UNIVERSIDAD DE COLIMA

FACULTAD DE MEDICINA

CENTRO UNIVERSITARIO DE INVESTIGACIONES BIOMDICAS

EFECTO DEL SUERO DE ANGUILA EN UN MODELO EXPERIMENTAL DE

INSUFICIENCIA RENAL EN RATAS WISTAR

Tesis que para obtener el grado de

Maestro en Ciencias Mdicas

presenta

MC. y H. Luis Brcenas Garca

Asesores

DR. JOSE CLEMENTE VASQUEZ JIMENEZ

M EN C. MARIO DEL TORO EQUIHUA

Colima, Col. junio de 2007

Colima, Col., 20 de Junio de 2007.

DRA. XOCHITL TRUJILLO TRUJILLO

Coordinadora del Postgrado en Ciencias Mdicas
en la Facultad de Medicina de la Universidad de Colima
PRESENTE
Por medio de la presente hacemos constar que el M. C. y H Luis Brcenas Garca
ha concluido satisfactoriamente la tesis titulada

Efecto del suero de anguila en un

modelo experimental de insuficiencia renal en ratas wistar, con la cual aspira al grado
acadmico de Maestro en Ciencias Mdicas y est en condiciones de presentar su examen
final.

Atentamente

Dr. Jos Clemente Vsquez Jimnez

Profesor Investigador Titular B
Asesor clnico

M en C. Mario del Toro Equihua

Profesor de la Facultad de Medicina
Asesor bsico

DEDICATORIAS

A mis Padres
Manuel Brcenas Herrera y Ofelia Garca Aguilar.
Por sus sabios consejos que han permitido lograr
mis metas.

A mi esposa
Lourdes Pea Monroy.
Por brindarme su amor, comprensin
y apoyo incondicional.
A mis hijos
Luis Antonio y Angel Tlacaelel.
Que son el alma y motor de mi existencia.

A mis asesores
Dr. Jos Clemente Vazquez Jimnez
Mtro. Mario del Toro Equihua
Por brindarme sus conocimientos, tiempo
y dedicacin en la elaboracin de esta tesis

A la Escuela de Homeopata y en especial a

M en C. Javier Grandini Gonzlez
MC y H. Armando Avalos Arzate
Como una demostracin de gratitud y afecto por
el apoyo recibido para la realizacin de esta tesis.
Colima, Col., junio de 2007.

INDICE

Pagina
INDICE DE FIGURAS

RESUMEN

I.- MARCO TERICO

a) ANTECEDENTES
b) PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
c) PREGUNTA DE INVESTIGACION
d) JUSTIFICACIN
e) HIPOTESIS
f) OBJETIVO GENERAL
g) OBJETIVOS ESPECFICOS

II.-MATERIAL Y MTODOS
a)
b)
c)
d)
e)
f)
g)
h)
i)
j)
k)
l)

DISEO
UNIVERSO DE TRABAJO
TAMAO DE LA MUESTRA
CRITRIOS DE INCLUSIN
CRITRIOS DE NO INCLUSIN
CRITRIOS DE ELIMINACIN
OPERACIONALIZACIN DE VARIABLES
ANLISIS ESTADSTICO
PROCESO EXPERIMENTAL
RESULTADOS
DISCUSION
CONCLUSIONES

3
3
11
11
12
12
13
13

14
14
14
14
14
14
14
15
15
15
18
22
23

III.- ANEXOS

23

IV.- BIBLIOGRAFIA

26

INDICE DE CUADROS Y GRAFICAS

No.
de

Pgina
TITULO DE FIGURA

figura

Valores de glucosa inicio y final

20

Valores de urea inicio y final

21

Valores de creatinina inicio y final

22

Valores de depuracin de creatinina

23

RESUMEN
Introduccin: La insuficiencia renal es una patologa caracterizada por la intoxicacin de urea
y creatinina en la sangre con alteraciones metablicas en el organismo, mientras que el suero
de anguila al parecer estimula la funcin renal, disminuyendo los niveles de azoados en la
sangre. Objetivo: Demostrar el efecto del suero de anguila sobre la reduccin de azoados en
ratas wistar inducidas a insuficiencia renal. Material y Mtodos: El estudio se realiz en 20
ratas wistar inducidas a insuficiencia renal con estreptozocina, divididas en dos grupos (n =
10), denominados como prueba y testigo. Por 15 das el grupo de prueba recibi 0.5 ml. de
suero de anguila al 0.0001 % , y el testigo slo vehculo. Resultados: La urea final promedio
del grupo con suero de anguila fue 68.7 + 13.57 mg/dl, y la del testigo 63.13 + 13.62 mg/dl, la
creatinina final promedio del grupo con suero de anguila fue 1.08 + 0.25 mg/dl, y la del
testigo 1.06 + 0.24 mg/dl, la depuracin de creatinina final promedio del grupo con suero de
anguila fue 0.72 + 0.29 mg/dl, y la del testigo 0.71 + 0.26 mg/dl. En el anlisis estadstico
por medio de la t de Student no se encontraron diferencias significativas entre los grupos
(p>0.05). El peso corporal promedio, consumo de agua y alimento fue similar en los dos
grupos. La prdida de peso corporal del grupo testigo fue constante, mientras que la del grupo
con suero de anguila se estabiliz. Conclusin: No se encontr efecto del suero de anguila
experimental utilizado. Posiblemente debido al tiempo de administracin del medicamento.

