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UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA


UNIDAD DE POSTGRADO

Determinacin de los compuestos fenlicos presentes


en el extracto metanlico de la pulpa del fruto
Mauritia flexuosa L. aguaje procedente de TarapotoSan Martn y su efecto sobre el nivel de estradiol en
ratas hembras jvenes normales

TESIS
para optar al grado acadmico de Magster en Recursos Vegetales y
Teraputicos

AUTOR
Carmen Cusco Vsquez

ASESOR
Pablo Enrique Bonilla Rivera

Lima-Per
2009

A Dios ya que sin el nada


podemos hacer
A mis padres Luis
y
Mara
por
brindarme
su
inmenso amor y
apoyo
incondicional
en
cada etapa de mi
vida
Al
Dr.
Pablo
Enrique
Bonilla
Rivera
por
su
apoyo
y
orientacin en el
desarrollo de este
trabajo.
A los docentes de
Universidad
Nacional Mayor de
San Marcos por
brindarme
su

enseanza
para
culminar con xito
la meta trazada.

Carmen Cusco
Vsquez

INDICE

RESUMEN SUMMARY

I.

Introduccin

II.

Generalidades

2.1

Aspectos Botnicos de Mauritia flexuosa L. Aguaje

2.2

Aspectos Qumicos de compuestos fenlicos

2.3

Menopausia

16

2.4

Estrgenos

19

III.

Parte Experimental

22

3.1

Materiales

22

3.2

Metodologa

22

3.2.1 Estudio Fitoqumico

23

3.2.2 Estudio Farmacolgico

24

Determinacin del nivel estrognico en muestras de sangre de ratas, hembras


Holtzmann previamente inducidas con la ingestin del extracto metanlico de
Mauritia flexuosa L. Aguaje.
IV.

Resultados

25

V.

Discusin

29

VI.

Conclusin

35

VII.

Referencias bibliogrficas

36

VIII. Anexos

39

RESUMEN
Se realiz una investigacin fitoqumica y farmacolgica del extracto metanlico de
Mauritia flexuosa L. Aguaje, con el objetivo de determinar compuestos fenlicos
que posee el fruto de esta especie y su actividad estrognica, la cual fue colectada en la
ciudad de Tarapoto en la Regin San Martn. Alrededor de esta

planta

se

han

extendido una serie de aventuras y propiedades, inclusive se le atribuye al fruto


virtudes como la de poseer hormonas femeninas que hacen que tanto hombres como
mujeres desarrollen caractersticas fsicas femeninas pronunciadas. Estas creencias
tradicionales incentivaron a que se desarrolle el presente trabajo , utilizando ensayos
generales de reconocimiento, cromatografa en capa fina con sistemas de solventes
diclorometano-metanol

(2:1)

espectroscopia

UV

utilizando

reactivos

de

desplazamiento; en la parte farmacolgica se utilizaron veinticuatro ratas de ,raza


Holtzmann, albinas hembras de dos semanas de vida y peso aproximado de 200 gr. de
peso, a las cuales se le administraron por va oral concentraciones de 25mg, 50mg,
500mg de extracto para determinar la actividad estrognica por medio del anlisis de
la hormona estradiol en muestras sanguneas de las ratas albinas inducidas .Los
resultados de la marcha fitoqumica muestran que el extracto metanlico de Mauritia
flexuosa L. Aguaje presenta en su composicin abundante cantidad de compuestos
fenlicos, flavonoides, taninos y alcaloides. Se detectaron las siguientes estructuras:
4,5-dimetoxi-7-O- glucosiflavona, 4,5,6,7-tetra -O- metoxi flavona, 4,5-di-O- metoxi6,7-dihidroxi flavona, 4-O-metoxi-5,7-dihidroxi-flavona, 34,7-trimetoxi-5- hidroxiflavona,

4-metoxi-5-hidro-7-O-R-flavona

5,7-dihidroxi-4-

metoxiisoflavona. El estudio farmacolgico realizado determin que el extracto


metanlico de Mauritia flexuosa L aguaje utilizado disminuy el nivel hormonal de
estradiol sobre los valores normales en las ratas Holtzmann (albinas hembras jvenes,
normales) tratadas produciendo efecto antiestrognico.
Palabras clave: Mauritia flexuosa L., Aguaje, compuestos fenlicos, isoflavona,
menopausia, estrgenos.

SUMMARY

A phytochemical investigation and pharmacological research of the

methanolic

extract of Mauritia flexuosa L. Aguaje, with the objective to determinate the


phenolic compounds and activity estrogenic of the that owns the fruit of this species,
which was collected in the city of Tarapoto in San Martin, around this silver have
extended a series of adventures and properties, inclusively attribut to the fruit virtues
has female hormones that make both men and women develop female physical
characteristics pronounced .These traditional beliefs stimulated to that the present
work was developed ,using general tests of recognition, chromatography in fine layer
with systems of reliable diclorometano-metanol (2:1) and UV spectroscopy using
reactive of displacement; in the pharmacological part twenty-four rats, Holtzmann
race, were used albinos females of two weeks of life and 200gr. approximated weight
of g. of weight, to which concentrations of 25mg were administered to him by oral
route, 50mg, 500mg of extract to determine the estrogenic activity by means of the
analysis of the hormone estradiol in sanguineous samples of the rats induced
albinos.The results of the phytochemical march show that the methanlic extract of
Mauritia flexuosa L. Aguaje presents its abundant amount of phenolic compounds,
flavonoids, tannins and alkaloids. UV spectroscopy resulted in the detection of the
following structures: 4',5- dimethoxy-7-O-glucosiflavona, 4' ,5,6,7-tetra-O-methoxy
flavone, 4',5-di-O-methoxy-6,7-dihydroxy-flavone,4-O-methoxy-5, 7 - dihydroxy
flavone,

3,4',7-trimethoxy-5-hydroxy-flavone

,4-metoxi-5-hidroxi-7-O-R-flavona

and 5,7-dihydroxy-4'-metoxiisoflavona. The pharmacologic study determined that


metanlico extract Mauritia flexuosa L. used, reduced the hormonal level of
estradiol, on the normal values in the albinos rats dealt, producing antiestogenic
effect.

Key words: Mauritia flexuosa L, Aguaje, phenolic compounds, isoflavonas,


menopause, estrogens,

I.

Introduccin

En el conocimiento tradicional de los pueblos indgenas y comunidades


campesinas, sobre plantas y animales, hay respuestas a las necesidades humanas.
Estos conocimientos tradicionales se han conservado de generacin en
generacin, constituyendo una fuente valiosa de informacin, para el futuro de la
agricultura y la medicina, siendo imprescindible rescatar plantas olvidadas, que
inclusive tienen posibilidades de curar enfermedades; que los medicamentos
sintticos no han podido resolver. La Regin de San Martn presenta una
abundante variedad de recursos naturales que se encuentran diseminadas por su
diversidad ecolgica y su especial posicin geogrfica; nos ofrece una de las
floras ms abundantes que debemos aprovechar, dentro de ella, los recursos
fitoterapeticos y el conocimiento ancestral de sus diversos usos en nuestra
sociedad, que deben ser evaluados con la finalidad de conocer sus principios
activos, para solucionar problemas de salud en nuestro medio y con fines de
aplicacin en la industria farmacutica.

Es por eso que el presente trabajo se basa en la informacin etnobotnica


recolectada de los pobladores de la Regin San martn, ya que alrededor del fruto
Mauritia flexuosa L. aguaje se han extendido una serie de aventuras y
propiedades, inclusive se le atribuy al fruto virtudes como la de

poseer

hormonas femeninas que hacan que tanto hombres como mujeres desarrollaran
caractersticas fsicas femeninas pronunciadas. Pero en realidad es el soporte de la
cadena alimenticia de animales y humanos, en medio de la selva por lo que los
antiguos nativos yaguas, los que sobreviven lo llaman "la madre de la floresta" y
el "rbol de la vida", considerndolo un smbolo de la inmortalidad.

Mauritia flexuosa L. aguaje, es una especie amaznica de la selva peruana, se


cultiva y explotan poblaciones naturales en los departamentos de Loreto, Ucayali,
Huanuco y San Martn.

l,2,33-34

Estudios han demostrado una relacin entre el consumo de comidas ricas en soya,
y la baja frecuencia de ciertas entidades como la enfermedad cardiovascular,
algunos cnceres hormonodependientes, como el cncer de mama, endometrio,
prstata y colon, la osteoporosis, sintomatologa menopusica, y alteraciones del
ciclo menstrual, dada la asociacin hormonal de estas enfermedades, han sido

implicados dentro de este contexto unos compuestos derivados de la soya, que


poseen una dbil actividad estrognica y, que reciben el nombre de isoflavonas.

Las isoflavonas son compuestos fenlicos con similitudes estructurales con los
estrgenos naturales (l7-estradiol). Se encuentran en una gran variedad de
plantas, especialmente cereales (arroz, trigo, avena, cebada), legumbres (granos de
soya, garbanzos), hortalizas (alfalfa y las coles, brcoli, coliflor).

4,5

En el desarrollo de esta investigacin se realiz el estudio fitoqumico y


farmacolgico de la especie Mauritia flexuosa L. aguaje para determinar los
compuestos qumicos que posee, teniendo como objetivo principal la
identificacin de compuestos fenlicos en el extracto metanlico del fruto y
comprobar la actividad estrognica, utilizando en ratas Holtzmann albinas
hembras de dos semanas de vida y peso aproximado de 200 gr. de peso con lo
cual se demostrara efecto deseado.
El trabajo se realiz Laboratorio de Qumica Orgnica del Instituto de
Investigacin en Ciencias Farmacuticas y Recursos Naturales Juan de Dios
Guevara de la Facultad de Farmacia y Bioqumica; y en el Laboratorio de
Farmacologa de la Facultad de Medicina, de la Universidad Nacional Mayor de
San Marcos.

