POTENCIAL INHIBITORIO DE EXTRACTOS ETANLICOS DE

SEMILLAS DE NEEM (Azadirachta indica A. Juss) SOBRE Spodoptera

frugiperda J.E Smith
Cesiah Prez-Ortiz, Hernn Villar-Luna, Armando Noriega-Feria, Luis Uribe EspejoGalicia, Paul Mauricio Snchez-Ocampo y Jacqueline Capataz-Tafur. Instituto de
Biotecnologa, Universidad del Papaloapan. Apdo. Postal 510-3. Tuxtepec, Oax.
Telfono (287)3172388. email: jcapataz@unpa.edu.mx
Palabras clave: dosis letal, mortalidad, control biolgico

Resumen: La obtencin in vitro de metabolitos secundarios de neem surge como una

alternativa para la posible produccin industrial de biocidas. Para la bsqueda de
propuestas dirigidas al control de Spodoptera frugiperda, se evalu la eficiencia de
extractos etanlicos de suspensiones celulares de Azadirachta indica para determinar
la DL50 sobre la fase larval del segundo nstar (L2). Se probaron cinco concentraciones
de los extractos (1500, 2500, 3000, 5000 y 10000 ppm) y el testigo (alcohol 96%) para
determinar la mortalidad en el tiempo (0, 12, 24, 36 y 48 h). A las 48 h, las
concentraciones de todos los extractos ensayados mostraron un porcentaje de
mortalidad sobre el 70%, lo cual indica que hay una eficiencia en la proteccin del disco
de hoja de maz y que dichas concentraciones pueden ser utilizadas en campo. La
dosis letal 50 (DL50) encontrada a las 48 h fue de 1156.92 ppm.

Introduccin El gusano cogollero del

principalmente por medio de sinttico, y

maz, Spodoptera frugiperda JE Smith, es

ms recientemente por cultivar resistente

una de las plagas de campo ms

de maz que expresa las toxinas Bt

importantes para la produccin de maz

(Colonia

(Murua

neem, Azadirachta indica, es una planta

Virla,

2004).

Se

controla
65

y Gmez, 1995). El rbol de

que potencialmente puede controlar los

relativa de 70 10 %, y fotoperiodo de 12

insectos con la ventaja de ser alimentos y

h luz y 12 h oscuridad. Y a las que se les

ambiental seguro (Capataz-Tafur et. al.,

realiz el seguimiento de su ciclo larval.

2007). Los insecticidas son una estrategia

Extractos etanlicos: Las semillas (con un

clave que se utiliza en muchos programas

contenido de azadiractina de 0.04% p/v)

de control de vectores en todo el mundo.

fueron molidas en un mortero y tamizadas

Los costos podran reducirse si los

en una malla (tamao de poro de 500

insecticidas

fabricarse

m), 10 g del polvo obtenido fueron

presente

extrados con 100 ml de etanol al 96%

trabajo fue evaluar el potencial de los

en agitacin constante durante 24 h. El

extractos etanlicos de las semillas de A.

extracto etanlico obtenido fue filtrado al

indica como insecticidas contra la plaga

vaco y concentrado a 45 C en un

principal de maz, Spodoptera frugiperda.

rotoevaporador (Buchi modelo R-210,

Metodologa: El estudio se realiz en los

Alemania) hasta obtener un volumen

laboratorios

aproximado de 5 ml de extracto.

localmente.

Universidad

podran
El

de

objetivo

del

Biotecnologa

del

la

Este

Sede

procedimiento se repiti dos veces, hasta

Tuxtepec. Las larvas iniciales para el pie

completar 3 extractos etanlicos, los

de cra fueron obtenidas de cultivos de

cuales fueron mezclados para obtener el

maz hbrido infectados del Campo

stock o solucin madre de extractos

Experimental del Instituto Tecnolgico de

etanlicos de semillas y los cuales

la Cuenca del Papaloapan ubicado en el

nuevamente

ejido San Bartolo, municipio de San Juan

sequedad

Bautista

etanlicos).

Tuxtepec,

Papaloapan,

de

Oaxaca,

en

el

se

concentraron

(4.39115
Los

de

gramos

hasta

extractos
del

pellet

Kilometro 7.5 de la carretera federal

obtenido (concentrado de metabolitos

Tuxtepec-Loma Bonita. Las larvas fueron

secundarios)

alimentadas con hojas de maz y con una

nuevamente en el etanol al 96%, a una

temperatura de 25 2 C, humedad

concentracin
66

fueron

de

30.000

disueltos

ppm

posteriormente se realizaron diluciones a

La mortalidad de las larvas se calcul

10000, 7500, 5000, 3000, 2500 y 1500

mediante la frmula propuesta por Abbott

ppm.