SUMMARY
Introduction: Renal failure is characterized by intoxication of urea and cratinine in blood
with metabolic alterations on the organism, whereas the eel serum seams to stimulate the renal
function lowering the levels of azoados in the blood. Objetive: To demonstrate the effect of
the eel serum on the reduction of azoados in Wistar rats induced to renal failure. Material and
Methods: The study was made with 20 Wistar rats induce to renal failure with estreptozocine
divided in two groups (n = 10, each), test and control. By 15 days the test group received 0.5
ml of eel serum to 0.0001% and the control group received only vehicle. Results: Mean final
urea in the test group was 68.7 13.57 mg/dl, and the control group was 63.13 13.62 mg/dl,
the mean final creatinine in the test group was 1.08 0.25 mg/dl, and in the control group was
1.06 0.24 mg/dl, the depuration of mean final creatinine in the test group was 0.72 0.29
mg/dl, and in the control group was 0.71 0.26 mg/dl. In the statistical analysis by Students
t test there were not significant differences between both groups (p>0.05). The mean corporal
weight, the consumption of water and food was similar in both groups. The body weight loss
of the control group was constant, while in the test group was stabilized. Conclusion: The
effect on the levels of azoados with the ell serum was not found in the experimental model
used, possibly due to its time of administration.

INTRODUCCIN
La insuficiencia renal crnica (IRC) se presenta como el resultado de la destruccin
progresiva e irreversible de las nefronas, sta destruccin produce hipertrofia estructural y
funcional de las nefronas que quedan. Esta hipertrofia se debe a la hiperfiltracin adaptativa
mediada por aumento de las presiones y flujos capilares glomerulares, estas adaptaciones
predisponen a la esclerosis glomerular por que un aumento de la carga funcional sobre los
glomerulos menos afectados los conduce a una destruccin final (1). Este proceso trae como
consecuencia un dficit del filtrado glomerular que cada vez se hace ms patente hasta traer
consigo

sntomas

signos

de

uremia

(1,2).

De acuerdo a los datos recientes, la diabetes mellitus representa la causa ms frecuente de

insuficiencia renal crnica en los Estados Unidos de Norteamrica (34.2%), seguida por la
hipertensin arterial (29.4%), glomerulonefritis (14.2%), enfermedad renal poliqustica (3.4%)
y nefritis tbulo intersticial (3.4%) (3, 4 ).
En Japn en el ao 1995 la diabetes mellitus 2 (DM 2) caus el 20.4% de los pacientes
en terapia dialtica crnica ( 5 ) .
La DM 2, es la principal endocrinopata, recientes estudios mencionan que en nuestro
pas la prevalencia es del 10% a 15%. y que sta se debe a una alteracin en la secrecin o
accin de la insulina o ambas, generando una hiperglucemia sostenida que puede provocar
complicaciones crnicas como micro-macroangiopata, neuropata y nefropata. Para el 2001
los diabticos ocupan el primer lugar en pacientes con terapia de reemplazo renal 34.2%,
siendo el grupo de mayor edad, con mayores complicaciones como enfermedad
cardiovascular, retinopata y gastroparesis ( 5 ).

MARCO TERICO

a.- ANTECEDENTES
La proteinuria fu reconocida en el siglo XVIII y posteriormente, 40 aos despus,
Bright postul esta forma de enfermedad renal como especfica de la Diabetes. En 1830 fue
clarificada por Kimmelstel y Wilson, describiendo las lesiones clsicas de la
8

glomeruloesclerosis nodular con proteinuria e hipertensin (6). La microalbuminuria, estado

inicial de la proteinuria, de acuerdo a la clasificacin de Mogensen, es definida como la tasa
urinaria de excrecin de albuminuria de 20-200 mg/min, predictivo del desarrollo de lesin
renal diabtica, asociado adems a otras complicaciones diabticas, especialmente enfermedad
cardiovascular. (6, 7)
Hemodinmica renal en la nefropata diabtica.
Los factores ms importantes que controlan la hemodinmica renal son la presin
arterial y la resistencia de las arteriolas aferentes y eferentes. Las prostaglandinas y la
angiotensina II son los principales reguladores de la resistencia arteriolar, mientras que las
prostaglandinas son potentes vasodilatadores de ambas arteriolas, la angiotensina II acta
como agente vasoconstrictor preferencialmente sobre la arteriola eferente (7). En general
cualquier aumento o disminucin en la presin arterial provocar cambios en la presin capilar
glomerular. Un incremento del tono de la arteriola aferente se asocia con una reduccin de la
presin capilar glomerular contrariamente a lo que ocurrira en respuesta a un aumento del
tono de la arteriola eferente, los vasos renales sanos responderan casi instantneamente a los
cambios de la presin arterial manteniendo la presin capilar glomerular lo ms constante
posible. Esta capacidad se perdera en presencia de enfermedades renales o diferentes
frmacos, a medida que la presin arterial aumenta el tono de la arteriola aferente se
incrementa limitando la transmisin de la presin arterial sistmica al glomrulo. Presiones
arteriales sistlicas superiores a 150 mm/Hg podran anular ste mecanismo compensador y la
hipertensin del capilar glomerular provocar un dao irreparable al rin. ( 7 )
En pacientes con nefropata diabtica, la daada arteriola aferente impedira limitar la
transmisin de la presin arterial sistmica al glomrulo, adems en los diabticos parece
existir un incremento del tono de la arteriola eferente debido a la excesiva reactividad vascular
a la angiotensina II. . (6, 7)
La angiotensina II es el producto de la accin secuencial de la renina y de la enzima
convertidora de angiotensina sobre el angiotensingeno.

La renina, que deriva de la

prorrenina, est secretada primariamente por las clulas yuxtaglomerulares del rin.. (7)
Dos estudios han evaluado la relacin entre la prorrenina plasmtica y las complicaciones de
la diabetes mellitus tipo 1,

en el primero de ellos,

las concentraciones de prorrenina

plasmtica se encontraron elevadas al menos 18 meses antes del desarrollo de la retinopata y

de la diabetes mellitus o antes de la complicacin de diabetes mellitus tipo 1. La prorrenina
9