II.

2.1 .

Generalidades

Aspectos botnicos

Clasificacin sistemtica
La clasificacin sistemtica de la planta se realiz en el Museo de historia Natural
de la Universidad Nacional de San Marcos, segn el sistema de clasificacin de
Cronquist (l988), como sigue:
Divisin: Magnoliophyta
Clase: Liliopsida
Orden: Arecales
Familia: Arecaceae
Genero: Mauritia
Especie: Mauritia flexuosa L.
Nombre Vulgar: Aguaje

(Anexo l)

Descripcin botnica
El aguaje es una palmera polgama dioica, tiene una copa esfrica, y en
condiciones naturales puede alcanzar una altura de 35m , el tallo en plantas
adultas, es coronado por hasta 30 hojas pinnadas de tamao mximo de 8m. de
longitud y hojas muertas colgando por algn tiempo debajo de la corona, dndole
un aspecto peculiar a la especie. El tallo es recto, liso, cilndrico, columnar con
DAP 30-60cm. de dimetro, con cicatrices conspicuas de hojas prominentes en
arreglo espiral. Se han observado generalmente, numerosos hijuelos alrededor del
tallo principal, hasta en nmero de 20. Las races primarias profundizan hasta
60cm. y luego desarrollan horizontalmente hasta 40m, tienen races secundarias
aerferas o neumatforos que le permiten respirar a las races en condiciones
hidromorfas. Las hojas son compuestas, flabeladas, de 5-6m de longitud,
agrupadas en nmero de l0-20 en la parte terminal del tallo formando la copa; la
lmina tiene 80-90cm. de dimetro y se prolonga en el pecolo.

l,33

Inflorescencias interfoliares, encerradas en 2 brcteas coriceas hasta la floracin.


Inflorescencia masculina en racimos largos, cilndricos, de hasta 70 cm. de
longitud y con centenares de flores. Inflorescencia femenina que conforman

racimos compactos, esfricos; flores con 68 spalos de hasta l5-20cm. de


longitud, un pistilo con un gran estigma de hasta 9cm. de longitud.

El fruto es una drupa, subglobosa o elptica, mide 5-7cm. de longitud y 4-5cm. de


dimetro, el peso vara 40-85g; el epicarpio es grueso y leoso con numerosas
proyecciones espinosas, de color pardo oscuro a rojo oscuro externamente e
internamente

cremoso-amarillento.

Mesocarpio

carnoso,

suave,

amilceo

ligeramente duro, de consistencia fibrosa, oleaginosa, tiene un espesor de 4-6mm


y constituye entre el l0-2l% del fruto de espesor, sabor ligeramente dulce y
aroma muy agradable; de color anaranjado o anaranjado rojizo. Endocarpio liso,
es una lmina delgada de color blanco o pardo-blancuzco, duro, muy delgado, de
0,5 de espesor fuertemente adherido al endospermo homogneo, fluido cuando
joven, ms tarde gelatinoso y finalmente muy duro y blanco, parecido al marfil al
estado maduro, con una pequea cavidad central. La semilla, l-2 por fruto, es
subglobosa, slida y con albumen blanco; constituye el 40-44,5% del fruto.

l,34

Es una especie nativa amaznica, probablemente originaria de las cuencas de los


ros Huallaga, Maran y Ucayli en el Per. En la cuenca amaznica, tiene
amplia distribucin en Bolivia, Brasil, Colombia, Ecuador, Venezuela y Guyana.
En la selva peruana, se cultiva y explotan poblaciones naturales en los
Departamentos de Loreto, Ucayli, Huanuco y San Martn. En Per se calcula que
hay unas 3 millones de hectreas de aguajales. Llega hasta los 860 m.s.n.s, en San
Martn, en el ro Mayo (Prov. De Rioja).

El uso principal del fruto es en alimentacin directa humana. El consumo


tradicional del aguaje, es masticando directamente el mesocarpio del fruto. Las
bebidas de aguaje se preparan diluyendo el mesocarpio, en agua con azcar o
sometiendo a fermentacin; el mesocarpio puede deshidratarse y reconstituirse
para bebidas. Tambin se obtiene del mesocarpio harinas y aceite.

2,33

La pulpa del aguaje tiene la siguiente composicin qumica. Tabla 1

Tabla 1. Anlisis qumico de la pulpa de Mauritia flexuosa L Aguaje

Componentes

33

100 g de pulpa

Energa

283,0 Kcal.

Agua

53,6 g

Protenas

3,0 g

Lpidos

2l,l g

Carbohidratos

l8,l g

Fibra

l0,4 g

Ceniza

0,9 g

Calcio

74,0 mg

Fsforo

27,0 mg

Hierro

0,7 mg

Vitamina A (Retinol)

l062,0 mg

Tiamina

0,l2 mg

Riboflavina

0,l7 mg

Niacina

0,30 mg

Vitamina C

26,0 mg

www.regionloreto.gob.pe/anazonia/libros/5l/5l00000.(l993)

2.2 Aspectos Qumicos


Compuestos fenlicos
El elemento estructural fundamental que los caracteriza es la presencia de al
menos un ncleo bencnico que contiene como mnimo un grupo hidroxlico, libre
o formando parte de otra funcin: ter, ster, hetersido. En la naturaleza, la
sntesis de un ncleo aromtico la realizan nicamente vegetales y
microorganismos. Los organismos animales reciben, sea por su alimentacin o a
travs de una simbiosis, para elaborar metabolitos que les son indispensables y
que poseen este elemento estructural (aminocidos, vitaminas, pigmentos,
toxinas).

8-l0

Proceden de dos grandes vas de la aromagnesis, la va ms frecuente es la va


shikimato , conduce a partir de osas a la formacin de aminocidos y despus por
desaminacin de estos ltimos, a cidos cinmicos y de sus numerosos derivados:
cidos benzoicos, acetofenonas, lignanos, cumarinas. La otra va parte del acetato
y conduce a la formacin de poli--cetosteres de longitud variable, poliacetatos
que producen por ciclacin compuestos normalmente policclicos: cromonas,
isocumarinas, orcinoles, dpsidos, depsidonas, xantonas, quinonas.

9,l0

La pluralidad estructural de los compuestos fenlicos debida a este doble origen


biosinttico se ve acrecentada por la posibilidad, muy frecuente, de la
participacin simultnea del shikimato y del acetato.

ll,l2

La gran diversidad de los compuestos fenlicos hace difcil la presentacin


conjunta de los mtodos que permitan su extraccin y aislamiento, de los procesos
implicados en su biosntesis, de sus propiedades fisicoqumicas y biolgicas.
Constituidos en funcin de su origen biosinttico, siguiendo el siguiente esquema:
Shikimatos y drogas que los contienen: derivados del l-fenilpropano, y estos son
fenoles sencillos, cidos fenlicos, cumarinas, lignanos, flavonoides, antocianos y
taninos.

8,l0

Dentro de los compuestos fenlicos encontramos a los flavonoides que son


pigmentos casi universales en los vegetales. Casi siempre hidrosolubles, son
responsables de la coloracin de las flores, frutos y a veces de las hojas,
asegurando as la proteccin de los tejidos contra los efectos nocivos de las
radiaciones ultravioletas.

ll

Los flavonoides contienen quince tomos de carbono en su ncleo bsico y estn


arreglados bajo un sistema C6-C3-C6, en el cual dos anillos aromticos llamados A
y B estn unidos por una unidad de tres carbonos ciclados a travs de un oxgeno
que pueden o no formar un tercer anillo, que en caso de existir sera llamado
anillo C.

8-l0

.Figura 1

Figura 1. Estructura general de los flavonoides

Los flavonoides presentan una clasificacion muy extensa, pero el objetivo de este
estudio corresponde solamente a las flavonas e isoflavonas
En las flavonas el ciclo A se encuentra, en ms del 90% de los casos, sustitudo
por dos hidroxilos fenlicos en C5 y C7.Estos hidroxilos se pueden encontrar
9

libres o esterificados, uno de ellos puede participar en un enlace heterosdico. .


Figuras 2

R=H, apigenol
R=OH, luteolol

Figura 2. Flavonas
Las principales actividades biolgicas de flavonoides es atribuida a los
flavonoides es la de ser venoactivos, es decir ser capaces de disminuir la
permeabilidad de los capilares sanguneos y aumentar sus resistencia. Los
flavonoides y las preparaciones a base de flavonoides son objeto (Francia,
Alemania, Espaa o Italia) de amplia prescripcin, de frecuentes recomendacin
farmacutica y de una importante automedicacin en el terreno de patologas
circulatorias menores. Adems algunas molculas de estos grupos, al menos en
posologas elevadas, han podido mostrar una cierta eficacia clnica. Actualmente,
interesa sobre todo la interaccin de los flavonoides con radicales y sus posibles
consecuencias en trminos preventivos asimismo la actividad celular de estas
molculas y los sistemas implicados en la respuesta inmunitaria y en la
inflamacin, estn siendo estudiadas.

En cuanto a las isoflavonas es una sustancia vegetal o metabolito que induce


respuestas biolgicas en vertebrados y que puede modular la accin de los
estrgenos endgenos, usualmente por la unin a los receptores estrognicos. Son
compuestos vegetales no esterodicos, que presentan accin estrognica .