(1925):

Todos

los

extractos

fueron

r r
M
100
n r

almacenados a - 4 C hasta su uso.

Evaluacin de la mortalidad: Para los
experimentos se utilizaron larvas de S.

Donde:

frugiperda de segundo instar (L2) de 1.2

M = Mortalidad.
r = larvas muertos en el extracto.

mm aprox., las cuales fueron dejadas sin

r' = larvas muertos en el blanco.

alimentacin durante 12 horas antes del

bioensayo.

Luego

se

n = Nmero de individuos.

colocaron

individualmente dentro de cajas de Petri

Las lecturas del bioensayo se realizaron a

de 6015 tamao moneda con 2 ml de

las 0, 12, 24, 36, y 48 h, registrando el

capa de agar al 1.0 % p/v, la cual

porcentaje de mortalidad. Las larvas

contena un disco de hoja tierna de maz

con un rea de 2.25 cm2. Cada uno de los

muertas fueron retiradas de su respectiva

discos se les adicion 50 L de las

caja Petri.
Para el anlisis estadstico se utiliz un

diferentes concentraciones por ambos

modelo de probabilidad no lineal con

lados del disco y se dej secar al medio

especificacin de los modelos de eleccin

ambiente antes de colocar la larva.

discreta (Probit) y un modelo estadstico

Previamente se evalu el efecto del

completamente al azar, analizado por el

disolvente (EtOH 96%) para descartar su

mtodo de medidas repetidas en el

efecto sobre los insectos y se utiliz como

tiempo, con un p= 0.05. Cada tratamiento

control positivo un producto comercial

tuvo 5 repeticiones y cada repeticin con

(Neemix ). Un grupo de control de las

cinco

larvas fue expuesto a una dieta natural

unidades

experimentales

unidades experimentales).

(hojas de maz) en condiciones similares.

67

(225

Resultados y Discusin: A. indica ha

Tabla

sido

frugfera por diferentes concentraciones

utilizado

principalmente

para

1.

Mortalidad

extractos

de

etanlicos

Spodoptera

combatir diversas plagas de cultivos de

de

partir

de

importancia agrcola, ya que la principal

semillas de A. indica a diferentes horas.

actividad biolgica de los compuestos

Larvas muertas

bioactivos (limonoides) de este rbol es

insecticida.

Las concentraciones

Concentracin
(ppm)

que

presentaron mayor ndice de mortalidad

0
h

12
h

24
h

36
h

48
h

Total
(h)

%
Mortalidad

fueron las de 10000 ppm y 7500 ppm que

10000

10

25

100

a partir de las 12 horas ya mostraban un

7500

10

24

96

total de 10 larvas muertas (40% de

5000

22

88

3000

21

84

2500

10

20

80

1500

18

72

Control
(Etanol al
96%)

20

Control (Disco
de maz)

Neemix 4.5

15

10

25

100

mortalidad), incrementndose a 72% y 76

% a las 18 h de realizado el experimento.
Un 88 % de mortalidad fue cuantificado
con la concentracin de 5000 ppm a las
48h (Tabla 1).
Colonia y Gmez (1995), sostienen que
los

extractos

porcentaje

de

de

neem

presentaron

mortalidad

Las concentraciones de 7 500 ppm y 10

similar,

000 ppm, la accin de dichos extractos

utilizando larvas de S. frugiperda al

sobre las larvas de S. frugiperda se

evaluar las concentraciones de 10000 y

considera como una accin txica en el

5000 ppm. Negrete y Morales (2003), en

individuo. Simmons et al. (1983) proponen

sus investigaciones afirma que la dosis de

que cuando stas son altas, causan un

5000 ppm fue la responsables del deceso

efecto

del 70 % de la poblacin larval de S.

neurotxico

directo

sobre

las

larvas, mientras que cuando son bajas las

frugiperda, y la de 10000 ppm de la

concentraciones, desestimulan la ingesta,

muerte del 100 % de los noctuidos.

