestra la capacidad de bacterias teidas de resistir a la
decoloracin por cidos y alcoholes. Esto se correlaciona con su alto contenido en
lpidos de su pared celular y presencia de cidos miclicos que aumentan el
carcter hidrfobo.
Los Bacilo Alcohol cido Resistente (BAAR) tras la unin de la fucsina, resisten el
tratamiento orgnico y se vern teidas de rosado/fuscia. El resto de las bacterias
se decolorarn y se contrastarn con azul de metileno.
El observar BAAR (+) en una muestra de esputo, no significa que esos bacilos
sean necesariamente de M. tuberculosis.

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CONCLUSION

Herbert Caldern Prez

El estudio del cultivo de microorganismos anaerobios se realiza

principalmente.
Las tcnicas de dilucin proporcionan resultados cuantitativos
(concentracin mnima inhibitoria, CMI) y las de difusin cualitativos
(sensible, intermedio, resistente). Ambos mtodos son comparables
ya que hay una correlacin directa entre el dimetro del halo de

inhibicin con un disco y la CMI.

Las tcnicas bioqumicas y genticas

mecanismo o el gen de resistencia en minutos u horas.

La realizacin de un antibiograma se basa en el patrn de

permiten

detectar

el

resistencia de cada bacteria. As, los antibiticos a los que esa

bacteria es intrnsecamente resistente o cuya sensibilidad puede

inferirse por otros, no suelen informarse en el antibiograma.

Los patrones de antibiograma poco frecuentes o imposibles
requieren confirmacin, ya que no responden a mecanismos de
resistencia conocidos.

ANEXOS METODO AUTOMATICO

Antibiograma realizado por mtodo automtico

Herbert Caldern Prez

En esta fotografa se muestra un ejemplo de antibiograma realizado por un

mtodo automatizado.
En la imagen de la izquierda se muestra una vista general de una
microplaca para autoanalizador que incluye fase de identificacin y fase
de antibiograma (panel microScan). Las tres filas superiores de la
microplaca son la zona de "identificacin" del microorganismo, las cinco
filas inferiores son el apartado "antibiograma".
La foto de la derecha, un plano ms cercano de la mitad inferior izquierda
de la microplaca, permite observar con ms detalle algunas filas de
pocillos con diluciones seriadas de algunos antibiticos. La dosificacin de
cada antibitico aumenta, en cada fila, de izquierda a derecha. Los pocillos
que en la imagen muestran un color verde intenso tienen crecimiento
bacteriano, o sea, el antibitico en cuestin no impide el desarrollo del
microorganismo a estudio. Los pocillos transparentes marcaran los puntos
de inhibicin de cada antibitico.

BIBLIOGRAFIA LINKOGRAFIA
http://www.danival.org/microclin/antibiot/_madre_antibiot.html

Herbert Caldern Prez

 Sham D. The role of clinical microbiology in the control and

surveillance of antimicrobial resistance. ASM News.
1996;62:259
Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI). Performance
standards for antimicrobial susceptibility testing; eighteenth
informational supplement. CLSI document M100-S19. Wayne,
PA: CLSI; 2009.
European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing
(EUCAST): Expert rules in antimicrobial susceptibility testing,
2008. Disponible en: http://
www.srga.org/eucastwt/MICTAB/index.html

Herbert Caldern Prez