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Aulo Prova MBI 100

Aula 2- Ultra-estrutura dos micro-organismos e Nutrio microbiana


Procariotos
nucleo
Sem membrana nuclear
Organelas revestidas por Ausentes

Eucariotos
Nucleo
Presentes e revestida por

membranas
Ribossomos
70 S
Cromossomo (DNA)
1 cromossomo circular
Diviso celular
Fisso binria
- Glicoclice: tudo que est externo a clua

membranas
80 S
Multiplos lineares
Encolve Mitose

- cpsula e camada limosa Aderencia e fixao, proteo e reserva nutriente

- flagelos locomoo (Energia/Ap), quimiotaxia e fototaxia

- estrutura dos flagelos: Filamento , Gancho, Corpo basal. Protena Flagelina. Gram
positiva tem 2 aneis e gram negativa tem 4.
- fimbras e pili: mais curtos que o flagelo, natureza proteica e funo de aderencia
- pilus sexual: conjugao bacteriana- proximao de celulas compatveis
-Parede celular: proteo contra lise osmtica, define a forma- peptideoglicano
(N-acetilglicosamina e acido n-acetil muramico)
Gram positiva- roxo(cristal de violeta) acido teicoico e lipoteicoico

Gram negativa- vermelho (safranina) exopolissacarideos

Membrana citoplasmtica procariotica- permeabilidade seletiva, transporte de nutrientes


processos de conservao de energia (fotossinte e respirao) Alvo da ao de agentes
antimicrobianos.
-material gentico: nucleoide (cromossomo unico e circular) plasmdeos (Dna
extracromossional, pq no transcrito em mRNA. Conferenrem beneficios, mas no
resulta em transcrio e traduo).
Incluses citoplasmaticas- armazenamento, granulos ou vesiculas de gas
Endosporos bacterianos: estrutura de sobrevivncia, desidratada, gram positivas.
Produo de endosporo por B. Subtilis quando o ambiente fica seco.
Ribossomo: citosol, sintese proteica, alvo de antimicrobianos. 70S
Diversidade metabolica: C, N sais e agua, pode utilizar diferentes fontes

Aula 3- Metabolismo microbiano I: Obteno de energia


- Descrever as vias de obteno de energia no mundo microbiano
Catabolismo gera energia (ATP-fora prton motiva) e Anabolismo consome energia
- Diferenciar quimiotrofia de fototrofia
Quimiotrofia: compostos quimicos como fonte de energia: Quimiorganotrficos e
quimiolitotroficos. Fototrofia: luz como fonte de energia
- Explicar respirao aerbia, anaerbia e fermentao

Energia livre: energia disponivel para realizar trabalho til. Reao exergnica e
endergnica. Oxidao e Reduo
Reao Aerbica- Oxidao do substrato orgnico pelas vias metablicas centrais. Os
eletrons (da oxidao) passam por uma CTE at chegar no O2 que o aceptor final de
eltrons.
Via Glicoltica- Oxidao parcial do composto Glicose at piruvato. Saldo 2 ATP.
Via Entner-Doudoroff- Forma apenas 1 ATP. Comum em gram negativas aerbias
Fosforilao a nvel de substrato e fosforilao oxidativa.
Ciclo de Krebs
Respirao Anaerria. O2 no o aceptor final de eltrons, pode ser NO3, Fe3+.
Fermentao- Um composto orgnico produzido por ele mesmo utilizado como
aceptor final de eletrons
- Explicar a fotossntese oxignica (acclica) e anoxignica (cclica).

Fermentao estequiomtricamente balanceado, os subprodutos (ac. Latico, alcool)


so para balancear as reaes

Quimiolitotrofia- obteno de energia pela oxidao de compostos inorgnicos

Fotossntese oxignica- fluxo de eletrons aciclico. PII


Fotossntese anoxignica- fluxo cclico de eletrons. PII e PI
Pigmentos antena e centro de reao.
Aula 4- Metabolismo microbiano II: Utilizao da energia
-Identificar os processos microbianos que consomem energia: rotao do flagelo,
transporte de nutrientes
- Reconhecer as vias metablicas centrais e sua natureza anfiblica

Via Glicolitica, Ciclo de Krebs, via Entner Doudorof, Ciclo de Calvin.


