Para determinar la importancia de la separacin de las subunidades ribosomales nos
apoyaremos en el constructo un ribosoma quimirico 16s-23s, desarrollado por la
univerdad bla, en el cual indagaremos sus resultados en base a comportamiento natural de un ribosoma.
En la produccin de ribosomas sintticos, los investigadores plantearon ciertos
parmetros entre los que se incluyen 1) interactuar correctamente con las protenas ribosomales y factores de la biognesis de montaje ribosoma funcional, 2) evitar Degradacin RNasa y 3) poseer un enlazador suficientemente corto para asegurar subunidad cis-asociacin El primer paso fue conectar ambas subunidades 50S y 30s en zonas especificas de ellas (rARN), las cuales son 23S y 16S respectivamente, pero ambas zonas se encuentran muy separadas una de la otra (alrededor de 0.17A), por lo cual ellos injertaron rRNA 23S dentro de rRNA16S generando una permutacin circular ,lo cual produjo puentes de unin en el borde de comunicacin entre ambas subunidades , pero se necesitaba un sitio de permutacin donde se adecuara a los parmetros anteriormente descritos, en la bsqueda de ese sitio prometedor se encontr un mutante viable ,cp2861 que corresponde a una unidad estructural , tena 23S rARN terminal dentro bucle de la hlice 101 (H101),situada en el ribosoma cerca del bucle vertical de 16s rARN hlice 44 (h44). Debido a que la longitud de h44 vara entre las diferentes especies, y sus secuencia de bucle terminal puede tolerar alteraciones,h44 fue un sitio prometedor para injertar el cp2861 23s rARN y asi generar una molcula 16s-23s rARN hibrido. Una vez que ellos identificaron el punto de unin ahora era necesario buscar un enlazador de longitud ptima, ambos enlazadores T1 que conectan G1453 con C2858 y T2 que conecta C2857 con G1454, varan entre ellos por 7 a 12 residuos de adenina ambos enlazadores. En posteriores experimentos se
Anlisis de resultados obtenidos por
En la grafico a se puede observar que la
incorporacin del aminocido metionina tanto al ribosoma hibrido como salvaje presentan diferencias siendo este ltimo de una incorporacin mayor, aun as el Ribo-T pudo incorporar grandes cantidades de metionina lo cual implica una produccin alta de protenas, tener en cuenta que la metionina es conocida como el codo de inicio(AUG), por lo tanto no es trivial la incorporacin de este dado que es un indicador de sntesis de protena. Tanto la figura b y c, presenta la comparacin entre e ribosoma salvaje y Ribo-T en la electroforesis bidimensional , la cual se puede observar una poblacin de protenas disgregadas de acuerdo a su peso molecular y PH, si bien se presentan sutiles diferencias entre la caractersticas proteicas sintetizadas entre ambos ribosomas, estas diferencias no son suficientemente subtanciales para afirmar que la produccin en cuanto a caractersticas de masa y PH son dismiles.