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Bioqumica
Enzimas

2016

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METODOS DE
INMOVILIZACIN
DE ENZIMAS

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ndice
Introduccin--------------------------------------------------------------------------4
Desarrollo-----------------------------------------------------------------------------5

Definicin de inmovilizacin de enzimas------------------------------5

Propiedades cinticas de la enzima inmovilizada------------------5
Clasificacin de los mtodos de inmovilizacin---------------------5
Tipos de mtodos de inmovilizacin de enzimas-------------------7
Mtodos de atrapamiento y encapsulacin-------------------7
Mtodos de unin a un soporte----------------------------------9
Entrecruzamiento (reticulado o cross-linking)---------------15
Ventajas y desventajas de la inmovilizacin enzimatica-16
Conclusin-------------------------------------------------------------------19
Bibliografa-------------------------------------------------------------------20

Introduccin

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Las enzimas son protenas especializadas en la catlisis de reacciones
bioqumicas, son catalizadores naturales, es decir, son biocatalizadores.
Destacan por ser extraordinariamente especificas con un poder cataltico mucho
mayor que el de los catalizadores elaborados por el hombre.
Los procesos catalizados por enzimas en la industria son cada da ms
numerosos, ya que presentan una serie de ventajas frente a los catalizadores
convencionales no biolgicos:

Presentan una gran actividad cataltica.

Muestran una gran especificidad de sustrato.

Son muy activos a temperatura ambiente y presin atmosfrica.

A pesar de estas claras ventajas, el empleo de enzimas no se ha generalizado

en los procesos qumicos industriales debido a que la mayora de las enzimas no
son estables en las condiciones de trabajo. Por otra parte al ser solubles en
agua, su separacin de los sustratos y productos es difcil, y por tanto, no se
pueden reutilizar.
En esta investigacin se detallan los mtodos ms utilizados para la
inmovilizacin de enzimas los cuales cubren los ltimos inconvenientes dado que
permite una mejora significativa de la estabilidad alargando el tiempo de uso y
protegindolas de las variaciones ambientales como el pH, temperatura,
disolventes, sales, autodestruccin, inhibidores y venenos, lo que hace posible
su empleo en la produccin industrial de productos qumicos, farmacuticos,
alimentos, en el tratamiento de residuos, en el diagnstico y tratamiento de
enfermedades, y otras muchas aplicaciones, esto permite que los procesos
biotecnolgicos sean econmicamente rentables siempre y cuando no se alteren
significativamente las propiedades cinticas de las enzimas.

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Desarrollo
Definicin de Inmovilizacin de enzimas
Una Enzima inmovilizada es una enzima que ha sido fijada en un material
inerte e insoluble. Este proceso puede incrementar la resistencia a cambios en
las condiciones en las que se encuentra el preparado.
La inmovilizacin de enzimas no es ms que un modo de mantener por algn
medio qumico, fsico o fisicoqumico fijas las molculas de la enzima dentro de
un sistema reaccionante sin que se alteren significativamente sus propiedades
cinticas. Posteriormente esta definicin se ha ampliado a aquel proceso por el
cual se restringen, completa o parcialmente, los grados de libertad de
movimiento de enzimas, orgnulos, clulas, etc. por su unin a un soporte

Propiedades cinticas de la enzima inmovilizada

Al hablar de cintica enzimtica se refiere a la velocidad de las reacciones
qumicas que son catalizadas por las enzimas.
Las propiedades cinticas de un sistema de enzima inmovilizada pueden ser
bien diferentes a aquellas que corresponden a sistemas en solucin. Los
cambios pueden atribuirse a alteraciones de la enzima por s misma o a la
naturaleza fisicoqumica del soporte.

