Nutricin microbiana

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NDICE:
1

CONCEPTOS BASICOS

CLASES DE NUTRIENTES
2.1

NUTRIENTES UNIVERSALES
2.1.1

EL AGUA

2.1.2

EL CO

2.1.3

FSFORO

2.1.4

SALES MINERALES

2.2

NUTRIENTES PARTICULARES

2.3

NITRGENO Y AZUFRE
2.3.1

2.4
3

FIJACIN DE NITRGENO

FACTORES DE CRECIMIENTO

MEDIOS DE CULTIVO

1 CONCEPTOS BASICOS
La nutricin es el proceso por el que los seres vivos toman del medio donde habitan las
sustancias qumicas que necesitan para crecer. Dichas sustancias se denominan nutrientes, y
se requieren para dos objetivos:
fines energticos (reacciones de mantenimiento);
fines biosintticos (reacciones plsticas o anabolismo).
Las biosntesis de nuevos componentes celulares son procesos que requieren energa
procedente del medio ambiente. En el captulo anterior vimos los principales modos de
captacin y obtencin de energa existentes en las bacterias.
Es importante tener claro desde el principio una serie de conceptos y nomenclaturas
relacionados con los principales tipos de nutricin bacteriana. Puesto que, como acabamos de
ver, la nutricin presenta un aspecto de aprovisionamiento de energa y otro de suministro de
materiales para la sntesis celular, podemos hablar de dos clasificaciones de tipos de
nutricin:

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1) Desde el punto de vista de los fines de aprovisionamiento de energa, las bacterias se

pueden dividir en:
0

a) litotrofas: son aquellas que slo requieren sustancias inorgnicas sencillas (SH S ,
2

NH , NO , Fe, etc.).
3

b) organotrofas: requieren compuestos orgnicos (hidratos de carbono, hidrocarburos,

lpidos, protenas, alcoholes...).
2) Desde el punto de vista biosinttico (o sea, para sus necesidades plsticas o de
crecimiento), las bacterias se pueden dividir en:
a) autotrofas: crecen sintetizando sus materiales a partir de sustancias inorgnicas
sencillas. Ahora bien, habitualmente el concepto de autotrofa se limita a la capacidad de
utilizar una fuente inorgnica de carbono, a saber, el CO .
2

b) heterotrofas: su fuente de carbono es orgnica (si bien otros elementos distintos del C
pueden ser captados en forma inorgnica).
Otros conceptos:
autotrofas estrictas son aquellas bacterias incapaces de crecer usando materia
orgnica como fuente de carbono.
Mixotrofas son aquellas bacterias con metabolismo energtico litotrofo (obtienen energa
de compuestos inorgnicos), pero requieren sustancias orgnicas como nutrientes para
su metabolismo biosinttico.
Sean autotrofas o heterotrofas, todas las bacterias necesitan captar una serie de
elementos qumicos, que se pueden clasificar (segn las cantidades en que son requeridos)
como
macronutrientes (C, H, O, N, P, S, K, Mg), y
micronutrientes o elementos traza (Co, Cu, Zn, Mo...)([1])
En la naturaleza, estos elementos se encuentran combinados, formando parte de
sustancias orgnicas o inorgnicas. Algunos de los nutrientes sern incorporados para
construir macromolculas y estructuras celulares; otros solo sirven para la produccin de
energa, y no se incorporan directamente como material celular; finalmente, otros pueden
ejercer ambos papeles.
El mundo bacteriano, como conjunto, exhibe una gigantesca versatilidad metablica de
uso de nutrientes: desde autotrofos que obtienen su carbono por reduccin del CO y los
2

dems elementos a partir de fuentes igualmente inorgnicas, hasta heterotrofos capaces de

usar amplia gama de fuentes orgnicas de carbono.
A su vez, dentro de los heterotrofos, podemos encontrar muchos y variados tipos de
nutricin, desde bacterias metilotrofas que slo usan metano o metanol como fuente de
carbono y energa, hasta los muy verstiles Pseudomonas, que pueden recurrir a degradar ms
de 100 tipos de fuentes de C (incluyendo entre ellas sustancias tan exticas como

