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CAPITULO 6

CRECIMIENTO MICROBIANO

CRECIMIENTO CELULAR

Es el aumento en la cantidad de constituyentes y


estructuras celulares.
Es el resultado tanto del cambio en el tamao celular como
de la reproduccin celular.
Los microorganismos en un medio de cultivo apropiado, se
reproducen empleando los nutrientes que le aporta el medio
de cultivo para producir nuevos microorganismos.
Hay tres aspectos determinantes del crecimiento
microbiano:
Los factores del crecimiento.
La estequiometria del crecimiento. que depende de la
composicin del medio de cultivo
La cintica, que indica la velocidad del proceso.

1.- FACTORES DEL


CRECIMIENTO MICROBIANO
1.1.- REQUERIMIENTOS FISICOS
Temperatura
pH
Actividad de Agua
Presin Osmtica

1.a.- Temperatura
Cada microorganismo prefiere una T de desarrollo.
Temperatura mnima, por debajo de ella no hay crecimiento
Temperatura ptima a la que la velocidad es mxima.

La falta de crecimiento a temperaturas bajas se debe a:


Reduccin en la velocidad de reaccin, segn leyes cinticas)
Cambio de estado de los lpidos. (aumento de viscocidad).
El incremento de la velocidad de crecimiento con la temperatura se
debe al incremento de la velocidad de las reacciones enzimticas.

Tipos microbianos
Sicrfilos: -5 20C, ptimo < 15oC
organismos marinos, algas: Chlamydomonas nivalis
(nieve rosada), bacterias: Pseudomonas, Flavobacterium
membrana con alto % de c. grasos insaturados
Mesfilos 15-45 C, ptimo: 30-40C
Mayora de los m.o (del suelo, aguas, patgenos)
Termfilos 40-70C, ptimo de 55-65oC
Tienen membrana con alto % de cidos grasos saturados,
y enzimas estables al calor
Bacillus stearothermophilus, (compostaje)
Hipertermfilos 80-113C, ptimo > 90o
Pyrococcus, Pyrodictium (aguas termales)
Altas temperaturas desactivan las enzimas y producen
dao celular.

1.b.- pH

El pH interno en mayora de m.o est entre 6.0 a 7.0.


Los rangos de pH tolerables son distintos.
Hay microorganismos acidfilos que pueden vivir a pH=1.0 y
alcalfilos que toleran pH=10.0
Por efecto del metabolismo, el pH del medio suele bajar.
Si la nica fuente de nitrgeno es
amonio, se produce liberacin de
iones H, bajando el pH.
Si la fuente de nitrgeno es solo
nitrato, se deben tomar iones H
del medio para formar amonio,
subiendo el pH.
La bajada del pH que producen
ciertos
microorganismos
les
confiere ventaja selectiva frente
a otros competidores.
Ejplo.
Bacterias
lcticas.
Reducen el pH del medio a 4.5.
La evolucin del CO2, tambin
hace variar el pH.

1.c.- Disponibilidad del agua


Los microorganismos necesitan presencia de agua, en
forma disponible, para crecer y llevar a cabo sus funciones
metablicas.
La disponibilidad de agua se mide como actividad de agua
(aw).
aw: Es la relacin entre la presin de vapor de agua del
medio (P) y la presin de vapor del agua pura (Po).

Algunas molculas del agua se orientan en torno a las


molculas del soluto y otras quedan absorbidas por
componentes insolubles de las soluciones. En ambos
casos, el agua queda en una forma menos reactiva.

Actividad del agua (aw)y Presin osmtica


La presin osmtica est relacionada con aw por la expresin
V . = R.T.Ln.aw
Donde: R= constante de los gases, T= temperatura absoluta, la
presin osmtica, y V el volumen molar parcial del agua
: Puede definirse como la presin que se debe aplicar a una
solucin para detener el flujo neto de disolvente a travs de una
membrana semipermeable.
alta, causa prdida de agua y plasmlisis celular. (hipertnico)

Valores mnimos: bacterias aw >0.90, levaduras aw>0.85, hongos


filamentosos aw >0.80.
La utilizacin de almbares, salmueras y salazones reducen la actividad
de agua de los alimentos, y permite su conservacin. (ejemplo
mermeladas, leche condensada, etc)

Halfitos.
El agua de mar tiene una concentracin del 3%. Los m.o. halfilos:
requieren condiciones salinas:
Discretamente halfilo (1-6%),
Moderadamente halfilo (6-15%),
Halfilos extremos (15-30%)
La principal estrategia de los m.o halfilos para adaptarse al estrs
osmtico es la acumulacin de compuestos en el citoplasma para
compensar la presin osmtica externa. (Gonzales Hernandez y Pea)

La salinidad promedio del agua de los ocanos est entre 3,1


3,8%, en Mar muerto es 28%.
All solo viven microorganismos halfilos: un protozoo ciliado,
algunas algas y bacterias de los gneros Flavobacterium,
Halococcus y Halobacterium, y las artemias.
Debido a la elevada densidad de sus aguas (1240 kg/m) una
persona puede flotar, en el mar (1 027 kg/m).

1.d.- Concentracion de oxigeno.


El oxigeno se introduce al caldo de cultivo normalmente
esparcindolo en el medio.
La transferencia del oxigeno desde las burbujas de gas,
hasta las clulas esta limitada por la transferencia de
oxigeno a travs de la pelcula liquida que rodea las
burbujas de gas

2.- FORMAS DE CULTIVO


Las fermentaciones, pueden clasificarse en: continua,
semicontinua o intermitente.

2. a.- PROCESO INTERMITENTE. Fermentacin Batch.


Se refiere al crecimiento de clulas en sistema cerrado.
En el inicio del cultivo, el medio estril se inocula con un
volumen adecuado de microorganismos y se permite que se
lleve a cabo la fermentacin en condiciones ptimas. A lo
largo del proceso no se aade nutriente nuevo, por lo que se
produce su agotamiento.
Esto ocasiona cambios fisicoquimicos en el medio que dan
origen a fases tpicas de un Ciclo de crecimiento
microbiano.

Crecimiento microbiano en medio lquido

Fase lag. Adaptacin al nuevo ambiente.