Las isoflavonas son polifenles heterocclicos no esteroideo, cuya accin


esteroide radica inicialmente en su similitud estructural con los estrgenos. Por su
actividad de bioestrgenos, son capaces de interactuar con receptores de

estrgenos y producir efectos agonistas y antiagonistas; as, en mujeres en edad


frtil pueden producir una disminucin de los estrgenos endgenos. Su actividad
antiestrognica tambin sirve para prevenir diferentes enfermedades de las
mujeres posmenopusicas. La genistena acta con efecto estrognico y la
daidzena con efecto antiestrognico, por lo cual, cuando se recomiende
tratamiento con isoflavona, debe de tenerse en cuenta la enfermedad a tratar, as
como la edad de la paciente, porque la genistena, en edad frtil, puede actuar
como antiestrgeno, por competencia con los estrgenos. La genistena inhibe la
conversin de estrona a l7- estradiol y aumentan la sntesis heptica de la
globulina transportadora de hormonas sexuales (SHBG), la cual modula
concentraciones sricas de esteroides.

3,l8,l9

las

Figura 3.

Figura 3. Isoflavona
La actividad biolgica de la isoflavonas radica en su estructura isoflavonoidica lo
que le proporciona actividad de fitoalexinas, es decir sustancias producidas por las
plantas como respuesta a una infeccin por un agente patgeno, normalmente de
naturaleza fngica.

El metabolismo de las isoflavonas depende de su forma qumica y el metabolismo


propio de cada individuo. Las variaciones entre los diferentes sujetos depende de
la hidrlisis por las bacterias intestinales, el transito intestinal, la edad del sujeto,
el grupo tnico al que pertenece, drogas, pH intestinal, la dieta, presencia o no de
enfermedades intestinales e inmunidad del husped. Despus de la ingestin, son
hidrolizadas por glucosidasas intestinales, para la primera etapa del metabolismo
de las isoflavonas se requiere de la hidrlisis bacteriana en el intestino, paso clave
en la actividad biolgica y biodisponibilidad de las mismas y como consecuencia
sus efectos fisiolgicos como constituyentes de la dieta .Las isoflavonas
absorbidas en el tracto intestinal, tanto en intestino delgado y grueso, cumplen el
circuito entero heptico y por lo tanto se transportan al hgado por la vena porta

donde se conjugan predominantemente con cido glucurnico y en menor medida


con cido sulfrico. Las isoflavonas que se encuentran en la sangre y orina se
encuentran bsicamente en su forma conjugada. Se afirm anteriormente que las
variaciones en la absorcin y posterior utilizacin de las isoflavonas esta
condicionado por diferentes factores, uno de los cuales es la dieta, en donde
podramos intervenir y as optimizar el resultado. Por ejemplo, las bacterias
intestinales transforman la isoflavona daidzena en equol. El equol es
bioqumicamente activo, circula en sangre, es un mejor antioxidante que la
daidzena, la isoflavona de la cual deriva.La ingesta de altas concentraciones de
hidratos de carbono, incrementan la fermentacin intestinal obtenindose como
resultado una mayor biotransformacin de la daidzena y como consecuente un
incremento de equol. Se determin que la vida media en plasma circulante de
genistena y daidzena es de 7.9 horas en adultos, siendo el pico mximo entre 6 a
8 hs despus de la administracin. Como consecuencia, para maximizar la efectiva
exposicin a las isoflavonas y mantener los niveles en constantes en sangre, es
necesario su consumo varias veces al da, por lo menos 2 a 3 veces por da,
obtenindose mejores resultados en lugar de consumir una dosis mayor una sola
vez. Son eliminados mayormente a travs de la orina en cantidad proporcional a la
ingesta, aunque tambin se encuentran en heces, bilis, leche materna, saliva y
semen.

5,l2,20-23

Las isoflavonas poseen capacidad para unirse a los receptores estrognicos, hecho
del que derivan muchas de sus acciones tisulares. Desde un punto de vista
estructural, respecto a la posibilidad de unin de estos compuestos con los
receptores estrognicos, ha de tenerse en cuenta que el receptor estrognico (RE)
se liga a molculas de distinta naturaleza, sean o no de estructura esteroide. En la
capacidad de unin de cualquier ligando al RE son importantes, entre otras

Caractersticas, la presencia de un anillo aromtico y de grupos hidroxilo, as


como el carcter hidrofbico de la estructura. El l7--estradiol contiene dos
grupos hidroxi en las posiciones 3 y l7 de un esqueleto esteroideo.

5, l2,l9

.Figura 4

Figura 4. Isoflavonas y comparacin estructural con el 17-Estradiol


Existen notables similitudes estructurales de con el l7--estradiol, que se traducen
en la capacidad de unin de los mismos al RE, si bien con diferente grado de
afinidad segn el compuesto de que se trate. La actividad estrognica se ve
negativamente afectada tanto por la metilacin como por la glicosilacin de los
hidrxilos fenlicos. El complejo ligando-receptor que se forma resulta ser
funcionalmente equivalente al formado por el l7- estradiol, en el sentido de que
es capaz de inducir actividad transcripcional .En general, presentan menor grado
de afinidad por el receptor estrognico que el estradiol, y se ligan
preferencialmente al RE : la afinidad por el RE de las isoflavonas es del orden
de 30 veces ms que la que presentan con respecto al RE a. Esta diferencia de
afinidad hacia ambas isoformas del receptor estrognico, es debida probablemente
a la diferente secuencia de aminocidos de la regin F del dominio de unin de
ambos tipos de receptor estrognico. Adems, la actividad transcripcional es
mucho ms potente con respecto al RE que al RE a

l0

5,l2,22

. Figura 5

Figura 5. Interaccin de las Isoflavonas con los receptores estrognicos


Este hecho puede ser debido a la mayor capacidad de reclutamiento de factores
coactivadores para el RE que para el RE a. El estradiol, por su parte, recluta de
forma no selectiva los correguladores de ambos tipos de receptor. Dada la
naturaleza selectiva de sus acciones sobre los diferentes receptores estrognicos,
se podra considerar a las isoflavonas como verdaderos moduladores selectivos de
dichos receptores (SERM), cuyas acciones se efectuaran bsicamente en aquellos
rganos y tejidos diana en los que los RE se encuentran en cantidades
relevantes, tales como el sistema nervioso central, hueso y pared vascular e,
inversamente, no actuaran en aquellos rganos con expresin preferencial del RE
a, como la mama y el endometrio. Aunque las isoflavonas, concretamente la
genistena, se ligan al RE con casi la misma eficiencia que el estradiol, la
concentracin requerida para inducir actividad transcripcional es de l04 veces
mayor para la genistena que para el estradiol; algo similar sucede para la
daidzena, el equol o la glicitena. Adems, el tipo de actividad transcripcional
inducido por las isoflavonas no es exactamente el mismo que el producido por el
estradiol, lo que podra tener su explicacin en el hecho de que la estructura
conformacional del complejo isoflavona-receptor es diferente de la del complejo
estradiol-receptor: concretamente, la hlice l2 de la superficie AF-2 se encuentra
en una posicin diferente segn que el ligando sea la genistena o el l7-estradiol.
Sin embargo, esta menor actividad transcripcional de las isoflavonas queda
parcialmente compensada por el hecho de que presentan una mayor facilidad de
acceso a los RE que el propio estradiol, debido a que la fraccin circulante libre
de este ltimo es tan slo de un 4-5%, en tanto que las isoflavonas pueden circular

ll

libres en ms de un 50%, y adems su unin a las protenas plasmticas es menos


fuerte que la del estradiol. Por ltimo, los niveles circulantes de isoflavona son de
un orden de magnitud superiores a los del estradiol (nanogramos/mL versus
picogramos/mL), hechos todos ellos que condicionan una biodisponibilidad
importante de las isoflavonas..

5,l2,22

Las isoflavonas son capaces de inhibir diversos enzimas implicados en numerosos


procesos orgnicos.

5,l2

. Figura 6

Figura 6. Mecanismos de accin de isoflavonas relacionadas con inhibicin


enzimtica
Inhibicin de tirosinkinasas
La actividad de las tirosinkinasas es inhibida por la genistena va interaccin con
el sitio de unin con el ATP. Esta familia de enzimas juega un papel fundamental
en una serie de eventos relacionados entre otros con la divisin celular y la
carcinognesis: inhibicin de la expresin de oncogenes y modulacin de la
expresin de diversos factores de crecimiento y sus receptores. Como resultado de
la reduccin del nmero de receptores inducido por las isoflavonas a travs de la
inhibicin de las tirosinkinasas, se reduce la actividad de los factores de
crecimiento correspondientes, con la consiguiente inhibicin del crecimiento
tumoral. Estos factores de crecimiento se encuentran tambin implicados en los
procesos de angiognesis fundamentales en el desarrollo tumoral y la aparicin de

l2

metstasis. Por otra parte, los inhibidores de la tirosinkinasa como la genistena,


antagonizan la contractilidad vascular en respuesta a un amplio rango de agentes
contracturantes y reducen la resistencia en distintas arterias. Esta actuacin sobre
el msculo liso vascular incluye la inhibicin reversible del incremento de Ca
intracelular y la regulacin del efecto del Ca

2+

2+

en el aparato contrctil de las

clulas de dicho msculo. Adems, las tirosinkinasas actan en los procesos de


agregacin plaquetaria y en el metabolismo osteoblstico, por lo que su inhibicin
por las isoflavonas se traducira en efectos positivos sobre la trombognesis y la
osteoporosis menopusica.

l2

Accin sobre enzimas implicados en el ciclo celular


Las isoflavonas son capaces de actuar sobre otras muchas enzimas, tales como las
topoisomerasas I y II, que catalizan cambios topolgicos en el ADN, y que son
necesarias en la replicacin del mismo. En este caso, las isoflavonas actan sobre
el complejo topoisomerasa-ADN induciendo la apoptosis o muerte celular
programada, tal y como se ha observado en lneas celulares de cncer de mama.

