Estafilococo Medio 110.

Es un medio selectivo para el aislamiento y diferenciacin presuntiva de

estafilococos, en base a la produccin de pigmentos, la fermentacin de manitol y la
hidrlisis de gelatina, a partir de alimentos y otras muestras.
Fundamento
Staphylococcus aureus es un microorganismo que puede causar intoxicacin alimentaria,
y para su aislamiento, pueden usarse distintos medios slidos selectivos: Baird Parker
Medio (B02-141-05/06), Manitol Salado Agar (B02-118-05/06), o Estafilococo Medio 110
(B02-105-05/06).
En el medio de cultivo, el extracto de levadura y la triptena aportan los nutrientes para el
desarrollo de microorganismos. La gelatina es el sustrato de la enzima gelatinasa. La
lactosa y el manitol son los hidratos de carbono fermentables. El cloruro de sodio, se
encuentra en alta concentracin, para inhibir el desarrollo de la flora acompaante
excepto Staphylococcus spp., logrndose as un medio selectivo para el desarrollo de
estos microorganismos.
Permite, en la misma placa, obtener pruebas de identificacin presuntiva de especie como
ser: desarrollo de pigmentos, fermentacin de manitol e hidrlisis de la gelatina.
Frmula (en gramos por litro)

Instrucciones

Extracto de levadura

2.5

Triptena

10.0

Gelatina

30.0

Lactosa

2.0

D-Manitol

10.0

Cloruro de sodio

75.0

Fosfato dipotsico

5.0

Agar

15.0

Suspender 149 g del medio en un litro

de agua destilada. Reposar 5 minutos
y mezclar calentando a ebullicin
durante 1 o 2 minutos. Esterilizar en
autoclave durante 15 minutos a
121C. Verter en placas y mezclar
para dispersar el precipitado.

pH final: 7.0 0.2

Resultados
Observar las caractersticas de las colonias y realizar las pruebas de identificacin
de microorganismos.
1-Fermentacin de manitol: agregar unas gotas de prpura de bromocresol a las
zonas donde se encuentran las colonias sospechosas y en una zona de la placa
donde no hay desarrollo bacteriano. Comparar el color desarrollado entre estas dos

zonas.
Prueba positiva: cambio de color del indicador del medio en la zona de crecimiento
bacteriano. El medio sin desarrollo de microorganismos permanece sin cambio.
Prueba negativa: no hay diferencias de color entre las zonas de crecimiento
bacteriano y la zona sin inocular.
Limitaciones
-Algunas cepas de Enterococcus faecalis, fermentadoras de manitol, pueden
desarrollar en este medio.

Levine E.M.B. Agar (con Eosina y Azul de Metileno)

Uso: Medio adecuado para la bsqueda y diferenciacin de bacilos entricos, a
partir de muestras clnicas, alimentos y otros materiales de importancia sanitaria.
Para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rpido desarrollo y
escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la
familia Enterobacteriaceae.
Fundamento: La frmula original de este medio de cultivo, fue modificada por Levine,
quien elimin la sacarosa e increment la concentracin de lactosa, logrando as una
mejor diferenciacin de cepas de Escherichia coli. En el medio de cultivo, la peptona es la
fuente nutritiva y la lactosa es el hidrato de carbono fermentable. La combinacin utilizada
de eosina y azul de metileno, inhibe el desarrollo de microorganismos Gram positivos y de
bacterias Gram negativas fastidiosas, y tambin, permite diferenciar bacterias
fermentadoras y no fermentadoras de lactosa. El agar es el agente solidificante. Los
microorganismos fermentadores de lactosa, originan colonias de color azulado-negro, con
brillo metlico o mucosas. Las colonias producidas por microorganismos no
fermentadores de lactosa son incoloras. Tambin, pueden crecer especies de Candida
y se observan como colonias rosadas y puntiformes; la siembra en profundidad
permite el desarrollo de clamidosporas en C. albicans. Enterococcus spp. crece en
este medio como colonias puntiformes y transparentes, mientras que Acinetobacter
spp. y otras bacterias oxidativas se observan como colonias de color azul lavanda;
esto puede ocurrir aunque las cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa al
0.5% y ello se debe a la incorporacin de azul de metileno a sus membranas. En este
medio se obtiene adems, un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella.
FRMULA
Peptona.......................................................................................................................10.0 g
Lactosa........................................................................................................................10.0 g
Fosfato dipotsico..........................................................................................................2.0 g
Eosina............................................................................................................................0.4 g
Azul de metileno.........................................................................................................0.065 g
Agar..............................................................................................................................15.0 g
Agua purificada..........................................................................................................1000 ml
pH final: 7,1
Interpretacin de los resultados:
Microorganismos fermentadores de lactosa: colonias de color negro azulado o
amarronado. Pueden tener centro oscuro y brillo metlico.
Microorganismos no fermentadores de lactosa: colonias del color del medio, incoloras.