Clasificacin de los mtodos de inmovilizacin

Existen varios criterios en los cuales se clasifican los mtodos de inmovilizacin
de enzimas;

Segn su reversibilidad:
Mtodos de Inmovilizacin Irreversibles
El concepto de inmovilizacin irreversible implica el enlace de la enzima a un
soporte poroso (a excepcin del entrecruzamiento) de manera permanente o al
atrapamiento de esta en gel, fibra o capsula, por lo cual la enzima no puede ser
liberada sin destruir o modificar su actividad biolgica o el soporte o lo que la

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tenga atrapada.

Los procedimientos ms comunes de inmovilizacin

irreversible son el enlace covalente, enlace cruzado, atrapamiento y micro

encapsulado.
Mtodos de Inmovilizacin Reversible
En el mtodo de inmovilizacin reversible son los mtodos de adsorcin ya
que las enzimas inmovilizadas pueden ser desprendidas del soporte bajo
condiciones no extremas. El uso de mtodos reversibles para la inmovilizacin
de enzimas es altamente atractivo, principalmente por razones econmicas
debido a que el Soporte puede regenerarse y recargarse con enzimas nuevas
cuando

la

actividad

enzimtica

decae.

Existen

distintos

mtodo

de

inmovilizacin reversible que se describen ms adelante.

Tambin se clasifican en mtodos de inmovilizacin fsica o

qumica:

Mtodos de Retencin Fsica: Aqu entran los mtodos de atrapamiento

y encapsulacin.

Mtodos de Unin qumica: Incluyen los de unin a soporte y el

entrecruzamiento.

Cada uno de los mtodos antes mencionados se desarrolla a continuacin:

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Tipos de mtodos de Inmovilizacin de enzimas

Mtodos de atrapamiento y encapsulacin
Son mtodos que no necesitan de ninguna
propiedad qumica de la enzima, por lo que son de
aplicabilidad general, extendindose su uso a clulas
y a orgnulos.
Durante estos mtodos las molculas de enzimas
se mantienen libres en la solucin, pero restringidas
en una cpsula por una red o membrana de gel.
Figura 1:
Inmovilizacin por
atrapamiento

Consiste en la retencin fsica de la enzima en las

cavidades interiores de una matriz slida porosa
constituida

por

prepolmeros

fotoentrecruzables

polmeros

de

tipo

poliacrilamida, colgeno, alginato, carraginato o resinas de poliuretano. El

proceso de inmovilizacin se lleva a cabo mediante suspensin de la enzima en
una solucin del monmero, seguidamente se inicia la polimerizacin. La
estructura del polmero que atrapa debe ser lo suficientemente fuerte para
prevenir el lavado de la enzima y a la vez lo suficientemente abierto para dejar
penetrar el sustrato y salir el producto.
Existen diversas tcnicas de atrapamiento y encapsulacin de enzimas como
el de gel (Bernfeld y Wan, 1963) o atrapamiento por fibras (Dinelli et al, 1976),
microencapsulado (Wadiack y Carbonell, 1975) y por inclusin, algunas de estas
se describen a continuacin:
Tcnica de gel: Es la ms ampliamente usada y trata de la oclusin de la
enzima o celulosa microbiana en gel de poliacrilamida. La acrilamida es
polimerizada en presencia de un enlazador cruzado en un medio acuoso
conteniendo la enzima disuelta. El bloque de gel resultante puede ser
mecnicamente dispersado en partculas del tamao deseado.

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Atrapamiento en fibras: permite el atrapamiento de enzimas en la red
formada por fibras segn estas se van formando por el procedimiento de
hilado en hmedo, con aparatos similares a los de la industria textil. Se
extrusiona el polmero solubilizado en un disolvente orgnico que est
formando emulsin con la disolucin acuosa de enzima sobre otro disolvente
orgnico, como tolueno o ter de petrleo, donde el polmero precipita,
atrapando microgotas de la solucin enzimtica en sus cavidades. Este
mtodo es mejor que el atrapamiento en gel, pues el rea de contacto redenzima es mucho mayor y las propiedades de las fibras son mejores que las
de los geles como: mayor resistencia a cidos y bases dbiles, a disolventes
orgnicos y a fuerzas inicas altas. Se pueden inmovilizar varias enzimas
(inmovilizacin multienzimtica), aunque se requiere que el sustrato o
sustratos no tengan peso molecular alto. El polmero ms usado por su
biocompatibilidad y bajo costo es el acetato de celulosa. La retencin de
actividad es alta, posiblemente porque la enzima est en un entorno acuoso
y el tiempo de contacto con los disolventes orgnicos es corto.
microencapsulacin: En este mtodo, la enzima
queda atrapada en una membrana polimrica
esfrica de dimetro comprendido entre 1 y 100
m, a travs de la cual difunden sustratos y
productos, lo que permite la coinmovilizacin de
varias enzimas. Existen varios mtodos para
realizar