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hidrocarburos alifticos y cclicos). De cualquier modo, entre los heterotrofos, una de las
fuentes ms tpicas de carbono consiste en glucosa.
En los heterotrofos-organotrofos, los sustratos carbonados (con un nivel de oxidacin
no muy distinto del material celular -CH O-) entran simultneamente a:
2

metabolismo energtico (donde la fuente de C se transforma en CO , o en CO junto con

2

otras sustancias no totalmente oxidadas);

metabolismo plstico (anabolismo = biosntesis de nuevo material celular).
Aunque dentro del mundo de los procariotas se encuentre tanta variedad de nutriciones,
las bacterias que pueden nutrirse solamente de sustancias inorgnicas sencillas (H O, CO ,
2

-N , NO ,
2
3

=
NH , SO ,
3
4

fosfatos, etc.) son minora, pero sus procesos metablicos son muy

interesantes. De hecho, existen tipos metablicos que slo han evolucionado en

procariotas. Como paradigma de esto citaremos los microorganismos quimioautotrofos (o
quimiolitoautotrofos): obtienen su energa de la oxidacin de sustancias inorgnicas sencillas,
el carbono procede del CO , y el resto de elementos a partir de sales inorgnicas, por lo que
2

pueden vivir en soluciones de sales minerales en ausencia de luz.

Lo habitual, sin embargo, es que muchas bacterias recurran, siempre que puedan, a
tomar del medio ciertos compuestos ms complejos, ya que carecen de ciertas rutas
biosintticas.

2 CLASES DE NUTRIENTES
Podemos clasificar los nutrientes en las siguientes categoras:
Universales (es decir, aquellos que son requeridos por todos los procariotas): agua, CO ,
2

fosfatos y sales minerales;

Particulares;
Factores de crecimiento.

2.1 NUTRIENTES UNIVERSALES

2.1.1 EL AGUA
Las bacterias necesitan grandes cantidades de agua. De hecho, salvo excepciones, se
pueden considerar como organismos acuticos. Requieren cierto grado de humedad para
crecer. Desde el punto de vista de sus posibles papeles, el agua es:
el principal constituyente del protoplasto bacteriano;
el medio universal donde ocurren las reacciones biolgicas;

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un reactante en exceso (es decir, un producto resultante de algunas reacciones

bioqumicas).
Las fuentes de agua pueden ser:
endgena: procedente de procesos de oxido-reduccin;
exgena (la ms importante): procedente del medio, y que difunde a travs de las
membranas.
Ahora bien, no toda el agua de un ambiente est disponible para la bacteria:
Existen determinadas sustancias que absorben y superficies que adsorben de modo ms
o menos intenso molculas de agua, dejndolas inasequibles para la bacteria.
Los solutos disueltos en agua (p. ej., sales, azcares) tienen afinidad por las molculas
de H O que los rodean, por lo que stas tampoco estarn a disposicin del
2

microorganismo.
La disponibilidad de agua se mide por un parmetro llamado actividad de agua o potencial de
agua, indicativo del agua libre, y que se expresa como
a = P /P
W

donde P es la presin parcial de vapor de agua en la solucin problema y P

S

es la presin

parcial de vapor del agua destilada.

Cmo medir el potencial de agua de un medio lquido determinado? Se mide la humedad
relativa del aire que hay encima del medio (en frascos), y este valor se refiere al valor de 100,
que es la humedad del aire encima del agua destilada. O sea, la a = humedad relativa/100).
W

Las bacterias tienen valores de a

normalmente entre 0.90 y 0.99.

Bacterias de hbitats oligotrficos (como Caulobacter, Spirillum) tienen a

cercanos a 1.

Bacterias como Escherichia y Streptococcus, que viven en sangre y fluidos corporales,

tienen a de alrededor de 0.995.
W

Bacterias marinas como ciertos Vibrio y Pseudomonas encuentran valores de 0.980.