Nutritivo Agar
Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el aislamiento y recuento
de microorganismos con escasos requerimientos nutricionales. Su uso est
descripto en procedimientos para el anlisis de alimentos, aguas y otros materiales de
importancia sanitaria. Fundamento Medio de cultivo nutritivo no selectivo, en el cual la
pluripeptona y el extracto de carne constituyen la fuente de carbono, nitrgeno y aportan
nutrientes para el desarrollo bacteriano. El agregado de cloruro de sodio mantiene el
balance osmtico y el agar es el agente solidificante. Puede ser suplementado con sangre
ovina desfibrinada estril para favorecer el crecimiento de microorganismos exigentes en
sus requerimientos nutricionales y permite una clara visualizacin de las reacciones de
hemlisis.
FRMULA
Pluripeptona............................................................................................................5.0 g
Extracto de
carne........................................................................................................................3.0 g
Cloruro de
sodio.........................................................................................................................8.0 g
Agar........................................................................................................................15.0 g
Agua purificada....................................................................................................1000 ml
pH final: 7.3 0.2
No contiene inhibidores del desarrollo bacteriano. La pluripeptona es la fuente de carbono
y nitrgeno para el desarrollo bacteriano. El agregado de cloruro de sodio permite el
enriquecimiento con sangre de carnero u otras sustancias para facilitar el cultivo de
microorganismos exigentes.

Salmonella Shigella Agar.

Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas
especies de Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros materiales en los cuales
se sospeche su presencia.
Fundamento
Es un medio de cultivo selectivo y diferencial. La selectividad, esta dada por la sales
biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la
mayora de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp.
Es diferencial debido a la fermentacin de la lactosa, y a la formacin de cido sulfhdrico
a partir del tiosulfato de sodio.
Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar,
acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH, obtenindose colonias
rosadas o rojas sobre un fondo rojizo.
Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen
bien en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes.
La produccin de cido sulfhdrico se evidencia como colonias con centro negro
debido a la formacin de sulfuro de hierro.

Frmula (en gramos por litro)

Pluripeptona

5.0

Extracto de carne

5.0

Lactosa

10.0

Mezcla de sales biliares

8.5

Citrato de sodio

8.5

Tiosulfato de sodio

8.5

Citrato frrico

1.0

Agar

13.5

Verde brillante
Rojo neutro

Instrucciones

Suspender 60 g del polvo por litro de

agua destilada. Reposar 5 minutos y
mezclar hasta homogeneizar.
Calentar a ebullicin durante 2 o 3
minutos. NO ESTERILIZAR EN
AUTOCLAVE. Enfriar a 45-50C y
distribuir unos 20 ml por placa. Secar
la superficie del medio unos minutos
en la estufa.

0.00033/
0.025
pH final: 7.0 0.2

Resultados
Microorganismos

Colonias

Salmonella typhimurium ATCC 14028

Transparentes, centro negro

Shigella flexneri

Incoloras

Shigella sonnei

Incoloras

Proteus mirabilis ATCC 43071

Transparentes, centro negro

Escherichia coli ATCC 25922

Rosadas a rojas

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603

Rosadas cremosas y mucosas

Enterococcus faecalis ATCC 29212

Incoloras, de muy escaso crecimiento