l2

Accin sobre el metabolismo y transporte de estrgenos y andrgenos


La aromatasa, enzima implicada en la formacin del l7- estradiol a partir de sus
precursores andrognicos, es tambin inhibida por la genistena, con la
consiguiente reduccin en la produccin de esta hormona, lo que puede tener una
especial importancia en los tumores hormono-dependientes, como el de mama.
Algo parecido sucede con las familias enzimticas de las l7- esteroide
dehidrogenasas y las sulfotrasnferasas, implicadas asimismo en el metabolismo de
los estrgenos, as como con la 5-a reductasa, enzima convertidora de la
testosterona en dihidrotestosterona e implicada en el cncer de prstata. Las
isoflavonas

y lignanos

tambin modulan la

produccin

de globulina

transportadora de hormonas sexuales, estimulando su sntesis por parte de los


hepatocitos, e incrementando sus niveles plasmticos en humanos, sobre todo en
aquellos sujetos con valores previos bajos de SHBG, con la consiguiente
reduccin de los valores de estradiol libre circulante.

l2

Accin sobre enzimas implicados en procesos inflamatorios


Algunos lignanos e isoflavonas se comportan tambin como inhibidores de
enzimas relacionados con los procesos inflamatorios, como la ciclooxigenasa o la

l3

lipooxigenasa, as como de otras enzimas, como la colesterol-7a-hidroxilasa,


implicada en la formacin de cidos grasos biliares a partir del colesterol, y la aglucosidasa, que interviene en el metabolismo de la glucosa y otros procesos .Su
actuacin

enzimtica

se

extiende

tambin

la

regulacin

de

la

colinacetiltransferasa, enzima implicado en el metabolismo de la acetilcolina ; esta


regulacin se extiende, en diferentes reas cerebrales (cortex frontal e
hipocampo), a distintos factores de crecimiento: factor neurotrfico
(BDNF) y factor de crecimiento nervioso (NGF) .

cerebral

l2

Actividad antioxidante y sobre la pared vascular


El grupo de los polifenles, al que pertenecen las isoflavonas, presenta
propiedades antioxidantes ms o menos marcadas, dependientes, al menos en
parte, de su interaccin con las agrupaciones polares de los fosfolpidos de
membrana. La isoflavona con mayor actividad en este sentido es la genistena,
conjuntamente con el equol, producto metablico de la daidzena, el cual ejerce su
actividad antioxidante mediante la inhibicin de la expresin de la NADPH
oxidasa p22phox, que se traduce en un descenso en la produccin de radical
peroxinitrito

expensas

del

NO

(xido

ntrico),

incrementando

la

biodisponibilidad de este agente relajante de la musculatura lisa vascular. Este


descenso en el ONOO. Determina una disminucin en la oxidacin de las LDL.
Por otra parte se sugieren que la genistena aumenta la actividad de distintas
enzimas antioxidantes (catalasa, superxido dismutasa y glutation reductasa), no
afectando la actividad de la glutation transferasa (GST). Dicha actividad
antioxidante, evidenciada tanto in vitro como in vivo, da lugar a un decrecimiento
de las llamadas especies reactivas de oxgeno y de nitrgeno, como consecuencia
de lo cual cabe esperar, entre otros beneficios sobre patologas producidas o
agravadas por estrs oxidativo. Por otra parte, la genistena favorece la relajacin
del msculo liso vascular por diversos mecanismos:bloqueo de los canales de Ca+
+, modulacin de la produccin de NO tanto por la NOS inducible como por la
NOS constitutiva, inhibicin del receptor de la angiotensina II y descenso de la
produccin del pptido vasoconstrictor endotelina-l .Esta reduccin de la
endotelina-l podra jugar adems un cierto papel protector en determinados
procesos neoplsicos, puesto que dicho pptido est implicado en los procesos de

l4

crecimiento, migracin, invasin y angiognesis tumoral. Adems, las isoflavonas


incrementan la eficacia del hgado en lo que se refiere a la metabolizacin del
LDL, ya que incrementan la expresin de sus receptores y la actividad de los
mismos. Estas acciones, que interesan al perfil lipdico, se encuentran
acompaadas por una disminucin en la proliferacin y migracin de las clulas
del msculo liso vascular pudiendo conferir efectos cardioprotectores en el
sistema cardiovascular mediante inhibicin del remodelado vascular y la
formacin de la neontima.

l2,22

Las isoflavonas estn presentes principalmente en las hojas, los frutos y las
semillas de gramneas y de leguminosas. Tambin se encuentran en granos
ntegros de cereales, en semillas bayas y nueces. Aunque las isoflavonas no son
nutrientes esenciales, pueden ayudar a reducir la incidencia de varias
enfermedades.Las semillas de soya tostada tienen el mayor contenido de
isoflavonas: Aproximadamente l67 mg. por una racin de 3.5 onzas. El tempeh
(un pastel de semillas de soya fermentadas) es el siguiente, con 60 mg., seguido
por la harina de soya con 44 mg. Los productos de soya procesados como la
protena de soya y la leche de soya contienen aproximadamente 20 mg. por
racin. Las mismas isoflavonas que se encuentran en la soya tambin estn
contenidas en ciertos productos de trbol rojo.

5,23,24

El consumo promedio diario de isoflavonas de soya es de aproximadamente 50


mg. Cuando se trata de disminuir la concentracin de colesterol, es suficiente un
consumo diario de entre 60 y 90 miligramos diarios de compuestos protectores
(25 a 50 gramos de protena de soya).Para la prevencin de cncer de mama,
prstata y colon, la ingesta ser, diariamente, de 50 a 70 miligramos (20 a 40
gramos de protena de soya). Si el objetivo es el control de los sntomas de la
menopausia, la dieta deber incluir de 50 a 75 miligramos (20 a 45 gramos de
protena de soya).En el tratamiento de osteoporosis en mujeres posmenopusicas
sern necesarios, cada da, de 60 a 80 miligramos de isoflavonas
(aproximadamente 40 gramos de protena de soya).

l0,23,24

Las poblaciones asiticas ocupan el primer lugar, ya que consumen soya en su


dieta diaria desde la niez (40 a 50 mg/da; en el Japn, 200 mg/da),
observndose que solo 25% de las mujeres presenta sntomas

l5

vasomotores

climatricos, con una baja incidencia de cncer de mama, colon, prstata,


enfermedades cardiovasculares, osteoporosis. En los pases occidentales, su uso es
menor en cantidad y tiempo, con consumo promedio de 5 mg/da.
2.3.

l9

Menopausia

El climaterio, que incluye perimenopausia, menopausia y posmenopausia, es un


perodo de cambios fisiolgicos en el eje hipotlamo-hipfisis-ovario, con
disminucin progresiva del estradiol endgeno. Como consecuencia, en la etapa
perimenopusica comienzan los periodos menstruales irregulares y hay trastornos
de la termorregulacin, los bochornos, entre otros sntomas vasomotores. En la
menopausia cesa permanentemente la actividad menstrual, debiendo transcurrir
por lo menos l2 meses con amenorrea para tener un diagnstico certero. La edad
promedio de la mujer en el momento en que cesa la hemorragia menstrual es de
50 a 5l aos. La amenorrea es producto de la disminucin de la funcin folicular
ovrica, que se manifiesta por deficiencia de estrgenos. La intensidad de la
sintomatologa se relaciona con la herencia, estilos de vida, paridad, entre otros.
En la posmenopausia ocurre envejecimiento de la piel, aumento de peso, riesgo de
osteoporosis

de

fracturas,

de

problemas

cardiovasculares,

como

arterioesclerosis, angina pectoris, hipertensin, accidentes cerebro vasculares,


enfermedad de Alzheimer, entre otros. Como se observa, el dficit estrognico va
a producir alteraciones fsicas y psquicas en la vida de la mujer, por lo que se
busca tratamientos que le mejoren su calidad de vida .Se ha empleado diversas
terapias hormonales con estrgenos, progestgenos y otros, para prevenir o tratar
estas complicaciones. Pero, las investigaciones mdicas advierten que la terapia
hormonal prolongada, mayor a los 5 aos, expone a las mujeres a riesgos de
adquirir cncer de endometrio, mama, ovario y al incremento de riesgos de
enfermedades cardiovasculares, como infarto de miocardio y trombosis venosa.
Por ello, se busca otras terapias, como la medicina alternativa, siendo los
componentes

ms

apreciados

significativamente entre ellas.

isoflavonas,

sustancias

que

difieren

l8

La disminucin del nmero de vulos se inicia ya en la vida intrauterina; en el


momento de la menopausia, el nmero de vulos es muy escaso y, probablemente,
su funcin es nula. El nmero de vulos que desaparece como consecuencia de la

l6

ovulacin de vida frtil muy escaso, y la mayora de los folculos y vulos


asociados se pierden por un proceso de atresia. La detencin del desarrollo
folicular determina un descenso de la produccin del estradiol y de otras
hormonas, que a su vez anulan la retroalimentacin negativa sobre los centros
hipotlamo-hipofisiarios. Por su parte, los niveles de gonadotropinas en el plasma
se elevan; la concentracin del FSH aumenta de forma ms precoz e intensa que la
de LH. La mayor concentracin de FSH comparada con LH en la mujer
posmenopusica obedece a la disminucin de la secrecin inhibida por el ovario, a
la menor depuracin plasmtica de FSH por su mayor contenido de cido silico y
posiblemente a la perdida de retroalimentacin positiva sobre la produccin de
LH ejercida por el estradiol. La administracin intravenosa de LHRH a mujeres
menopusicas determina un aumento pronunciado de la secrecin de FSH y LH,
que sugiere un incremento de la actividad secretora hipotlamo-hipofisiaria que
ocurre en otras formas de insuficiencia ovrica primaria. Los ovarios de la mujer
posmenopusica son de pequeo tamao y las clulas residuales son
principalmente del estroma. Los niveles de estrgeno y andrgenos en el plasma
se reducen pero no desaparecen del todo. Antes de la menopausia, la
androstendiona plasmtica procede en una proporcin similar de la glndula
suprarrenal y del ovario, pero despus de esta, la contribucin ovrica cesa, por lo
que los niveles plasmticos de androstendiona desciende un 50%. No obstante, el
ovario menopusico contina secretando testosterona, probablemente a partir
las clulas del estroma.