Fase exponencial (log) - velocidad mxima de crecimiento
bajo condiciones particulares.
Fase estacionaria - sin crecimiento neto, vc=0.
vc=vm (vel. crecimiento = vel de muerte), por nutrientes
limitantes, acumulacin de desechos, inhibicin del crecimiento
Fase de muerte. velocidad de muerte celular > velocidad de
divisin celular

Fase de latencia
Cuando se introduce un inoculo en medio fresco, el
crecimiento usualmente no comienza de inmediato sino
despus de un tiempo llamado de latencia o
acostumbramiento.
En este periodo de transicin los microorganismos,
reorganizan sus contituyentes celulares, producen las
enzimas necesarias para aprovechar un nuevo medio
ambiente, e inhiben otras que no necesitan. Estos cambios
suceden segn los mecanismos de regulacin de los
procesos bioqumicos, vistos anteriormente.
En esta fase no hay incremento en el nmero de clulas,
pero hay actividad metablica, aumento en el tamao
individual de las clulas, en el contenido proteico, ADN y
peso seco de las clulas.

Factores que afectan la fase de latencia


Generalmente la fase de latencia aumenta con la edad del
inoculo.
Si un cultivo que est creciendo en fase exponencial es
inoculado al mismo medio de cultivo bajo las mismas
condiciones de crecimiento, no se observa fase de latencia
y el crecimiento exponencial sigue a la misma velocidad.
Se puede producir una pseudo fase de latencia, cuando el
inoculo es pequeo o con baja porcin de clulas viables.

Si se desea minimizar la fase de latencia es


recomendable:
- Las clulas deben estar adaptadas a las condiciones del
medio donde crecer.
- Las clulas debe ser jvenes (en fase exponencial)
- El tamao del inoculo debe ser entre el 5% y 10% v/v.

Fases de latencia mltiples.


El crecimiento diaxico es un tipo de
crecimiento microbiano que tiene lugar cuando
hay presentes dos sustratos diferentes que
pueden ser utilizados como fuente de carbono.
En este caso se observa una curva de
crecimiento bifsica debido a la utilizacin
secuencial de distintas fuentes de carbono.
El metabolismo del organismo es selectivo para
uno de los sustratos (se usa la fuente de
carbono que permite un crecimiento ms rpido)
y cuando la agota, comienza a metabolizar el
otro.
En bacterias lcticas, por ejemplo, la presencia
de glucosa que es fcilmente asimilable, induce
un efecto de represin por catabolito sobre
el opern lac que es necesario para el
metabolismo de la lactosa, un disacarido de ms
difcil asimilacin. Como consecuencia se
produce un crecimiento diaxico en medios de
cultivo que contienen una mezcla de glucosa y
lactosa.

Fase exponencial o fase logartmica


Es el perodo en el cual, cada vez que pasa un tiempo de
generacin la poblacin microbiana se duplica.
En esta fase la concentracin de nutrientes es alta, y la tasa
de crecimiento celular es independiente de la concentracin
de nutrientes.
Es un periodo de crecimiento balanceado, en el cual todos
los componentes celulares se incrementan en la misma
proporcin.

Fase de desaceleracin.

En esta fase el crecimiento desacelera debido a la escases de


algn nutriente esencial o de la acumulacin de algn producto
toxico, resultado del crecimiento previo.
Estos factores ocasionan un crecimiento desbalanceado,
ocasionando cambios en las estructuras celulares, para aumentar
sus perspectivas de crecimiento en un medio hostil.
Un ejemplo de producto inhibitorio es el etanol producido por las
levaduras alcohlicas.
Si de algn modo se remueve el producto toxico, puede haber
una nueva fase de crecimiento.

Fase estacionaria

En esta fase la velocidad de muerte celular se iguala a la


velocidad de reproduccin de las sobrevivientes.
En esta fase las clulas sobrevivientes, producen metabolitos
secundarios (como los antibiticos).
Las limitaciones del crecimiento ocurren por: agotamiento de
algn nutriente esencial, por acumulacin de productos txicos, o
por una combinacin de las causas anteriores.

Fase de muerte
Ocurre una disminucin progresiva en el nmero de
clulas viables.
velocidad de muerte celular > velocidad de divisin celular
Cuando la concentracin de sustrato es mnima, la clula
se ve forzada a metabolizar su propio protoplasma (se
conoce como metabolismo endgeno)
Manejo industrial.
La fase de latencia, no es deseable, por que se pierde
tiempo y acarrea prdidas econmicas
Para minimizar esta fase, se hace crecer el inculo aparte,
en un medio de cultivo igual al que se va a emplear en el
bioproceso (cultivo o fermentacin) y luego se procede a
transferirlo cuando las clulas ya se encuentran en la fase
exponencial (inoculacin).

Ventajas y Desventajas del proceso batch.


Su mayor ventaja es la sencillez.
Desventajas: alto requerimiento de mano de obra, y
demasiados tiempos muertos.
Tiempos muertos: Fase de adaptacin, fase de
decaimiento, periodo de descarga, y renovacin de la carga
del reactor para un nuevo batch.

2,b.- Proceso semicontinuo

Se operan de forma similar a los batch, pero slo se cosechan


parcialmente a intervalos regulares, reponiendo con medio fresco.
Es como repetir un cultivo batch indefinidamente, pero ahorrando
la mayor parte del tiempo de servicio entre lotes.

Los parmetros a controlar: volumen y tiempo de adicin, se calculan de


modo que el cultivo se mantenga en fase logartmica.
Si el volumen extrado es muy grande puede diluirse el medio, tanto que
la masa microbiana puede volver a la fase de acostumbramiento.
Si el volumen extrado es muy pequeo para igual tiempo el cultivo
puede agotarse y pasar a la fase estacionaria.
Si el tiempo de renovacin es muy grande el cultivo puede alcanzar la
fase estacionaria y si es muy pequeo el cultivo puede regresar a la fase
de acostumbramiento.

2.c.- Proceso en cultivo continuo


Constantemente se suministra
nuevo medio de cultivo al
bioreactor, con agitacin, y se
retira producto y clulas.
Cuando el sistema alcanza
estado estacionario, la
concentracin de clulas,
productos y sustrato permanecen
constantes.
Se usa, cuando el producto de
inters se sintetiza en la fase
logartmica. Por tanto, interesa
que las bacterias estn en esa
fase el mayor tiempo posible,
para lo que requieren ms medio.
Sistemas de control: quimiostato
y turbidostato

Control por quimiostato


El elemento de control es la
concentracin de un nutriente limitante (C
o N).
Los dems nutrientes en el medio se
encuentran en exceso.
Los parmetros a tener en cuenta son:
F (m3/h);
volumen del reactor (m3);
densidad celular (x);
factor de dilucin (D): Es la relacin entre el
caudal de alimentacin, y el volumen de
cultivo. D=F/V (h -1)
D indica las veces que se renueva el
volumen del biorreactor por unidad de
tiempo.
D= 0.25 h-1 indica que en una hora se
renov 25 % del volumen de cultivo, o bien
que cada 4 h se renueva el volumen de
cultivo.