So anaplerticas- fornecem precursores para outras vias metabcias. Salientar que por
causa das vias anaplerticas que os precursores nunca ficam em falta, uma vez que so
essenciais.
- Identificar o consumo de energia da biossntese (peptideoglicano), transporte de
nutrientes e motilidade.
Biossintese de monmeros e polmeros
As VMC fornecem eletrons e carbono para a biossntese das macromolculas que
compes a celula microbiana
- Identificar os 12 precursores com respectivos monomeros que polimerizam nas umtraestruturas microbianas.

- Assimilao de nitrognio: a fixao de nitrognio gasoso pelos micro responsvel


por todo nitrognio naturalmente encontrado na terra. Gasta 8ATP por mol de NH3
fixado. Reao catabolizada pela enzima Nitrogenase. Na presena de amnia a sintese
da nitrogenase reprimida, pq? Gasto de energia
N2>> NH3 - Glutamato forma outros aminocidos por reaes de transaminao e tb
forma a Glutamina que forma aminocidos, Purinas e Pirimidinas.
Peptideoglicano: PEP (Acido N acetil murmico) e acetilCoA e Glutamina (Nacetil
glicosamina)

Aula 5- Crescimento e regulao do metabolismo microbiano


- Definir o crescimento microbiano: Aumento da densidade populacional. Massa ou cel.
- Descrever o processo de diviso celular por fisso binria
Nesse processo h continuamente a sntese de peptideogligano (parede celular)

- Descrever as fases de crescimento microbiano

Fase lag: a massa celular no aumenta, porque as clulas esto se adaptando ao meio

Fase log: nenhum fator fsico-qumico limita o crescimento microbiano


Fase estacionria: no se observa aumento ou diminuio lquido no nmero de clulas
Fase de morte: decorre do esgotamento da energia celular
- Definir crescimento diuxico: crescimento em meio contendo mais de uma fonte de
energia. Utiliza preferencialmente uma fonte do que outra

- Explicar o modelo do operon lac, a regulao da sntese de enzimas induzidas.


E. coli no consome lactose na presena de glicose. No ocorre a induo do operon lac
na presena de glicose e ento no vai ter atividade da enzima Beta-galactosidase. No
h induo dos genes do operon lac, sofre represso catablica. Efetor alosterico:
Molcula que se liga a um local diferente do stio ativo, alterando a funo da protena a
que anexado. Tambm chamado modulador alostrico.Portanto, no basta apenas a
presena de lactose para a completa induo do operonlac, necessrio tambm
ausncia de um acar preferencial, tal como a glicose para E. coli. Na ausncia de
glicose, h um aumento de AMP cclico na clula. A molcula de AMP cclico se liga a
uma protena ativadora da transcrio (PCA),o que fundamental para que ela se ligue
no stio ativador. Uma vez nesse stio, a protena auxilia a RNA polimerase a se ligar ao
promotor para conduzir eficientemente a transcrio.
- [cAMP] sinal do baixo estado energtico da clula, isto , do estado de limitao
energtica da clula: [glicose].

- Descrever os fatores ambientais que afetam o crescimento de microrganismo


Concentrao

de

nutrientes,

temperatura

(Psicrfilos,

Mesfilos,

termofilos,

Hipertermofilos), pH (Acidfilos, Neutrofilos, Aucalinfilos), oxignio, atividade da


gua, disponibilidade de O2 (aerbios estritos, microaerfilos, anaerobios estritos,
facultativos e aerotolerantes.
-Enzimas alostricas. para estudar a regulao da atividade de enzimas alostricas, ser
descrita a regulao da atividade da enzima fosfofrutocinase, que catalisa a terceira
reao da via glicoltica, na qual frutose-6-P fosforilada a frutose-1,6-P. Uma enzima
alostrica aquela que existe em duas conformaes - a conformao da enzima
alostrica alterna em funo da sua ligao com um efetor alostrico.