Ciertos bacilos Gram-positivos que resisten mejor la sequedad poseen valores de 0.950.
En el extremo de resistencia encontramos ciertas bacterias xerfilas, capaces de vivir a
a muy bajos (en torno a 0.75). Muchas de estas bacterias viven de hecho en medios
W

acuosos, pero donde gran parte del agua no est disponible por las razones arriba
citadas:
procariotas halfilos extremos, como la arquea Halobacterium, que habita en
lagunas hipersalinas;

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bacterias (y sobre todo, ciertos microrganismos eucariticos como levaduras)

sacarfilos, que viven en jugos y zumos con altas concentraciones de azcares.

2.1.2 EL CO

El anhidrido carbnico es requerido por todo tipo de bacterias:

Las autotrofas lo requieren como fuente de carbono, y lo reducen usando como fuente de
energa la luz (en el caso de las fotoautotrofas) u oxidaciones de determinadas sustancias
inorgnicas (los quimioautolitotrofos).
Las arqueas metanognicas pueden usar el CO como aceptor de los electrones
2

procedentes de la oxidacin del H , proceso por el que obtienen su energa de modo

2

litotrofo:
CO + 4H --> CH + 2H O
2

(DG' <0)
0

Adems, algunas arqueas no slo usan CO como aceptor de electrones para obtener
2

energa, sino que, adems lo usan como fuente de carbono celular (arqueas metanognicas
autotrofas).
Los heterotrofos, aunque no usan el CO como fuente de C ni como aceptor de
2

electrones, necesitan pequeas cantidades para las carboxilaciones en determinadas

rutas anablicas y catablicas.
El origen del CO puede ser:
2

endgeno: procedente de descarboxilaciones que ocurren al degradar la fuente orgnica

de carbono;
exgeno: el CO de la atmsfera o disuelto en las soluciones acuosas.
2

Normalmente, las bacterias crecen a la concentracin de CO atmosfrico (0.03%), pero

2

algunas bacterias (Neisseria, Brucella), cuando se aislan por primera vez, requieren atmsferas
enriquecidas, con 5-10% de CO . Ello parece deberse a que poseen alguna enzima con baja
2

afinidad hacia el carbnico; sin embargo, tras varios subcultivos, suelen adaptarse a crecer a
tensiones normales.

2.1.3 FSFORO
Suele requerirse en forma de fosfatos, sea orgnicos o inorgnicos. Las bacterias que
pueden usar los fosfatos orgnicos (merced a la posesin de fosfatasas) no dependen
absolutamente de ellos, ya que pueden recurrir igualmente a los fosfatos inorgnicos. Los
fosfatos orgnicos son hidrolizados por fosfatasas extracelulares o (en las Gram-negativas)
periplsmicas (p.ej., la fosfatasa alcalina).
El fsforo se usa principalmente para la sntesis de los cidos nucleicos y los

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fosfolpidos, pero aparece tambin en coenzimas y en protenas.

2.1.4 SALES MINERALES

-

Las sales minerales son la fuente de aniones (p. ej. el Cl ) y de cationes para la clula. Los
+

siguientes cationes, concretamente, se necesitan en cantidades relativamente grandes: K ,

++

++

++

Mg , Ca , Fe .
+

El in potasio (K ):
interviene en la activacin de una variedad de enzimas, incluyendo las que
participan en la sntesis de protenas.
En Gram-positivas est asociado con los cidos teicoicos de la pared.
++

El in magnesio (Mg ):
estabiliza ribosomas, membranas y cidos nucleicos;
como cofactor en muchas reacciones, especialmente las que implican transferencia
++

de grupos fosfato. Por ejemplo, en las reacciones que requieren ATP, el Mg

puede unir la enzima al sustrato durante el mecanismo de accin de la primera.
Participa de las clorofilas y bacterioclorofilas de bacterias fotosintticas.
++

