FACULTAD DE SALUD
ESCUELA DE TECNOLOGA MDICA
UNIVERSIDAD SANTO TOMS
SEDE SANTIAGO
MANUAL DE LABORATORIO
BANCO DE SANGRE
&
INMUNOHEMATOLOGIA
Autor
Prof. TM MgCs Guillermo Jerez
Revisado por
Prof. TM Dr. Jos Caamao
Prof. TM MgCs Franco del Valle
Prof. TM Monserrat Bustamante
INDICE
I N D I C E.......................................................................................................................................... 1
NORMAS DE BIOSEGURIDAD ...................................................................................................... 5
PRECAUCIONES EN LOS LABORATORIOS ............................................................................. 12
REACTIVOS USO FRECUENTE EN BANCO DE SANGRE E INMUNOHEMATOLOGIA.. 14
CALIBRACIN DE CENTRFUGA INMUNOHEMATOLGICA ............................................ 15
PREPARACIN DE GLBULOS ROJOS SENSIBILIZADOS .................................................. 17
PREPARACIN CONTROL ANTI-D ............................................................................................ 19
CONTROL DE CALIDAD DE LOS SUEROS CLASIFICADORES ABO................................... 20
Inspeccin visual .............................................................................................................................. 20
Recomendaciones de la OMS........................................................................................................... 22
CONTROL DE CALIDAD DE LOS SUEROS Rh, anti D ............................................................. 23
Inspeccin visual .............................................................................................................................. 23
Especificidad..................................................................................................................................... 23
Potencia ............................................................................................................................................ 23
Avidez ................................................................................................................................................ 23
Recomendaciones de la OMS........................................................................................................... 24
Especificidad..................................................................................................................................... 25
Potencia ............................................................................................................................................ 25
CONTROL DE CALIDAD REACTIVOS MISCELANEOS .......................................................... 26
CONTROL DE CALIDAD DEL SUERO DE COOMBS ............................................................... 27
TTULO DE LA FRACCIN IgM y DE LA FRACCIN IgG DEL REACTIVO ANTI-D......... 30
DETERMINACIN DE GRUPO SANGUNEO ABO Y RH EN LAMINA Y TUBO ................. 31
CLASIFICACIN Rh ..................................................................................................................... 35
CLASIFICACIN ABO Y RH EN MICROPLACAS .................................................................... 36
DETERMINACIN DE GRUPO SANGUNEO POR TCNICA EN GELES BIO-TYPE ..... 39
ANLISIS DE CAUSAS DE DISCREPANCIAS EN LA CLASIFICACIN ABO/Rh ............... 41
ANLISIS DE SUBGRUPOS SANGUNEOS ............................................................................... 41
CONCLUSIONES:........................................................................................................................... 44
ANTIGENO B ADQUIRIDO POR INDIVIDUOS A1................................................................... 45
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autorizacin expresa del autors. 2009. Guillermo A. Jerez J.
INTRODUCCIN:........................................................................................................................... 81
MATERIALES ................................................................................................................................. 81
ACTIVIDAD PRCTICA ................................................................................................................ 82
RESULTADOS ................................................................................................................................. 83
TCNICA DEL POLIBRENE ........................................................................................................ 84
TECNICA ENZIMATICA PAPANA EN DOS ETAPAS ............................................................. 85
BANCO DE SANGRE Y MEDICINA TRANSFUSIONAL ................................................... 87
PUNCIN SANGRE VENOSA EN BANCO DE SANGRE .......................................................... 87
EXAMEN FSICO AL DONANTE DE SANGRE ......................................................................... 89
TCNICA DE DETERMINACIN DE HEMOGLOBINA (Hb) ................................................. 91
INSTRUCTIVO PARA LA SELECCION DE UN DONANTE DE SANGRE .............................. 94
1.- INTRODUCCIN: ...................................................................................................................... 94
DONACION EN BANCO DE SANGRE GLOSARIO DE TERMINOS ................................... 95
2.- NORMAS PARA EL LLENADO DE LA ENCUESTA: ..................................................................... 97
7.- PREGUNTAS DE LA ENCUESTA: ............................................................................................... 99
MEDICAMENTOS DISPONIBLES EN CHILE QUE PUEDEN AFECTAR LA AGREGACIN
PLAQUETARIA ............................................................................................................................. 112
MEDICAMENTOS CONTRAINDICADOS PARA DONAR SANGRE ...................................... 115
RECONOCIMIENTO Y MANEJO INICIAL DE LAS REACCIONES ADVERSAS A LA
DONACION ................................................................................................................................... 117
MANEJO DE LAS REACCIONES ADVERSAS A LA DONACION DE SANGRE .................. 119
Medidas generales.................................................................................................................. 119
Desmayos ................................................................................................................................ 119
Nuseas y vmitos .................................................................................................................. 119
Espasmos musculares y calambres ........................................................................................ 119
Hematoma .............................................................................................................................. 120
Puncin arterial. ..................................................................................................................... 120
Convulsiones ........................................................................................................................... 120
PREPARACIN DE HEMODERIVADOS Y CONTROL DE CALIDAD ................................. 122
Clculo para la extraccin de sangre de donantes que pesan menos de 50Kg..................... 122
FRACIONAMIENTO DE LA SANGRE....................................................................................... 123
CONTROL DE CALIDAD DE LOS HEMOCOMPONENTES .................................................. 126
PRUEBAS PRETRANSFUSIONALES ........................................................................................ 127
Todos los derechos de copia e impresin total o parcial de este documento debe ser con la
autorizacin expresa del autors. 2009. Guillermo A. Jerez J.
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NORMAS DE BIOSEGURIDAD
Introduccin
Debido a la importancia que involucra el Servicio de Medicina Transfusional dentro de la actividad de
un Hospital Asistencial, por su apoyo en el tratamiento de los pacientes que lo requieren y porque su
trabajo lo realiza utilizando como elemento principal SANGRE, es que se hace necesario establecer
lneas de trabajo claras a fin de:
1.- Disminuir el riesgo de accidentes al manipular en forma incorrecta objetos contaminados
protegiendo al que ejecuta el procedimiento y a terceros.
2.- Facilitar el trabajo con objetos contaminados con fluidos de alto riesgo, cumpliendo con las
PRECAUCIONES UNIVERSALES establecidas.
PRECAUCIONES UNIVERSALES
Antes de avanzar en las normas propiamente tales, es necesario dejar claro algunos conceptos
importantes para realizar nuestro trabajo, que estn vigentes en todo el quehacer del personal de
salud de nuestro pas de las cuales daremos un resumen a continuacin:
"Las Precauciones Universales de sangre y fluidos corporales, son medidas destinadas a proteger al
personal de salud de la exposicin a productos biolgicos contaminados provenientes de cualquier
paciente, en relacin a la potencial infeccin laboral producida por grmenes patgenos cuya
transmisin sea por la sangre".