de

25

Los estrgenos circulantes de la mujer ovuladora derivan de dos fuentes. El 60%


de los estrgenos producidos durante el ciclo menstrual se encuentran el forma de
estradiol, procedente bsicamente del ovario, y el resto en forma de estrona que se
sintetiza principalmente en tejidos extraovricos a partir de la androstendiona. La
sntesis extraovarica de estrgenos constituye la va principal despus de la
menopausia. La produccin de estrgenos por el ovario menopusico es mnima y
la ooforectoma no se acompaa de una disminucin de estos niveles. Los niveles
plasmticos de estradiol, principal estrgeno secretado por el folculo, son
menores que los de estrona en la mujer posmenopusica. La tasa de formacin
perifrica de estrona aumenta ligeramente, por lo que la produccin de estrona es

l7

algo inferior a la produccin previa a la menopausia, a pesar del descenso de la


androstendiona plasmtica. El tejido adiposo constituye uno de los lugares
fundamentales de sntesis de estrgenos fuera del ovario por lo que la produccin
perifrica de estrgenos, en realidad, puede aumentar en las mujeres obesas
posmenopusicas, de tal modo que la tasa total de sntesis de estrgenos resulta
equivalente o superior a la de la mujer premenopusica. El
predominante es la estrona, y no el estradiol.

estrgeno

25

Loa sntomas menopusicos ms frecuentes consisten en inestabilidad


vasomotora sofocos, atrofia del epitelio urogenital y de la piel, disminucin del
tamao de las mamas y osteoporosis. La patognia de los sofocos no se conoce
bien. Existe una relacin temporal estrecha entre el inicio de los sofocos y los
pulsos de secrecin de LH; sin embargo, los sofocos tambin aparecen en mujeres
con ausencia de funcin hipofisaria y en tratamiento con anlogos de LHRH,
cuyos niveles de LH se encuentran ausentes o disminuidos. Las alteraciones del
metabolismo de las catecolaminas, prostaglandinas, endorfinas, o neurotensinas,
asociadas a la produccin reducida de estrgenos influyen, sin duda, en este
fenmeno. Otros sntomas que se asocian con frecuencia a los sofocos, como el
nerviosismo, la ansiedad, la irritabilidad y la depresin pueden estar producidos o
no por la deficiencia de estrgenos. La disminucin del tamao de los rganos del
aparato reproductor femenino y de las mamas durante la menopausia es
consecuencia de la deficiencia de estrgenos. El endometrio se adelgaza y se
atrofia en la mayora de los casos la mucosa vaginal y la uretra tambin muestran
adelgazamiento y atrofia. Existe una estrecha relacin entre la carencia de
estrgenos y el desarrollo de la osteoporosis. La osteoporosis es una de las
complicaciones mas temidas del envejecimiento. Las mujeres posmenopusicas
muestran

una

mayor

predisposicin

hacia

osteoporosis

hacia

sus

complicaciones, ya que la densidad sea de estas pacientes es menor antes de la


menopausia y la perdida consiguiente posee consecuencias mas graves en este
grupo. La prueba adicional de que la osteoporosis es producida por la carencia de
estrgenos se basa en el desarrollo prematuro de osteoporosis en las mujeres con
menopausia precoz debida a causas naturales o a castracin quirrgica.

l8

25

El tratamiento de la menopausia estrognico de la menopausia , constituye, en


realidad, una sustitucin farmacolgica de un anlogo de lo estrgenos, y no una
sustitucin fisiolgica del estradiol. Los estrgenos utilizados en el tratamiento de
sustitucin son los estrgenos conjugados, los derivados de los estrgenos
(dietilestilbestrol), los estrgenos sintticos (etinilestradiol y sus derivados), el
estradiol micronizado, las cremas vaginales con estrgenos y los parches drmicos
con estrgenos. Entre los tratamientos con un menor riesgo de complicaciones se
encuentra, el tratamiento cclico de estrgenos, a las dosis mininas eficaces,
durante 2l a 25 das por va oral., la administracin cclica de estrgenos, junto
con la adicin de gestgenos en los ltimos l0 a l3 das del ciclo estrognico.
El efecto ms beneficioso ms notorio del tratamiento estrognico de la
menopausia consiste en el alivio de la inestabilidad vasomotora (sofocos de calor)
y la atrofia del epitelio urogenital y de la piel. El tratamiento estrognico mejora
estos sntomas en la mayora de los casos, pero ste no debe de administrarse ms
all de 3 o 4 aos ya que suelen desaparecer por s solos. El tratamiento
estrognico posee efecto positivo a corto plazo

sobre el balance de calcio y un

efecto beneficioso a largo plazo sobre la densidad sea.

25

El riesgo ms preocupante del tratamiento estrogenico es el carcinoma


endometrial en las usuarias de estrgeno vara de 6 a 8. Este riesgo aumenta con la
duracin de la dosis de los estrgenos, pero disminuye en las mujeres que reciben
tratamiento de combinacin de estrgenos y gestgenos. El empleo de estrgenos
en la menopausia se asocia a un ligero aumento de la colelitiasis.
2.4

22

Estrgenos

Los compuestos estrgenos se segregan en el ovario, la placenta, los testculos y


las cpsulas suprarrenales. El principal estrgeno que secreta el ovario y el ms
potente de los estrgenos naturales es el estradiol. La estrona tambin es secretada
en el ovario, aunque su principal fuente procede de la conversin extraovrica de
androstendiona en los tejidos perifricos.

25,28

En los seres humanos se presentan varios tipos de estrgenos, siendo los ms


importantes la estrona, el estradiol y el estriol. Tienen estructura esterodica de 4
anillos, todos ellos tiene un esqueleto esteroide de l8 tomos de carbonos y un
anillo aromtico A ; un grupo fenlico en posicin C-3 y una funcin cetona en

l9

Cl7 (estrona) , El estradiol esta en equilibrio con la estrona difiere de esta en


que tiene una funcin alcohol en el Cl7 en lugar de la funcin cetona
(estradiol). El estradiol (l6-hidroxiestradiol), el estrgeno preponderante en la
orina, procede de la l6-hidroxilacin de la estrona y del estradiol. El estriol
tiene la misma estructura que el estradiol pero con otra funcin alcohol en la
posicin l6.

l0,28

Figura 7,8,9

Figura 7. Estradiol

Figura 8. Estrona

Figura 9. Estriol

El estrona y el estradiol intervienen en el desarrollo de los rganos femeninos


cuando se secretan en la pubertad y , despus de la pubertad favorecen la
proliferacin de la mucosa que reviste las trompas de Falopio, estimulan el
crecimiento de las mamas, favorecen el crecimiento esqueltico, provocan un
aumento de los depsitos de protenas en el organismo, producen depsitos de
grasa, sobre todo en ciertas regiones (glteos nalgas), causan una ligera retencin
de cloruros, sodio, y agua en el, tbulo renal y , por otra parte, incrementa la
cantidad de fibras elsticas, favorecen el desarrollo del pelo y afectan a la textura
de la piel, que se vuelve ms tensa y lisa.

l0,25,28

20

Esta hormona, al igual que otros casos, circula por el torrente sanguneo unido a
una protena portadora, y son inactivadas principalmente en el hgado mediante
procesos de sulfoconjugacin y de glucoronoconjugacin. Sin embargo, los
niveles plasmticos de estrgenos pueden ser medidos con suficiente exactitud
actualmente, al igual que su utilizacin urinaria en forma de conjugados, lo que
permite inferir el comportamiento ovrico en un ciclo normal de una mujer sana.
En ese caso, los niveles estrognicos llegan a un pico en la preovulacin, y es
seguido de un pequeo descenso y una nueva elevacin durante la aparicin del
cuerpo luteo. La produccin diaria de estradiol y estrona oscila, segn el da del
ciclo, entre 0,l y 0,5 mg. por 24 horas. Los niveles plasmticos varias de 0 a 500
g/mL.

29

2l

III.

3.1.

Parte experimental

Reactivos y materiales

Material bsico de vidrio

Equipos

Balanza analtica Mettler

Molino de cuchillas Willwy Hill St. Model N3

Luz UV 254nm -365nm Vole Parmer.98l5-Series lamps Gwatts

Espectrmetro UV VIS marca: Hewlhet Packard con arreglo de


diodo.

Reactivos
Reactivos de
solubilidad

N-hexano Q.P , acetato de etilo Q.P, cloroformo Q.P, isobutanol Q.P, Nbutanol Q.P, metanol Q.P, etanol Q.P, agua destilada
Reactivos de caracterizacin
Reactivo Shinoda Q.P, reactivo Mayer Q.P, reactivo Nihindrina Q.P,
reactivo Gelatina Q.P, reactivo Cloruro Ferrico Q.P, reactivo 2,4dinitrofenilhidrazina Q.P, reactivo Dragendorf Q.P, reactivo Molish Q.P,
reactivo Lieberman Q.P, NaOH 5%, Q.P, NaCl , Formol 80%.