El in calcio (Ca ):
es un cofactor de ciertas enzimas, como proteinasas.
++

El hierro (principalmente como in ferroso, Fe ) suele estar acomplejado en la

naturaleza, formando sales insolubles. Las bacterias disponen de una serie de molculas,
denominadas siderforos, capaces de captar ese hierro (p.ej., hidroxamatos y
enterobactina). El hierro
participa en muchas molculas implicadas en procesos de respiracin, como
citocromos y ferroprotenas no hmicas (protenas con Fe-S);
interviene como cofactor en ciertas enzimas.
Aparte de estos iones que se requieren en cantidades relativamente grandes, las bacterias
necesitan minsculas cantidades de otros elementos (oligoelementos), a los que tambin se
denomina como micronutrientes o elementos traza:
++

El manganeso (Mn ) es un cofactor de ciertas enzimas, y a veces puede sustituir al

++

Mg .
++

El cobalto (Co ) se requiere casi exclusivamente para la vitamina B

12

(de hecho, si
++

suministramos esta vitamina al medio, la bacteria se vuelve independiente del Co

libre).

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El zinc interviene en la estabilizacin de complejos enzimticos como las ADN- y

ARN-polimerasas.
El molibdeno participa en las llamadas molibdoflavoprotenas, implicadas en la
asimilacin de nitratos. Por otro lado, participa como cofactor, junto con el Fe, en el
complejo nitrogenasa de las bacterias fijadoras de N atmosfrico.
2

El nquel participa en hidrogenasas, enzimas que captan o liberan H .

2

2.2 NUTRIENTES PARTICULARES

2.3.1

NITRGENO Y AZUFRE

Se trata de elementos que pueden ser cubiertos de modo muy distinto, dependiendo
del tipo de bacteria que consideremos. Concretamente, los elementos N y S (que requieren
todos los seres vivos) pueden ser captados por las bacterias de modos muy distintos,
dependiendo de sus capacidades biosintticas.
Tanto el N como el S se encuentran en la clula en estado reducido:
el radical -NH forma parte de los aminocidos (que a su vez son los sillares de las
2

protenas) y de las bases nitrogenadas (que participan en los cidos nucleicos y en

algunas coenzimas);
el radical -SH interviene en determinados aminocidos y en coenzimas como la CoA.
En qu formas qumicas entran N y S a las bacterias?
La mayora de bacterias fotosintticas y muchas heterotrofas asimilan estos elementos en
forma combinada inorgnica oxidada:
como NO

-,
3

merced a la actuacin secuencial de nitrato-reductasas y nitrito-

reductasas asimilatorias.
como SO

2.
4

Este sulfato se activa con ATP, y luego se reduce hasta sulfito y

finalmente sulfhdrico, que ya tiene el estado de reduccin adecuado para la

incorporacin del S.
Muchas bacterias heterotrofas pueden usar alguna forma reducida
+

de N inorgnico: amonio (NH )

4

2-

de S inorgnico: sulfuros (S , SH )
de N orgnico: aminocidos, pptidos
de S orgnico:cistena.

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Muchas de las bacterias que pueden usar amonio como nica fuente de nitrgeno tambin
pueden usar nitratos.

2.3.2 FIJACIN DE NITRGENO

La atmsfera contiene enormes cantidades de nitrgeno no combinado (libre) en estado
gaseoso: el nitrgeno molecular o dinitrgeno (N ), que procede de microorganismos
2

desnitrificantes (vase el captulo 10). Sin embargo, esta gran reserva slo puede servir de
fuente de nitrgeno a ciertos procariotas, las llamadas bacterias fijadoras de nitrgeno o
diazotrofos. Esta notable capacidad bioqumica no ha evolucionado en eucariotas. (Lo ms a
que ha llegado la evolucin es a seleccionar ciertos tipos de asociaciones simbiticas entre
procariotas diazotrofos y ciertos eucariotas, como p. ej., la simbiosis entre races de
leguminosas y bacterias del grupo de Rhizobium).
La fijacin del N es un proceso de reduccin que convierte el nitrgeno molecular en
2

amoniaco, segn la siguiente ecuacin:

+

N + 8H + 8e + 18 ATP ---------> 2NH + H + 18 (ADP + P )