Sus objetivos son:
Determinar uso racional de barreras que reduzcan el potencial riesgo de exposicin a sangre
y fluidos de alto riesgo.
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FLUIDOS CORPORALES
Son todas las secreciones o lquidos biolgicos fisiolgicos o patolgicos que se producen en el
organismo.
Dada la posibilidad de transmitir patgenos se han dividido en:
1.- Fluidos corporales de alto riesgo.
2.- Fluidos corporales de bajo riesgo.
3.- Otros fluidos en rea especial.
1.- Fluidos de alto riesgo: Son aquellos en los que se ha encontrado mayor concentracin de
patgenos y que facilitan su transmisin. En estos siempre se deben aplicar las Precauciones
Universales.
- Sangre y sus derivados.
- Semen, secreciones vaginales.
- Todos los tejidos.
- LCR, lquido sinovial, lquido pleural, lquido peritoneal, lquido pericrdico, lquido amnitico.
- Fluidos corporales que contengan sangre visible.
2.- Fluidos de bajo riesgo: Si bien se han aislado virus, la frecuencia y la cantidad aislada no
representa riesgo potencial de infectarse. Se requiere solo aplicar medidas de proteccin de sentido
comn.
- Deposiciones, orina.
- Secreciones nasales, ticas.
- Lgrimas, sudor.
- Expectoracin, vmito.
- Saliva en la piel.
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BARRERAS PROTECTORAS
Debern utilizarse rutinariamente en cualquier paciente independiente de su calidad de infectado o
no, ya sea en hospitales, laboratorios, atencin ambulatoria, dilisis y anatoma patolgica.
Las precauciones universales no son solo la aplicacin de barreras protectoras, sino un cumplimiento
a las recomendaciones de rutina para prevenir infeccin. Haciendo uso de ellas en forma racional por
su elevado costo y modificando tcnicas de rutina a fin de disminuir riesgos.
EL RIESGO DE TRANSMISION INTRAHOSPITALARIA DE GRMENES POTENCIALMENTE INFECCIOSOS
TRANSMITIDOS POR LA SANGRE U OTROS FLUIDOS CORPORALES PUEDEN MINIMIZARSE, SI EL
PERSONAL DE SALUD APLICA EN LA ATENCIN DE CUALQUIER PACIENTE LAS SIGUIENTES MEDIDAS:
I. LAVADO DE MANOS: Es una de las medidas ms sencillas y ms importantes para cortar la
cadena de transmisin de infecciones. El lavado de manos y otras superficies de la piel se
realizar con agua, jabn y/o antispticos, inmediata y cuidadosamente si han sido
contaminadas con sangre y fluidos corporales. Deber realizarse de rutina independiente del
uso de guantes, antes y despus de atender a cualquier paciente.
II. PREVENIR LESIONES: Causadas por material corto-punzante, durante la realizacin de
procesamientos clnicos, de laboratorio, limpieza del material y eliminacin de desechos.
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1. Material Desechable Corto-Punzante: Material como agujas bistures, hojas de afeitar, mquinas
de rasurar, catteres, teflones, venoflex, lancetas, simplate, etc.,debern ser desechados en cuanto
cese su uso.
2. Manipulacin del Material Corto-Punzante: Material corto-punzante es todo aquel que habiendo
estado o no en contacto con sangre y fluidos corporales, es capaz de producir lesiones por puncin
y/o corte, por lo que significan un riesgo para los manipuladores y para la comunidad.
Para facilitar su manejo se dividen en:
2.1. Material Cortante: Principalmente material de vidrio que no ha estado en contacto con sangre y
fluidos de alto riesgo. Frascos, vidrios, botellas, ampolletas, tubos, etc., sin sangre ni fluidos
corporales, termmetros, lminas, porta objetos, etc.
En lo que respecta a su eliminacin destacamos, en este resumen solamente lo siguiente, puesto que
se aplicar en nuestro Banco de Sangre principalmente.
Los receptculos que los recepcionen deben ser de paredes semi-rgidas (cartn o plstico) y sern
llenados solo a 3/4 partes de su capacidad.
En el servicio de Banco de Sangre dichos receptculos sern las cajas de "SAFE BOX" que vienen
rotuladas con el logo de Riesgo biolgico PELIGRO MATERIAL CONTAMINADO (ROJO)
Precauciones :
-
Destino: Basura o desechos comunes, los receptculos sern retirados de las respectivas
reas sucias por el personal de aseo para transportarlas al rea de recoleccin final (rea del
compactador) siempre separadas del resto de la basura.
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Recomendaciones generales
Lavado de manos antes y despus de usar guantes.
Cambiarse los guantes entre cada paciente, si no fuera posible y est usando solo guantes limpios,
lavarse las manos con los guantes entre cada atencin y entre paciente y paciente.
-
Uso de guantes de ltex estriles: En procedimientos y tcnicas que conlleven contacto con
reas normalmente estriles del organismo, en procedimientos invasivos y en los que est
alterada la integridad de la piel. En general en todos los procedimientos que requieran de
tcnicas asptica.
Uso de guantes limpios de ltex : En procedimientos que impliquen que la persona que
ejecuta la accin est en contacto con fluidos de alto riesgo o sangre. Es una medida de
proteccin para el que realiza el procedimiento.
Uso de guantes domsticos : En todas las funciones de aseo que lo requieran segn la
norma; en el lavado y preparacin de material o instrumental sucio; manipulacin de ropa
sucia y basura.
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V. USO DE MASCARILLA:
Su objetivo es proteger la mucosa bucal y nasal, as como tambin la piel de la cara de eventuales
salpicaduras y aerosoles de sangre y fluidos de alto riesgo.
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- Incinerar.
- Despus de descontaminado se elimina a la basura comn, de acuerdo a las normas.
6. Los equipos cientficos que han sido contaminados con sangre u otros fluidos corporales deben
descontaminarse limpindolos antes de ser reparados o transportados donde el fabricante (alcohol al
70%).
7. No est permitido comer o fumar en las reas de trabajo y menos cuando se estn procesando
muestras.
8. Las personas deben lavarse las manos despus de terminadas las actividades en el laboratorio y
retirarse la ropa protectora antes de abandonar el laboratorio.
LA IMPLANTACION DE LAS PRECAUCIONES UNIVERSALES DE SANGRE Y FLUIDOS CORPORALES PARA
TODOS LOS PACIENTES ELIMINA LA NECESIDAD DE ETIQUETAR "CONTAMINADO" LAS MUESTRAS DE
LOS PACIENTES QUE SE CONSIDERAN INFECTADOS. LA ETIQUETA ACTUAL ES SLO PARA REFORZAR
LA PRECAUCIN.
Cada laboratorio debe establecer de acuerdo al rea y al procedimiento que se realiza en esa rea, las
medidas de proteccin necesarias.