plasmtica por arriba de 11,5 ng/litro/s. se asoci con un 62% de posibilidades de desarrollar
retinopata o nefropata. Por lo tanto la sobreactividad del sistema renina-angiotensina parece
asociarse al desarrollo de nefropata diabtica. . (6, 7)
Bohrer y colaboradores (8) investigaron hasta qu punto los cambios inducidos en la
hemodinmica glomerular por la renina o angiotensina II pudieran contribuir al aumento de la
filtracin de macromolculas en ratas Munich-Wistar. La excrecin fraccional de molculas y
protenas aumento significativamente durante la infusin de angiotensina II., esto se traducira
en que debido a las acciones hemodinmicas de la angiotensina II., se produce proteinuria.
Las ratas diabticas mediante estreptozocina y mantenidas en hiperglucemia moderada
muestran un aumento del filtrado glomerular tal y como se observa en los estadios iniciales de
la diabetes mellitus tipo 1 ( 8 ). Este incremento est causado por un aumento del flujo
plasmtico y de la presin capilar glomerular, Zatz y colaboradores (1977) encontraron en
estudios iniciales en ratas diabticas que una reduccin en la ingesta proteica era capaz de
reducir la presin capilar glomerular y el flujo plasmtico glomerular. Se ha descrito una
situacin de hiperfiltracin glomerular, frecuente a pesar de existir un nmero de nefronas
normal, con vasodilatacin preglomerular e incremento del filtrado glomerular y de la fraccin
de filtracin. ( 8 )
En biopsias renales de pacientes diabticos, la hipertrofia glomerular es un hallazgo
habitual. Debido a que la diabetes es un estado de hiperglucemia crnica, es posible que el
proceso dependiente de hiperglucemia est envuelto en la nefropata diabtica, por ejemplo va
la generacin de avanzada glucosilacin de protenas, que al acumularse en el rin, altere la
funcin del mismo. ( 9 )
La aminoguanidina, un inhibidor de la formacin de glucosilacin proteca, reduce la
acumulacin de dichas protenas en el rin y retarda el desarrollo de albuminuria y
proliferacin mesangial

( 6,9 ).

Otra va dependiente de glucosa es la va del poliol, que ha

sido implicado en la patognesis de la nefropata diabtica, los inhibidores de la enzima

aldosa-reductasa han sido utilizados en roedores y humanos sin resultados claros, aunque el
inhibidor activo oral de la II isoforma de la protena kinasa C, ha sido desarrollado y este
compuesto (LY333531) previene el desarrollo de la hiperfiltracin y albuminuria en ratas
diabticas

(6).

Los pacientes con nefropata diabtica tienen un metabolismo lipoproteco anormal que

10

puede ser influido por la alteracin de la funcin renal y por la alteracin del control
metablico de la diabetes (10), este dao se da en el transporte lipdico, con cambios en el
metabolismo de lipoprotenas que contribuyen a los cambios estructurales de la alteracin
catablica, que puede aumentar el potencial aterognico caracterstico en estos pacientes
(10,11) La nefropata diabtica es comnmente asociada a la hipertensin sistmica y se ha
encontrado aumento de la presin intraglomerular an en ausencia de hipertensin sistmica,
relacionndose dichos cambios al efecto de angiotensina II y endotelina, acumulacin de
matriz mesangial, por lo que el uso de los inhibidores de enzima convertidora de angiotensina
II y de antagonistas de receptores de angiotensina II han demostrado reducir la presin
intraglomerular, mejorando la progresin de la nefropata diabtica, quedando an por
establecer la accin de los antagonistas de receptores de angiotensina II ( 6,10,12 ), tambin
se ha postulado que las citocinas proesclerticas, el factor de desarrollo transformador (TGF), el factor de crecimiento similar a la insulina (IGF) estimulan la glucosa, la glucosilasin
proteca y las hormonas vasoactivas como angiotensina II y endotelina a jugar un papel
importante en el desarrollo de la nefropata diabtica, genticamente expresado e induciendo
cambios de hiperinsulinismo, hiperglicemia, y otros que influyen en la gnesis de la lesin
renal del modelo animal murino ( 4,8,13 ).
Factores Genticos en la insuficiencia renal
Se mencionan alteraciones en el aumento de la actividad del intercambio Na+/H+,
travs de la bomba de contra-transporte

Na+/Li+ , asimismo polimorfismo de los genes

relevantes al sistema renina - angiotensina y receptores tipo I de angiotensina ( 6 ), estos

factores genticos parecen condicionar que la microalbuminuria no predice la mortalidad
cardiovascular en japoneses con diabetes tipo 2 ( 5,14 ). Se ha relacionado la incidencia de
nefropata diabtica avanzada con la interaccin entre el genotipo DD inhibidor de la enzima
convertidora y el genotipo PAI- 1 4G4G (15 ).
Estreptozocina, hiperglucemia e insuficiencia renal
La estreptozocina es una nitrosourea obtenida a partir de la fermentacin de
Streptomyces acromogenes ( 16 ), aislada inicialmente como un antibitico

de amplio

espectro, posteriormente se identificaron sus propiedades antioncolgicas especialmente en

tumores malignos de las clulas beta del pncreas, ya que tiene una afinidad especfica por
estas clulas, pero provoca hiperglucemia como efecto secundario, de tal forma que en

11

algunos animales como ratones, ratas, cobayas, conejos y perros, es capaz de inducir diabetes
por destruccin selectiva de las clulas beta del pncreas, por lo que es ampliamente utilizada
para la induccin a diabetes experimental, ya que tiene una mayor especificidad por las
clulas beta que el aloxano, que tambin se utiliza ocasionalmente con esta misma finalidad (
17 )
La estreptozocina acta sobre el cido desoxirribonucleico ( DNA ), ocasionando dos
alteraciones importantes: en primer lugar, mediante una reaccin de alquilacin sobre el DNA
altera los mecanismos fundamentales de la proliferacin celular; adems produce enlaces
cruzados entre dos cadenas de DNA o con la unin de una protena nuclear, alterando la
integridad y funcin del DNA, este ltimo proceso provoca

la formacin de enlaces

interfilamentosos responsables de los efectos citotxicos de este agente alquilante (18 ), de

hecho Kahn (1996) considera que se comparten caractersticas fenotpicas con la diabetes
mellitus directo tipo 1, sin insulina dependiente del humano.
La estreptozocina se ha utilizado para inducir nefropatia diabtica , ya que provoca una
hiperfiltracin glomerular que se asemeja a la ocasionada en la diabetes (19).