2

Esta reaccin est catalizada por un complejo enzimtico denominado nitrogenasa o

dinitrogenasa, que consta de dos componentes:
Componente I o nitrogenasa propiamente dicha; posee un cofactor de hierro y
molibdeno (FeMoCo) que forma parte del centro activo. Por ello, a este componente
tambin se le conoce como molibdoferroprotena. (En realidad existen dos copias del
cofactor, cuya estequiometra es MoFe S -homocitrato)[2]
7 8

Componente II o nitrogenasa-reductasa, que posee tomos de Fe acomplejados con S

de determinadas cistenas (por lo que este componente se denomina a veces
ferroprotena).
Mecanismo del complejo dinitrogenasa:
Los electrones para la reduccin llegan al complejo por medio de una ferredoxina o una
flavodixina (FeS protenas no hmicas), que los transfiere al componente II, que queda
reducido. El componente II reducido se une a dos molculas de ATP, y cambia su
conformacin, lo que le permite unirse al componente I. Entonces se produce la transferencia
de electrones desde el componente II al componente I, con hidrlisis de ATP, lo que a su vez
provoca la separacin del componente II respecto del I. Una vez reducido el componente I (la
molibdoferroprotena), ste transfiere los electrones (y los protones) al N , hasta convertirlo en
2

dos molculas de amoniaco. (El centro activo es FeMoCo). El amoniaco entra entonces en las
rutas biosintticas para convertirlo en N orgnico, incorporable a las macromolculas.

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Mecanismo de la
nitrogenasa

Dos cosas llaman la atencin de la reaccin de la nitrogenasa:

Obsrvese que la reaccin requiere un gran aporte de energa en forma de al menos
18 ATP (en ocasiones puede llegar a 24 ATP). Ello se debe a que el dinitrgeno (NN) es
una molcula extremadamente inerte (su energa de disociacin es de 940 kJ), y su
reduccin precisa una gran energa de activacin para transferirle 6 electrones.
Parte de la actividad nitrogenasa (as como ATP y electrones) se pierden en reducir dos
+

iones H hasta H . Se desconoce la razn de este despilfarro, pero se sabe que es un

2

efecto intrnseco de este complejo enzimtico.

Un aspecto muy importante del complejo nitrogenasa es su extrema sensibilidad al
oxgeno, de modo que queda rpida e irreversiblemente inactivado por este gas. Ahora bien,
esto no significa que la capacidad de diazotrofa est relegada a bacterias anaerobias, ya que,
como veremos en la seccin de taxonoma, la evolucin ha inventado distintas estrategias
para proteger a la nitrogenasa en fijadores aerobios:
Eliminando rpidamente el O por una intensa respiracin (ej: Azotobacter)
2

Produciendo capas mucosas que retardan la entrada del oxgeno a la clula (en
Azotobacter, Beijerinkia)
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En clulas especiales dotadas de mecanismos protectores, como el heteroquiste de las

cianobacterias o los bacteroides de Rhizobium dentro de los ndulos radicales de las
leguminosas
Proteccin conformacional: en Azotobacter: la nitrogenasa se une con protenas
protectoras
Debido a lo caro que resulta fijar nitrgeno, no es extrao comprobar que este proceso
est regulado de forma muy estricta ante la presencia en el medio de fuentes
combinadas de nitrgeno (nitratos, amonio, aminocidos):
la actividad nitrogenasa se ve inhibida ante la presencia de N combinado (nitratos,
amonio, aminocidos);
ante N combinado, se reprime la transcripcin de los genes codificadores de la
nitrogenasa y dems funciones relacionadas (genes nif).
La nitrogenasa es una enzima relativamente inespecfica, ya que puede reducir otras
pequeas molculas provistas de triples enlaces, como cianuros (NC-) y acetileno (HCCH). La
reduccin de acetileno a etileno sirve de base al mtodo ms usual de medir la actividad
nitrogenasa, el llamado ensayo de reduccin del acetileno, que se registra mediante
aparatos de cromatografa gaseosa.