Si la tasa de crecimiento se hace igual al factor de dilucin


(D), entonces dx/dt=0. Por tanto, la cc de las clulas se hace
constante (x=x) y el cultivo se encuentra en estado
dinmico de equilibrio.
Con altas tasas de dilucin el cultivo puede drenarse
totalmente (DC: dilucin crtica). Es decir, el cultivo se lava
porque su velocidad de crecimiento es inferior a la tasa de
dilucin.
A muy bajas diluciones (D) el quimiostato no funciona si el
nutriente limitante es la fuente de energa. Ello se debe a que
en esas condiciones, la fuente de energa slo se usa para
reacciones de mantenimiento de la integridad celular, pero
no queda para el crecimiento.

Aplicaciones:
Procesos industriales de fermentacin (produccin de
bebidas alcohlicas, de aminocidos, etc)
Su aplicacin ms conocida es para la depuracin de
aguas residuales, por procesos aerbicos o anaerbicos.
El medio de cultivo fresco es el agua residual que
entra en la planta y alimenta a los fangos activados por MO
que luego se retiran por decantacin

Turbidostato: elemento de control, la turbidez.


La alimentacin se regula mediante el monitoreo de la
densidad ptica del cultivo. Se alimenta medio fresco cuando
la turbidez supera un lmite prefijado.
Se usa menos que el quimiostato

3.- DETERMINACION DE LA
CONCENTRACION CELULAR
Existen diversos mtodos, con diferentes propuestas de
clasificacin.
Se pueden agrupar en dos:
mtodos directos y
mtodos indirectos.

Directos obtienen una medida de la masa celular por:


Tcnicas de conteo,
Medida de concentracin de masa celular: peso celular,
absorbancia.
Indirectos miden la concentracin de algn componente
celular (ADN, protenas, etc).

a. Conteo celular

Se cuentan directamente las clulas.


En este mtodo la suspensin de la muestra se coloca en una
cmara de recuento, que tiene una micro-cavidad cuadriculada de
dimensiones conocidas, y se tapa con el cubre objetos. Como se
conoce el rea de las cuadrculas y la altura de la cmara, el
volumen ocupado por la suspensin en cada cuadrculas queda
determinado.

Existen cmaras especificas como: Cmaras de Neubauer, de


Petroff-Hausser, de Sedgewick Rafter, etc.
Para obtener el nmero de clulas/ml de suspensin, se cuenta el
nmero de clulas en varias cuadriculas, se calcula el promedio y se
multiplica por el factor correspondiente.
Estos mtodos presentan algunas limitaciones:
-La precisin es difcil de lograr
-El mtodo no es adecuado para suspensiones con menos
7

Cuadrado de 3 x 3 mm.
Cmara de
El rea sombreada y marcada L es 1
mm2.
La depresin tiene 0.1 mm de
profundidad.
El volumen de la superficie L, bajo el
cubreobjetos es de 0.1 mm3 (0.1
microlitro)
Los cuadrados L estn subdivididos
en 16 cuadraditos de 0,0025 mm2
cada uno.
El cuadrado del centro es usado para
conteo de bacterias, y se divide en 5
cuadrados por lado con una longitud
lateral de 0,2 mm, y superficie de 0,04
mm2.
Al
contar
las
cuatro
reas
sombreadas (L), si hay un total de X
clulas entre las cuatro reas, la
concentracin en la suspensin celular
ser: = 10000 (X/4) clulas/mL

Neubauer

Tcnica de conteo
Para que las clulas, no se cuenten dos
veces, se siguen las siguientes reglas:
-Se cuentan las clulas dentro de la zona
definida.
- Tambin se cuentan las clulas, que se
apoyan o tocan en dos caras, por ejemplo,
en la lnea de medida izquierda y superior.
Otras recomendaciones de conteo.
Efectuar conteo en forma de meandro
El diafragma del condensador en el
microscopio deber estar cerrado en gran
parte.
- El valor medio de los conteos se aplica
luego en una frmula de clculo o se
multiplica por el factor correspondiente.

Cmara Petroff-Hausser
El retculo, est dividido en 25 cuadrados grandes
Cada cuadrado grande tiene 16 cuadraditos
Volumen de la cmara= 0,02 mm3
rea de la cmara 1 mm2
Calculo:
Se observan 12 clulas/cuadrado.
12 x 25 = 300 (nmero de clulas en 0,02 mm3).
300 x 50= 15000 (nmero de clulas en 1 mm3)
15000 x 1000 = 1,5 x 107 (nmero de clulas en 1 mL)

Cmara de conteo SEDGEWICK RAFTER


Es una cmara graduada de 50 x 20 x 1 mm. El rea total
es de 1000 mm2 y el volumen de 1000 mm3 o 1 ml.
Tiene grabados 1000 cuadrados, cubierto por un
cubreobjetos.
Se usa para contar plancton en un microscopio
compuesto o en microscopio invertido. (Moreno et al, 2012)

b) Equipos automticos
"Cell Coulter" de Beckman-Coulter
Mide los cambios en la resistencia elctrica
que se producen cuando una partcula no
conductora en suspensin en un electrolito
atraviesa un pequeo orificio.
El contador consta de dos cmaras
separadas por un material no conductor, en
el que hay un orificio de tamao similar al de
las clulas.
Ventajas y desventajas:
Es posible contar y medir varios miles de
partculas por segundo.
Las limitaciones de este mtodo son:
- Se cuentan clulas vivas y muertas.
- Las suspensiones deben estar
libres de partculas diferentes a los
microorganismos, por que el aparato no
puede distinguir entre una u otra.

c.- Conteo de celulas viables


En los mtodos anteriores se determina el nmero de
clulas totales, pero en muchos casos nicamente interesa
contar clulas viables. (clula que es capaz de dividirse y
forma una progenie)
Se puede hacer por:
- recuento en placa (UFC).
- numero mas probable (NMP)

c.1.- Conteo en placas.


En este procedimiento se
realizan diluciones
seriadas de la muestra
Se inoculan pequeos
volmenes conocidos, de
cada dilucin, en placas
de Petri con un medio
slido adecuado y se
extiende con una varilla
de vidrio
Luego las placas se
incuban en las
condiciones optimas
hasta que aparezcan las
colonias.

Se asume que cada colonia ha sido formada por una nica


clula del medio de cultivo original. Esta suposicin puede
subestimar la densidad de poblacin.
Las clulas son entonces medidas como unidades
formadoras de colonia UFC.
Para realizar el recuento se seleccionan las placas de la
que contengan entre 25 y 250 colonias.

