Revisin sobre microorganismos amilolticos

Las amilasas son enzimas que hidrolizan molculas de almidn dando diversos
productos incluyendo dextrinas y progresivamente pequeos polmeros
compuestos por unidades de glucosa. Las amilasas pueden ser sintetizadas de
diversas fuentes incluyendo plantas, animales y microorganismos.
Las amilasas se pueden dividir en tres grupos: -amilasas, -amilasas y
glucoamilasas. La familia de las enzimas amilasas son de gran inters en la
biotecnologa porque su uso lo tienen principalmente en la sacarificacin de
almidones y tambin en las industrias textil y alimentos Las -amilasas son unas
de las ms populares y las ms importantes a nivel industrial (Das 2003).
Las amilasas son enzimas las cuales hidrolizan molculas de almidn dando como
productos dextrinas y polmeros compuestos progresivamente por unidades de
glucosa1 Esta familia de enzimas hidrolticas est compuesta por a protenas
catalticas: alfa-amilasa, beta-amilasa; glucoamilasa; isoamilasa. Se encuentran
ampliamente distribuidas en tejidos
vegetales, donde juegan un rol muy
importante en la degradacin del almidn en la germinacin de las semillas; en
tejidos animales, cumpliendo una misin digestiva; y en diversas especies de
microorganismos como hongos y bacterias.(UNIVERSIDAD PONTIFICIA
BOLIVARIANA, 2008)

El microorganismo husped se selecciona de un grupo formado por las levaduras

de los gneros Saccharomyces, Schizosaccharomyces, Schwanniomyces o
Kluyveromyces o las bacterias del gnero Zymomonas o los mohos del gnero
Aspergillus. (OFICINA ESPAOLA DE PATENTES Y MARCAS, 1988).
La invencin se refiere a una clula de levadura capaz de expresar una o varias
enzimas amilolticas termolbiles como resultado de haber recibido ADN de una
levadura donadora mediante tecnologa de recombinacin de ADN. (OFICINA
ESPANOLA DE PATENTES Y MARCAS, 1988).
Las especies del gnero de levadura Schwanniomyces hidrolizan el almidn hasta
glucosa como resultado de la produccin de dos enzimas extracelulares, es decir
la amilasa (-1,4-glucan 4-glucanohidrolasa E.C.3.2. 1.1) y la glucoamilasa (sin,
amiloglucosidasa) (-1,4-glucan-glucohidrolasa, E.C.3.2.1.3. con actividad
desramicadora E.C.3.2.1.9.). (OFICINA ESPANOLA DE PATENTES Y MARCAS,
1996).
Los sistemas amilolticos de Schwanniomyces castellii y Schwanniomyces alluvius
estn bien documentados (Oteng-Gyang et al., 1981; Sills et al., 1982, 1984a,
1

1984b, Wilson et al., 1982). Citado por (OFICINA ESPANOLA DE PATENTES Y

MARCAS, 1996).
Resulta deseable trabajar con Schwanniomyces spp. Porque la -amilasa tiene
actividad licuante y la glucoamilasa tiene actividad desramicadora, y porque el
sistema amiloltico es sensible a las condiciones de pasteurizacin normalmente
empleadas en la elaboracin de cerveza (Sills et al., 1984a y b). Citado por:
(OFICINA ESPANOLA DE PATENTES Y MARCAS, 1996).
La levadura Saccharomyces, que no tiene ninguna de las actividades
mencionadas de la levadura Schwanniomyces, es el organismo ms utilizado en la
elaboracin de cerveza, los procedimientos de coccin al horno y en la industria
de la fermentacin del etanol.
En los procedimientos de fermentacin, se utiliza convencionalmente almidn
como materia prima. No obstante, puesto que como se ha mencionado antes,
Saccharomyces cerevisiae no es capaz de hidrolizar el almidn, la conversin
tradicional del almidn en etanol y CO2 por Saccharomyces cerevisiae requiere
dos procedimientos de degradacin enzimtica antes de la actividad de
fermentacin por Saccharomyces cerevisiae, es decir la licuefaccin, llevada a
cabo aadiendo -amilasa y la sacaricacin aadiendo glucoamilasa con
actividad desramicadora (Fogarty et al., 1979).