TRATAMIENTO DE LA INSUFICIENCIA RENAL

Control glucmico :

Se ha demostrado que el control glucmico

retarda la tasa de

microalbuminuria y proteinuria (15,20). La hemoglobina glucosilada es formada por

condensacin postranslacional no enzimtica de la glucosa con los grupos amino N-terminal
de la cadena Beta de la hemoglobina. Por cromatografa de intercambio catinico, existen
cuatro fracciones de la hemoglobina glucosilada, todas migrando ms rpido que la
hemoglobina no glucosilada. Desde mediados de los setentas se ha demostrado que la
hemoglobina glucosilada se correlaciona con otros ndices de control glucmico, como la
glucosa sangunea en ayunas, postprandial y la excrecin urinaria de glucosa en orina de 24
horas, en diabticos con funcin renal normal ( 21 ). En los diabticos, la hemoglobina
glucosilada es una forma de control glucmico, no alterada en la insuficiencia renal crnica,
por lo que se recomienda su medicin en diabticos con insuficiencia renal, incluso bajo
terapia dialtica ( 22,23 ).

12

Tratamiento antihipertensivo: Hace ms de veinte aos Mogensen demostr que el

tratamiento antihipertensivo puede atenuar la tasa de declinacin en la funcin renal en
pacientes con diabetes tipo 1 , hipertensin y proteinuria. Se han utilizado ramipril a dosis
bajas, captopril y lisinopril, siendo ms efectivos que las dihidropiridinas calcio antagonistas y
los - bloqueadores (6,24,25,26 ).
Microalbuminuria: Se ha utilizado con buenos resultados el captopril (4,6,27), recientemente
el grupo de Crepaldi en Italia (1998), han obtenido buenos resultados con el uso de nifedipina
para retardar la evolucin de la nefropata

en pacientes con diabetes mellitus insulina

dependientes, con presin arterial normal y microalbuminuria, los inhibidores de enzima

convertidora tienen un efecto antiproteinrico ( 3,21,28 ).
Combinacin de tratamiento: La combinacin de los calcio antagonistas con inhibidores de
enzima convertidora de angiotensina han resultado en reduccin de la proteinuria, y de la
evolucin de la lesin renal, especialmente el verapamilo y lisinopril solos o en combinacin (
2,6,20 ). Sin embargo se han reportado diferencias individuales a los inhibidores de enzima y a
la glicosilacin de productos finales debido a la produccin de pentosidina libre o su
liberacin en una forma de unin a protenas y por la evidencia de activacin de monocitos ,
macrfagos, que se asocian a la progresin de la nefropata diabtica (4,29 ).
Enfermedad cardiovascular: La microalbuminuria no solo predice la nefropata en pacientes
con diabetes mellitus no insulino dependiente, sino que tambin predice otras causas de riesgo,
en especial la enfermedad cardiovascular, estudiando el uso de calcio antagonistas e
inhibidores de enzima convertidora de angiotensina (2,4,6,29 ), as como su posible relacin
entre hiperhomocisteinemia y el riesgo aumentado de enfermedad cardiovascular (30).
Igualmente se ha reportado renoproteccin con antagonistas selectivos de angiotensina II( 31 )
Ingesta diettica de protenas: Se ha encontrado un efecto benfico sobre la tasa de filtracin
glomerular, el aclaramiento de creatinina y la proteinuria con una dieta con restriccin de
protenas 0.5 - 0.85 g/kg/da ( 6 ).
Trasplante Renal: Se ha encontrado que la sobrevida de los diabticos es significativamente
menor que la de los no diabticos. La sobrevida del injerto es comparable en trasplante para
ambos grupos, no existiendo evidencia de aparente disminucin de la hiperfiltracin
glomerular. La intervencin para modificar el riesgo cardiovascular debe ser agresiva para
mejorar la sobrevida del paciente y del injerto ( 32 ).

13

TRATAMIENTO ALTERNATIVO
Suero de anguila ( Serum danguille ): En la bsqueda de opciones de tratamiento para
pacientes con sta patologa se localiz este medicamento homeoptico. Que si bien es
conocido que el mtodo utilizado por la homeopata no est cientficamente validado, se tienen
evidencias clnicas de mejora emprica en ste tipo de pacientes.
En un anlisis de 80 pacientes con insuficiencia renal crnica con niveles de
Depuracin de creatinina en orina de 24 horas entre 20 y 15 ml/min, se encontr que despus
de administrar el medicamento por un lapso de 8 meses, los niveles no disminuyeron y en un
15% de estos pacientes su depuracin mejor en un 15% ; de igual forma los niveles sricos
de urea y creatinina disminuyeron en un 10% y la proteinuria en orina disminuy en un 30%.
* Datos obtenidos de pacientes con diagnstico de insuficiencia renal crnica con
valores de depuracin de creatinina en orina de 24 horas entre 15 y 30 ml/min., atendidos en la
consulta particular y con control de protenas, urea, creatinina y depuracin de creatinina en
orina de 24 horas, durante el perodo 2000-2003.
En homeopata el suero de anguila ha sido utilizado en las siguientes alteraciones
renales: neuropata diabtica, sndrome nefrtico y glomerulonefritis lo cual se menciona en
las materias mdicas homeopticas las indicaciones clnicas de este medicamento donde se
refiere que tiene accin selectiva sobre el rin, sobre todo cuando aparece albumina y otros
elementos en orina, es eficaz para restablecer la diuresis y detener la albuminuria, tiene accin
especfica en nefritis (33, 34).
Cuando los niveles de urea y creatinina se encuentran sobre lo normal, ha sido til en
3x y 6x de 5 a 10 gotas tres veces al da. En dos estudios (34, 35) se ha encontrado que el
suero contiene una glucoprotena y un factor no identificado que alteran el sistema renina
angiotensina de acuerdo al medio en que se encuentre que le permite a la anguila adaptarse de
acuerdo al medio en que se encuentre (agua dulce o salada). ( 34, 35, 36 )

14

b.- PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

El 90% de los casos de insuficiencia renal crnica, es causada por diabetes mellitus e
hipertensin arterial y el 10% restante se debe a nefritis tubulointersticial, enfermedades
hereditarias, nefropatias obstructivas y enfermedades vasculares. Aunque no todos los
enfermos que tienen diabetes llegan a evolucionar a la insuficiencia renal, la diabetes tipo 1
tiene una probabilidad de 30 a 40% de neuropata, mientras que en la tipo 2 la probabilidad
es de 15 a 20% en la misma edad ( 2 ).
Se estima que 16 millones de individuos en Estados Unidos son diabticos de los
cuales 1.5 millones padecen diabetes tipo 1 y aproximadamente 14.5 millones padecen
diabetes tipo 2.