Ejemplo.
En un recuento en placa, se hacen diluciones seriadas con factor
de dilucin 100, para ello se toma 1 mL del caldo bacteriano, y se
aade a un frasco de dilucin que contiene 99 mL del diluente
adecuado. Se agita y se toma de esta dilucin 1 mL y se transfiere
a un segundo frasco con 99 mL del diluente, se agita y se toma de
esta segunda dilucin 1 mL y se transfiere a un tercer frasco de
dilucin que contiene 99 mL del diluente.
De cada dilucin se siembran por triplicado muestras de 1 mL, se
incuban por 24 horas y se cuentan las colonias.
Si el promedio de las placas de la segunda dilucin, es de 32
colonias. Determine la concentracin celular en la muestra.
Solucion.
Ci = X
Primera dilucion: 1:100 10-2
Segunda dilucion: 1:10.000 10-4
Tercera dilucion : 1:1.000.000 10-6
Respuesta: 32x10,000 = 3.2x105 UFC

Ventajas y desventajas
Ventajas.
Se usa frecuentemente, para estimar poblaciones
bacterianas en leche, agua, y otros productos.
Es fcil de realizar y se adapta a la medicin de
poblaciones de cualquier densidad.
Desventajas:
Tiempo largo, (requieren 24 horas)
Exigen muy buenas tcnicas de esterilizacin
Puede dar errores cuando se trata de clulas agregadas

Placas petrifilm (3M)


Son placas prefabricadas
con el medio de cultivo
adecuado para el
microorganismo que se
desea contar.
Las placas Petrifilm de 3M
para Coliformes dan
resultados en 24 h.
Tres etapas:
1) Sembrar. Levantar la
pelcula y aadir la muestra
2) Incubar. El diseo de las
placas ahorra espacio en la
estufa
3) Contar. Las colonias rojas
asociadas a burbujas de gas.

c.2.- Nmero mas probable (NMP)


Llamada tcnica de dilucin en tubo, da una estimacin estadstica
de la densidad celular.
Al aumentar la dilucin, se alcanza un punto en el que algunos
tubos no contienen ningun microorganismo. Al calcular la
probabilidad de que los tubos no hayan recibido ninguna clula, se
puede estimar el nmero ms probable de microorganismos
presentes en la muestra original, a partir de una tabla estadstica.
Se usan las tablas de Cochran.
El NMP es una afirmacin que existe 95% de probabilidad que la
poblacin bacteriana sea de rango correcto.
Este mtodo es til cuando las bacterias a contar no crecen en
medios slidos, o cuando la bacteria puede crecer en un medio
lquido diferencial, como sucede con las bacterias coliformes, que
usan selectivamente lactosa.
La precisin del mtodo del nmero ms probable aumenta con el
nmero de tubos que se usan; cinco tubos por dilucin se considera
como una relacin adecuada entre precisin y economa.

Nmero mas probable (NMP) para 6 tubos, lectura


6,3,1
10 mL de inculo

6 tubos positivos
(com crescimento
bacteriano)

1 mL de inculo

0,1 mL de inculo

3 tubos positivos

1 tubos positivos

Tabla: NMP de
bacterias por 100 g
(ml) de material
analizado
empleando cinco
tubos inoculados
con 10, 1 y 0.1 ml o
g de material

Tomada de:
Enumeration of
coliforms, faecal
coliforms and of e. Coli in
foods using the MPN
methoD MFHPB-19 April
2002 por Donna
Christensen Crawford y
Rick Szabo

Uso de la tabla
Consideremos positivos los siguientes cultivos:
(1) 5 tubos inoculados con 10 ml de dilucin (1/10) del material :
los cinco (5) son postivos
(2) 5 tubos inoculados con 1 ml de dilucin (1/10) del material:
solo uno (1)es positivo
(3) 5 tubos inoculados con 1 ml de dilucin (1/100) del material:
ninguno (0) es positivo
Cada uno de los cinco tubos de las tres diluciones representan
respectivamente a 1, 0.1 y 0.01 g (ml), del material analizado.
La lectura se toma en la ubicacin de la Tabla correspondiente a la
lectura 5-1-0 (NMP de 33) si se hubiesen utilizado 10, 1 y 0.1 g (ml)
de material.
Como se usaron cantidades 10 veces menores (1/10) de aquellas
con las que se construy la tabla, el valor de 33 debe multiplicarse
por 10, lo que proporciona un valor de 330 organismos por 100 ml
de material.
Como usualmente se expresa por g (ml) de material, este valor
(330) debe dividirse por 100. El recuento obtenido por el NMP es
en este caso de 3,3 organismos por ml de material analizado.

c.3.- Membranas Filtrantes


En poblaciones con menos de una clula por mililitro (agua de
piscina), no son aplicables los mtodos UFC o NMP. La muestra
debe concentrarse antes del recuento, por filtracion.
Se hace pasar la muestra que contiene los microorganismos a
travs de una membrana de acetato de celulosa (0.45m).
Los microorganismos quedan retenidos en la membrana filtrante,
la cual se retira y se coloca en una placa de Petri con un medio de
cultivo adecuado.
Despus de incubar, aparecen sobre la membrana las colonias
de los microorganismos.

d. Peso seco.
Secar volmenes conocidos de medio con las clulas en
crecimiento, hasta obtener un peso constante.
Es til para grandes volmenes.
Para levadura se puede usar una centrfuga con
velocidades de 4-6x103rpm. Se obtiene una masa hmeda
de clulas, luego esta masa se lava y seca a 80C por 24
horas, y se pesa.
En clulas bacterianas, se usan filtros de membranas para
obtener la masa celular hmeda, y luego se seca. (1 mg de
peso seco equivale a una masa bacteriana de 5 x 10 9
bacterias)
Puede ser usada cuando el medio no contiene slidos en
suspensin.
Desventajas:
Los componentes voltiles de la clula pueden perderse.
La muestra seca puede recobrar humedad durante el
pesado.
Requiere muestras muy grandes y son lentos.

e. Absorcin de luz.
Consiste en hacer incidir una luz monocromtica a la
suspensin de microorganismos, y medir la luz transmitida a
travs de la suspensin, que es inversamente proporcional a
la concentracin de biomasa, segn la ley de Beer.
Usar, turbidmetro o espectrofotmetro 600- 700 nm.
Se necesitan de 10 millones a 100 millones de clulas por
mililitro para hacer una suspensin suficientemente turbia
para ser leda.

Previo se hace una curva de


calibracin que relacione
medidas directas (recuento en
placa o microscopa) con las
indirectas de turbidez
Teniendo esta curva, se
podr determinar las ufc/ml
de otras muestras luego de
leer la absorbancia de las
mismas.
Valores altos de OD
(mayores a 0.3) afectarn la
linealidad en la respuesta.
El principal inconveniente es
que no distingue clulas vivas
de muertas, o entre clulas y
otras particulas. Sin embargo,
es una tcnica que puede ser
utilizada on-line para
mediciones continuas

f. Masa de un componente celular.