La glucoamilasa de Schwanniomyces tiene una actividad desramicadora especial

y es por tanto capaz de hidrolizar el almidn virtualmente por completo en glucosa,
mientras la glucoamilasa de Cndida albicans o Saccharomyces diastaticus no
tienen actividad desramicadora, y por lo tanto no son capaces de hidrolizar
completamente el almidn en glucosa. La glucoamilasa de Schwanniomyces,
adems de sus propiedades enzimolgicas y qumicas especialmente adecuadas,
incluyendo el ptimo de pH y temperatura, tiene las ventajas adicionales sobre las
glucoamilasas codicadas por otros genes ya clonados de que esta enzima se
origina a partir de una especie de levadura y puede ser inactivada por calor en las
condiciones de pasteurizacin (Sills et al., 1983) que se emplean normalmente en
el procedimiento para la elaboracin de cerveza.
Los gneros hallados fueron Bacillus sp, Clostridium sp y Kurthia sp. Las enzimas
amilolticas obtenidas a partir de las cepas nativas presentaron pesos moleculares
que oscilan entre 30 y 150 kDa aproximadamente. (SNCHEZ et al, 2004)
Los jarabes glucosados son soluciones de glucosa en alta concentracin que se
utilizan en diversas aplicaciones de la industria alimenticia y biotecnolgica. Los
jarabes de glucosa se obtienen por hidrlisis enzimtica del almidn.
Este
proceso requiere dos etapas, la primera etapa, denominada de licuefaccin, es

una hidrlisis de las largas cadenas de almidn para obtener maltodextrinas

(cadenas ms cortas de almidn), esta es llevada a cabo por la enzima -amilasa
que corta los enlaces glicosdicos -1,4 internos en forma aleatoria del almidn. En
la segunda etapa, denominada sacarificacin se hidrolizan los enlaces -1,4 y/o
-1-6 del terminal no reductor de la cadena de dextrina, por la enzima
amiloglucosidasa, liberando glucosa. (SNCHEZ et. al, 2004).
Hasta el momento el proceso de hidrlisis enzimtica del almidn hasta glucosa,
se ha llevado a cabo en dos etapas, licuefaccin y sacarificacin, por lo que ha
sido necesario cultivar y manipular dos microorganismos productores de enzimas
amilolticas separadamente, conllevando a un alto consumo de energa y de
equipos para el proceso adems de las diferencias existentes entre el pH y la
temperatura que necesitan las dos enzimas, es difcil que ambos acten
simultneamente con el almidn. (SNCHEZ et. al, 2005)
Las perspectivas futuras con respecto a la hidrlisis del almidn es acortar las
etapas del proceso, a una sola etapa ya sea con dos cepas microbianas juntas
con sus respectivas enzimas, con una sola cepa con las dos enzimas amilolticas,
o con una enzima que tenga capacidad de romper todo tipo de enlace de las
molculas de almidn como lo hace la Glucoamilasa.
La amiloglucosidasa (Glucoamilasa o alfa-1,4 gluco- hidrolasa, EC 3.2.1.3) es una
enzima "GRAS", extracelular producida por los hongos de los gneros Aspergillus,
Rhizopus, principalmente, y de
Mucor, Candida, Saccharomyces,
Schwanniomyces, y de los gneros bacterianos Clostridium, Arthrobacter y una
enzima tipo "Glucoamilasa" de Flavobacterium.
Dentro de las cepas obtenidas figuran microorganismos de tipo bacilos y cocos
Gram Positivos y Gram negativos.
Las cepas amilolticas seleccionadas fueron identificadas bioqumicamente,
mostraron pertenecer a los gneros Bacillus sp, Clostridium sp y Kurtia sp., siendo
el primero el ms predominante dentro de las cepas seleccionadas. (SNCHEZ et.
al, 2005).
Bajo las condiciones de referencia se logr obtener un cepario de 103 cepas
amilolticas, de las cuales 13 presentaron cualitativamente mayor actividad
amiloltica e identificadas bioqumicamente pertenecen a los gneros Bacillus sp.,
Clostridium sp y Kurthia sp, estas fue- ron presentadas en el Almidn de maz.
(SNCHEZ et. al, 2005)
El almidn es la fuente de carbono idnea en las fermentaciones industriales. En
la mayora de los casos y dadas las propiedades fsico-qumicas de esta molcula,
para que pueda ser utilizada se requiere su hidrlisis previa o simultnea. Con
este fin se emplean amilasas fngicas (Aspergillus) y bacterianas (Bacillus) que
hidrolizan tanto los enlaces (1-4) como los (1-6) del polisacrido. Estas