Quando a enzima alostrica est


ligada ao efetor alostrico negativo, a afinidade da enzima pelo substrato diminui e,
consequentemente, a sua atividade baixa. Por outro lado, a interao com o efetor
alostrico positivo aumenta a afinidade da enzima pelo substrato e, consequentemente,
a atividade enzimtica alta. A enzima fosfofrutocinase interage tanto com efetores
alostricos positivos quanto negativos.
O aumento da concentrao de AMP e ADP no citoplasma da clula acompanhado
pela diminuio da concentrao de ATP. Nessa condio, a enzima fosfofrutocinase
tem sua atividade aumentada, em funo do aumento da concentrao dos efetores
alostricos positivos AMP e ADP. Assim, haver uma maior sntese de ATP pela clula,
pois o ATP um dos produtos finais da via glicoltica. Por outro lado, alta concentrao
de ATP no citoplasma sinaliza que esse metablito est sendo produzido mais rpido do
que consumido. Nessa condio, a atividade da enzima fosfofrutocinase diminui, pois o
ATP age como um efetor alostrico negativo.
Questes:

5) Esquematize uma tpica curva de crescimento microbiano identificando as fases do


crescimento microbiano.
6) Analise a curva que voc esquematizou e responda:
a) Em qual das fases a velocidade especfica de crescimento mxima?
b) Em qual das fases ocorre o ajuste da maquinaria metablica do micro-organismo?
c) Em qual fase do crescimento no se observa aumento ou diminuio lquido no
nmero de clulas?
d) Em quais circunstncias de crescimento normalmente se observa ou no a fase lag?
8) Defina crescimento diaxico.
9) Explique como ocorre a induo do operon da lactose?
10) Por que em um meio de cultivo contendo os acares glicose e lactose, a atividade
da enzima -galactosidase de E. coli no detectada na presena de glicose?
Aula 6- Gentica Microbiana I: Hereditariedade e Mutaes
-Reconhecer a importancia dos microrganismos em estudos genticos: A informao
gentica de todos os organismo celulares codificada pelo DNA (genoma)
Replicao do DNA>> transcrio em mRNA >>>> Traduo em protenas
Gene A(DNA) >>transcrito>>>regio codificadora>>> mRNA>>>> protena
Cromossomo bacteriano: circular, DNA fita dupla, replicao semiconservativa

Fontes de variabilidade gentica: mutaes genicas e recombinao gentica


- Diferenciar alteraes genotpicas de fenotpicas

Fenotpicas: causadas por modificaes ambientais e so reversveis. Ex: prduo de


Beta-galactosidase na presena de lactose.
- Reconhecer os tipos de mutaes e suas consequncias
Mutaes de ponto: substituio de pares de bases e insero ou deleo de um par de
bases.

Mutaes de fase de leitura: leva ao deslocamento do quador de leitura pela insero ou


remoo de um ou alguns pares de nucleotideos no DNA
- Reconhecer agentes mutagnicos fisicos, quimicos e biologicos
Fisicos: Radiao ionizante e UV
Quimicos: agentes que reagem com o DNA, anlogos a bases
Agentes biolgicos: Elementos transponveis- elemento gentico que tem a capacidade
de se mover de um local para outro no genoma. (transposons). Sua localizao vai
modificar o produto final da expresso de um gene
Aula 7- Gentica Microbiana II: Transferncia de genes Recombinao em bacterias
- Descrever e diferenciar os mecanismo de transferncia de informao gentica entre
procariotos
Conjugao- Transferncia de DNA depende do contato entre as cluas e depende do
plasmdeo (vai transferir a informao gentica). Etapas: Formao de pares
especificos> Conexo celular (pilus)> Mobilizao do fator F> Replicao

Pode ocorrer uma recombinao: recombinao entre o Fator D e o cromossomo ocorre


em um stio especfico. A clula resultante passa a apresentar uma alta frequencia de
recombinao (Hfr).

Etapas da conjugao: formao de pares especficos>> conexo >>> Mobilizao do


F>> transferncia >> replicao

Transformao: Transforma o DNA, incorpora fragmentos de DNA na clula receptora


Etapas: Ligao do DNA celula receptora, entrada do DNA >> Integrao e replicao
do DNA

Transduo: modificao do material gentico por um Bacterifago

-Reconhecer as caracteristicas e o papel dos plasmdeos na transferncia de material


gentico entre bactrias
Fator F- molcula DNA circular, contem cerca de 40 genes, responsvel pela formao
do pilus, replicao autnoma.
- Reconhecer o papel e importancia dos microrganismos na engenharia gentica
Fcil cultivo, obento de um grande numero de clulas em curto tempo e produz
compostos por tempo indefinido
- identificar as etapas e elementos necessrios para clonar genes
1- vetor (plasmideo) 2-gene de interesse 3- hospedeiro(aceitar o DNA exgeno) 4clonagem
Construo

de

uma

bac

recombinante:

Isola

DNA

doador>Isola

DNA

plasmidial>Tratamento com endonucleases de restrio.