Medida de algn componente celular que sea parte
constante del peso seco total de las clulas.
Pueden ser: protenas, nitrgeno, ADN, RNA, y ATP
celulares, los cuales estn presentes en cantidades mas o
menos constantes por especie.
Se detecta la presencia de ATP, por bioluminiscencia
usando luciferasa, aunque hay algunos problemas
experimentales que hacen que la tcnica sea
controvertida.

e. Efectos fsicos.
Se puede medir la
variacin de algn
factor externo por
efecto del
crecimiento celular,
tales como; el calor
generado por el
crecimiento, o el
oxgeno captado
por el medio, y que
deja un vaco
medible.

Para CO2.
CO2 + 2NaOH Na2CO3 + H2O
Na2CO3 + BaCl2 BaCO3 + 2NaCl
NaOH (residual) + HCl NaCl + H2O
1.Muestra de suelo, 2.Recipiente con agua
3.Solucin de NaOH 0.5 N
4.Aguja #20 (Venocat calibre 17)
5.Jeringa desechable de 20mL
6.Tubo de plstico flexible de 1-2 mm de
dimetro

4.- ESTEQUIOMETRIA
Estudia el grado en que un microorganismo puede
transformar los componentes del medio de cultivo en nuevas
clulas (biomasa) y productos.
El crecimiento de poblaciones microbianas es en realidad,
el resultado de miles de reacciones intracelulares.
En un medio nutricional adecuado, los microorganismos,
extraen nutrientes del medio y los convierten en
componentes celulares.
4.1.- Conceptos importantes: C-mol de biomasa, grado de
reduccin, y calor de reaccin.

4.1.a.- C-Mol de biomasa.


Es la cantidad de biomasa que contiene 1 tomo gramo de C.
se puede definir la composicin de un microorganismo
promedio como: (% p/p): C = 46,5; H = 6,94; 0 = 31,0 y N =
10,85, el 5 % restante son sales.
Teniendo en cuenta esto, se escribe una frmula mnima del
m.o. promedio como: C H1,79O0,5N0,2 (que representa el 95%
p/p de la biomasa)
Por tanto, se tiene:

De forma anloga, se puede definir:


1 C-mol de sustrato (fuente de carbono y energa, FCE),
Ejemplo, 1 C-mol de glucosa (C6H12O6), se representa por CH2O
y pesa 30 g, y 1 C-mol de etanol (C2H60) se representa por
CH3O0.5 y pesa 23 g.
En general para un compuesto de la forma CnHlOqNm, 1 C-mol
esta representado por: C Hl/n Oq/n Nm/n.

4.1.b.- Grado de reduccin


Es til para plantear los balances de materia y energa.
En las siguientes reacciones de oxidacin, se tiene:
C + O2. CO2
=4
CH4 + 2O2 CO2 + 2H2O
=8
CO + 0,5 O2 CO2
=2
CH2O + O2 CO2 + H2O
=4
CH3O0,5 + 1,5 O2 CO2 + 1,5 H2O
=6
se expresa, como n de e- disponibles/C-mol, y representa el
nmero de electrones transferidos del compuesto a oxidar al
oxgeno
Para calcular el valor de de un compuesto se toman los grados
de reduccin: 4 para el C; 1 para el H; -2 para el O y -3 para el N.
En el caso del CO2, H2O y NH3 no hay e- disponibles, y CO2 =
H2O = NH3 = 0.

En general para un compuesto CHaObNc, su grado de


reduccin est dado por:

= 4 + a - 2b - 3c
un compuesto con frmula Ch Hi Oj Nk, se lleva a la forma
CH i O jN k

Para el m.o. promedio su x (donde x indica biomasa) ser:

e d is p .
-

= 4 ,1 9

C - m ol

Este valor, junto al peso C-mol = 25,8 gr., son datos


regulares, y pueden emplearse en balances de materia y
energa, cuando se desconoce la composicin de biomasa.
el valor de es una medida de la energa contenida en un
compuesto.
En general para calcular el grado de reduccin de un
compuesto se plantea la ecuacin de oxidacin del mismo
a CO2 y H2O, y el valor de se obtiene multiplicando por 4
el coeficiente estequiomtrico del O2.

4.1.c.- Calor de reaccin. (q)


q: es la cantidad de calor liberado en una reaccin.
qo: es el calor de reaccin por mol de e- transferidos al O2 en Kcal/mol
e- disponibles. qo= q/
De la tabla surge que: La cantidad de calor liberado por mol de
electrones transferidos al oxgeno (q/), es prcticamente constante,
con un valor medio de qo = 27.5 k cal/mol electrones transferidos al O2

4.2.- Relaciones estequiometricas


Se puede establecer las relaciones estequiometricas a
travs de: balance de materiales, y los coeficientes de
rendimiento.

4.2.1.- Coeficientes de rendimiento


a.- Coeficiente de rendimiento biomasa-sustrato
Es la relacin entre la variacin de biomasa y la variacin del
sustrato. Yx/s= -X/S
Yx/s= Yx (Masa de clulas formadas/masa de sustrato
consumidos), es el rendimiento global.

El signo negativo, indica que x y s varan en sentido contrario


Si para obtener 30 gl-1 de levadura para panificacin, se consumen
60 gl-1 de fuente carbonada, el rendimiento ser Yx/s= 0.5 gr de
levadura/gr de sustrato.
Para organismos aerobios que crecen en glucosa se tiene que los
Yx/s tpicos son: para levaduras y bacterias vara entre 0.4 y 0.6 g/g.
En condiciones anaerobias el valor de Yx/s es menor.
yx (especifico). El yx se calcula conociendo el rendimiento global
Yx y los valores de Peso C-mol de X por:

b.- Coeficiente de Rendimiento biomasaoxgeno.


Esta dado por la relacin de biomasa producida y el
consumo de O2 del medio.(Yx/o2, qo)
Yx/o2= -X/O2
Yx/O2 para bacterias y levaduras aerobias que crecen en
glucosa es de 0.9 a 1.4 g/g
Un cambio en el sustrato ocasionar variaciones en el
valor del coeficiente.
Los mismos m.o, en las mismas condiciones, pero en
metano tendrn un Yx/O2 de alrededor de 0.2 g/g.