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15
10
20
30
45
60
90
Sobrenadante Transparente
Botn celular definido
Resuspensin fcil de las clulas
Intensidad de aglutinacin
Control Negativo es negativo
Criterio lavados
Sobrenadante Transparente
Botn celular definido
Resuspensin fcil de las clulas
Materiales:
- Suero de Antiglobulina Humana
- 5 tubos control +
- 5 tubos control
- PBS
- Suero anti D
- Suspensin de glbulos rojos al 2-4%
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Procedimiento:
5 tubos control +: Suspensin de Gr. D+ al 2-4% incubados 15 min. a 37 C con anti D que de 1+ al
agregar suero AGH
5 tubos control : suspensin de Gr. D+ al 2-4% incubados 15 min. a 37 C con solucin de
albmina al 6%.
Llenar con PBS todos los tubos
Centrifugar de a pares uno positivo y uno negativo a diferentes tiempos 45, 60,90, 120 segundos
Agregar PBS a ambos tubos + y que de el tiempo ptimo para el lavado.
Lavar 2 veces de acuerdo al tiempo de lavado establecido
Eliminar todo el sobrenadante
Agregar a los 2 tubos (control y control +) reactivo de Coombs
Evaluar el tiempo de lectura a los 10, 20, 30 segundos
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Metodologa
Se deben mantener Glbulos Rojos R1R1, R1R2 o R2R2 para este objetivo.
Los glbulos se seleccionan de las unidades ms frescas disponibles para uso. Se determina su
genotipo Rh ms probable mediante el uso de los reactivos correspondientes.
Una vez que se tienen los Glbulos disponibles, se deben tomar 2 tubos Vacutainer rojos donde se
colocan aproximadamente 4 ml de glbulos rojos en cada tubo y estos son lavados 4 veces con
PBS. Una vez lavados los glbulos, se toman 4 Tubos de vidrio de 10 ml, donde se coloca 1 ml de
glbulos lavados a cada tubo.
Paralelo a esto, debe descongelarse el plasma control Anti D a usar. En caso de que el plasma
tenga un ttulo mayor o igual a 128, se debe usar en proporcin 1 es a 1, es decir, 1 ml de glbulos
por 1 ml de plasma Anti D. Por el contrario, si el ttulo es menor a 128 debe usarse 1 ml de
glbulos y 2 ml de plasma, ya que esta es la cantidad necesaria para lograr una sensibilizacin
ptima de los glbulos rojos (esto significa que al agregar dos gotas de suero de Coombs a una
gota de stos glbulos, se pueda leer una aglutinacin de intensidad ++ a +++), la que va a
depender del ttulo previo del plasma Anti D a usar.
Incubar posterior mente los tubos a 37C por 1 hora, Agitando por inversin al comienzo de la
incubacin y cada 15 minutos hasta su trmino.
Una vez finalizado el tiempo de incubacin, se debe controlar los glbulos obtenidos previo a su
lavado, para lo cual se toma una gota de los glbulos concentrados en un tubo Kahn y se le realiza
una prueba de Coombs Directo
Este resultado debe dar intensidad de aglutinacin entre ++ y +++.
Se debe lavar los glbulos sensibilizados 4 veces con PBS, para eliminar el suero con anticuerpos
que quede libre y que podra interferir al momento de usar los glbulos como control. Luego
resuspenderlos en PBS al 2-4%.
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Los glbulos sensibilizados se deben alicuotar en frascos con gotario, los que deben ser rotulados
como tal, con fecha de sensibilizacin y vencimiento de esta, que corresponde a dos semanas
desde la fecha de su preparacin.
Consignar en la hoja de registro correspondiente la fecha, el nmero de la bolsa anti D utilizada, el
ttulo del Anti D, el nmero de la unidad de glbulos rojos utilizados y la intensidad del Coombs
Directo.
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Inspeccin visual
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
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Avidez
Capacidad de un reactivo para dar una reaccin observable (aglutinacin) en un tiempo
determinado, debe dar como mnimo 3+ dentro de 1 minuto despus de mezclar. Reactivos
usados para aglutinacin en lmina con sangre total.
Los glbulos rojos deben estar resuspendidos al 35-45 %.
Procedimiento:
En la placa de vidrio deposite 2 gotas del antisuero a estudiar y agregue el antgeno adecuado a la
concentracin utilizada. Inmediatamente encienda el cronmetro.
Registre la intensidad de los aglutinados al tiempo adecuado para la concentracin de la
suspensin empleada.
Especificidad
Capacidad de un anticuerpo para reaccionar selectivamente con su antgeno conocido, mediante
la observacin y estimacin visual de la aglutinacin. Se mide en cruces.
Procedimiento:
Utilizar muestra con EDTA con hematocrito entre 35-45%
Depositar 2 gotas de los diferentes reactivos a evaluar anti A anti B anti AB y anti D en la
lmina.
Agregar una gota de la muestra de glbulos rojos conocidos.
Evaluar especificidad de los reactivos registrando la presencia o ausencia de aglutinacin
la que se informa como:
Presencia de aglutinacin = signo + (en grado de cruces +/-,1+,2+,3+,4+)
Ausencia de aglutinacin = signo menos encerrado entre parntesis (-).
Potencia
Mide la fuerza de reaccin del anticuerpo contenido en el suero con su antgeno respectivo. Se
realiza mediante diluciones del suero en estudio (Ttulo) y se expresa con el nmero recproco de
la dilucin ms alta en la cual se observe aglutinacin de una cruz.
1- Numerar 10 tubos Kahn con los ttulos correspondientes (2, 4, 8, 16, 32, 64, 128, 256,
512,1024)
2- A cada tubo agregar 500 l de PBS. Posteriormente agregar al primer tubo 500l de suero
a titular (dilucin ) y mezclar por agitacin lateral.
3- De esta dilucin tomar 500l y agregar al tubo siguiente (tubo n4) y mezclar por agitacin
lateral. Hacer esto sucesivamente, en orden, con el resto de los tubos hasta obtener todas
las diluciones necesarias.
4- Numerar 10 tubos Kahn 1-10
5- Transferir a estos tubos 100l de cada uno de los tubos con diluciones madres.
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6- Paralelamente lavar dos a tres veces, ms o menos 2ml de GR apropiados para realizar el
ttulo y luego dejarlos al 3%
7- Agregar a cada tubo 50l de glbulos al 3%, apropiados para el ttulo.
8- incubar todos los tubos a temperatura ambiente durante 45 min.
9- Centrifugar y leer, comenzando desde la dilucin ms alta.
10- Registrar resultados en cruces y/o score.
Anticuerpo evaluado
Clulas
Titulo mnimo
Clulas
Titulo mnimo
anti-A frente a A1
128
anti-A frente a A2
64
anti-B frente a B
128
Recomendaciones de la OMS.
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Especificidad
Corresponde a la capacidad de un reactivo de reaccionar selectivamente con antgenos
conocidamente positivos y negativos, sin dar falsos positivos.