enzimas no son inactivadas totalmente con la pasteurizacin, encarecen

notablemente el coste del producto final y producen en muchas de las personas
que las manipulan alergias de distinto tipo. La molcula de almidn est
compuesta por una mezcla de -amilosa y amilopectina. La -amilosa es un
polmero lineal de unidades de -D-glucosa unidas covalentemente por enlaces
glucosdicos (1-4); en agua forma micelas que dan color azul con iodo. La
amilopeptina est formada por cadenas de amilosa unidas mediante enlaces (16), a modo de ramificaciones cada 30 residuos de glucosa aproximadamente; en
agua forma micelas que dan una coloracin rojo-violcea con iodo. ( www.uam.es ,
2014).

Las hidrolasas son ampliamente utilizadas en los procesos industriales. Dentro de

ellas podemos encontrar las enzimas alfa-amilasa, beta-amilasa como las ms
comunes para las sntesis del almidn produciendo productos de bajo peso
molcula. Estas enzimas son producidas, especialmente alfa-amilasa, por gran
diversidad de microorganismos, Producen amilasas muchos hongos del suelo as
como bacterias de los gneros Bacillus, Pseudomonas, Streptomyces entre otras.
(Universidad Pontificia Bolivariana, 2008).

El principal gnero que est siendo tratado para la produccin de dicha enzima es
el bacillus. Las especies registradas como productoras de enzima en este gnero
son

el

Bacillus

licheniformis,

Bacillus

stearothermophilus,

Bacillus

amyloliquefacien quienes son aplicados en procesos industriales para alimentos,

textiles, fermentacin, papelera entre otros. (Universidad Pontificia Bolivariana,
2008).
Tambin otros gneros han sido reportados en proyectos de investigacin. La
especie Aspergillus produce una amplia variedad de enzimas extracelulares entre
las cuales adems de estar las amilasas se puede identificar las proteasas.
Aspergillus rizhopus est identificado como un gran productor de enzimas .
Es una importante fuente de carbono que ha sido empleada en los ltimos aos
para la produccin de enzimas y a su vez la fermentacin de azucares para la
elaboracin de etanol. Se ha identificado que el microorganismo ptimo para

reproducirse en este medio y sintetizar alfa-amilasa es el Bacillus subtilis. (ZOE,

2005) citado por : (UNIVERSIDAD PONTIFICIA BOLIVARIANA,2008).

Aureobasidium pullulans es un hongo tipo levadura, es un saprobio de distribucin

mundial, ms comn del suelo, hojas y madera de los rboles tiene muchos usos
en diferentes campos por que tiene la capacidad de producir enzimas
extracelulares tales como proteasas, lipasas y amilasas, sideroforos, cido
glucnico (Chi et al. 2009) citado por : (Hernndez, 2011)
Pullulans es potencial en Mxico, primero por su capacidad de hidrolizar almidn

Bibliografa

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http://www.uam.es/personal_pdi/ciencias/mflobato/biotecnologia/Practicas10.pdf
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Enzimas amilolticas productoras de microorganismos construidas por tecnologas de ADN
recombinante y su uso en procedimientos de fermentacin. Traduccin de
reivindicaciones de solicitud de patente europea. Registro de la propiedad industrial
Espaa, 1988. N._ de publicacin: ES 2 003 314.
Enzimas amilolticas productoras de microorganismos construidas por tecnologas de ADN
recombinante y su uso en procedimientos de fermentacin. Traduccin de
reivindicaciones de solicitud de patente europea. Registro de la propiedad industrial
Espaa, 1996. N._ de publicacin: ES 2 003 314.
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FARMACUTICA ISSN 0121-4004 Volumen 12 nmero 2, ao 2005. Universidad de
Antioquia, Medelln - Colombia. pgs. 21-28