Coeficientes para m.o aerobios


Organismo

Sustrato

Yx/s

Yx/o2

g/g

g/mol

g/g-C

g/g

Maltosa

0.46

149.2

1.03

1.50

Manitol

0.52

95.2

1.32

1.18

Fructosa

0.42

76.1

1.05

1.46

Glucosa

0.40

72.7

1.01

1.11

Candida utilis

Glucosa

0.51

91.8

1.28

1.32

Penicillium chrysogenum

glucosa

0.43

77.4

1.08

1.35

Pseudomonas fluorescens

glucosa

0.38

68.4

0.95

0.85

Rhodopseudomonas spheroides

glucosa

0.45

81.0

1.12

1.46

Saccharomyces cerevisiae

Glucosa

0.50

90.0

1.25

0.97

Enterobacter aergenes

Ribosa

0.35

53.2

0.88

0.98

Succinato

0.25

29.7

0.62

0.62

Glycerol

0.45

41.8

1.16

0.97

Lactato

0.18

16.6

0.46

0.37

Piruvato

0.20

17.9

0.49

0.48

Acetato

0.18

10.5

0.43

0.31

Enterobacteraergenes

Coeficientes para m.o aerobios


Organismo

Sustrato

Yx/s

Yx/o2

g/g

g/mol

g/g

g/mol

Cndida utilis

Acetato

0.36

21.0

0.90

0.70

Pseudomonas fluorescens

Acetato

0.28

16.8

0.70

0.46

Cndida utilis

Etanol

0.68

31.2

1.30

0.61

Pseudomonas fluorescens

Etanol

0.49

22.5

0.93

0.42

Klesbiella sp.

Metanol

0.38

12.2

1.01

0.56

Metylomonas sp.

Metanol

0.48

15.4

1.28

0.53

Pseudomonas sp.

Metanol

0.41

13.1

1.09

0.44

Metyloccocus sp.

Metano

1.01

16.2

1.34

0.29

Pseudomonas sp.

Metano

0.80

12.8

1.06

0.20

Metanol

0.60

9.60

0.80

0.19

Metano

0.56

9.00

0.75

0.17

Pseudomonas metnica

c.- Coeficiente de formacin de producto (qr, qp),


o Yp/s.
Yp/s = - P/S
Se puede calcular los valores de yp conociendo el
respectivo rendimientos global Yp y los valores de Peso Cmol de P por:

Si en el proceso hay produccin de CO2, tambin se


puede calcular el coeficiente global YCO2
De igual manera, se puede calcular los valores de yco2,
por:

e.- Coeficiente de mantenimiento (m, qm, Ym)


Es la velocidad especfica de consumo de sustrato para energa
de mantenimiento.

Esta energa es necesaria para mantener la membrana celular


activa en el transporte de nutrientes, para funciones metablicas
esenciales, la movilidad y la reparacin de estructuras daadas.
Si no hay sustrato disponible, el mantenimiento se har a costa
de prdida de masa celular (metabolismo endgeno).

Tambin pueden ser tiles


- El coeficiente de consumo de ATP. YX/ATP
- El coeficiente respiratorio (RQ).
RQ= Moles de CO2 producido

Moles de O2 consumido.

4.2.2.- Balances
Se plantean balances de materia y energa, para lo cual
se trata al cultivo de un m.o. como una reaccin simple.

1 C m o l S + a m o l F N + b O y X y p r o d + y
C O + w H O + q ( c a lo r )

Donde X significa biomasa, o masa celular.


Los coeficientes estequiomtricos estn referidos a 1 Cmol de fuente de C y energa, como:
r = v e lo c id a d d e
r e a c c io n

C - m ol de X

C - m o l d e fte . d e C y E

CO2

lo mismo para yp e yCO2.

a). El balance de carbono para esta reaccin de


formacin de biomasa y producto ser:
y x + y p + y CO 1

2
Si FCE es la fuente de carbono y energa.
yx

Balance del consumo de sustrato


El sustrato es utilizado por las clulas como fuente de
energa y como materia prima para la sntesis de
macromolculas constitutivas.
En un tiempo cualquiera, el consumo de sustrato (S) es:
Donde:
s = sx + sp + sE
Sx = Fraccin de sustrato utilizado en formar biomasa
Sp = Fraccin de sustrato utilizado en formar producto
SE = Fraccin de sustrato utilizado para obtener energa
despejando:
SE = S - Sx - Sp
SE = S + X
Segn el balance de sustrato, no puede haber entre los
productos ms carbono del que 1 C-mol de sustrato puede
aportar y segn el balance del grado de reduccion, los
electrones disponibles del sustrato van obligadamente a los

Ejemplo 1:
Se cultiva levadura Candida utilis en un medio con glucosa,
SO4(NH4)2 y sales. La concentracin inicial de
microorganismos es 0.53 gL-1, y la glucosa 15.2 gL-1. Al
cabo de 9.5 horas, se consumi totalmente la glucosa, y
0.123 mol de O2 L-1, se produjeron 0.179 mol de CO2 L-1 y la
biomasa alcanz un valor de 6.07 gL-1. Se desea averiguar
si, adems de biomasa, se form algn producto.
Datos:
Xo = 0.53g/L , So= 15.2 g/L
t= 9.5 hr.
Sf= 0, Xf= 6.07 g/L
consumo: O2= 0.123 mol/L
Productos: CO2= 0.179 mol/L .
Solucin: se usa formula de microorganismo promedio, y
el valor de C-mol.

Ecuacion de reaccin:
CH2O + O2 + SO4(NH4)2 ---Yx/s(CH1.79O0.5N0.2) +yp/sP
Biomasa formada = (6.07 -0.53)/25.8 = 0.215 C-mol/L de
biomasa
Glucosa consumida = 15.2/30= 0.506 C-mol/L de glucosa
Rendimiento:
yx/s = 0.215/0.506 = 0.425
yco2/s = 0.179/0.506= 0.354.
Puesto que la suma de yx/s y yco2/s es inferior a 1, es
obvio que se ha formado algn producto:
yp/s= 1-(0.425 + 0.354) = 0.22

5.- CINETICA DEL CRECIMIENTO


La velocidad de crecimiento es el cambio en el numero de
clulas en la unidad de tiempo.
Es una consecuencia del hecho de que cada clula se
divide dando dos clulas hijas, las cuales se dividen luego,
cada una en otras dos, de modo que en cada perodo de
divisin la poblacin se duplica.

Parametros:
Tiempo de duplicacin.
Tasa de crecimiento.

Cinetica
Velocidades del bioproceso:
rx = d x velocidad de crecimiento microbiano: C-molbiomasa/L.hr
;

dt

del mismo modo:


ds
C m ol FC E
rs = d t L . h = velocidad de consumo de sustrato

rp = d p C m o l d e p r o d u c to = velocidad de formacin de producto.


dt
L . h

d
r d t mLo l. Oh
= velocidad de consumo de O2

d
m ol C O
r d t L . h
= velocidad de produccin de CO2
O2

O2

CO2

CO2

Tambien se conocen como tasa de crecimiento.