Para su evaluacin se necesitan clulas positivas y negativas para los antgenos segn como
muestras el siguiente cuadro.
Clulas
anti-D
D positivas
D negativas
Potencia
Se titula con un pool de por lo menos 4 glbulos rojos Rh positivos; se debe obtener un ttulo
mnimo de 16.
Avidez
Se estudia con dos glbulos RhD positivos; deben dar un grado tres dentro del primer minuto si se
ocupan glbulos rojos al 35-45 % o 2 minutos en caso de ocupar glbulos rojos al 10-20 %.
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Recomendaciones de la OMS.
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Esto se aplica para todos los otros anticuerpos utilizados en banco de sangre.
Especificidad
Estudiar por lo menos con dos glbulos rojos que tengan dosis simple para el antgeno
dependiendo del anticuerpo utilizado y 4 glbulos rojos que sean negativos para ese antgeno. Los
resultados deben ser positivos inequvocos y claros negativos.
Potencia
Deben dar un ttulo de 4 como mnimo con glbulos rojos que tengan dosis simple para el
anticuerpo estudiado. Tanto el suero puro como el diluido 1 en 2 deben dar una reaccin de +++
como mnimo
Estas clulas se utilizan en la tcnica de antiglobulina humana, para controlar que la antiglobulina
humana no se neutralice total o parcialmente, se usa en todos los test de Coombs directos e
indirectos negativos.
Los glbulos rojos O Rh positivos se les deben agregar suficiente anti-D como para que den un
resultado negativo con antiglobulina humana, al agregar un volumen de glbulos rojos y un
volumen de suero diluido 1 en 1000, pero deben permanecer positivos si en vez de suero diluido
se adiciona un volumen se suero fisiolgico.
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pH 6,5 7 a 22 1 C.
Conductividad 3,4 4 mS/com
Osmolaridad 285 305 mOsmol/Kg.
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Materiales:
-Pipetas de 1ml
-Bao termoregulado a 37 C
-Centrfuga inmunohematolgica
-Tubos de 10x75 mm
-Fuentes iluminadora
Reactivos
-Suero anti-D IgG Humano
-Glbulos rojos O Rh Positivo
Metodologa
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Agregar 2 gotas de suero de Coombs conocido a cada suspensin de GR. Anotar sus
resultados.
Preparar el suero de Coombs en estudio haciendo diluciones seriadas desde a 1/64
teniendo presente de dejar un volumen final de 1,5 ml.
Preparar 54 tubos enumerados segn esquema adjunto (tablero Ajedrez)
Agregar 2 gotas de GR sensibilizados con una dilucin de a los tubos 1, 10, 19, 28, 37 y
46. Efectuar lo mismo con todas las diluciones de GRs.
Agregar 2 gotas de la dilucin de suero de Coombs a los tubos que estn en la fila 1, 2,
3, 4, 5,....9. Efectuar lo mismo con las dems filas.
Mezclar la gradilla y centrifugar todos los tubos con procedimiento estndar.
Leer en fuente luminosa, anotar sus resultados.
INTERPRETACIN
Ttulo mnimo del suero de Coombs de ser de 1/64 (tubo 46)
La sensibilidad del suero de Coombs debe ser como mnimo con un ttulo de
1/1024 (tubo 9), 200 a 300 IgG por GR.
El ttulo del suero de Coombs est dado por la columna que se utilizaron GRs
tratados con anti-D .
La potencia est determinada por la fila en donde se utiliza la dilucin de del
suero de Coombs.
El control de sensibilidad y potencia del suero de Coombs se debe realizar cada vez que se cambia
de lote y/o proveedor del reactivo y como control rutinario utilizando los ttulos de sensibilidad y
potencia lmites.
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Diluciones
SAGH
1/4
1/8
1/16
1/32
1/64
1/128
1/256
1/512
1/1024
1/2
1/4
10
11
12
13
14
15
16
17
18
1/8
19
20
21
22
23
24
25
26
27
1/16
28
29
30
31
32
33
34
35
36
1/32
37
38
39
40
41
42
43
44
45
1/64
46
47
48
49
50
51
52
53
54
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Tcnica en lmina
Slo para reclasificar muestras sanguneas.
1.
2.
3.
4.
Tcnica en tubo
Los tubos de Kahn se rotularn de la siguiente manera: A, B, AB, TS (testigo salino), y con las
iniciales del paciente o nmero de donante.
1. Colocar una gota de anti-A monoclonal en un tubo limpio y rotulado.
2. Colocar una gota de anti-B monoclonal en un segundo tubo limpio y rotulado.
3. Colocar una gota de anti-AB monoclonal en un tercer tubo limpio y rotulado.
4. Aadir a cada tubo una gota de suspensin de glbulos rojos problema al
2-4%.
6. Mezclar suavemente el contenido de los tubos y centrifugarlos segn el tiempo estandarizado
de lectura.
7. Resuspender suavemente los sedimentos de glbulos rojos y examinar la aglutinacin.
8. Anotar los resultados de la prueba. Confirmar los resultados con los obtenidos en las pruebas
ABO en suero.
2. Mtodo inverso.
Muestra: suero o plasma
Materiales
-Pipetas Pasteur
-Tubos Kahn
-Centrfuga para Inmunohematologa.
-Fuente de luz.
Reactivos
Glbulos rojos testigos A1 y B lavados y resuspendidos en EDTA 1,5 % o
suspensin debe prepararse diariamente.
PBS, al
2-4 %. La
Tcnica en tubo
Los tubos de Kahn se rotularn de la siguiente manera: A1, B, (opcional A2), y con las iniciales del
paciente o nmero de donante.
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1. Colocar una gota de glbulos rojos reactivos comerciales del grupo A1 en un tubo limpio y
rotulado.
2. Colocar una gota de glbulos rojos reactivos comerciales del grupo B en un segundo tubo limpio
y rotulado.
3. Colocar una gota de glbulos rojos reactivos comerciales A2 en un tercer tubo, si van a
realizarse pruebas en paralelo con este reactivo.
(Nota: las pruebas con glbulos rojos A2 son opcionales. Ej.: Discrepancias o subgrupo del sistema
ABO.)
4. Aadir a cada tubo una gota de suero problema.
5. Mezclar suavemente el contenido de los tubos e incubarlos a temperatura ambiente durante 5
minutos para potenciar reacciones dbiles.
6. Centrifugar segn el tiempo estandarizado de lectura.
7. Anotar los resultados de la prueba. Confirmar los resultados de la prueba en suero con los
obtenidos en la prueba globular.
Interpretacin
-La aglutinacin de los glbulos rojos en estudio y la hemlisis o la aglutinacin en el suero,
constituyen resultados positivos.
-La suspensin uniforme despus de la resuspensin de las clulas, constituye un resultado
negativo.