Estudio farmacolgico
24 ratas albinas raza
Holtzmann

Sexo:

Hembra
Edad: 2 semanas (jvenes)
29 gr. extracto metanlico de Mauritia flexuosa L aguaje
3.2
3.2.1

Metodologa:
Estudio fitoqumico.

Coleccin, secado, molienda y extraccin de los metabolitos secundarios de la


especie Mauritia flexuosa L. aguaje.
Los frutos de la planta se colectaron en Regin San Martn ciudad Tarapoto en el
mes de enero. La clasificacin taxonmica fue realizada en el Museo de Historia

22

Natural "Javier Prado" de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Se


aceler el proceso de maduracin sumergiendo los frutos en bao Mara (60-80

23

C) por espacio de tres horas y se procedi a pelarlos obtenindose la pulpa


requerida para el estudio; luego se sec en estufa de aire circulante a 40C, se
tritur en molino de cuchillas. Para la extraccin de los metabolitos secundarios
se agreg al material obtenido, 530 gr. de pulpa en l,3 L de metanol, se macer en
frasco de color mbar por l5 das con agitacin diaria. Posteriormente se filtr
con una gasa; el lquido filtrado fue concentrado, llevado a sequedad obtenindose
29 gr. de extracto seco, procedindose luego a la identificacin de componentes
con reactivos de caracterizacin.

Marcha de solubilidad del extracto metanlico de Mauritia flexuosa L.


aguaje
El extracto seco metanlico se someti a pruebas de solubilidad en solventes de
diferentes polaridades. En tubos de ensayo se coloc una pequea porcin del
extracto metanlico total del fruto se le agreg 2 mL del solvente respectivo, nhexano, acetato de etilo, cloroformo, isobutanol, n-butanol, metanol, etanol, agua
destilada, se agit y se observaron los resultados.

Marcha fitoqumica del extracto metanlico de Mauritia flexuosa L. aguaje


Se realizaron las siguientes reacciones qumicas en el extracto metanlico total:

Tabla 2. Reacciones de coloracin y precipitacin del extracto metanlico de


Mauritia flexuosa L. aguaje.
Reactivos

Resultados

Reaccin con FeCl3

Compuestos fenlicos: verde a marrn: catecol, azul: piragalol.

Reaccin con gelatina

Precipitado abundante indica presencia de taninos

Reaccin de Shinoda

Coloracin indican la presencia y tipo de flavonoides.

Reaccin de Dragendorff

Precipitado o coloracin rojo naranja : alcaloide

Reaccin de Mayer

Precipitado blanco inmediato, indicar la presencia de alcaloides.

Reaccin Lieberman

Coloracin verde o azul verdoso: ncleo esteroidal

Cromatografa del extracto metanlico de Mauritia flexuosa L. aguaje


El extracto metanlico se desarroll en cromatoplacas con el sistema de solventes:
diclorometano-metanol (2:l), se revel con tricloruro FeCl 3, Dragendorf, H2SO4
50% observndose a la luz visible y bajo la lmpara de luz UV de 254- 366nm.
l6

l3,

Identificacin de flavonoides en extracto metanlico de Mauritia flexuosa L.


aguaje
Las fracciones encontradas en cromatografa fueron ledas al espectrofotmetro
UV-Visible en etanol y con varios reactivos de desplazamiento qumico, segn
l6

Mabry et al . Los flavonoides poseen espectros con intensas absorciones en


bandas II (250 280 nm.) y la banda I (300 390 nm.) .
3.2.2

3,8,l6

Estudio Farmacolgico

Determinacin del nivel estrognico en muestras de sangre de ratas albinas


previamente inducidas con la ingestin del extracto metanlico de Mauritia
flexuosa L. aguaje. Mediante el mtodo segn MARTINEZ G. , 2002

31

Patrn de expresin del receptor de estrgeno alfa y beta en endometriosis


experimental en la rata Winstar. Instituto Nacional de Perinatologa. Mxico
DF. l6 N4; Octubre- Diciembre 2002.

30-32

Procedimiento
Se utilizaron veinticuatro ratas albinas hembras raza Holtzmann de dos
semanas de vida y peso aproximado de 200 gr. de peso, las ratas albinas
utilizadas para este ensayo se mantuvieron en condiciones de 45 a 50 % de
humedad a una temperatura ambiental de 23C, agua filtrada y alimento
comercial. Se agruparon aleatoriamente en cuatro grupos de seis individuos
cada uno, el primer grupo recibi suero fisiolgico 5 mL/Kg. (grupo control) ,
al segundo grupo se le administr El Mauritia flexuosa L. 25 mg/Kg. (el
extracto fue diluido en l00 mL de agua); al tercer grupo se administr E 2
Mauritia flexuosa L 50 mg/Kg. (el extracto fue diluido en l00 mL de agua); al
cuarto grupo se le administr E3 Mauritia flexuosa L 500 mg /kg (el extracto
fue diluido en l0 mL de agua ). Se administr el extracto por va oral una vez
por da durante 30 das. Luego se procedi a extraer muestras de sangre por
puncin cardiaca, previo adormecimiento de las ratas en estudio con
anestsico, se coloc la muestra tomada en tubos de ensayo con epinefrina y
se llevaron al laboratorio de Anlisis clnico del Hospital 2 de Mayo para
30-32

determinacin de la hormona estradiol .

IV.

Resultados

Estudio fitoqumico
Los resultados de la marcha de solubilidad del extracto metanlico total de
Mauritia flexuosa L aguaje se muestran en la Tabla 3.
Tabla 3. Solubilidad del extracto metanlico de Mauritia flexuosa L aguaje.
Solvente

Solubilidad

n-hexano

++

Parcialmente soluble

Acetato de etilo

Poco soluble

Cloroformo

Poco soluble

Isobutanol

Poco soluble

n-butanol

Poco soluble

Metanol

++

Parcialmente soluble

Etanol

+++

Soluble

Agua

++

Parcialmente soluble

Simbologa: Poco soluble (+) Parcialmente soluble (++) Soluble (+++)

Los resultados de la marcha fitoqumica del extracto metanlico total de Mauritia


flexuosa L aguaje se muestran en la tabla 4.
Tabla 4. Marcha fitoqumica del extracto metanlico de Mauritia flexuosa L
aguaje.
Reaccin

Metabolitos secundarios

Resultados

Aminocidos libres

Taninos

++

Compuestos fenlicos

+++

Rvo. Dragendorff

Alcaloides

++

Rvo. Mayer

Alcaloides

++

Compuestos carbonilo

Rvo. Shinoda

Flavonoides

++

Rvo. 1a-naftol

Glucsidos

Esteroides , terpenoides

Quinonas

Rvo. Nihindrina
Rvo. gelatina
Rvo. FeCl3

Rvo. 2,4 dinitrofenilhidrazina

Rvo. Lieberam-Burchard
Rvo. NaOH 5%

Simbologa: No detectable (-) Poco (+) Moderado (++) Abundante (+++)

Anlisis cromatogrfico
Del extracto metanlico de Mauritia flexuosa L aguaje se realiz cromatografa
en capa fina con mezcla de solventes Diclorometano-Metanol (2:l), del cual se
obtuvieron 7 fracciones. Tabla 5.

Tabla 5.Cromatografa del extracto metanlico de Mauritia flexuosa L aguaje


Frac.

Rf

Luz UV Z (254 nm)

FeCl3

Dragendorf

H2SO4

0.04

Marrn

Marrn verdoso

Marrn

Leve rosado

II

0.08

Marrn

No se observa

Marrn

Marrn

III

0.10

Marrn

No se observa

Marrn

Marrn

IV

0.13

Fluorescencia celeste

No se observa

Marrn

Marrn

0.20

Fluorescencia azul

No se observa

Marrn

Marrn

VI

0.25

Fluorescencia celeste

No se observa

Marrn

Marrn

VII

0.42

Azul

No se observa

Anaranjado

Marrn

Estas fracciones se purificaron y se llevaron a leer al espectrofotmetro UV,


con reacciones de desplazamiento. Obteniendo los siguientes resultados:
M1:

: 268, 332
nm;

EtOH
mx

: 268, 332
nm;

Metox.Na
mx

: 258, 332 nm;


EtOH +

AlCl

mx

: 268, 332
nm;

: 268,332 nm

+ AlCl +
HCl mx
EtOH
3

EtOH +
Actato mx

M2:

: 273,327
nm;

: 273,327 nm;
Metox.Na
mx

EtOH
mx

:273,327 nm;
EtOH +

AlCl

mx

: 273,327 nm;

: 273,327 nm

EtOH + AlCl +
mx
HCl
3

EtOH +
Actato mx

M3:

: 256,282,325nm;

:256,292,325nm;
Metox.Na
mx

EtOH
mx

AlCl

mx

: 256, 282,325
nm;
+ AlCl +
HCl mx
EtOH
3

: descomposicin

EtOH +
Actato mx

M4:

EtOH + AlCl

Metox.Na

EtOH
mx

:270,282,325 nm;
EtOH +

: 260, 320
nm;

: 265, 360
nm;

mx
+
EtOH
AlCl
+ HCl
mx

M5:

mx

: 305, 360 nm;

: 305, 360 nm;

: descomposicin
: 258, 325
nm;

EtOH +
Actato mx

: 285, 325

: 270, 325 nm;

Metox.Na nm;
mx

EtOH
mx

EtOH +

AlCl

mx

: 270, 325
nm;

: descomposicin.