Si las velocidades se expresan en g/L.hr, para diferenciarlo del
anterior, se denotan con R. Por ej.:
Rx = dX/dt : Gr de biomasa/L.hr
La conversin entre rx y Rx esta dada por:
Rx = 25,8.rx

5.1.- Tiempo de duplicacin. g


Es el tiempo necesario para duplicar una biomasa.
Xo ----g--- 2Xo
Al tiempo 0: X = Xo
Despus de: 1 generacin
X= 2.Xo.
En 2 generaciones
X = 2(2Xo.) =22 Xo
En 3 generaciones
X = 2(22 Xo)= 23Xo
En n generaciones
X = 2nXo , Y =2n.Xo
El nmero de generaciones en un tiempo t ser: n = t/g
Aplicando logaritmos: Log X = log Xo + n log 2
despejando: n = (LogX-LogXo)/log2
Sustituyendo log 2= 0.3010, se tiene que 1/0.3010 = 3.3
n = 3.3(logX logXo): n = 3.3 log (X/Xo)
Reempazando en g: g= 0.3t/log(X/Xo)
En ln: n= (LnX-LnXo)/Ln2
O tambin LnX=nLn2+LnXo
(ln2=0.69), y remplazando n =t/g se tiene:
g =0.693 t/(lnX-lnXo)

Tiempos de generacin en bacterias


Bacteria

Medio

Tiempo de generacion
(min)

E. Coli

Glucosa-sal

17

Bacillus megaterium

Sacarosa-sal

25

Streptococcus lactis

Leche

26

Staphylococcus aureum

Caldo infusion de corazon

27-30

Streptococcus lactis

Caldo lactosa

48

Lactobacillus acidfulus

Leche

66-87

Rhizobium japonicum

Leche

344-461

Mycobacterium
tuberculosis

Sinttico

792-932

Ejemplo.2
Se tienen 1000 bacterias en un medio de cultivo ptimo y
despus de 4 horas de incubacin, creciendo
exponencialmente, se obtienen 100 000 bacterias. Calcule
el tiempo de generacin.
Xo = 1000
X = 100 000
t= 4 horas
g =? g = t/n
Calculo de n de la ec (3):
n = 3.3 log X/Xo , n = 3.3 log 100000/1000 = 6.6
generaciones
Reemplazando en: g =t / n
g = 240/6.6 = 36,36 minutos
Otra forma: con g =0.693 t/(lnX-lnXo)
g= (0.693x4)/(ln100) = 0.602 hr = 36.12 min

Ejemplo 3.
En un cultivo se tiene inicialmente 5x107 bacterias y
despus de 6 horas se tiene 5x108
Calcule el tiempo de generacin
Ecuaciones:
n=t/g, : n= (LnX-LnXo)/Ln2
Reemplazando:
n = (20-17.7)/0.693
n = 3.3
g = t/3.3 = 6/3.3
Td = 1,8 h

Ejemplo 4.
En un proceso de fermentacin microbiana, se toman datos del
conteo celular, obtenindose los siguientes:
t (hr)
X

0 0.5
1 2

1 1.5 2
4
8 16

2.5
32

3 3.5
4 4.5
5 5.5
6 6.5
7
64 128 256 512 1024 2048 4096 8192 16382

Calcule el tiempo de generacin.


t (hr)
X
lnX

0 0.5
1
1
2
4
0 0.7 1.4

1.5
8
2.1

2
16
3

2.5
3
32
64
3.47 4.16

3.5
128
4.9

4
256
5.5

4.5
5
5.5
6
512 1024 2048 4096
6.2 6.93 7.62 8.32

Solucion por correlacin:


La ecuacin de la recta es: LnX=1.3863t + 0.00001
De la Ec. LnX=nLn2+LnXo.
LnX=Ln2(t/g) + LnXo
Se observa que: Pendiente: m = 1.386 = Ln2/g = 0.693/g
g = o.5 h

6.5
7
8192 16382
9.01 9.704

Solucin
Grafica:
(criterio)
La pendiente de la
lnea de ajuste
corresponde a la
variacin del doble
del valor de X en la
ordenada y de un
valor g en la absisa.
Por tanto: m=Ln2/g
Se observa que: Pendiente:
m = 1.386 = 0.693/g
g = o.5 h

5.2.- Velocidades especficas:


Las velocidades anteriormente definidas pero referidas a la
unidad de biomasa, seran:
r = ; velocidad especfica de crecimiento.
x
r
x = qs ; velocidad especfica de consumo de sustrato
x

rO

rp

; velocidad especfica de consumo de O2.

; velocidad especfica de formacin de producto.


Las velocidades especficas dan informacin sobre el
metabolismo microbiano, ya que al estar referidos a la unidad de
biomasa, una modificacin en el valor de , qs, etc. indica que
"algo" est ocurriendo en el metabolismo de un microorganismo.
Es frecuente que las velocidades especficas varen durante el
cultivo.
x

6.- CRECIMIENTO EN PROCESOS BATCH


Al transcurrir el tiempo de cultivo, S va disminuyendo, y por tanto
rx, hasta que finalmente S = 0 (fase estacionaria), y rx = 0
lo que implica: X = cte = Xf
Xf = concentracin final de biomasa.
Variacion de con el tiempo

6.1.- MODELOS CINETICOS


Varios modelos conceptuales y matemticos se han
formulado con el objeto de explicar el comportamiento que
muestran los sistemas biolgicos.
Estos modelos se han clasificado segn las
consideraciones asumidas respecto a la estructura de las
clulas o a la distribucin de la poblacin celular.
La clasificacin ms general incluye modelos noestructurados, y estructurados.

a.- Modelos No-Estructurados


Tambin llamados modelos deterministas, son del tipo de
caja negra. Son los modelos ms simples para crecimiento
microbiano.
Se asume que las clulas son una entidad en solucin. No
interesa la estructura celular, ni la diversidad de la
poblacin.
Son estrictamente vlidos para la fase exponencial en
batch.
Desde el punto de vista de lmite de sustrato, la relacin de
tasa especfica de crecimiento y concentracin de sustrato a
menudo adquiere la forma de saturacin cintica. Esta
concepcin cintica es similar a la cintica de Langmuir
(Shuler & Kargi, 1992).

Los mas usados son:


Modelo de Monod, Modelo de Contois, Modelo de Mosser,
etc.