-Todas las discrepancias entre los resultados de las pruebas en el suero y las clulas deben
resolverse antes de registrar el informe del grupo ABO y Rh de la muestra.
Protocolo de registro de resultados
Muestra
Mtodo directo
Anti-A Anti B Anti-AB
Grupo Rh
Anti-D
Mtodo inverso
A1
A2
B
Interpretacin
1
2
3
4
Lectura de aglutinacin:
La lectura de aglutinacin debe hacerse en forma lenta y sobre una fuente de luz. De acuerdo a lo
que se vea en los tubos se grada en cruces (+), segn lo detallado:
4+ o ++++
3+ o +++
2+ o ++
1+ o +
W o +/-
:
:
:
:
:
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Score de aglutinacin:
Este indicador se usa para hacer control de calidad en antisueros y el reactivo que muestre mayor
score en una titulacin posee mayor potencia.
El Score es la suma de cada uno de los scores individuales obtenidos, para ello se ha asignado
valores a cada grado de aglutinacin.
Score(Puntaje)
Negativo
(-)
Positivo
+/1+
10
4+
12
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CLASIFICACIN Rh
El sistema Rhesus, est constituido por unos 40 antgenos siendo 5 de estos importantes desde el
punto de vista clnico. Son los llamados antgenos mayores D, C, E, c, e.
En los bancos de sangre generalmente solo se estudia el antgeno D, ya que produce la
aloinmunizacin ms frecuente.
Los anticuerpos anti D son de tipo IgG y se producen por aloinmunizaciones previas, ya sea por
embarazo o transfusiones.
Reaccionan mejor en SAGH a 37 C.
El 85% de los individuos caucsicos expresan el antgeno D y se les denomina Rh positivos, si el
antgeno no se expresa 15% , se denomina Rh negativos.
Muestra
Sangre completa con o sin anticoagulante
Reactivos
Suero anti D (mezcla IgM e IgG)
PBS
Tcnica en lmina
1. En lmina de vidrio disponer de 1 gota de suero anti D
2. Agregar 1 gota de suspensin de glbulos rojos 50% en solucin salina, suero o plasma.
3. Mezclar con bagueta y hacer girar la lmina manualmente
4. Leer en un mximo de 2 minutos.
Tcnica en tubo
Los tubos de Kahn se rotularn de la siguiente manera: D, TA (testigo albuminoso), y con las
iniciales del paciente o nmero de donante.
1. Colocar una gota de antisuero anti-D en un tubo limpio y rotulado.
2. Colocar una gota de albmina al 30% como testigo en un segundo tubo limpio y rotulado.
3. Aadir a cada tubo 1 gota de la suspensin de glbulos rojos problema al 2-5%.
4. Mezclar y centrifugar segn el tiempo estandarizado de lectura..
5. Resuspender suavemente el sedimento de glbulos rojos y examinar la aglutinacin.
6. Anotar los resultados de la prueba y los controles.
Interpretacin
-Si hay aglutinacin, se denomina Rh D positiva
-Si no hay, seguir estudiando la muestra para investigar presencia de antgeno D dbil.
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Materiales
Microplacas
Micropipetas automticas
Tubos khan
Equipos
Centrifuga con porta microplacas, estandarizadas
Agitador estandarizado para resuspensin de Gr.
Muestra
Sangre coagulada o anticoagulada.
Reactivos
Anti A monoclonal
Anti B monoclonal
Anti AB
Estandarizados para microplaca
Glbulos rojos A1, A2 (opcional) y B (suspensin al 2-5%)
Procedimientos:
Prueba en glbulos rojos
1.
2.
3.
4.
5.
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37
Tipificacin Rh en microplacas.
Reactivos
Anti D monoclonal IgG o IgG + IgM, adems tener un suero anti D de otra marca para repetir las
muestras negativas en tubo o gel.
Procedimiento
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Interpretacin
- La aglutinacin en las microcubetas de los glbulos rojos en estudio y la hemlisis o la
aglutinacin en las microcubetas del suero, constituyen resultados positivos.
- La resuspensin uniforme de las clulas, constituye un resultado negativo.
- Todas las discrepancias entre los resultados de las pruebas en el suero y las clulas deben
resolverse antes de registrar el informe del grupo ABO y Rh de la muestra.
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38
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Reactivos
La tarjeta Bio-Type ABO/D/D/PI contiene anticuerpos Monoclonales Anti-A Anti-B, Anti-D IgM,
Anti-D IgM/IgG y Anti-D IgG.
Suspensin neutra adecuada para realizar la prueba inversa en presencia de glbulos rojos A1 y B.
Preparacin de la muestra
a.- Determinacin ABO y Rh (prueba directa)
Preparar una suspensin de Glbulos Rojos al 1% en la solucin I de la siguiente forma:
Dispensar 2 volmenes de solucin I (Liss) (1 ml) a un tubo y agregar 10 ul de glbulos rojos
concentrados.
b.- Prueba Inversa.
Se puede utilizar suero o plasma. Los G.R. A1 + B deben se diluidos al 1% en solucin I, de acuerdo
a la siguiente proporcin:
Dispensar un volumen (500 ul)
: 4 gotas de GR.
Dispensar dos volmenes (1000 ul) : 8 gotas de G.R
Dispensar tres volmenes (1500 ul ) : 12 gotas de G.R
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Resultados
NEGATIVO
POSITIVO
+/1+
2+
3+
4+
DP
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MATERIAL Y EQUIPO
Tubos Kahn
Cronmetro
Marcador
Centrfuga serolgica
MUESTRA BIOLGICA
REACTIVO
Glbulos rojos de donante o Lectina anti-A1
paciente
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MUESTRA BIOLGICA
REACTIVO
Glbulos rojos de donante o Lectina anti-H
paciente
Adicione una gota de una suspensin de eritrocitos a una concentracin aproximada del 4% en
solucin salina (PBS) en un tubo de ensayo debidamente marcado. Mezcle completamente el
contenido del tubo.
Adicione dos gotas de lectina anti-H y mezcle completamente el contenido del tubo. Incube
durante 5 minutos a temperatura ambiente.
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CONCLUSIONES:
Para realizar una transfusin sangunea se debe tomar en cuenta los subgrupos del donante y del
receptor. Los subgrupos con mayor frecuencia y tienen ms relevancia clnica los de A, que los de
B. Se identifican por medio de lectinas. Los subgrupos A ms importantes son: A1 y A2.
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Debilitamiento de antgenos A, B y H
El debilitamiento de la expresin de antgenos AB puede observarse en las personas de edad
avanzada (aparentan ser grupo O); los anticuerpos anti-AB tambin pueden sufrir cambios en
estos sujetos.
En pacientes que estn recibiendo quimioterapia inmunosupresora la concentracin de
anticuerpos disminuye significativamente. En ocasiones la sangre parece contener una mezcla de
clulas de los grupos A y O, o de A1 y A dbil; en otros casos, los eritrocitos reaccionan dbilmente
con el anti-A y se comportan de manera parecida al A3 o al Am.