Cincuenta millones de estadounidenses presentan incremento de la presin

arterial y de estos aproximadamente del 3 al 5% evolucionaron a la insuficiencia renal ( 38 ).

En nuestro pas las cifras son muy semejantes y debido a la alta prevalencia de diabetes
mellitus e hipertensin arterial una cantidad importante de pacientes llegarn a evolucionar a
insuficiencia renal.

Por lo que sta enfermedad merece especial consideracin por el

alarmante aumento en su incidencia, el decremento en la calidad de vida que puede

representarle al paciente y los altos costos que su tratamiento representa a las instituciones de
salud pblicas y privadas. Debido a que actualmente una vez que al paciente se le empieza a
detectar proteinuria es muy difcil detener el dao renal. y hasta el momento no se cuenta con
un medicamento eficaz que detenga o retarde el dao renal, por lo tanto, es importante
investigar tratamientos alternativos, como se plantea en el presente proyecto.

c.- PREGUNTA DE INVESTIGACION

Que efecto tiene el suero de anguila sobre los niveles de urea y creatinina en ratas wistar con
insuficiencia renal provocada por diabetes experimental inducida por estreptozocina?

15

d.- JUSTIFICACIN

Conforme la ciencia avanz y proporcion tratamientos exitosos para las enfermedades

infecciosas, que anteriormente constituan la principal causa de morbilidad y mortalidad,
aparecieron silenciosas e inexorables las enfermedades crnico-degenerativas hasta el punto
de volverse principales motivos de consulta en los hospitales, con severas cargas econmicas
para los pacientes y las instituciones de salud. Actualmente, ya ocupan los primeros lugares de
morbilidad y mortalidad. Dentro de las enfermedades crnico-degenerativas, la insuficiencia
renal crnica merece especial consideracin por el alarmante aumento en su incidencia debido
a la alta prevalencia de diabetes en el pas, el decremento en la calidad de vida que representa
para el paciente y los altos costos de su tratamiento para las instituciones.
El estudio es de gran magnitud y trascendencia, por los beneficios que puede aportar si
se logra detener el dao renal evitando llegar a la prdida de la funcin renal y las
consecuencias que sta prdida implicara. Con base en lo antes expuesto y considerando las
evidencias clnicas en 80 pacientes renales de que el suero de anguila incide favorablemente
sobre la insuficiencia renal, ste trabajo pretende visualizar los posibles efectos de ste
medicamento homeoptico en el control de urea y creatinina en ratas inducidas a diabetes con
insuficiencia renal.

Como primer paso del estudio farmacolgico y de su fundamento

cientfico.

e.- HIPOTESIS DE TRABAJO

El serum de anguille estimula la funcin glomerular en ratas con insuficiencia renal
inducidas con estreptozocina, por lo que mejorarn los niveles de urea y creatinina.

f.- HIPOTESIS ALTERNA

La administracin del serum danguille en ratas wistar

con insuficiencia renal

provocada por diabetes experimental inducida por estreptozocina; disminuye los niveles de
urea y creatinina.

16

g.- HIPOTESIS NULA

Los niveles de urea y creatinina en ratas wistar con insuficiencia renal provocada por
diabetes experimental inducida por estreptozocina tratadas con serum danguille es igual al de
ratas wistar con insuficiencia renal, sin la aplicacin del serum danguille.

h.- OBJETIVO GENERAL

Determinar el efecto del serum danguille sobre las cifras de urea y depuracin de creatinina
en ratas wistar con insuficiencia renal provocada por diabetes experimental inducida con
estreptozocina.

i.- OBJETIVOS ESPECIFICOS

1.-Adaptar un modelo de ratas wistar con insuficiencia renal.
2.-Determinar los niveles de glucosa, urea, depuracin de creatinina en ratas

wistar

machos antes y despus de induccin a insuficiencia renal y antes y despus de la

administracin del serum danguille.
3.-Cuantificar la depuracin de creatinina, en orina de 24 horas.
4.-Determinar el efecto del serum danguille sobre los niveles de urea y creatinina

17

II.- MATERIAL Y MTODOS

a.- Diseo
Experimental.

b.- Universo de trabajo

Ratas wistar machos, con peso corporal entre 200 y 300g, obtenidas y alimentadas en el
bioterio de la Facultad de Medicina de la Universidad de Colima.

c.- Tamao de la muestra

Se realiz una prueba piloto para poder obtener el tamao de la muestra.
Mediante la formula para estudio de dos medias :

(1.96 + 1.28)(0.2 )
n = 2

0 .3

n = 9 .3

(Dawson-Saunders y Trapp, 1997)

n = Tamao de muestra
Za = Valor de Z para la probabilidad de error (tipo1).
Z = Valor de Z para la probabilidad de error (tipo2).
= Desviacin estndar considerada (prueba piloto).
D = Diferencia esperada o por detectar en los dos grupos.
d.- Criterios de inclusin
-

Ratas wistar sanas.

Machos.

De 3 a 4 meses de edad.
18

Con pesos corporales entre 200 y 300 g.

Que desarrollen insuficiencia renal

e.- Criterios de exclusin

-

Ratas con patologas aparentes trans-experimento

f.- Criterios de eliminacin

-

Ratas que no respondan a la induccin de insuficiencia renal.