Modelo de Monod
Monod en 1942 desarroll una ecuacin cintica simple.
Parte de suponer que slo una enzima con cintica
Michaeliana es la responsable del consumo de S.
El modelo asume tambin que la produccin de biomasa
depende exclusivamente de la concentracin de un
sustrato limitante. Representacin:

Linearizacion del modelo


La solucin emprica del modelo requiere hacer la
linealizacion de Lineweaber-Burk.

Si la tasa de crecimiento celular esta dada por:

Le ecuacin de Monod, se expresa en funcin de


velocidad:
El descenso en la concentracin de sustrato esta dado por:

Considerando la velocidad de muerte se tiene:

Donde:
Kd, es la constante de decaimiento endgeno (t-1)

Otros modelos no estructurados


Modelo de Contois.
Muestra
una
dependencia de la
tasa especfica de
crecimiento,
con
respecto
a
la
concentracin
de
organismos activos
presentes.

m S

sx

x [S ]

Ejemplo 5

Un cultivo BATCH de microorganismos en crecimiento, en


sustrato de glucosa, dio los siguientes datos.
TIEMPO
(h)

CONC. CELULAS (X)


(g/l)

ln X

CONC. GLUCOSA
(g/l)

1.25

0.2231

100.00

2.45

0.8961

97.00

16

5.10

1.6292

90.40

23

10.50

2.3514

76.90

30

22.00

3.0910

48.10

34

33.00

3.4965

20.60

36

37.50

3.6243

9.38

40

41.00

3.7136

0.63

a) Calcular la tasa mxima de crecimiento.


b) Calcular el coeficiente biomasa-sustrato
c) Cul es la concentracin celular mxima que podra esperarse si
150g de glucosa fueron usados con la misma cantidad de inoculo.

Desarrollo:
a . Tasa mxima de crecimiento

Modelo logistico
Los modelos anteriores representan el comportamiento de los
m.o, slo en la fase log de un cultivo batch (donde es constante)
Si se quiere representar todo el proceso, es necesario recurrir al
modelo logstico.
Se obtiene combinando la ecuacin de Monod con la expresin
de y la de rendimiento biomasa-sustrato (Yx/s).
dX = m(Yx/s.So + Xo X) . X
dt
(Ks.Yx/s + Yx/s.So +Xo-X)2

Esta ecuacin describe


una curva de crecimiento
sigmoidal que tiene la
forma de la curva real de
crecimiento en cultivos
batch, donde el valor de X
se acerca asintoticamente
a Xo+Yx/s.S

Modelos Estructurados
Estos modelos consideran a la clula como un sistema de
componentes mltiples (ribosomas, enzimas, membranas, etc.).
Por ello dividen a la clula en sus componentes y consideran las
reacciones y cambios metablicos que tienen lugar en cada zona de
la clula, como respuesta a cambios en el medio.
Estos modelos consideran: las concentraciones intrnsecas,
(cantidad de un componente por unidad de masa celular) (Ci/X), y
las concentraciones extrnsecas o cantidad de un componente por
unidad de volumen del reactor.
d(Ci/X) = (1.dCi) - ( Ci. dX/dt)
dt
X.dt
X. X
Al construir el modelo se debe decidir cuantos componentes
celulares se tomaran en cuenta. (de 2 a 40). Un resultado aceptable
se produce usando al menos 3 componentes celulares.
Con mas componentes el modelo ser mas preciso, pero tambin
mas complejo.
Ci, es la concentracin de cada componente.
Con ms de un substrato limitante se pueden usar modelos
multiplicativos, modelos aditivos y modelos nominativos

Modelos segregados
Los modelos segregados tienen en cuenta que la
poblacin celular es heterognea, por lo que resultan aun
mas complejos.
Estos modelos pueden reconocer como diferentes a las
"clulas ms viejas" de las "clulas ms jvenes". (Paz
Astudillo)
Tienen en cuenta que el medio no es homogneo, permiten
variaciones de concentraciones de biomasa y de nutrientes
y diferencias en las propiedades fisicoqumicas del medio
(viscosidad, densidad, pH, T, etc.).
En el caso de microorganismos filamentosos, el modelo
tiene en cuenta los cambios morfolgicos que all se
producen, y es, un modelo segregado.(Reyes, 2006)

CRECIMIENTO EN CULTIVO CONTINUO


Por sus caractersticas especiales permite controlar el proceso
a una tasa especfica de crecimiento () prefijado.
Para poner en marcha un cultivo continuo, se realiza
previamente un cultivo batch y en un momento dado,
normalmente antes que se agote el substrato limitante, se
comienza a alimentar con medio de cultivo fresco a un caudal F

El volumen del cultivo se


mantiene constante. El lquido
que sale del biorreactor, a un
caudal F tendr clulas, y una
concentracin de nutrientes
menor que en el caudal de
entrada.

Balance de Biomasa
En quimostato, las clulas crecen y son, simultneamente, lavadas. El
aumento neto de biomasa estar determinado por los valores relativos
de y D en cada proceso.
Aumento neto de biomasa = Crecimiento -Lavado
Vdx = V.Xdt -FXdt
dividiendo por Vdt
sustituyendo F por D (tasa de dilucin, en hr-1 ),

(8)

sustituyendo por su valor, esta ecuacin se convierte en:

(9)
Si u > D, entonces dx/dt ser positivo y la concentracin de
microorganismos en el fermentador aumenta con el tiempo. Si u < D,
dx/dt ser negativo, y la concentracin de microorganismos disminuir
con el tiempo, por el efecto de "lavado" del fermentador.

Balances de materia:
De acuerdo al esquema, se puede plantear los siguientes
balances de materia.
V . dX V .r F . X
x
dt

dS
V . dt F . S R F . S~ V . rs

dP
V.
V . r F .P
P

dt
Cuando se alcanza el estado estacionario, X, S y P ya no
varan con el tiempo, lo que equivale a igualar a cero estas
Ecuaciones:
r X D . X~
rS D . ( S R S~ )
y
~
r
D .P
P

donde X, S y P representan las respectivas


concentraciones en estado estacionario.

Referencias

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Scragg Alan. Biotecnologa para ingenieros.
Fernando Llavador Colomer. Metabolismo bacteriano y
modelizacin matemtica de procesos. Valencia.
Hernndez Eovaldo. Cultivo Continuo de Microorganismos .
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Shuler Michael L. , Kargi Fikret. Bioprocess Engineering: : Basic
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Moreno Julio Ricardo . Medina Cesar Dante. Albarracn Virginia
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Aspergillus niger sobre un Medio Slido. Universidad autnoma
metropolitana unidad Iztapapala. Tesis para obtener el Grado de