Secretores y no secretores
Los genes secretores Se y se controlan la secrecin de H, A y B. Alrededor de 80 % de los
individuos son secretores y segregan la sustancia H, independientemente de su grupo ABO; as la
saliva de secretores de grupo O contiene H y la de secretores de grupo A contiene A y H. 20% de
los individuos que no segregan sustancia H (no secretores) tampoco segregan A ni B.
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Falsos negativos
Pueden tener lugar debido a la omisin de:
- Agregar reactivo o suero de prueba a un tubo.
- No Identificar la hemlisis como una reaccin
positiva.
- Uso de una relacin inapropiada entre suero
(reactivo) y eritrocitos.
- Centrifugar insuficientemente las pruebas.
- Interpretar o registrar incorrectamente los
resultados de las pruebas.
Falsos positivos
Los resultados pueden ocurrir por:
- Sobrecentrifugacin de los tubos.
- Uso de reactivos, eritrocitos o solucin salina
contaminados.
- Uso de material de vidrio sucio.
- Autoaglutinacin de los eritrocitos del paciente y
realizacin slo del grupo directo sin autotestigo.
- Interpretacin o registros incorrectos de los
resultados de las pruebas.
Obtener una nueva muestra (donante o receptor) y someter sta a prueba; esto resuelve
las discrepancias debidas a un rotulado equivocado o contaminacin de muestra.
Lavar los eritrocitos varias veces para eliminar componentes sricos o qumicos que
puedan estar causando reacciones positivas.
Someter a prueba los eritrocitos con anti-A, B, anti-A1 o anti-H, segn corresponda.
Si se sospecha anti-A1, examinar el suero contra varios ejemplos de eritrocitos del grupo
A2.
Revisar los resultados de la prueba de investigacin de anticuerpos contra eritrocitos del
grupo O para detectar efectos de interferencia por aloanticuerpos fros inespecficos.
Incubar las pruebas durante 30 minutos a temperatura ambiente para facilitar la
deteccin de antgenos o anticuerpos dbiles.
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Verificar el diagnstico del paciente. Los antgenos adquiridos B suelen relacionarse con
afecciones hsticas que permiten ingresar a las bacterias del colon a la circulacin.
Someter a prueba el suero del paciente contra eritrocitos autlogos. El anti-B del
individuo no aglutina sus propios eritrocitos que portan el B adquirido.
Someter a prueba los eritrocitos con suero anti-B humano que ha sido acidificado a pH
6,0. El anti-B humano acidificado no reacciona con el antgeno B adquirido.
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Los pacientes inmunodeficientes pueden no producir niveles detectables de anti-A y antiB; estos anticuerpos estn ausentes del suero de recin nacidos, o ser muy dbiles en
personas seniles normales, pacientes que cursan con hipogamaglobulinemias y pacientes
con transplantes de medula sea. Cuando esto sucede en la prueba inversa:
aumentar el tiempo de incubacin 15-30 minutos a temperatura ambiente.
incubar a 4 C junto con tubo que lleve Gr O y un autocontrol (PA).
Concentraciones anormales altas de anti-A y anti-B han causado reacciones prozona que
dieron lugar a resultados falsos negativos; en estos casos, el grupo ABO se puede inferir
mediante pruebas en eritrocitos por dilucin del suero mediante el uso de suero tratado
con EDTA.
El anti-A en el suero de individuos A2, A2B u otros subgrupos aglutina eritrocitos testigos
A1.
Las autoaglutininas fras como anti-I y anti-IH, pueden aglutinar los eritrocitos de todos los
adultos, incluidas las clulas autlogas y eritrocitos testigos, cuando esta reactividad
interfiere en la interpretacin de las pruebas:
- Calentar el suero y los eritrocitos testigos a 37 C antes de mezclarlos y realizar las
pruebas en suero a 37 C y convertirlas a la fase antiglobulina si es necesario.
- Eliminar la autoaglutinina fra del suero mediante un mtodo de autoadsorcin fra, el
suero adsorbido puede ser sometido contra eritrocitos testigos A1 y B.
- Tratar el suero con DTT y usar el suero tratado para pruebas de agrupacin inversa.
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Muestra
Saliva
Reactivos
Suero clasificador ABO
Lectina anti H
Glbulos rojos A-B-O lavados
PBS
Tcnica
1. Enjuagar la boca
2. Recolectar 5-10 ml de saliva en un tubo de centrifuga
3. Centrifugar durante 9 min.
4. Transferir el sobrenadante a un tubo limpio y colocar en bao termoregulado durante 810 min. Para inactivar la saliva.
5. Centrifugar 9 min. Extraer el sobrenadante transparente o algo opalescente en otro tubo,
descartar el material opaco o semi slido.
6. Diluir el sobrenadante (500ul) con un volumen igual de PBS (500ul).
7. Por otra parte prepare diluciones de los antisueros para tipificar, esta dilucin debe
permitir una aglutinacin de las clulas correspondientes de 2 +
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8. Colocar una gota de reactivo para tipificar (antisuero diluido) en dos tubos, una marcado
como solucin salina (control +) y el otro como desconocido. Para cada anticuerpo en
anlisis.
9. Agregar una gota de solucin salina al tubo marcado como control+ y una gota de saliva
diluida e inactivada al tubo respectivo.
10. Mezclar e incubar a temperatura ambiente 10 min.
11. Agregar una gota de glbulos rojos testigos suspendidas al 3 % a cada tubo del grupo A, B
u O.
12. Mezclar e incubar a temperatura ambiente por 10 min.
13. Centrifugar bajo condiciones estandarizadas, leer y registrar los resultados.
Interpretacin
Ejemplo:
Saliva en estudio + anti A + Gr A
++
-
PBS+ anti A+ Gr A
++
++
Interpretacin
Sese o No Secretor
SeSe, Sese o Secretor
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Almacenaje
Almacenar entre 18-25C.
El reactivo se mantendr estable por todo el perodo indicado.
Toma de la muestra
La muestra de sangre debe ser extrada en forma asptica y preferentemente en Citrato, EDTA,
Heparina o CPD-A. Para obtener resultados confiables se recomienda el uso de sangre fresca.
Se puede utilizar suero o plasma frescos. Reacciones de Hemlisis dependientes de complemento
podran pasar desapercibidas al utilizar plasma en vez de suero.
La muestra de suero o plasma, una vez separada, puede ser almacenada durante 48 horas a
temperatura de refrigeracin (2-8 C), o congelarse entre 20 a 80 C por perodos mayores.
Al utilizar suero, este debe ser aclarado mediante centrifugacin a 1.500 g por 10 minutos, para
evitar residuos de fibrina que pudieran interferir con la reaccin.