Ratas que se mueran durante el estudio (Que sern consideradas como

fracaso del tratamiento)

En teraputica homeoptica se establece por medio de la Ley de Semejantes, que lo

que una sustancia produce en el organismo relativamente sano del hombre, esta misma
sustancia en cantidades mnimas es capaz de restablecer la alteracin semejante a la que
produjo; es decir la sustancia diluida y dinamizada por el mtodo propuesto por Hahnemann
tiene un efecto en sentido inverso al que produce sin diluirse ( 36, 37 )
En la teraputica homeoptica se cuenta con 9 reglas de preparacin de los
medicamentos y cuenta con 3 escalas diferentes de preparacin; la decimal, centesimal y
cincuenta milesimal, siendo utilizadas la 5. Regla y la escala decimal para preparacin del
suero de anguila, la escala decimal se prepara a partir del suero de anguila de donde se toma
una parte de la sustancia (que puede ser 10 100 ml) y se mezcla en 9 partes iguales de
alcohol de 76, agitndola 200 veces, a sta primera preparacin se le clasifica como 1x
(primera decimal), una parte de sta primera decimal en 9 partes iguales de alcohol ms 200
agitaciones nos da la 2x (segunda decimal), una parte de sta segunda decimal en 9 partes
iguales de alcohol ms 200 agitaciones nos da la 3x (tercera decimal), y as sucesivamente
hasta la 12x (37).
Luego entonces podemos observar que la 3x corresponde a una solucin en una
concentracin al 0.1% de suero de anguila.

19

g.- Operacionalizacin de las variables.

VARIABLES

NATURALEZA

NIVEL

DE INTERRELACIN

INDICADOR

MEDICIN
Y

MEDICIN

ESTADISTICOS

Determinacin

Cuantitativa

Razn

de Depuracin
de

Variable

Depuracin

de 1.Media

Dependiente

creatinina: ml/min

2.

Desviacin

Estndar

Creatinina

3. t de studett

en Orina de 24
horas

Cuantificacin
de

Cuantitativa

Razn

Variable Dependiente

Glucosa: mg/dl

2.Desviacin

Glucosa,

Urea,
Creatinina

Estndar

Urea. mg/dl.

3. t de Student

en
Creatinina: mg/dl.

suero

Tratamiento

1.Media

Cualitativa

Nominal

Independiente

Con

serum

danguille
Sin

serum

danguille

h.- Anlisis estadstico

Estadstica Descriptiva: Promedios y desviacin estandar.
Estadstica inferencial:
Para la comparacin de promedios en caso de varianzas iguales utilizamos las pruebas t de
student pareada e independiente, en todas las pruebas utilizamos un intervalo de confianza
(IC) del 95% y se consider significancia estadstica cuando P < 0.05

20

i.- Proceso experimental

Se realiz un estudio piloto para lograr la reproduccin del modelo experimental,
organizar el rea de trabajo y desarrollar las habilidades necesarias para la manipulacin, toma
de muestras, medicin de glucosa, urea, creatinina, depuracin de creatinina en orina de 24
horas y proteinuria, as como la aplicacin de estreptozocina.
En este estudio experimental se utilizaron 20 ratas wistar machos de 3 a 4 meses de
edad, con un peso de 200 a 300 g., las cuales se manejaron de acuerdo a las normas y
lineamientos internacionales y aprobadas por el comit de tica para estudios en animales. Las
ratas se dividieron mediante aleatorizacin en dos grupos A y B , una vez divididas fueron
inducidas a diabetes e insuficiencia renal bajo el siguiente esquema : las ratas fueron
mantenidas en ayuno durante doce horas, pero con acceso libre a los contenedores de agua,
transcurrido el perodo de ayuno a las ratas se les administr estreptozocina previamente
disuelta en una solucin amortiguadora de citratos con un pH = 4.5 a una dosis de 30 mg/kg,
mediante una inyeccin aplicada por va intraperitoneal, prolongando el ayuno por 30 minutos
despus de la aplicacin. Despus de sta induccin se valoraron los niveles de glucosa, urea y
depuracin de creatinina, cada siete das en cada una de las ratas. Cuando las glucemias
fueron superiores a 200 mg/dl., se consider diabetes experimental, mientras que la aparicin
de proteinuria (41) se consider como insuficiencia renal.
Una vez logrado el modelo anterior, fueron divididas en forma aleatoria en dos grupos cada
uno con 10 ratas. A las ratas de un grupo (grupo de prueba) se les administr 0.5 ml de serum
danguille en solucin al 0.0001%, una vez al da, por va subcutnea , el grupo testigo recibi
agua destilada estril por la misma va, dentro del mismo lapso de tiempo que el suero de
anguila. Los valores de glucosa, urea , creatinina y depuracin de creatinina en orina de 24
horas, se obtuvieron antes de la induccin al modelo, antes y al concluir los 15 das de la
aplicacin del suero de anguila.
Mediciones
Para la medicin de glucosa, urea y creatinina , las ratas permanecieron en ayuno
durante 12 horas, con acceso libre al agua. Para la toma de las muestras, las ratas fueron
colocadas en contenedores especiales, realizando un corte en la punta de la cola

21

aproximadamente de 3 a 4 mm. esperando el flujo libre de la sangre (fueron eliminadas las

dos primeras gotas) se colectaron entre 500 y 1000 ul, de sangre total en un tubo para
micromuestras. La recoleccin de orina de 24 horas, se colecto en jaulas metablicas. La
determinacin de la glucosa se realiz por medio del mtodo colorimtrico de la glucosa
oxidasa, la urea por el mtodo de la ureasa, la creatinina por el picrato alcalino y la proteinuria
por el mtodo del Pirogalol-Molibdato. Las mediciones se realizaron en un espectrofotometro
Ultrospec 1000 (Pharmacia Biotech).
Composicin del alimento
El alimento que las ratas consumieron durante el experimento, fu en forma de
perdigones, los cuales contienen protenas en un 21%, grasa en 8%, fibra en 6%, y humedad
de un 10%. Se elabora a base de harinas y suplementado con: Carbonato de calcio, Cloruro de
sodio, fosfato diclcico, sulfato de magnesio, xido de magnesio, selenio, Vitaminas: A, K,
D3, E, B1, B6, B12, cido pantotnico, colina, L-lisina y DL-metionina.
Reactivos
Estreptozocina (Sigma-Aldrichs) , Citrato de Sodio (Sigma-Aldrichs) , Serum d anguille
(Laboratorios Millenium ).
Equipo de reactivos para determinacin de urea (mtodo de ureasa).
Creatinina (mtodo del picrato alcalino).
Glucosa (mtodo de glucosa-oxidasa).
Eter etlico (sigma)
Equipo
Bascula electrnica de 4 kg. con variaciones de 0.1 g, bascula analtica Sartorious,
espectrofotometro

Ultrospec 1000, centrfuga para tubos de micromuestras, dos jaulas

metablicas Nalgene.