la

microencapsulacin:

coacervacin

(separacin de fase), polimerizacin interfacial,

membrana surfactante (del ingls surface active
agent = surfactant, activo en la superficie) lquida

Figura 2:
Inmovilizacin por
Microencapsulacin

y secado de lquidos (Wiseman, 1985). Un factor importante para la eleccin

de la tcnica de mircoencapsulacin es su costo y su adaptacin a gran
escala o nivel industrial.
Los siguientes son la

descripcin

microencapsulacin de enzimas:

de

algunos

mtodos

para

la

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o coacervacin: Es un mtodo qumico de separacin de fases. El soluto
polimrico separado en forma de pequeas gotas lquidas, constituye el
coacervado. La deposicin de este coacervado alrededor de partculas
insolubles dispersas en un lquido forma cpsulas incipientes que, por una
gelificacin apropiada, da las cpsulas finales. La coacervacin puede ser
iniciada por diferentes formas: cambios de pH, temperatura o adicin de
una segunda sustancia como una sal inica; este mtodo es eficiente pero
costoso. Para el proceso de microencapsulacin algunos biopolmeros han
sido utilizados para su uso como coberturas (goma arbiga y grenetina).
o Polimerizacin interfacial (Incompatibilidad polimrica): Este mtodo
utiliza el fenmeno de separacin de fases en una mezcla de dos
polmeros qumicamente diferentes e incompatibles en un mismo solvente.
El material a encapsular interaccionar slo con uno de los dos polmeros
el cual se adsorbe en la superficie del material a encapsular formando una
pelcula que lo engloba.

Mtodos de unin a un soporte

En estos mtodos la enzima interacciona con la superficie de un soporte,
generalmente poroso. Estas interacciones modifican la estructura espacial de la
enzima e, incluso, pueden alterar su estructura qumica, lo que provoca
variaciones de su comportamiento como catalizador: actividad, estabilidad,
afinidad por sus sustratos, etc. La influencia de estas variaciones en las
propiedades de la enzima depende del mtodo utilizado, siendo menores cuanto
menos enrgicas sean las interacciones enzima-sustrato. Ordenando los
diversos mtodos de inmovilizacin de mayor a menor fuerza de unin soporteenzima se obtiene:
Enlace covalente > enlace inico > enlace metlico > adsorcin fsica

Mtodos de adsorcin: En estos mtodos la enzima es retenida en un

soporte slido por fuerzas diferentes al enlace covalente (por ejemplo enlace
ionico, fuerzas de Van der Waals, puente de hidrgeno, etc.). La naturaleza de

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las fuerzas involucradas en la inmovilizacin no covalente resulta en un
proceso que puede ser reversible cambiando las condiciones que influyen en
la resistencia de la interaccin. La fuerza del enlace es relativamente dbil y
sumamente sensible a cambios de pH, fuerza inica y temperatura. Estos
mtodos tienen la gran ventaja de ser sencillos. Los soportes ms usados son
polmeros orgnicos, sales minerales, xidos metlicos y varios metales
silceos o intercambiadores inicos como DEAE-Sephadex y DEAE celulosa,
aunque tambin pueden usarse soportes inorgnicos.