Preparacin de la muestra
Preparar una suspensin de Glbulos Rojos al 1% en la solucin I de la siguiente forma:
1. Las Clulas de screening deben ser diluidas al 1% en Solucin I de acuerdo a la siguiente
proporcin, dependiendo del nmero de muestras diarias:
Vol. Gr (uL)
40
200 (4 gotas)
400 (8 gotas)
N de pruebas
2
14
28
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Falsos negativos
Neutralizacin del reactivo antiglobulnico humano.
Interrupcin de la prueba.
Almacenamiento incorrecto de los reactivos.
Procedimientos incorrectos.
Complemento.
Solucin salina.
Exceso de antgenos
Omisin de adicin de AGH
Tiempo de incubacin y temperatura inadecuada
Falsos positivos
Clulas aglutinadas antes de los lavados.
Presencia de cogulos de fibrina
Problemas con la limpieza de material
Clulas con PAD positiva.
Complemento.
Contaminacin de AGH
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Interpretacin
Si el resultado es negativo, se puede afirmar que esa persona es Rh D negativa.
Si el resultado es positivo puede ser porque la persona tiene un antgeno D dbil o un D parcial.
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Tcnica
En el refrigerador de Inmunohematologa se deben mantener Glbulos Rojos R1R1, R1R2 o R2R2
como control (-) o +. Los glbulos se seleccionan de las unidades (Concentrados de Glbulos
Rojos) ms frescas disponibles para uso. Se determina su genotipo Rh ms probable mediante el
uso de los reactivos correspondientes.
1. Preparar 5 tubos de Kahn marcados como D, C, E, c, e
2. Colocar en cada tubo lo que corresponda, 1 gota del antisuero anti-Rh es decir una gota
de antisuero D al tubo marcado D, etc.
3. Hacer una suspensin de los glbulos rojos a estudiar del 2-4% en solucin salina y
aadir una gota a cada tubo.
No olvidar los controles Negativos y positivos para cada antisuero (D, C, c, E, e). Para los
controles se puede usar cada antisuero a una dilucin de en PBS. Para esto tomar 50
microlitros de antisuero y resuspenderlo en 150 microlitros de PBS quedando un volumen
final de 200 microlitros, que nos alcanza para realizar 2 determinaciones y 2 controles para
cada uno.
Luego de lavados los glbulos y hechas las diluciones,
4. Tomar 50 microlitros de antisuero diluido y ponerlo en un tubo Kahn,
5. Agregar 50 microlitros de glbulos a analizar mezclar. Realizar esto con los tubos
rotulados como Anti D, Anti C, Anti c, Anti E y Anti e, y tambin para los controles
Negativos y positivos de cada antisuero.
6. Centrifugar los tubos y leer sobre la fuente luminosa.
7. Validar los resultados con los controles.
8. Interpretar el resultado registrando la intensidad de aglutinacin observada de cada tubo
en la plantilla de resultados, luego segn lo observado asignar un genotipo Rh ms
probable de acuerdo a la tabla adjunta.
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Genotipo probable
c
E
Wiener
FischerRace
DCe/dce
Rr
R1R1
rr
R1R2
R2r
R2R2
Ror
rr
rr
DCe/DCe
dce/dce
DCe/DcE
DcE/dce
DcE/DcE
Dce/dce
dCe/dce
dcE/dce
R
r
R2
R0
r
r
Rz
ry
FischerRace
DCe
Chile
%
49,9
Frecuencia
Blancos
42
dce
22,2
37
26
DcE
22,2
14
11
Dce
2,3
44
dCe
0,9
dcE
1,4
DCE
0,9
dCE
Negros
17
Frecuencia (%)
85
15
70
30
80
98
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Marcar 5 tubos A, B, AB, D y AGH. Agregar 2 gotas de los antisueros segn corresponda.
Agregar a cada tubo 1 gota de la suspensin de GR.
Mezclar y centrifugar
Remover los eritrocitos sedimentados, observar si existe aglutinacin.
Informar en cruces
Protocolo
Identificacin Anti A
Anti B
Anti AB
Anti D
TAD
Grupo ABO
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63
Este pocillo ha sido diseado para deteccin de muestras con Coombs Directo Positivo (+).
Precauciones
Este reactivo contiene 0.1% p/v Azida de Sodio.
Puede ser txico al ser ingerido y reacciona con las tuberas de plomo y cobre.
Almacenaje
Almacenar entre 18-25C.
El reactivo se mantendr estable por todo el perodo indicado.
Toma de la muestra
Sangre de cordn o puncin de taln puede ser utilizada. Generalmente no es necesario lavar la
sangre previo a su clasificacin. Cuando se utilice sangre de cordn debe evitarse la
contaminacin con gelatina de Wharton.
La muestra de sangre debe ser extrada en forma asptica y preferentemente en Citrato, EDTA,
Heparina o CPD-A. Para obtener resultados confiables se recomienda el uso de sangre fresca.
Preparacin de la muestra
Preparar una suspensin de Glbulos Rojos al 1% en la solucin I de la siguiente forma:
En un tubo de ensayo limpio, colocar 1 ml de Solucin I y 10 ul de sedimento de glbulos rojos.
Procedimiento.
No utilizar tarjetas que presenten deshidratacin o variacin en su presentacin al examen ocular.
No utilizar muestras hemolizadas o contaminadas.
1.- Identificar cada tarjeta con el nombre del paciente.
Retirar el sello que recubre la tarjeta.
2.- Aadir 50 ul de glbulos rojos suspendidos al 1% en solucin I a los pocillos 1 al 6.
3-Centrifugar por 10 minutos a la velocidad indicada.
4- Leer y anotar los resultados.
Interpretacin
Las muestras positivas se presentan como una lnea roja en la superficie del reactivo, (4+) o
dispersadas a travs del pocillo (1-3 +).
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7. Centrifugar. Leer los tubos en busca de aglutinacin o hemlisis sobre la fuente de luz.
Registrar resultados positivos.
8. Lavar los tubos cuatro veces con PBS. En el ltimo lavado luego de botar el PBS, secar los
tubos sobre un papel absorbente, a fin de dejar el botn de glbulos seco en el fondo del
tubo.
9. Agregar dos gotas de suero de Coombs a cada tubo. Mezclar.
10. Centrifugar los tubos y leer.
Interpretacin:
Ausencia de aglutinacin en todos los tubos indica que no se encuentra antgeno para el
anticuerpo.
Presencia de antgenos para el anticuerpo, estos se deben comparar con la tabla de
antigenicidad que proporciona el kit.
Control de calidad
Se utilizan las clulas control de Coombs para validar los resultados con AGH negativos.
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Interpretacin Resultados
Antgeno Presente
Antgeno Ausente
TOTAL
Positivo
A+B
Negativo
C+D
TOTAL
A+C
B+D
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5. Repetir el paso anterior para todas las diluciones, cuidando de usar una pipeta limpia
para mezclar y transferir cada dilucin. Retirar 1 volumen de suero diluido del tubo
final y guardarlo para diluciones siguientes.