Enzimas de restrio: clivagem em stios especficos para reconhecimento,

tem

extremidades coesivas e unem uma as outras por complementariedade.


- Explicar como as enzimas de restrio e as DNA ligases so utilizadas para construir
plasmdeos recombinantes
- Descrever estratgias que possibilitam a identificao de bactrias recombinantes
Crescimento em meio com antibitico
Aula 9- Vrus: caractersticas gerais e multiplicao
-Descrever as principais caracteristicas dos virus
Ausencia de maquinaria para sntese de protenas, replicao por meio de sntese dos
componentes seguido de montagem das particulas virais, so parasitas intracelulares
obrigatrios, acido nucleico envolvido por uma cobertura proteica
Virion: particula viral infecciosa
Capsideo: cobertura proteica que envolve o genoma viral, determina forma do virus,
pode auxiliar na fixao do virus.
Envelope: externo ao capsideo, proteo, auxiliam na ancoragem do virus a celula
hospedeira
Genoma Viral: DNA fita simples e dupla, RNA fita simples positiva ou negativa e
dupla, linear, segmentado ou circular.
-Diferenciar os tipos morfolgicos
Helicoidais, polidricos, envelopados, complexos (bacteriofagos)

-Descrever as etapas do ciclo de infeco viral: Penetrao, sintese de protenas virais,


replicao, sada da clula inicialmente infectada: O capsideo (sem o envelope)
liberado no citoplasma e o Genoma incorporado no Genoma do hospedeiro, utiliza a
maquinria gentica do

hospedeiro

para sintese de suas protenas, sintetiza os

componentes virais, montagem do capsideo, liberao.


-Explicar como os vrus so classificados: Tipos de acido nucleico, numero de
componentes do genoma, morfologia da particula viral, gama de hospedeiros.
Comite Internacional de Taxonomia de Virus.
Nomenclatura ingles grafadas em itlico. Segue o padro: Hospedeiro sintoma virus:
Tobacco mosaic virus (TMV)
Aula 10- Filogenia e taxonomia de micro-organismos
- Em que se baseia o sistema de classificao de 5 reinos? Morfologicos e metablicos
- Pq o sistema de classificao de 3 dominios o mais amplamente aceito hj? Pq
baseado na filogenia, em sequencia consevada do rRNA

Endossinbiose
Mitocondrias- bacterias que realizavam respirao aerobia
Cloroplastos- Cianobacterias que realizavam fotossintese oxignica

Nomenclatura cientifica: Sistema binomial: Genero +espcie


Mtodos para classificao: Caracteristicas morfologicas (forma, arranjo, flagelos),
colorao diferencial (gram positivas e negativas), caracteristicas metabolicas, perfil de
cidos graxos, cracteristicas genotipicas. Sequencia assinaturas de rRNA

Aula 11- Diversidade de procariotosDiversidade Fisiologica: capacidade de sobreviver em condies ambientais extremas:
T, pH, salinidade. Depende da diversidade metablica

Organismos primitivose modernos, os primitivos deram origem aos modernos. Os mais


e menos derivados, quanto mais proximo da base da arvore, mais derivados so.
- Bacterias e Archaea: ausencia de nucleo, ausencia de organelas, ancestrais das
outras.
-Proteobactrias: Bacterias Purpuras fototroficas

- Enterobacterias: Fermentativas (E. Coli)

-Bacterias Gram Positivas no esporulantes (laticas)-

Bacillus e Cocos: produz acido

ltico. Produzem exotoxinas. (Streptococcus pneumoniae, S. bovis)


Bacterias gram postitivas que formam endosporo: Bacillus e Clostridium

Archeae: Parede celular com pseudopeptideoglicano (acido N-acetil-talomurnico).


