MANUAL DE METODOS DE ENSAYO

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INSTRUCTIVO PARA ESPERMATOGRAMA

Rev
N

ELABORADO
por

FECHA

REVISADO
por

FECHA

APROBADO
por

FECHA

00

T.M. Hugo Quispe

25/07/2009

Angelica Salazar

10/07/2009

Dr. Saul Mendoza

05/08/2009

01

T.M. Hugo Quispe

27/10/2014

Celina Cruz

04/06/2015

Luis anez

04/06/2015

Luis anez

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TABLA DE CONTENIDO

OBJETIVO

CAMPO DE ACCIN

RESPONSABLES

FINALIDAD DEL USO

CONSIDERACIONES PARA LA TOMA DE MUESTRA

REQUISITOS PARA SU ENVIO

CAUSA DE RECHAZO

BIOSEGURIDAD EN EL MANEJO DE LAS MUESTRAS

PROCEDIMIENTO

10 REGISTRO DE RESULTADOS
11 RANGOS REFERENCIALES
12 GLOSARIO
13 REFERENCIA BIBLIOGRAFICA

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1.

OBJETIVO
El presente manual presenta los elementos necesarios para efectuar el anlisis morfolgico
cualitativo y cuantitativo de una muestra de semen, delimitando especialmente la motilidad y
viabilidad para establecer criterios de fertilidad.

2.

CAMPO DE APLICACIN
La aplicacin de este procedimiento est dirigido hacia el correcto desarrollo e interpretacin
del espermatograma como prueba cualitativa de la fertilidad

3.

RESPONSABLES
Personal de Medlab Central en el rea de Inmunologa Especial y sedes segn corresponda.

4.

FNALIDAD DEL USO

El espermograma es el examen de diagnstico ms importante y sencillo para iniciar el
estudio de la fertilidad masculina. En l se evalun los aspectos fsicos del semen, como el
volmen, pH, viscosidad, color , etc y los aspectos celulares que estudia el espermatozoide
en relacin con el nmero, movilidad, morfologa y vitalidad.

5.

CONSIDERACIONES PARA LA TOMA DE MUESTRA

5.1 Explicar el procedimiento al paciente y lo importante que es para su mdico la informacin que
se obtenga del examen
5.2 Se recomienda obtener la muestra de semen entre los 2 a 7 dias de abstinencia sexual. Para
reducir la variabilidad de los resultados de los anlisis del semen.
5.3 En la etiqueta del frasco se debe anotar el nombre del paciente, periodo de abstinencia, fecha
y hora de recoleccin, el lugar donde fue emitida la muestra (casa o sede Medlab). Comunicar
al rea de Inmunologa especial si el paciente usa frmacos que puede disminuir los niveles
de espermatozoides ( estrgenos, meiltestosterona, cimetidina, antineoplasicos, etc).
.
5.4 Lo ideal es que la muestra se obtenga en los servicios higinicos del mismo laboratorio. Si la
muestra va a ser recogida en el domicilio del paciente, debemos explicarle que evite colocarlo
en la refrigeracin y mantenerlo a la temperatura corporal para evitar una reduccin en la
motilidad de los espermatozoides mientras lo transporta al laboratorio en menos de 1 hora
5.5 La muestra debe obtenerse mediante masturbacin y eyaculacin dentro de un recipiente de
vidrio o plstico de boca ancha
5.6 No se debe usar los condones de ltex
para recoger el semen, porque pueden
comprometerla viabilidad de los espermatozoides. El coito interruptus no es aceptable para
hacer la recoleccin del semen por que puede perderse la primera porcin del eyaculado, que
suele contener la mayor concentracin de espermatozoides.
5.7 Es importante destacar el hecho que la muestra de semen deben ser completa ( todo el
eyaculado )
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6.

REQUISITOS PARA SU ENVIO

6.1 Antes de enviar la muestra, verificar que el frasco este correctamente rotulado con el nombre
y cdigo del paciente, periodo de abstinencia, fecha y hora de recoleccin y el lugar donde fue
emitida la muestra ( casa o sede Medlab).
6.1 Enviar inmediatamente la muestra al laboratorio para su proceso.
6.2 Transportar la muestra a temperatura ambiente, CM anotara la hora en que fue recibida la
muestra en el laboratorio
7.

CAUSA DE RECHAZO

7.1 Muestra refrigerada, recoleccion incompleta del eyaculado, pasado mas de 1 hora de haber
sido emitido la muestra ( si es para espermatograma ). Para cultivo no mayor de 3 horas de
recoleccin.
8.