Figura 3: Inmovilizacin por adsorcin

Se pueden usar diversas tcnicas para que la enzima entre en contacto con
el soporte: procedimiento esttico, electrodeposicin, proceso en reactor y
bafio con agitacin. La ms usada en el laboratorio es la ltima, en la que la
solucin enzimtica es puesta en contacto con el slido en un tanque
termostatizado (que se mantiene a cierta temperatura) y agitado por vibracin,
vaivn o movimiento orbital, con lo que se logra una deposicin uniforme de
enzima. La inmovilizacin se suele llevar a cabo comercialmente en reactor,
que puede ser un lecho fijo o fluidizado o un tanque agitado por hlice, paleta
o turbina, al que la solucin enzimtica se recircula o en el que se agita dicha
solucin,

respectivamente.

En

el

procedimiento

de

adsorcin

por

electrodeposicin, el soporte se coloca cerca de un electrodo y la enzima

migra hacia l debido a la atraccin elctrica. El procedimiento esttico es el
ms lento y origina una deposicin no uniforme, ya que no hay agitacin.
Los siguientes son los diferentes enlaces que se pueden dar por el mtodo de
adsorcin:

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o Adsorcin fsica: Las enzimas son unidas a la matriz a travs de
puentes de hidrgeno, fuerzas de van der Waals, o interacciones
hidrofbicas
o Enlace inico: Los enlaces inicos de enzimas son producidos a travs
de uniones con sales. En este caso se usan resinas intercambiadoras de
iones, que tienen grupos superficiales que pueden sustituir su unin
inica a un catin o anin por uniones similares a radicales polares de la
enzima. Esta unin es ms fuerte que la mera adsorcin fsica, aunque
no tanto como el enlace covalente.
El principal problema asociado a este mtodo de inmovilizacin es
conseguir que la enzima se una al soporte con suficiente fuerza para que
la prdida de enzima por lavado durante la operacin del reactor que
contenga la enzima inmovilizada sea mnima. Con este objeto se
modifican qumicamente los aminocidos superficiales de las enzimas o
se modifican por Ingeniera Gentica aadindoles grupos peptdicos
muy cargados.
o Enlace metlico: Son aquellas tcnicas de inmovilizacin que utilizan la
formacin de quelatos entre metales de transicin y enzimas, Los
metales de transicin empleados con ms frecuencia son el titanio (IV) y
el zirconio (IV), ya que sus xidos no son txicos. De hecho, los cloruros
de estos metales, as como los de vanadio (III), hierro (III) y estao (IV),
forman hidrxidos en medio cido, que precipitan como geles, por lo que
pueden ser usados como soportes para la inmovilizacin de enzimas. Sin
embargo, el empleo de soportes porosos es ms adecuado por sus
propiedades mecnicas y, en este caso, la tcnica consiste en depositar
una capa de hidrxido del metal sobre la superficie de los poros.

Mtodo de enlace covalente: La unin de las enzimas a los soportes

mediante enlaces covalentes es, probablemente, el mtodo general de
inmovilizacin ms conocido y desarrollado, dado el auge de la sntesis
orgnica, y es el ms utilizado hasta el momento, a escala industrial y en
laboratorio para la fijacin de enzimas a soportes. En este mtodo, se produce
una reaccin qumica que origina un enlace irreversible o reversible slo en

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condiciones muy especficas entre la enzima y los grupos reactivos del
soporte. A este tipo de enlace se aaden siempre fuerzas electrostticas que
consolidan la fijacin. La reaccin qumica de formacin del enlace covalente
debe ser poco desnaturalizante para la macromolcula biolgica; para ello, es
necesario proceder a

una activacin previa de los grupos del soporte

susceptibles de reaccionar con la enzima.