Lipideos de membrana tem uma ligao ter enquanto bacteria ester. Muitas so
extremfilas (pH e T), todas as archaea so quimiotrficas, nenhuma fototrfica.
Archaea Halfilas extremas: hipersalinos, quimiorganotroficas
Metanognicas: utilizam CH4 como fonte de eletrons, anoxicas, trato gastointestinal
Aula 12- Diversidade de eucariotos
- Comparao do rRNA 18S (Mitocondrias, Cloroplastos, Flagelos)
- Opistokonta (animais, fungos, protozorios)
- Amoebozoa: Amebas. Mixomicetos(Fungos gosmentos)
- Archaeplastida: algas vermelhas e verdes
-Stramenopiles: Oomyvetes, fungos no verdadeiros( Phytophora spp)
-Excavata: Vermes humanos
Aula 13- Fungos: Reproduo assexuada e sexuada
- Fungos: Eucariotos, parede celular quitina forma corpo do fungo que talo, reserva
glicognio, quimiorganotrficos, uni(leveduras) ou pluricelulares, dimorfismo sexual
-Saprofitas: Decompoe materia morta, produo de micotoxinas, cilcagem
- Parasitas
Simbiontes: Liquens, micorrizas

-Apressrio: estrutura de infeco especializada, que desenvolve na extremidade de um


tubo germinativo e penetra num estmato.
-Haustrios: Parasitas obrigatorios. Absorve nutrientes da celula invadida
- Rizoides: em forma de raiz que auxiliam no ancoramento do fungo ao substrato e
absoro de nutrientes.
-Rizomorfos: sobrevivncia, disseminao e penetrao
- Escleridios: estrutura de resistencia, globosa, agregao de hifas, sobrevivncia
-Anastomose: ligao de 2 hifas
-Estruturas Reprodutivas Assexuadas: esporos

-reproduo Sexuada: Plasmogamia (n+n) >> cariogamia


meiose (n+n)

(fuso do nucleo 2n)>>

-Ascosporo; esporo sexuado produzido dentro de clulas especializadas denominadas


Ascos- Ascomycota

- Ascocarpos: cleistotcio, Apotcio, Peritcio, Ascostroma, ascos nu


- Basidiocarpos: cogumelos

Aula 14- Controle do crescimento microbiano


- Importancia : contaminao, prejuizo, doenas, perda de material
Controle: Por eliminao (calor, radiao ou filtrao) ou por limitao do crescimento
(refrigerao , desitrao)
- Cintica de morte microbiana (binmio tempo X temperatura). Segue um padro
exponencial: decresce exponencialmente com o tempo

- fatores que interferem na efetividade dos tratamentos antimicrobianos: Tipo de


microrganismo, estagio fisiolgico (fase lag, log...), condies ambientais
-Pq importante manter a carga microbiana baixa num alimento antes do tratamento
para controle? Para que consgiga eliminar a pop, que o agente tenha efeito em toda
populao, Exponencial.
- modo de ao dos agentes antimicrobianos : Danos a membrana plasmtica, danos a
parede celular, danos a proteinas e danos aos cido nucleicos
- Metodos de controle microbianos: Fisicos (T, radiao, filtrao,

desidratao),

Qumicos (agentes qumicos)


- Calor: Umido (desnaturao de protenas), seco (fluidez de membrana). Importante
Tempo X Temperatura.
-Radiao: ionizao de moleculas com formao de radicais reativos, alta energia
-Inibio de crescimento: T baixa e desidratao
Endosporos: Estrutura de resistncia melanisada, temperatura no consegue afetar as
estruturas internas, pq esto protegidos.
-Microbiocida ou microbiostticos (Bacteriostticos e Bacteriocida)
Agente quimico antimicrobiano: toxicidade seletiva, estabilidade, poder de penetrao,
eficincia (amplo espectro de ao).
- antibiticos (cuidado com a resistncia com o uso excessivo)
Aula 15- Mecanismos microbianos de patogenicidade
- Relao entre a microbiota normal e o hospedeiro (antibiose, comensalismo,
sintrofismo, parasitismo)

- Postulados de Kock: Associao entre o patgeno e o hospedeiro>> Isolamento em


cultura pura>> reinoculao no hospedeiro >>> observao dos mesmos sintomas

Etapas da infeco: Exposio> Aderencia > Penetrao> Colonizao e crescimento>


Toxicidade> Danos
-Toxinas: Endotoxinas (faz parte da estrutura da bacteria) Exotoxinas (produto do
metabolismo, excretada)
- plasmideos: podem transporta a informao gentica que determina a patogenicidade
de um microorganismo ou genes que conferem resistencia a antibioticos.