BIOSEGURIDAD EN EL MANEJO DE LAS MUESTRAS

El personal de laboratorio debe saber que las muestras de semen pueden contener virus
patgenos, por ejemplo, VIH, virus de la hepatitis y del herpes y por consiguiente deben ser
manejas con precaucin.

9.

PROCEDIMIENTO
El espermatograma consiste en realizar un anlisis de todo el eyaculado. Para ello, despus
de 2 a 7 das de abstinencia sexual se recoge el lquido seminal y se realiza el anlisis fsico
(aspecto, color, consistencia, volmen, viscosidad, licuefaccion y pH ), microscpico
(presencia de leucocitos, hematies, Trichomonas, Candida etc), recuento de espermatozoides
por ml y por eyaculado, morfologa (anormalidades de cabezan cuello o cola), motilidad y
vitalidad

EXAMEN MACROSCOPICO
Licuefaccin
Una muestra de semen normal se licua dentro de los 60 minutos de la eyaculacin a temperatura
ambiente, aunque esto suele ocurrir dentro de los primeros 15 minutos. En algunos casos, la
licuefaccin no es completa a los 60 minutos y esto debe ser informado
La muestra debe ser mezclada cuidadosamente en el recipiente original evitando batirla
vigorosamente
Aspecto
La muestra de semen debe ser examinada inmediatamente despus de su licuefaccin o dentro
de los 60 minutos de emitida por simple inspeccin a temperatura ambiente. Una recoleccin
normal tiene una apariencia homognea gris opalescente. Puede aparecer menos opaca cuando
la concentracin de espermatozoides es muy baja, marrn cuando contiene glbulos rojos o
amarillenta en el caso de un paciente con ictericia o que consume algunas vitaminas

Volmen
El volmen del eyaculado puede ser medido usando un tubo graduado de base cnica
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Viscosidad
La viscosidad de la muestra licuada ( a menudo denominada consistencia ) puede ser estimada
aspirando la muestra en una pipeta de 5 ml y permitiendo la libre cada de las gotitas, en las que
se observa la longitud del filamento formado. En una muestra normal se observan gotas pequeas
y bien definidas, mientras que en una muestra de viscosidad anormal se formara un filamento
mayor de 2 cm. Como mtodo alternativo, la viscosidad se puede evaluar introduciendo una varilla
de vidrio en la muestra y observando la longitud del filamento que se forma al retirarla. Este no
debe exceder los 2 cm
pH
El pH debe ser medido dentro de una hora de la eyaculacin, se distribuye una gota del semen
sobre el papel de pH ( rango de pH: 6.1 10.0 6.4 8.0 ), al cabo de 30 segundos el color de la
zona impregnada debe ser uniforme y se compara con la cartilla patrn para determinar el pH de
la muestra. Cuando el pH es menor a 7.0 en una muestra con azoospermia se debe sospechar
obstruccin de la vas eyaculatorias o ausencia bilateral de los vasos deferentes.
EXAMEN MICROSCOPICO
Examen directo
Colocar 10 l de semen en una lmina portaobjetos y colocar una laminilla cubreobjetos de 22 x
22 mm, evitando la formacin de burbujas. Se debe permitir que la muestre se estabilice durante
aproximadamente un minuto y observar con objetivo de 40X determinado el nmero de
espermatozoides por campo para decidir la dilucin a utilizar en el recuento de espermatozoides

< 15 espermatozoides, dilucin de 1 : 5

15 40 espermatozoides, dilucin de 1 : 10
40 200 espermatozoides, dilucin de 1 : 20
200 espermatozoides, dilucin de 1 : 50

Buscar la presencia de otros elementos no espermticos : clulas, hemates, leucocitos,

levaduras, Trichomonas, etc
Motilidad
Examinar cinco campos microscpicos para evaluar la motilidad de los espermatozoides como
sigue :
Motilidad progresiva (MP) : Los espermatozoides se mueven activamente en forma lineal
o en grandes circulos sin tener en cuenta la velocidad
Motilidad No Progresiva (NP) : Todos los otros patrones de motilidad con ausencia de
progresion. Ej. Nadar en pequeos circulos, el flagelo se mueve con dificultad, etc
Inmviles (IM ) : Sin movimiento
Vitalidad
Para el estudio de la vitaidad, colocar 10 l de semen en una lmina mas 1 gota de Eosina Y al
0.5 % en solucin acuosa de 9 gr/L de ClNa. Mezclar y colocar una laminilla.
Obsevar a 40 X el porcentaje de espermatozoides que no se colorean y debe coincidir con la
suma de MP+NP
Los espermatozoides muertos lisan su membrana y permite la entrada del colorante supravital
( Eosina Y )