2.4 FACTORES DE CRECIMIENTO

Los factores de crecimiento son molculas orgnicas especficas que, en muy pequea
cantidad, algunas bacterias necesitan para crecer. Salvo excepciones no tienen funcin plstica
(no son sillares de macromolculas) ni sirven como fuente de energa. Suelen ser coenzimas o
sus precursores, vitaminas, que determinadas bacterias no pueden fabricar por s mismas, al
carecer de parte o toda una ruta biosinttica.
Ejemplos: las bacterias del gnero Brucella requieren como factores de crecimiento en
sus medios de cultivo la biotina, niacina, tiamina y cido pantotnico. Haemophilus necesita
suplementos de grupos hemo y piridn-nucletidos.
En la siguiente tabla se muestran algunas de las vitaminas y cofactores requeridos por
algunas bacterias:
Factor o vitamina

funciones principales

p-aminobenzoico (PABA)

precursor del cido flico

Acido flico

metabolismo de compuestos C , transferencia de grupos

1

metilo

Biotina

biosntesis de cidos grasos; fijacin de CO

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Cobalamina (vitamina B )
12

reduccin y transferencia de compuestos C ; sntesis de

1

desoxirribosa

Niacina (cido nicotnico)

precursor del NAD; transferencia de electrones en

reacciones redox

Riboflavina

precursor de FAD y FMN

cido pantotnico

precursor de la CoA

Tiamina (vitamina B )

descarboxilaciones; transcetolasas.

Complejo B (piridoxal, piridoxamina)

transformaciones de aminocidos y cetocidos

Grupo Vitamina K, quinonas

transportadores de electrones (ubiquinonas, menaquinonas,

etc.)

3 MEDIOS DE CULTIVO
(NOTA: esta parte del tema es para que te sirva de cara a las prcticas de la asignatura, que es
el sitio ideal para aprender sobre los medios de cultivo, su fundamento y sus variedades).
El conocimiento de la nutricin microbiana permite el cultivo de los microorganismos en
el laboratorio. Como acabamos de ver, en general, todos los microorganismos tienen parecidos
requerimientos de macro- y micronutrientes, aunque ha quedado claro que la forma en que
cada nutriente es captado puede variar mucho entre unas bacterias y otras, as como la
cantidad relativa de cada nutriente. Los microbilogos, en su trabajo cotidiano, estn
acostumbrados a manejar multitud de recetas o frmulas correspondientes a muchos tipos de
medios de cultivo.
Un medio de cultivo es una solucin acuosa (bien como tal, o bien incorporada a un
coloide en estado de gel) en la que estn presentes todas las sustancias necesarias para el
crecimiento de un(os) determinado(s) microorganismo(s). Los medios de cultivo se pueden
clasificar, en primera instancia, en tres grandes tipos:
1) Medios complejos o indefinidos: su composicin qumica exacta se desconoce, ya que
son el producto de realizar infusiones y extractos de materiales naturales complejos:
Ejemplos:
Digeridos crudos de extracto de carne
Digeridos de extracto de levadura
Digeridos de peptona de carne o de soja

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Digeridos de casena (de la leche).

Con ellos se logra un tipo de medio rico nutricionalmente, aunque indefinido
qumicamente. Si lo que pretendemos simplemente es obtener un buen crecimiento bacteriano,
este tipo de medios es ideal, ya que su confeccin es fcil y rpida (basta pesar una cierta
cantidad del extracto desecado, suministrado por casas comerciales, disolverlo en agua y
esterilizar en autoclave, antes de inocular e incubar la bacteria con la que queramos trabajar).
Estos medios contienen fuentes variadas de C y N orgnicos, sales minerales y
micronutrientes. Sin embargo, con ellos no podemos tener un control nutricional preciso, ya que
desconocemos la composicin qumica y proporcin exacta de los distintos nutrientes.
2) Medios sintticos o definidos: se obtienen disolviendo en agua destilada cantidades
concretas de distintas sustancias qumicas puras, orgnicas y/o inorgnicas. La composicin
concreta de un medio sinttico depender de la bacteria que queramos cultivar: lgicamente,
un medio definido para una bacteria con grandes capacidades biosintticas ser ms sencillo
que el medio definido de otra bacteria con menores posibilidades biosintticas. En la tabla
siguiente se dan las composiciones de sendos medios sintticos para dos bacterias diferentes.
___________________________________________________________________________
Medio sinttico para Escherichia coli