Figura 4: Inmovilizacin por enlace covalente

Enlace por afinidad: Este mtodo de inmovilizacin se basa en que las

enzimas, al igual que los anticuerpos y otras protenas, tienden a fijarse a
determinados molculas orgnicas por las que tienen afinidad, formando
complejos estables y reversibles con estas molculas. Esta propiedad ha sido
utilizada en los ltimos aos para la inmovilizacin de enzimas a soportes
polimricos. Su inmovilizacin en soportes inorgnicos sera similar, aunque
con algunas modificaciones en la activacin del soporte. Cuando la enzima o
protena no presente afinidad por determinados grupos funcionales de
soportes comerciales, se pueden aadir a la protena dominios proteicos con
afinidad por tales grupos utilizando tcnicas de Ingeniera Gentica. Este
hecho permite obtener enzimas con una amplia variedad de actividades que
se unan a soportes comerciales.
Una de las tcnicas de activacin tpicas es la que utiliza bromuro de
ciangeno para unir al soporte por enlace covalente diferentes ligandos que
interaccionan con la protena. Ligandos de tipo general para protenas son los
dextranos tipo dextran blue y polmeros colorantes tipo cibacron bIue y,

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evidentemente, hay ligandos especficos para muchas enzimas que se unen a
los grupos alostricos de las mismas.

Tipos de soportes:
Se pueden dividir en orgnicos o inorgnicos

soportes orgnicos: admiten mayor carga enzimtica, son ms fciles de

modificar qumicamente para la inmovilizacin de enzimas, presentan una
porosidad adecuada para este fin y suelen ser baratos. Por contra, cabe
destacar su tendencia a cambiar de tamao lo que modifica su porosidad y,
por tanto, el comportamiento del biocatalizador en el reactor- su
compresibilidad -lo que hace inadecuado el empleo de lechos fijos- y su
tendencia a ser fuente de carbono de microorganismos invasores, como
ocurre al utilizar polmeros naturales como la agarosa, la sefarosa, el agar, la
celulosa, la quitina, etc.
Los soportes orgnicos pueden ser:
o Polmeros naturales:
- Polisacridos (celulosa, almidn, dextranos, agar-agar, agarosa,
alginatos, quitina, - Protenas fibrosas (colgeno, queratina, etc.)
o Polmeros sintticos:
- Poliolefinas (poliestireno)
- Polmeros acrlicos (poliacrilatos, poliacrilamidas, polimetacrilatos,
-

etc.)
Otros (alcohol polivinlico, poliamidas, etc.)

soportes inorgnicos o cermicos: presentan una menor afinidad por las

enzimas y por los compuestos orgnicos en general y necesitan activar su
superficie mediante reacciones con diferentes agentes organofilizadores
(como los silanos) o con sustancias qumicas de otra clase que introduzcan
funciones orgnicas en dicha superficie, con las que puedan reaccionar las
enzimas o alguna molcula orgnica que haga de puente. Por ello,
generalmente, admiten menor carga de enzima. Como ventajas, se puede
citar que son poco atacables por microorganismos, presentan una estructura

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porosa rgida y definida, no son compresibles, tienen una vida til larga, son
fciles de manejar, son resistentes a los disolventes orgnicos y se pueden
regenerar mediante pirlisis. Adems, suelen ser baratos (al menos, los que
tienen posibilidad de uso industrial).
Los soportes inorgnicos pueden ser:
o Naturales: arcillas como bentonita, piedra pmez, slice, etc.
o Manufacturados: xidos de metales y vidrio de tamao de poro
controlado, vidrio no poroso, almina, cermicas, gel de slice, etc.
En cualquier caso un soporte debe cumplir con los siguientes requisitos
mnimos:
o Fsicos: resistencia mecnica, incompresibilidad en el rango de variables
de proceso utilizado, superficie intema adecuada, forma geomtrica que
facilite su manejo y empaquetamiento, permeabilidad al sustrato, densidad
mayor que el lquido, prdida aceptable de carga en el reactor.
o Qumicos: Hidrofilicidad (alta polaridad de la superficie), no reactividad
con la enzima, grupos funcionales en superficie suficientemente reactivos
o
o

o fciles de activar.
De estabilidad: mecnica y de almacenamiento.
Resistencias: al ataque por bacterias y hongos, al pH, a la temperatuira,

a la fuerza inica, a los disolventes orgnicos.

o De seguridad: biocompatibilidad, no toxicidad.
o Econmicos: Disponibilidad elevada y coste bajo, simplicidad del equipo
que necesita para su modificacin y de la habilidad tcnica requerida para
su manejo, posibilidad de cambio de escala y uso en procesos en
continuo, periodos elevados de utilidad y posibilidad de reutilizacin.
o De reaccin: escasas limitaciones a la transferencia de materia.