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Recuento
Se utiliza la cmara de Neubauer, la dilucin se determina ( 1:5, 1:10,1:20, 1:50 ) de acuerdo
a la estimacin preliminar de la concentracin espermtica en el examen directo. Ej . una
dilucin 1:20 se prepara con 5 l de semen y 95 l de diluyente
Diluyente : 50 gr de bicarbonato de sodio ( Na HCO3 ) y 10 ml de formol al 36 % ( v / v ) y agua
destilada suficiente para 1,000 ml
Cargar la cmara de Neubauer con 10 l de la dilucin por duplicado y leer en el cuadrado
central ( de hemates ) que esta dividido en 25 cuadrados.
Para muestras con menos de 10 espermatozoides por cuadrado, se debe contar todo el
cuadrado central ( es decir los 25 cuadrados ). Ver figura mas adelante
Para los que contienen 10 40 espermatozoides por cuadrado pueden estudiarse 10
cuadrados. Ver figura mas adelante
Para los que contienen ms de 40 espermatozoides por cuadrado es suficiente analizar 5
cuadrados. Ver figura mas adelante
Si un espermatozoides esta en la lnea que divide a dos cuadrados adyacentes, solo se debe
contar si esta en el lado superior o izquierdo del cuadrado que se estudia

Calcular el recuento / ml, multiplicando por el factores correspondientes :

Ejm : Si el recuenro se realiza en los 5 cuadrados de la retcula central de los hemates y se obtuvo
como resultado 120 espermatozoides con una dilucin de semen de 1/10
Recuento : 120 espermatozoides / 2 ( factor de coreccin) = 60 espermatozoides
Recuento / ml = 60 x 1000,000 ( factor de dilucin ) = 60000,000 espermatozoides / ml

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Calcular el recuento / eyaculado, multiplicando el recuento / ml por el volmen del semen

Ejm : Volmen de semen : 2.5 ml

Recuento / eyaculado = 600000,0000 x 2.5 ml = 150000,000 espermatozoides / eyaculado
OTROS FACTORES
Factor de correccin
Dilucin del semen
5 cuadrados contados

10 cuadrados contados

25 cuadrados contados

2
1
0.4

4
2
0.8

10
5
2

1 / 10
1 / 20
1 / 50
FORMULA GENERAL :

Recuento / ml =

N de espermatozoides contados en los cuadrados

6
--------------------------------------------------------------------- x 10
Factor de correccin

Morfologa
Se realiza en el mismo preparado del examen directo con Eosina Y al 0.5 % ( Vitalidad )
Se evalua las caracteristicas morfolgicas y se expresa en porcentajes :
Defectos en la cabeza : grande, pequea, acintada, piriformes, amorfa y vacuolada, cabezas
dobles, etc
Defecto del cuello
Defectos de la cola : corta, mltiple, doblada ( > 90 ), irregular, etc
Ejm :

Defecto de cabeza
Defecto de cuello
Defectos de la cola
TOTAL

12 %
05 %
05 %
---------------22 %

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Espermatozoide
anormal : cabeza
alargada o
piriforme

Espermatozoide normal :
Cabeza ovalada 4 x 5 m de
longitud y 2.5 x 3.5 m de
ancho. Cola derecha y
uniforme de 45 m de largo

Espermatozoide normal

Espermatozoide con defecto de cabeza

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Cabeza de alfiler

Dos colas

Cabeza piriforme

Dos cabezas y dos colas

Cola enrrollada

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10. REGISTRO DE RESULTADOS

Todos los resultados se anotarn en la hoja de trabajo F-IN-P-02-02
Todo hallazgo anormal debe ser consultado con el Supervisor del rea o Mdico Jefe del
Departamento para proponer los comentarios necesarios o indicar examenes
complementarios si es que fuera necesario
11. RANGOS REFERENCIALES
VOLMEN
pH
LEUCOCITOS
MOTILIDAD PROGRESIVA (MP)
MOTILIDAD TOTAL (MP + NP)
VITALIDAD
MORFOLOGA NORMAL
DEFECTO DE CABEZA
DEFECTO DE CUELLO
DEFECTO DE COLA
3
RECUENTO / mm
RECUENTO / EYACULADO