+ AlCl +
HCl mx
EtOH
3

EtOH +
Actato mx

M6:

: 255, 330
nm;

: 270, 330

: 263, 330 nm;

Metox.Na nm;
mx

EtOH
mx

AlClEtOH +
3

mx

EtOH + AlCl +
mx
HCl

: 263, 330
nm;

: 255, 330 nm

EtOH +
mx
Actato

Metox.Na
mx

EtOH
mx :;
M7:
: 258,285, 323 nm;

EtOH + AlCl3 +
HCl

EtOH
mx

283,360 nm;

:;

AlClEtOH +

:;

+ AlCl + HCl
EtOH
:;
mx
3

: 265, 292,323 nm;


Metox.Na
mx

: 270,
EtOH +

EtOH +
Actato

: 270,283, 360
nm;

mx

EtOH +
mx
Actato

mx

mx

AlCl

mx

:258,285,323 nm

Estudio farmacolgico
El anlisis de las muestras sanguneas tomadas de ratas albinas tratadas con
extracto metanlico Mauritia flexuosa L aguaje di los siguientes

valores.

Tabla 6.
Tabla 6. Valores sanguneos de estradiol en ratas albinas hembras tratadas con
extracto metanlico de Mauritia flexuosa L aguaje
N

Tratamiento

Dosis mg/Kg.

Grupo

Estradiol UI/Kg

ll3.3

l00.7

64.9

ll2.3

2l4.6

l00.8

88.9

87.9

1
2
3
4
5

Control
(suero
fisiolgico)

5ml/Kg

l07.4

10

Extracto 1

25mg/Kg

90.6

l47.9

12

ll6.8

13

90.4

14

l25.2

60.6

11

15

Extracto 2

50 mg/Kg

82.5

17

l23.4

18

l04.8

19

8l.3

20

70.l

92.3

16

21

Extracto 3

500 mg/Kg

7l.2

23

l06.3

24

ll0.9

22

Anlisis estadstico de los datos obtenidos en ratas albinas hembras que recibieron
Mauritia flexuosa aguaje durante 30 das por va oral. Tabla 7 y figura 10.
Tabla 7. Anlisis estadstico de datos hormonales de ratas albinas hembras tratadas
con extracto metanlico de Mauritia flexuosa L aguaje
N

Tratamiento

Valor

Error

95% Confidence Intervalo for Mean

medio

estndar

Lower Bound

Upper Bound

Control (SSF 5 L/kg)

117.8

20.7

64.7

170.9

Extracto 1 (25 g/kg)

106.6

9.5

82.1

131.1

Extracto 2 (50 mgkg)

97.8

10.2

71.6

124.1

Extracto 3 (500 g/kg)

88.7

701

70.4

107.0

Figura 10.Representacin grfica de datos hormonales en ratas albinas hembras


normales tratadas con extracto metanlico de Mauritia flexuosa L aguaje

Anlisis de varianza de los datos obtenidos en ratas hembras que recibieron


Mauritia flexuosa Aguaje durante 30 das por va oral. Tabla 9.
Tabla 8. Anlisis de varianza de datos hormonales de ratas albinas hembras
tratadas con extracto metanlico de Mauritia flexuosa L aguaje
Tratamiento

Sum of Squares df

Mean Square

Between Groups

2774.4

3.0

924.8

0.9 0.451

Within Groups

20180.2

20.0

1009.0

Sig.

V.

Discusin

Los resultados de los ensayos de solubilidad dan a conocer que el extracto


metanlico total de Mauritia flexuosa L. contiene mayormente metabolitos
secundarios solubles en solventes de alta polaridad como agua, etanol y metanol,
lo que indicara que los componentes del extracto metanlico estudiado son de
alta polaridad y mediana polaridad. Tabla 4.
Los resultados de la marcha fitoqumica muestran que el extracto metanlico total
de Mauritia flexuosa L. presenta en su composicin abundante cantidad de
compuestos fenlicos, flavonoides, taninos y alcaloides, los que seran los
responsables de las propiedades biolgicas que la medicina tradicional le atribuye.
Tabla 5.
Mediante cromatografa en capa fina, realizada al extracto metanlico del fruto de
Mauritia flexuosa L. aguaje en un sistema de solventes diclorometano: metanol
(2:l), se logr comprobar con seguridad la presencia de compuestos fenlicos, se
detect e identific 7 fracciones de compuestos tipo flavonoides, denominndolas
Ml, M2, M3, M4, M5, M6 y M7; luego fueron ledos al espectrofotmetro UVVisible en etanol y se verific la estructura con los reactivos de desplazamiento
qumico correspondientes, segn . Lok et al ,Mabry et al, Hesse et al(8,l6,l7). Al
interpretar los espectros obtenidos se observ que Ml, M2, M3, M4, M5 y M6
corresponden a flavonas y M7 corresponde a una isoflavona; se proponen las
siguientes

estructuras

por

correlacin

espectral

con

los

reactivos

de

desplazamiento y por comparacin con la informacin proporcionada por Lok et


al ,Mabry et al, Hesse et al(8,l6,l7):
M1
Segn el espectro en etanol el esqueleto bsico que corresponde a esta fraccin, es
de una flavona (Anexo 2), pues al tratarlo con metxido de sodio no hay cambios
lo que nos indicara que el compuesto no tiene hidroxilos libres, al hacer
reaccionar con tricloruro de aluminio se observa un ligero efecto ipsocrmico de
l0 nm, que luego al tratarlos con HCl regresa al valor anterior, esto nos indica la
presencia de azucares en la posicin 7; en la posicin 5 no existe un OH libre que
forme un complejo con el tricloruro de aluminio que al ser tratados con el cido

clorhdrico se rompa y regrese a su valor original. En el anillo B no existen


hidroxilos en posicin orto, pues no forman complejo con el tricloruro, pero puede
existir un grupo metoxilo. Al tratarlo con acetato de sodio no se observa
descomposicin.
M2
Segn el espectro en etanol el esqueleto bsico que corresponde a esta fraccin es
de una flavona (Anexo 2), pues al tratarlo con metxido de sodio no hay efecto
batocromico lo que nos indica que el compuesto no tiene hidroxilos libres, al
hacer reaccionar con tricloruro de aluminio no se observan efectos batocrmicos y
luego al tratarlos con HCl se mantienen las seales, esto nos indica que en
posicin 5 no existe OH libre para que forme un complejo con el tricloruro de
aluminio, en tanto que en el anillo B exitira un grupo metoxilo en 4. Al tratarlo
con acetato de sodio no se observa descomposicin.
M3
Segn el espectro en etanol el esqueleto bsico que corresponde a esta fraccin es
de una flavona (Anexo 2), pues al tratarlo con metxido de sodio hay un efecto
batocrmico de l0 nm lo que nos indicara que el compuesto tiene hidroxilo libre
en posicin 7, al hacer reaccionar con tricloruro de aluminio se observa un ligero
efecto batocrmico de l4 nm, que luego al tratarlo con HCl se regenera la seal
anterior, esto nos indica presencia de hidroxilos libres en las posiciones 6 y 7 que
forman un complejo temporal con el tricloruro de aluminio. Al tratarlo con acetato
de sodio se observa descomposicin en el espectro lo que indicara presencia de
OH libre en 7, confirma nuestra presuncin.
M4
Segn el espectro en etanol el esqueleto bsico que corresponde a esta fraccin es
de una flavona (Anexo 3), pues al tratarlo con metxido de sodio hay un efecto
batocrmico de 40 nm lo que nos indicara que el compuesto tiene hidroxilos
libres, principalmente en la posicin 7, al hacer reaccionar con tricloruro de
aluminio se observa efecto batocrmico de 40 nm, que luego al tratarlo con HCl
no regresa al valor de la seal anterior, esto nos indica presencia de hidroxilos
libres en las posiciones 5 y 7 ; en la posicin 5 existe un OH libre que forma un
complejo con el tricloruro de aluminio, por lo que se observ el efecto

batocrmico de 40 nm, que al ser tratado con el cido no se rompe por lo que no
regresa a su valor original. Al tratarlo con acetato de sodio se observa
descomposicin.
M5
Segn el espectro en etanol el esqueleto bsico que corresponde a esta fraccin, es
de una flavona (Anexo 3), pues al tratarlo con metxido de sodio hay un efecto
batocrmico de 27 nm, lo que nos indicara que el compuesto tiene hidroxilos
libres, al hacer reaccionar con tricloruro de aluminio se observa un efecto
batocrmico de l5 nm, que luego al tratarlo con HCl no regresa al valor anterior,
esto nos indica la presencia de hidroxilo libre en las posicin 5 ; en la posicin 5
existe un OH libre que forma un complejo con el tricloruro de aluminio que al ser
tratados con el cido no se rompe por lo que no regresa a su valor original. Al
tratarlo con acetato de sodio no se observa descomposicin.
M6
Segn el espectro en etanol el esqueleto bsico que corresponde a esta fraccin es
de una flavona (Anexo 3), pues al tratarlo con metxido de sodio hay un efecto
bactocromico de l5 nm lo que nos indicara que el compuesto tiene hidroxilos
libres, en este caso en posicin 7 estara sustitudo. Al hacer reaccionar con
tricloruro de aluminio se observa un ligero efecto batocrmico de 7 nm., que
luego al tratarlo con HCl se mantienen las seales, esto nos indica que en posicin
5 existe OH libre para que forme un complejo con el tricloruro de aluminio, en
tanto en 4 habra un grupo metoxilo. Al tratarlo con acetato de sodio no se
observa descomposicin.
M7
Segn el espectro en etanol el esqueleto bsico que corresponde a esta fraccin es
de una isoflavona (Anexo 4), pues al tratarlo con metxido de sodio hay un efecto
batocrmico de 7 nm lo que nos indicara que el compuesto tiene hidroxilo libre
en posicin 7, al hacer reaccionar con tricloruro de aluminio se observa efecto
batocrmico de 37 nm, que al tratarlo con HCl no hay variacin en las seales,
esto nos indica presencia de hidroxilos libres en las posiciones 5 y 7 en tanto que
en 4 habra un grupo metoxilo, al tratarlo con acetato de sodio no se observa
descomposicin.