22

j.- Resultados
Una vez analizadas las pruebas de laboratorio practicadas a 20 ratas wistar machos con
edad que fluctuaban entre los 3 y 4 meses de edad con un peso entre 200 y 300 g. divididas en
dos grupos A y B , los resultados fueron los siguientes:

Glucosa
Con los resultados de la glucosa de las veinte ratas, las cuales se dividieron en dos grupos,
se obtuvo el promedio de glucemia basal (antes de la aplicacin de estreptozocina) en el grupo
experimental fue de 89.28.1 mg/dl. Al iniciar la administracin del suero de anguila fue de
461.1 55.9 mg/dl y al concluir el proceso experimental el promedio de glucemia fue de
501.368.7 mg/dl, no encontrando diferencia significativa (p=0.39) entre el inicio y el final
del proceso experimental. Mientras que en el grupo control las glucemias fueron de 98.78.4
mg/dl, 463 75.3 mg/dl y 484.859.6 mg/dl respectivamente, sin diferencia significativas
(p=0.2) entre las glucemias iniciales y finales del proceso experimental (figura 1).
Durante todo el proceso experimental las glucemias entre los dos grupos (experimental y
testigo) permanecieron dentro de niveles similares, sin mostrar diferencias significativas (0.05)

23

Figura No.1.- Se muestra el promedio de la glucemia antes de la induccin a diabetes,

denominada como basal; la glucemia al inicio y al final de la aplicacin del suero de anguila,
esto en ambos grupos.

Urea
El promedio de urea basal (antes de la aplicacin de estreptozocina) del grupo
experimental fue de 25.674.58 mg/dl, al inicio de la aplicacin de suero de anguila fue de
67.810.1 mg/dl , y al final del proceso experimental fue de 68.713.57 mg/dl, no
encontrando diferencias significativas (p>0.05). Mientras que en el grupo control la urea fue
de 28.864.94 mg/dl , 748.9 mg/dl y 63.1313.62 respectivamente, aunque el promedio
final es menor, esta diferencia no es significativa (p>0.05) no es significativo (figura 2).
Los promedios de las ureas entre los dos grupos no mostraron diferencias significativas
en ninguna etapa del proceso experimental (p>0.05).

24

Figura No.2.- Muestra las concentraciones de urea antes de la induccin a diabetes (basal),
al iniciar la aplicacin del suero de anguila y al finalizar su aplicacin, los mismos datos
para los dos grupos (experimental y control).

Creatinina
El promedio de creatinina basal (antes de la aplicacin de estreptozocina) del grupo
experimental fue de 0.90.1 mg/dl, al inicio de la administracin del suero de anguila de 0.99
0.08 mg/dl y al final del proceso experimental de 1.080.25 mg/dl, no encontrando
diferencias significativas (p>0.05). Mientras que en el grupo control las creatininas fueron de
0.970.04 mg/dl, 0.98 0.06 mg/dl y 1.060.24 mg/dl respectivamente, aunque el valor del
promedio tiende a subir con el tiempo, esto no fue significativo (p>0.05).
Los promedios entre los dos grupos del estudio fueron similares durante todo el
proceso experimental (p>0.05) (figura 3).

25

Figura No.3. Aqu se muestran los promedios de las concentraciones de creatinina antes de
administrar la estreptozocina como basal, al comenzar la aplicacin del suero de anguila
como de inicio y al concluir su aplicacin como final, tanto en el grupo experimental como en
el de control.

Depuracin de Creatinina
El promedio basal de la depuracin de creatinina en orina de 24 horas (antes de la
aplicacin de estreptozocina) del grupo experimental fue de 0.450.07 ml/min, al iniciar la
administracin del suero de anguila el promedio fue de 0.68 0.20 ml/minl y al final del
proceso experimental de 0.720.29 ml/min, no alcanzando diferencia significativa (p=0.52).
Mientras que en el grupo control la depuracin de creatinina fue de 0.420.11 ml/min basal,
0.69 0.24 ml/min al inicio de la aplicacin del suero de anguila y 0.710.26 ml/min al
termino de su aplicacin no encontrando diferencias significativas entre estas dos ltimas
mediciones (p=0.53). No existi diferencia significativa entre los dos grupos en ninguna de las
etapas del proceso experimental (p>0.05) (figura 4).

26

Figura No.4. Promedios de la depuracin de creatinina basal, esto es antes de que la ratas
fueran inducidas a diabetes; de inicio, cuando se comenz con la aplicacin del suero de
anguila y final, al concluir su aplicacin. Los mismos datos se muestran para los dos grupos.

k.- DISCUSION
La insuficiencia renal crnica es el resultado de la destruccin progresiva e irreversible
de las nefronas siendo esta una de las principales complicaciones de la diabetes mellitus, sta
destruccin produce hipertrofia estructural y funcional de las nefronas remanentes, como
consecuencia de las adaptaciones funcionales. Predisponiendo con esto a la esclerosis
glomerular la cual es seguida de un dficit del filtrado glomerular (1,2), hasta llegar a una
insuficiencia renal crnica, para la cual existen diferentes evidencias sobres los mecanismos
implicados, resultando de esto opciones variables en su manejo teraputico, pero sin llegar a
obtener una remisin del dao renal, apenas si logrando algunas mejoras con ciertos
esquemas.