Lmite inferior de 1.5 ml

7.2 9.0
0 2 x campo+
Lmite inferior de 32%
Lmite inferiro de 40%
Lmite inferior de 58%
Mayor al 50 %
18 %
05 %
05 %
6
Lmite inferior 15 x 10 / ml
6
Lmite inferior 39 x 10 / eyaculado

12. GLOSARIO
6

POLIZOOSPERMIA
NORMOZOOSPERMIA

Concentracin de espermatozoides mayor a 200 x 10 / ml

6
Eyaculado normal, Lmite inferior 39 x 10 / ml / eyaculado

OLIGOZOOSPERMIA

Concentracin de espermatozoides menor al valor de referencia (

6
Menor a 39 x 10 / ml / eyaculado)
Menos del 58 % de espermatozoides con progregresin lineal
(movilidad MP+NP) o menos del 25 % con progresin rpida
(movilidad MP).
Menos del 50 % de espermatozoides con morfologa normal
Ausencia de espermatozoides en el eyaculado
No hay eyaculado
Concentracin, morfologa de los espermatozoides normal y aumento
de % de espermatozoides muertos
Volmen del semen menor a 1.5 ml

ASTENOZOOSPERMIA

TERATOZOOSPERMIA
AZOOSPERMIA
ASPERMIA
NECROZOOSPERMIA
HIPOSPERMIA

13. REFERENCIA BIBLIOGRAFICA

WHO. Laboratory manual for the examination and processing of human semen. 5ta
ed. 2010

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CAMBIOS AL DOCUMENTO

ANTES
1.
RESPONSABLES
Personal de Medlab Central en el area de Inmunologia Especial, personal de las Clinicas
Maison Sante Lima, Chorrillos, Este, El Golf, Collique, PSB, CSMP, CSJD y Max Salud
AHORA
1.
RESPONSABLES
Personal de Medlab Central en el area de Inmunologia Especial y sedes segn corresponda.

ANTES
5.2 Se recomienda obtener la muestra de semen entre los 3 a 5 das de abstinencia sexual.
Para reducir la variabilidad de los resultados de los anlisis del semen.
DESPUES
5.2 Se recomienda obtener la muestra de semen entre los 2 a 7 dias de abstinencia sexual.
Para reducir la variabilidad de los resultados de los anlisis del semen.

ANTES
9. PROCEDIMIENTO
El espermatograma consiste en realizar un analisis de todo el eyaculado. Para ello, despues
de 3 a 5 dias de abstinencia sexual se recoge el liquido seminal y se realiza el analisis fsico
(aspecto, color, consistencia, volmen, viscosidad, licuefaccion y pH ), microscpico
(presencia de leucocitos, hematies, Trichomonas, Candida etc), recuento de espermatozoides
por ml y por eyaculado, morfologa (anormalidades de cabezan cuello o cola), motilidad y
vitalidad
AHORA
9. PROCEDIMIENTO
El espermatograma consiste en realizar un analisis de todo el eyaculado. Para ello, despues
de 2 a 7 dias de abstinencia sexual se recoge el liquido seminal y se realiza el analisis fsico
(aspecto, color, consistencia, volmen, viscosidad, licuefaccion y pH ), microscpico
(presencia de leucocitos, hematies, Trichomonas, Candida etc), recuento de espermatozoides
por ml y por eyaculado, morfologa (anormalidades de cabezan cuello o cola), motilidad y
vitalidad

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ANTES

Motilidad
Examinar cinco campos microscpicos para evaluar la motilidad de los espermatozoides como
sigue :
Grado A : Motilidad progresiva rpida
Grado B : Motilidad progresiva lenta
Grado C : Motilidad no progresiva
Grado D : Inmviles
Al menos el 50% de ellos debe mostrar movilidad con progresion ( grado A + B )
Vitalidad
Para el estudio de la vitaidad, colocar 10 l de semen en una lmina mas 1 gota de Eosina Y al
0.5 % en solucion acuosa de 9 gr/L de ClNa. Mezclar y colocar una laminilla.
Obsevar a 40 X el porcentaje de espermatozoides que no se colorean y debe coincidir con la
suma de la motilidad de los espermatozoides grado A y B
Los espermatozoides muertos lisan su membrana y permite la entrada del colorante supravital
( Eosina )