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Figura 5: Microestructura de algunos soportes de

materiales usados para inmovilizacin enzimtica

Entrecruzamiento (reticulado o cross-linking)

Mediante Enlace cruzado: Este mtodo se considera el ms efectivo de todos
los mencionados anteriormente. Con esta tcnica los soportes no son
necesarios, ya que la inmovilizacin se da por un enlace directo entre enzimas,
que puede ser mediado o no por un agente de unin.
Generalmente se aade el agente de bajo peso molecular a la enzima en
solucin, uniendo covalentemente los grupos funcionales de las enzimas para
formar agregados.
Aun cuando el mtodo es sencillo no ha sido ampliamente utilizado, debido a
las dificultades en el control del tamao y propiedades mecnicas de los
agregados. En casi todos los casos el agente de enlazamiento cruzado es el
glutaraldehido, un dialdehido que reacciona con aminas primarias para formar
enlaces estables.

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Aunque el agente entrecruzante ms usado es el glutaraldehido, tambin se
usan dextranos de peso molecular medio y alto, poliaminas y otros polmeros.
Estos polmeros tienen ms de dos grupos funcionales tiles para el
entrecruzamiento, por lo que se llaman agentes multifuncionales. Con ellos se
obtiene un entrecruzamiento mltiple tanto en la superficie de la enzima como de
enzima a enzima. Este entrecruzamiento suele ser ms flexible y desactiva
menos la enzima que el entrecruzamiento logrado con glutaraldehido, pero
puede bloquear o dificultar el paso de los sustratos al centro activo, por el hecho
de crear una red polimrica sobre la superficie enzimtica. Aun as, el mtodo
logra estabilizar la enzima frente a agentes desactivantes como la temperatura,
los agentes caotrpicos o el pH

Ventajas y desventajas de la inmovilizacin enzimtica

Como ventajas de la inmovilizacin podemos destacar:

Aumento de la actividad en solventes orgnicos.

Aumento de la enantioselectividad.
El aumento de la estabilidad de la enzima.
La posible reutilizacin del derivado, por lo que disminuyen los costos del

proceso.
La posibilidad de disear un reactor enzimtico de fcil manejo y control
adaptado a la aplicacin de la enzima inmovilizada. Esto permite mejoras
en la separacin del producto adems de la posibilidad de aumentar la
concentracin de catalizador de forma significativa respecto a un proceso
en el que se encuentra en suspensin. Todo lleva a un aumento en

productividad que hace al proceso econmicamente ms rentable.

El estudio bioqumico de sistemas proteicos in vivo que difcilmente
podran ser simulados en soluciones homogneas.

Como desventajas de la inmovilizacin podemos destacar:

El derivado inmovilizado es ms caro que la enzima nativa ya que se

aade una etapa en la preparacin del catalizador.

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La gran heterogeneidad del sistema enzima-soporte donde pueden existir

distintas fracciones de protenas inmovilizadas con diferente nmero de

uniones al soporte.
Suele haber una prdida de actividad de la enzima durante la
inmovilizacin.

A menudo la inmovilizacin altera significativamente el comportamiento de las

enzimas. En primer lugar en cuanto a su estabilidad y en segundo lugar en
cuanto a su actividad.
Generalmente se observa un aumento en la estabilidad de las enzimas
despus de su inmovilizacin debido a las siguientes razones:

Estabilizacin conformacional de la enzima debido a la existencia de

uniones multipuntuales enzima-soporte. As la estructura terciaria de la
enzima adquiere mayor rigidez y mayor estabilidad. Este tipo de
estabilizacin se adquiere nicamente en aquellos mtodos en los que
intervienen enlaces de tipo covalente como el reticulado o la unin a

soportes (ms adelante se detallan los mtodos de inmovilizacin).