Medio sinttico para Leuconostoc mesenteroides

K HPO

7.0 g

K HPO

0.6 g

KH PO

2.0 g

KH PO

0.6 g

(NH ) SO

1.0 g

NH Cl

3.0 g

MgSO

0.1 g

MgSO

0.1 g

CaCl

0.02 g

Glucosa

25 g

Glucosa

10 g

acetato sdico

20 g

4 2

microelementos:
(Fe, Co, Mn, Zn, Cu, Ni, Mo) 2-10 mg cada uno
agua destilada

1000 ml

aminocidos (los 20)

100-200 mg cada uno

purinas (adenina, guanina)

10 mg cada una

pirimidinas (uracilo, xantina), 10 mg cada una

vitaminas: biotina, flico,
nicotnico, piridoxal, piridoxamina,
piridoxina, riboflavina, tiamina,
pantotnico, PABA)......
0.01-1 mg cada una
elementos traza

2-10 mg cada uno

agua destilada

1000 ml

___________________________________________________________________________
Como se puede deducir de la tabla anterior, Escherichia coli posee muchsimas capacidades biosintticas, ya que puede crecer
en un medio confeccionado exclusivamente a base de glucosa y sales minerales. (An ms impresionantes son las bacterias
autotrofas, que ni siquiera requieren fuente orgnica de carbono, y se apaan con medios a base de sales solamente).

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En cambio, Leuconostoc, a ms de fuente orgnica de C y sales similares a las necesitadas por E. coli, precisa una enorme
diversidad de sustancias adicionales, incluyendo todos los aminocidos proteinogenticos, las bases nitrogenadas y un buen
muestrario de vitaminas.

3) En tercer lugar, podemos fabricar un tipo de medio mezcla de los anteriores, denominado
medio semisinttico: llevan algunas sustancias qumicas cuya naturaleza y cantidad
conocemos, junto con sustancias de naturaleza y composicin indefinidas.
Cualquiera que sea el tipo de medio, de los tres que acabamos de citar, podemos elaborar dos
tipos de versiones, segn su estado aparente:
medios lquidos (por ejemplo, los dos de la tabla)
medios slidos: derivan de los lquidos simplemente aadiendo a la solucin nutritiva un
coloide en estado de gel, que solidifica (da consistencia) a esta solucin.
En los primeros tiempos de la Bacteriologa slo se conoca como sustancia gelificante
incorporable a los medios la gelatina. Sin embargo, presenta muchos inconvenientes, ya que
o

funde a 25 C (por encima de esta temperatura el medio se lica), y adems, muchas bacterias
presentan gelatinasas que hidrolizan la gelatina.
El gelificante ms usado es el agar-agar, extrado de algas rojas (p. ej. Gelidium), del cual
existen versiones ms o menos purificadas (las ms puras estn ms enriquecidas en el
polisacrido agarosa; son las que se emplean para los medios definidos, con objeto de evitar la
introduccin de sustancias "contaminantes" inadvertidas que falseen las interpretaciones sobre
el comportamiento nutricional de la bacteria). El agar presenta la gran ventaja de que una vez
o