AHORA
Motilidad
Examinar cinco campos microscpicos para evaluar la motilidad de los espermatozoides como
sigue :
Motilidad progresiva (MP) : Los espermatozoides se mueven activamente en forma lineal
o en grandes circulos sin tener en cuenta la velocidad
Motilidad No Progresiva (NP) : Todos los otros patrones de motilidad con ausencia de
progresion. Ej. Nadar en pequeos circulos, el flagelo se mueve con dificultad, etc
Inmoviles (IM ) : Sin movimiento
Vitalidad
Para el estudio de la vitaidad, colocar 10 l de semen en una lmina mas 1 gota de Eosina Y al
0.5 % en solucion acuosa de 9 gr/L de ClNa. Mezclar y colocar una laminilla.
Obsevar a 40 X el porcentaje de espermatozoides que no se colorean y debe coincidir con la
suma de MP+NP
Los espermatozoides muertos lisan su membrana y permite la entrada del colorante supravital
( Eosina Y )

11.

ANTES
RANGOS REFERENCIALES

VOLMEN
pH
LEUCOCITOS
MOTILIDAD GRADO A
VITALIDAD
MORFOLOGA NORMAL

2.0 5.0 ml
7.2 9.0
0 2 x campo+
Mayor al 25 %
Mayor al 50 %
Mayor al 50 %

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DEFECTO DE CABEZA
DEFECTO DE CUELLO
DEFECTO DE COLA
3
RECUENTO / mm
RECUENTO / EYACULADO

18 %
05 %
05 %
6
20 - 200 x 10 / ml
6
40 - 300 x 10 / eyaculado

12. GLOSARIO
POLIZOOSPERMIA
NORMOZOOSPERMIA
OLIGOZOOSPERMIA
ASTENOZOOSPERMIA

TERATOZOOSPERMIA
AZOOSPERMIA
ASPERMIA
NECROZOOSPERMIA
HIPOSPERMIA

Concentracin de espermatozoides mayor a 200 x 10 / ml

6
Concentracin de espermatozoides entre 20 y 200 x 10 / ml
6
Concentracin de espermatozoides menor a 20 x 10 / ml
Menos del 50 % de espermatozoides con progregresin lineal
(movilidad A+B) o menos del 25 % con progresin rpida (movilidad
A).
Menos del 50 % de espermatozoides con morfologa normal
Ausencia de espermatozoides en el eyaculado
No hay eyaculado
Concentracin, morfologa de los espermatozoides normal y aumento
de % de espermatozoides muertos
Volmen del semen menor a 2 ml

13. REFERENCIA BIBLIOGRAFICA

OMS, Manual del Laboratorio de la OMS para el examen del semen humano y de la
interaccion entre el semen y el moco cervical. Ed. Medica Panamericana . 4ta ed. 2001

AHORA

11. RANGOS REFERENCIALES

VOLMEN
pH
LEUCOCITOS
MOTILIDAD PROGRESIVA (MP)
MOTILIDAD TOTAL (MP + NP)
VITALIDAD
MORFOLOGA NORMAL
DEFECTO DE CABEZA
DEFECTO DE CUELLO
DEFECTO DE COLA
3
RECUENTO / mm
RECUENTO / EYACULADO

Limite inferior de 1.5 ml

7.2 9.0
0 2 x campo+
Limite inferior de 32%
Limite inferiro de 40%
Limite inferior de 58%
Mayor al 50 %
18 %
05 %
05 %
6
Limite inferior 15 x 10 / ml
6
Limite inferior 39 x 10 / eyaculado

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12. GLOSARIO
6

POLIZOOSPERMIA
NORMOZOOSPERMIA

Concentracin de espermatozoides mayor a 200 x 10 / ml

6
Eyaculado normal, Limite inferior 39 x 10 / ml / eyaculado

OLIGOZOOSPERMIA

Concentracion de espermatozoides menor al valor de referencia (

6
Menor a 39 x 10 / ml / eyaculado)

ASTENOZOOSPERMIA

Menos del 58 % de espermatozoides con progregresin lineal

(movilidad MP+NP) o menos del 25 % con progresin rpida
(movilidad MP).
Menos del 50 % de espermatozoides con morfologa normal
Ausencia de espermatozoides en el eyaculado
No hay eyaculado
Concentracin, morfologa de los espermatozoides normal y aumento
de % de espermatozoides muertos
Volmen del semen menor a 1.5 ml

TERATOZOOSPERMIA
AZOOSPERMIA
ASPERMIA
NECROZOOSPERMIA
HIPOSPERMIA

13. REFERENCIA BIBLIOGRAFICA

WHO. Laboratory manual for the examination and processing of human semen. 5ta
ed. 2010

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