68

actuando

de

igual

manera

nivel

produccin de materias pesticidas en

neuronal.

forma ms concentradas. Los reportes de

la National Research Council de 1992

Con la concentracin de 1 500 ppm se

afirman que los metabolitos secundarios

observ un 72 % de mortalidad a las 48 h

del neem son libremente solubles en

(Tabla 1). Sin embargo, Ruiz y Crdenas

solventes orgnicos como hidrocarburos,

(1993), con una concentracin de 1000

ppm

de

extractos

de

neem

alcoholes y cetonas. Iannacone y Lamas

sobre

(2003) han sealado que la efectividad de

poblaciones de Hipothenemus hampei

un extracto botnico depende de la

reportaron una mortalidad del 100% a las

sustancia orgnica empleada para su

20 h de tratamiento, en condiciones de

extraccin.

laboratorio.

A las 48 h, las concentraciones de todos

Las larvas tratadas con el testigo positivo

los extractos ensayados mostraron un

(Neemix 4.5) mostraron un 60% de

porcentaje de mortalidad sobre el 70%, lo

mortalidad (15 larvas muertas) a las 12

horas (Tabla 1).
testigos

cual indica que hay una eficiencia en la

Mientras que con los

negativo

utilizados

proteccin del disco de hoja de maz y

Control

que dichas concentraciones pueden ser

(discos de maz con etanol al 96%) y

utilizadas en campo.

Control (discos de maz sin etanol y

extractos) se observ una mortalidad del

Con

20% y 0% a las 48 h (Tabla 1). Esta

concentracin

respuesta

solvente

anlisis Probit se calcul la dosis letal 50

extractor no es el responsable de la

(DL50), obtenindose un valor de 1156.92

mortalidad

ppm (Figura 2).

confirma

larvaria

que

el

registrada

en

las

dems concentraciones. El empleo de

etanol para la extraccin se debi a que
este es el proceso ms directo para la
69

los

datos

de

obtenidos

mortalidad
mediante

vs
el

extractos de suspensiones celulares de Azadirachta indica

sobre Spodoptera frugiperda J. E. Smith en condiciones de
laboratorio. Rev. Fac. Nal. Agr. Medelln 60 (1): 3703-3715.
3. Colonia M.G y Gmez R.G. 1995. Evaluacin insecticida
de cuatro extractos de plantas sobre el gusano cogollero
del maz Spodoptera frugiperda J.E. Smith. Tesis de
Ingeniera

en

Agronoma.

Facultad

de

Ciencias

Agropecuarias. Universidad Nacional de Colombia. Medelln.

52p.
4. Iannacone J. y Lamas G. 2003. Efecto insecticida de

Figura

2.

Curva

probit

para

la

cuatro extractos botnicos y del cartap sobre la polilla de la

papa

determinacin de la dosis letal 50 (DL50).

A.

indica

concentraciones

las

mostraron

(Zeller)

(Lepidptera:

5. Murua, M. y E.G Virla. 2004. Presencia invernal de

Spodoptera frugiperda (Smith) Lepidoptera: Noctuidae) en

diferentes
un

operculella

Gelechiidae), en el Per. Entomotropica 18(2): 95-105.

Conclusiones: Los extractos etanlicos

de

Phthorimaea

el rea maicera de la provincia de Tucumn, Argentina.

efecto

Revista de la Facultad de Agronoma, La Plata 105(2): 4652.

insecticida mayor al 70% sobre las larvas

6. Nacional Research Council. 1992. Neem: A tree for

de S. frugiperda a las 48 h. La dosis letal

solving global problems. Washington: Nacional Academy

Press. 141 p.

(DL50) de los extractos fue de 1156.92

7. Negrete Barn, F. y Morales Angulo J. 2003. El gusano

ppm.

cogollero

del

maz

(Spodoptera

frugiperda.

Smith).

Agradecimientos: Los autores expresan

Corporacin Colombiana de Investigacin Agropecuaria,

su agradecimiento al Instituto Tecnolgico

Corpoica

Programa

Nacional

de

Transferencia

de

Tecnologa, Pronatta. Colombia. P 26.

de la Cuenca del Papaloapan por facilitar

7. Ruiz L. y Cardenas R.. 1993. Efecto insecticida en el

la colecta de las larvas de S. frugiperda

laboratorio de la azadirachtina sobre la broca del caf

en su campo experimental.

Hypothenemus hampei (Coleoptera: Scolitidae). p.142. En:

Memorias. XX Congreso de la Sociedad Colombiana de
Entomologa. Cali.

Bibliografa.

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Simmons

1984.

70

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W.M.

1983.

Some