3l

En el estudio farmacolgico los hallazgos estadsticos indican que en las


condiciones experimentales el extracto metanlico Mauritia flexuosa L. aguaje
disminuy los valores de estradiol en la muestras sanguneas analizadas dando a
entender que el extracto metanlico de Mauritia flexuosa L. aguaje ejerci
efecto antiestrognico en las ratas raza Holtzmann albinas tratadas .Los niveles
hormonales de estradiol son inversamente proporcionales a la concentracin de
los extractos metanlicos de Mauritia Flexuosa L. aguaje administrados.

Los valores hormonales de estradiol que se observan en los cuadros de resultado


de anlisis sanguneo y cuadros estadsticos demuestran que el extracto
metanlico de Mauritia Flexuosa L. aguaje estara produciendo cambio
hormonal en las ratas raza Holtzmann albinas tratadas, la isoflavona que contiene
el extracto metanlico, estara compitiendo con el sitio activo del estradiol
produciendo disminucin de los valores de dicha hormona , ya que

las

isoflavonas presentan actividad estrognica menor a la de las isoflavonas,


teniendo en cuenta que las ratas utilizadas se encontraban en edad frtil (jvenes)
la isoflavona estara actuando como antiestrognico. En caso de que se hubiera
tratado con animales de experimentacin con deficiencia de hormonas estradiol,
la isoflavona contenida en el extracto metanlico de Mauritia Flexuosa

L.

aguaje hubiera actuado como estrognico presentando resultados proporcionales


a la concentracin del extracto.

3,l8,l9

La actividad antiestrognica comprobada nos proporciona datos tiles para la


utilizacin del extracto de Mauritia Flexuosa L. aguaje en canceres
hormonodependientes, ya que las isoflavonas producen inhibicin de la expresin
de oncogenes y modulacin de la expresin de diversos factores de crecimiento y
sus receptores. Como resultado de la reduccin del nmero de receptores inducido
por las isoflavonas a travs de la inhibicin de las tirosinkinasas, se reduce la
actividad de los factores de crecimiento correspondientes, con la consiguiente
inhibicin del crecimiento tumoral. Estos factores de crecimiento se encuentran
tambin implicados en los procesos de angiognesis fundamentales en

32

el

desarrollo tumoral y la aparicin de metstasis.Adems, las tirosinkinasas actan


en los procesos de agregacin plaquetaria y en el metabolismo osteoblstico, por
lo que su inhibicin por las isoflavonas se traducira en efectos positivos sobre la
trombognesis y la osteoporosis menopusica.

l2

Las isoflavonas son capaces de actuar sobre otras muchas enzimas, tales como las
topoisomerasas I y II, que catalizan cambios topolgicos en el ADN, y que son
necesarias en la replicacin del mismo. En este caso, las isoflavonas actan sobre
el complejo topoisomerasa-ADN induciendo la apoptosis o muerte celular
programada, tal y como se ha observado en lneas celulares de cncer de mama.

l2

La aromatasa, enzima implicada en la formacin del l7- estradiol a partir de sus


precursores andrognicos, es tambin inhibida por la genistena, con la
consiguiente reduccin en la produccin de esta hormona, lo que puede tener una
especial importancia en los tumores hormono-dependientes, como el de mama.
Algo parecido sucede con las familias enzimticas de las l7- esteroide
dehidrogenasas y las sulfotrasnferasas, implicadas asimismo en el metabolismo de
los estrgenos, as como con la 5-a reductasa, enzima convertidora de la
testosterona en dihidrotestosterona e implicada en el cncer de prstata.

l2

El fruto de Mauritia Flexuosa L. Aguaje contiene 74,0 mg de calcio en l00 mg


de pulpa, por lo cual se le considerara una fuente alimenticia esencial en caso de
presentarse deficiencia de calcio en el organismo, como sucede en el caso de la
menopausia al producirse la osteoporosis. Tambin contiene 26,0mg vitamina C
lo cual es importante durante la menopausia, ya que se produce deterioro de los
rganos por la prdida de estrgenos, as podemos decir que se producen arrugas
en la piel por prdida de turgencia; el mantenimiento del colgeno es la primera
funcin de la vitamina C, el colgeno que es una protena necesaria para la
formacin del tejido conectivo en la piel, ligamentos y huesos. Las necesidades de
vitamina C aumentan en esta etapa por la necesidad de regenerar el colgeno, y el
consumo del fruto de Mauritia Flexuosa L. Aguaje brinda la cantidad necesaria
de este nutriente para cubrir los requerimientos nutricionales en caso de
deficiencia vitamnica. Tambin contiene l062,0 mg. de vitamina A en l00 mg.

de

pulpa,

lo

cual

ayudara

en

la

reparacin

de

los

tejidos,

en la construccin de los huesos y los dientes, as como en la formacin de los


componentes de la sangre, refuerza las paredes de las clulas de las mucosas que
recubren el tracto digestivo, respiratorio, riones y las hace ms resistentes a los
agentes infecciosos, ejerce efectos estimulantes sobre el sistema inmunitario
aumentando la actividad de anticuerpos. El calcio, vitamina C y vitamina A
actan de manera simultanea al intervenir en la reparacin de tejidos y huesos de
los daos que se producen debido a la disminucin de estrgeno producidos
durante la menopausia, es por eso que se considerara como una alternativa
nutricional el consumo de este fruto en esta etapa de la vida.

VI. Conclusiones

l. El extracto metanlico de Mauritia Flexuosa L aguaje contiene gran cantidad


de compuestos fenlicos, principalmente flavonoides, cuyas estructuras
obtenidas son: 4,5-dimetoxi-7-O- glucosiflavona, 4,5,6,7-tetra -O- metoxi
flavona, 4,5-di-O-metoxi-6,7-dihidroxi flavona, 4-O-metoxi-5,7-dihidroxiflavona, 34,7-trimetoxi-5-hidroxi-flavona, 4-metoxi-5-hidro-7-O-R-flavona
y 5,7-dihidroxi-4-metoxiisoflavona..

2. En las condiciones experimentales, el extracto metanlico de Mauritia


Flexuosa L aguaje disminuye los valores de estradiol en las muestras
sanguneas de las ratas de raza Holtzmann ( hembras, jvenes, normales)
tratadas, siendo los resultados inversamente proporcionales a la concentracin
del extracto administrado ejerciendo actividad antiestrognica.

VII.

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VIII. Anexos

ANEXO 2

M1:
: 268, 332
nm

EtOH
mx
Metox.Na
mx
EtOH + AlCl
mx

Glu - O

O
O
CH3

: 268, 332
nm

: 258, 332nm

EtOH + AlCl3 +
HCl mx

EtOH +
Actato mx

H3 C

: 268, 332
nm
: 268,332
nm

4,5- dimetoxi-7-O- glucosiflavona

CH3

M2
: 273,327
nm

EtOH
mx

Metox.Na
mx
EtOH + AlCl
mx

: 273,327
nm

EtOH + AlCl3 +
HCl mx

CH3

H3
C

: 273,327
nm
: 273,327
nm
O

EtOH +
mx
Actato

: 273,327
nm

H3 C

4,5,6,7-tetra O- metoxi flavona

HO

HO

M3

: 256,282,325nm

EtOH
mx

: 256,292,325nm

Metox.Na
mx

: 270,282,325 nm

EtOH + AlCl
mx

O
CH3

EtOH + AlCl3 +
HCl mx

EtOH +
mx
Actato

: 256, 282,325
nm

H3C

:
Descomposicin

4,5-di-O-metoxi-6,7-dihidroxi flavona

40

ANEXO 3

M4
: 260, 320 nm
: 265, 360 nm

EtOH
mx

HO

Metox.Na
mx

CH3

EtOH + AlCl
mx

: 305, 360 nm
EtOH + AlCl
mx
HCl

3+

: 305, 360 nm

EtOH +
mx
Actato

OH

: Descomposicin

4-O-metoxi-5, 7- dihidroxi flavona

M5
: 258, 325 nm

EtOH
mx

Metox.Na
mx

CH3

: 285, 325 nm
EtOH + AlCl
mx

EtOH + AlCl3 +
HCl mx

EtOH +
mx
Actato

O
O

: 270, 325 nm

CH

: 270, 325 nm
3O

: 258, 325
nm.

OH

CH3

3,4,7-trimetoxi-5-hidroxi-flavona

M6
EtOH
mx

Metox.
Na mx
EtOH +

AlCl

m
x

EtOH
+AlCl
+ HCl
mx

EtOH
+Actato
mx

: 255, 330 nm
: 270, 330 nm

: 263, 330 nm
: 263, 330 nm

R-O

O
OH

O
CH3

: 255, 330 nm

4-metoxi-5-hidroxi-7-O-R- flavona

4l

OH

ANEXO 4

HO

M7:

: 258,285, 323
nm

EtOH
mx

Metox.Na
mx
EtOH + AlCl
mx

EtOH + AlCl
mx
HCl

3+

EtOH +
mx
Actato

: 265, 292,323
nm
O

: 270, 283,360
nm

CH3

5,7-dihidroxi-4-metoxi isoflavona

: 270,283, 360
nm
: 284, 330 nm

42