Proteccin frente a proteasas. Se ha visto que la unin de proteasas a

soportes elimina su capacidad proteoltica.

Se evita agregacin intermolecular al mantener las molculas de enzima
retenidas en una determinada regin del espacio.

Alteracin del microentorno de la enzima. El microentorno de la enzima,

(pH, contenido de agua, concentracin de sustrato, oxgeno, etc. que ve
la molcula de enzima) estar determinado por las propiedades qumicas
del soporte, pudiendo ser muy diferentes a las caractersticas del seno del
medio de reaccin.

As mismo, la inmovilizacin afecta la actividad enzimtica. En este contexto

podra producirse la prdida total de actividad debida a las siguientes causas:

La unin al soporte se produce de tal forma que el paso del sustrato al

centro activo est impedido.

Los grupos reactivos del soporte reaccionan con algn aminocido que
forme parte del centro activo o que sea esencial para la actividad cataltica
de la enzima.

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La inmovilizacin puede generar un cambio conformacional que da lugar a

una forma inactiva.

Las condiciones experimentales del proceso causan desnaturalizacin o

desactivacin de la enzima.

Una disminucin o un aumento de actividad despus de la inmovilizacin se

debern principalmente a efectos difusionales, electrostticos, estricos y /o de
microentorno.

En cuanto a los efectos difusionales, como consecuencia de la

inmovilizacin la difusin de los sustratos al centro activo de la enzima
puede estar impedida por resistencias difusionales externas (el sustrato
deber atravesar la pelcula lquida estacionaria que rodea al soporte
insoluble, capa de Nernst o de difusin) como tambin resistencias
difusionales internas (debido a que el sustrato debe atravesar el interior
del soporte para llegar a la enzima inmovilizada).

Efectos electrostticos entre sustrato y soporte, estos pueden atraerse o

repelerse.
Impedimentos estricos o de tamao del sustrato. Se ha visto que
muchas veces la actividad posterior a la inmovilizacin se ve disminuida
para sustratos de elevado peso molecular mientras que se mantiene para
sustratos de bajo peso molecular, esto es debido exclusivamente a

efectos estricos.
Efectos de microentorno. De acuerdo a lo ya mencionado sobre el
microentorno, el efecto observado suele ser un desplazamiento en el
valor de pH ptimo de la catlisis enzimtica y, muchas veces, un
ensanchamiento del intervalo de pH en el cual la enzima puede actuar.

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Conclusin
Cada mtodo de inmovilizacin es muy diferente uno del otro, unos utilizan
soportes para darle estabilidad, otros atrapan o encapsulan la enzima y otros
mtodos enlazan las enzimas, la eleccin del mtodo a utilizar se basa segn el
tipo de enzima, el medio en el que este o los materiales que se puedan
conseguir.
Se puede concluir que, la inmovilizacin enzimtica puede ser muy til en
procesos industriales dado que permite la reutilizacin de la enzima porque evita
que esta se pierda en las primeras reacciones, sin embargo los mtodos de
inmovilizacin deben realizarse con suma exactitud para no perder o alterar
demasiado la enzima y que esta pueda servir para realizar otras reacciones.
En todo proceso de inmovilizacin ocurre una disminucin o aumento de la
actividad enzimtica por lo tanto se debe cuidar que esta no sea perjudicial (muy
alta o muy baja) para el proceso sea costeable.

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Bibliografia

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Pginas web Consultadas:

https://es.wikipedia.org/wiki/Biocatalizadores_inmovilizados

https://es.wikipedia.org/wiki/Enzimas_inmovilizadas

https://es.wikipedia.org/wiki/Cinetica_enzimatica

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http://biblioteca.ucm.es/tesis/19972000/X/0/
X0043802.pdf