En la bsqueda de opciones para este manejo se encontr el medicamento

27

homeoptico a base de suero de anguila, el cual ha evidenciado su utilidad en esta patologa

por medio de descripciones clnicas, pero para lograr obtener evidencias cientficas de esta
teraputica, se diseo el presente estudio experimental, utilizando la estreptozocina para
inducir nefropatia diabtica , ya que esta provoca una hiperfiltracin glomerular que se
asemeja a la ocasionada en los pacientes diabticos (16). En el presente trabajo se logr
primero inducir a diabetes experimental y despus a un dficit de la funcin renal, momento
en el cual se aplic el suero de anguila sin obtener cambios significativos en la funcin renal,
posiblemente por requerir una va de administracin o dosis diferentes a la utilizada, o bien un
tiempo de tratamiento ms prolongado, puede intentarse una prueba piloto en perro y poder
establecer cual de estos dos modelos es el que representa mayor confiabilidad en resultados,
en el caso de la va de administracin podra utilizarse en un futuro proyecto la va oral que es
la va utilizada en teraputica homeoptica, en el caso de las dosis, convendra realizar una
curva de dosis-respuesta ( de 0.0001-0.000001% , estos porcentajes son los equivalentes a las
diluciones utilizadas en medicina homeoptica), y por lo que toca al tiempo del tratamiento
sera interesante investigar el efecto a los 4, 6, 9 e inclusive 12 meses. Otro parmetro
interesante para evaluar en el futuro, seran los estudios histopatolgicos renales antes y
despus del tratamiento con suero de anguila.
Si bien el objetivo de este proyecto era evidenciar cientficamente la utilidad de la
teraputica homeoptica para la insuficiencia renal, es necesario resaltar el arranque de esta
metodologa cientfica avalada en la actualidad, como se ha empezado ya con medicamentos
como rnica montana y causticum (39,40) y por otro lado sealar que existen en la literatura
homeoptica reportes clnicos sin el sustento que se est presentando en este trabajo.

28

l.- Conclusiones
1.- Se Adapto un modelo de ratas wistar con insuficiencia renal.
2.- El suero de anguila no tuvo efectos significativos en los niveles de glucosa,
urea y depuracin de creatinina en orina de 24 horas, en ratas wistar machos

29

ANEXOS

MEDICION DE LA GLUCOSA, UREA Y CREATININA.

La medicin de la glucosa, urea y creatinina en las ratas se realiz despus de que estas
permanecieron en 12 hrs., de ayuno, ingiriendo nicamente agua. Para tomar la muestra las
ratas sern anestesiadas con ter etlico dentro de una campana previamente impregnada de
ste. Una vez anestesiadas se realizar un corte rpido en la punta de la cola aproximadamente
de 2 a 3 mm, esperando el flujo libre de la sangre; las dos primeras gotas sern eliminadas,
colectando entre 50 y 100 l de sangre total, en un tubo para micromuestras con capacidad
para 500 l; sta muestra se dejar en reposo durante 30 minutos para su coagulacin, ,
despus se proceder a separar el suro por medio de centrifugacin obteniendo entre 40 y 60
l de suero por muestra.
GLUCOSA. Se medir colocando una alcuota de 10
reactivo (este contendr

l del suero obtenido y un ml del

la glucosa oxidasa y el cromforo 4-aminofenazona en sol.

Amortiguada), despus de agitar se incubar en bao mara a 37o C por 15 minutos, despus
se retirar y se leer la absorbancia en el espectrofotometro (Spectronic 20D), a una longitud d
onda de 546nm, frente a su blanco para determinar la concentracin de glucosa, se utilizar el
estandar includo en el Kit o equipo comercial utilizado.
UREA. Esta se hidroliza en presencia de ureasa, en amonaco y dixido de carbono, el
amonaco producido de sta reaccin se combina con -cetoglutanato y NADH en presencia
de dehidrogenasa de glutamato para producir glutamato y NAD, la cantidad consumida de
NADH determinado por la disminucin de absorbancia en el UV es proporcional a la cantidad
de urea en la muestra. En suero y plasma la linealidad del mtodo es hasta 300 mg/dl y de 150
g/lt para la orina, para concentraciones altas se debe diluir la muestra 1:2 con agua destilada,
repetir la valoracin y multiplicar el resultado por dos. Para determinar la urea se prepar el
espectrofotometro a temperatura de 30oC . Tener 10 l de solucin estandar y 10

l del suero

problema, leer inmediatamente la mustra, colocando primero la solucin estndar, para

calibrar el aparato (QUIK LAB.), presionando la tecla CALIBRATEy posteriormente colocar
la muestra problema presionando la tecla ANALISE
CREATININA. La creatinina reacciona con un medio alcalino que contenga protenas con
picrato para formar un compuesto rojo-anaranjado. Los reactivos son estables de 15 a 25 oC

30

hasta la fecha de caducidad que se indica en la etiqueta, la linealidad de ste mtodo es hasta
12mg/dl de creatinina. Para concentraciones mayores mezclar un volumen de la muestra con
un volumen igual de agua destilada, repetir el ensayo y multiplicar por dos el resultado. Para
determinar el valor de la creatinina se debe de preparar el fotmetro a una temperatura de
30oC , teniendo una solucin estandar con 100 l y suero problema 100

l, se debe de leer

inmediatamente muestra por muestra , colocando la solucin estandar para calibrar el aparato
(QUIK LAB.) presionando la tecla CALIBRATE, luego se coloca la muestra de suero
problema y se presiona la tecla ANALYSE. La expresin de los resultados, tomando en cuenta
el tipo de muestra se expresan: suero mg/dl o

mol/l. y para orina mg/kg de peso en orina de

24 hrs.

CALCULO PARA LA DEPURACION DE CREATININA EN ORINA DE 24 HORAS

EN RATAS
Si la depuracin de creatinina es:

Ucr X V/Pcr

Donde Ucr= Concentracin de creatinina en orina

Pcr= Concentracin de creatinina en plasma
V= Volumen de orina formada por minuto

31

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