gelificado, no funde hasta cerca de los 100 C, lo que permite su uso para la inmensa mayora
de bacterias, que son mesfilas. Un comportamiento notable del agar es que una vez fundido
(a 100C), no gelifica (solidifica) hasta los 45C. En este margen de temperatura hasta el lmite
de solidificacin de 45C se dice que el agar est en sobrefusin.
Para cultivar ciertas bacterias (sobre todo los quimioautotrofos) se suele recurrir a un gelificante
inorgnico, el silicagel o gel de slice.
Finalmente, introduciremos otra serie de conceptos relativos a medios de cultivo, que al igual
que los anteriores, sern tratados con la suficiente amplitud en las sesiones de clases
prcticas:
Medios selectivos son aquellos que permiten seleccionar un tipo (o unos pocos tipos) de
microorganismos. En el laboratorio se emplean mucho medios selectivos slidos que
incorporan ciertas sustancias que inhiben el crecimiento de ciertas bacterias, pero permiten el
crecimiento de otras. (P. ej. medios que llevan violeta cristal inhiben el crecimiento de bacterias
Gram-positivas.
Medios diferenciales son aquellos que permiten distinguir a simple vista dos o ms tipos de
bacterias en funcin de su distinto comportamiento respecto de algn nutriente del medio. Ese
comportamiento diferencial se traduce normalmente en un viraje de color de una sustancia
indicadora presente en el medio.
Ejemplos:
en el medio EMB (eosina-azul de metileno) ciertos tipos metablicos de bacterias
producen cambios de color y precipitacin de sales cuando producen cidos por

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fermentacin de ciertas fuentes de carbono.

El medio llamado agar-sangre lleva un 5% de sangre de caballo o carnero, lo cual revela
la capacidad (y el tipo) de hemolisis de ciertas bacterias.
Algunos medios son simultneamente selectivos y diferenciales.
P. ej., el agar de MacConkey, que el alumno manejar en la segunda tanda de prcticas.
Se trata de un medio de color rosado y transparente, que posee, entre otras sustancias,
lactosa, peptonas, el colorante vital rojo neutro, sales biliares y violeta cristal.
Este medio es selectivo contra muchas bacterias Gram-positivas debido al violeta cristal, y
tambin contraselecciona muchas Gram-negativas debido a las sales biliares (que son agentes
tensioactivos que desorganizan muchas membranas externas). En cambio, las Enterobacterias
estn evolutivamente adaptadas a soportar sales biliares en su hbitat natural (el intestino de
vertebrados superiores), y pueden crecer en este medio.
En su faceta de medio diferencial, el agar MacConkey permite visualizar dos tipos de
Enterobacterias segn que puedan o no fermentar la lactosa, con produccin de cidos. Las
+

bacterias fermentadoras de lactosa (Lac ), excretan al medio gran cantidad de cidos

orgnicos, lo que provoca que sus colonias, y sus alrededores aparezcan de color rojo intenso,
debido al viraje del rojo neutro; adems, se forma un halo turbio a cierta distancia de estas
colonias, fenmeno ocasionado por la precipitacin de las sales biliares inducida por la acidez.
-

En cambio, las bacterias Lac , al no poder usar la lactosa, recurren como fuente de C a las
+
4

peptonas, a las que desaminan: incorporan el esqueleto carbonado, excretando iones NH ,

que alcalinizan el medio de cultivo, lo cual se traduce en que el indicador rojo neutro vira a
amarillo.
NOTAS

[1] .- Quiz llame la atencin del lector no ver citado aqu el Na. De hecho, el Na no es un
requerimiento universal en las bacterias; slo lo necesitan ciertos procariotas marinos, de
lagunas saladas, cianobacterias y anoxifotobacterias.
[2] Existen ejemplos de nitrogenasas alternativas en las que no existe FeMo-co, sino
cofactores de hierro y vanadio (FeVa-co) o cofactores con solo sulfuro de hierro. Se supone que
estas nitrogenasa funcionan solo mecanismos de apoyo cuando en el medio no hay suficiente
molibdeno.

[ Introduccin e Historia ] [ Rasgos generales procariotas ] [ Tamao y forma ]

[ Estructuras superficiales ] [ Paredes procariotas ] [ Sntesis peptidoglucano ]
[ Membrana y transporte ] [ Citoplasma y su contenido ] [ Apndices filamentosos procariotas ]
[ Diferenciaciones celulares ] [ Captacin de energa ] [ Nutricin microbiana ]
[ Ciclo celular y crecimiento ] [ Agentes fsicos ] [ Agentes qumicos ] [ Regulacin gnica ]
[ Mutaciones en procariotas ] [ Recombinacin. Transformacin ] [ Conjugacin ]
[ Transduccin ]
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