6. Marcar 10 tubos de 10x75 mm, para las diluciones apropiadas.
7. Usando pipetas individuales para cada dilucin, transferir 2 gotas de suero a cada uno
de los tubos del paso 6 y agregar 1 gota de la suspensin de glbulos rojos. Se puede
ocupar la misma pipeta si se comienza del tubo ms diluido al ms concentrado.
8. Mezclar bien e incubar segn la tcnica empleada para la deteccin e identificacin
del anticuerpo en estudio.
9. Examinar los resultados y registrar las reacciones. Se recomienda comenzar desde el
tubo ms diluido.
Interpretacin
1. Observar la dilucin ms alta que produce aglutinacin macroscpica de 1+.
2. En los estudios comparativos la diferencia significativa en los ttulos es de tres o ms
diluciones.
Observaciones
1. En el caso de madres sensibilizadas con especificidad anti-D se deben utilizar glbulos
rojos con fenotipo R2R2, al igual que para cualquier antgeno que presente efecto de
dosis se deben enfrentar glbulos rojos con antgeno en doble dosis.
2. Para cada control de ttulo se debe hacer en paralelo con la muestra de control
anterior y se debe realizar una nueva identificacin para cada control.
3. En los estudios con anticuerpos dirigidos contra antgenos de baja incidencia,
4. considerar el empleo de glbulos rojos paternos.
No usar tcnicas potenciadoras (como PEG y medios de baja fuerza inica LISS) o glbulos rojos
tratados con enzima porque podran obtenerse ttulos elevados.
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70
71
Metildopa induce la formacin de autoanticuerpos mediante su efecto inhibidor sobre las clulas
T suprimiendo estas la produccin de anticuerpos por las clulas B. la mayor parte de estos
pacientes no presentan hemlisis pero si una PAD +.
Sndrome de Crioaglutininas
Las Crioaglutininas son anticuerpos inespecficos que generalmente se pueden visualizar a
temperatura de 4C, generalmente sin relevancia clnica pero que es necesario estudiarlas y
demostrar su inocuidad. Una crioaglutinina puede estar enmascarando un anticuerpo
clnicamente significativo (Aloanticuerpo; alo de griego Allo=otro) o estar relacionado con alguna
patologa como por ejemplo Sndrome de aglutininas frias, que se da en pacientes con
enfermedades lifoproliferativas, mononucleosis infecciosa, o neumona atpica por Mycoplasma
pneumoniae, Hemoglobinuria paroxstica por fro o Sndrome de Donath-Landsteiner,
hemoglobinuria paroxstica nocturna pueden desarrollar anticuerpos IgM debido a cierta similitud
antignica frecuentemente contra el antgeno I (antgeno i grande) del glbulo rojo generando un
fenmeno autoinmune lo que se refleja en la produccin de autoanticuerpos fros dirigidos en
contra del husped, por tanto hay una relacin directa entre el ttulo del anticuerpo y la severidad
del cuadro clnico de Neumona.
Estudio serolgico para evaluar la PAD +
- Analizar con anti IgG y anti C3d para determinar qu tipo de protenas recubren los glbulos
rojos.
- Analizar suero/plasma para detectar e identificar anticuerpos contra antgenos eritrocitarios
significativos.
- Examinar el eluato preparado a partir de los glbulos rojos recubiertos. Este se examina con una
batera de clulas reactivas, para determinar si son aloanticuerpos (reaccin transfusional o EHRN)
o fracciones del complemento en donde los eluatos no son reactivos.
Para facilitar los resultados de las pruebas, se debe revisar la historia clnica, el
diagnstico, antecedentes teraputicos, gestacionales y transfusiones recientes del paciente.
Adems complementar con los resultados de laboratorio: Hematocrito, bilirrubina,
haptoglobina y recuento de reticulocitos.
Observar destruccin eritrocitaria: reticulositosis, hemoglobinemia, hemoglobinuria,
disminucin de la haptoglobina srica, elevacin de la lactato deshidrogenada, adems paciente
se observa anmico.
Averiguar si el paciente fue transfundido en fecha reciente: La fijacin de anticuerpos en los
glbulos rojos, puede ser indicador de una respuesta inmunolgica en desarrollo. En la
inmunizacin primaria los anticuerpos podran aparecer ya a los 7-10 das de la transfusin y en la
secundaria a los 2-7 das.
Elucin:
Libera los anticuerpos de los eritrocitos sensibilizados y los recupera en forma utilizable.
Cuando no se conoce la causa de TCD se puede preparar eluido y probarlo contra un panel de
eritrocitos.
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Por lo general se puede detectar la misma especificidad en el suero del paciente. Cuando
el eludo reacciona con todas las clulas del panel la explicacin ms probable es la de un
autoanticuerpo.
Cuando no hay presentes anticuerpos irregulares en el suero y el paciente no ha sido
transfundido recientemente no es necesaria otra prueba serolgica para la deteccin de un
autoanticuerpo aislado
Como las crioaglutininas casi siempre son IgM, tratar los glbulos rojos con reactivos
sulfidrilos DTT o ZZAP.
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Materiales y Reactivos
-
ZZAP: Reactivo preparado con papana y DTT (Dithiothreitol), que permite limpiar la superficie
de los glbulos rojos a usar para la adsorcin.
PEG: Polmero soluble en agua usado como potenciador de reaccin antgeno-anticuerpo.
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Metodologa
AUTOADSORCION CON ZZAP
Modificacin de los glbulos rojos con reactivo ZZAP
Preparacin del reactivo ZZAP. Para 1 ml de ZZAP preparar:
0,5 ml de DTT stock 0.2 M.
0,1 ml de papana stock 1%
0,4 ml de PBS.
Tratamiento de los Hemates:
Centrifugar los glbulos rojos autlogos con TAD positivo del paciente o glbulos rojos
control (+); remover el plasma de tal manera de dejar el concentrado de glbulos rojos, no
se requiere lavar.
Mezclar un volumen de GR concentrados (segn disponibilidad de muestra) ms 2
volmenes de ZZAP. Ej.
0,5 ml de GR autlogos con TAD +, y otro tubo control GR sensibilizados
Incubar 30min a 37 C. Mezclar por inversin cada 15 minutos durante la incubacin.
Terminada la incubacin, lavar 4 veces con abundante PBS (llenar hasta del tubo de
Khan) mediante el uso de la centrifuga inmunohematolgica.
En el ltimo lavado, centrifugar 3 minutos en vez de 1 minuto en High para dejar bien
concentrados los glbulos rojos tratados.
Realizar un TAD a los glbulos rojos tratados para verificar que la cantidad de IgG unida
haya disminuido (verificado en intensidades de cruces)
Adsorcin:
a. Agregar a razn de 1 /2 un volumen del suero paciente que se va a adsorber con dos
volmenes de GR modificados y tratados con ZZAP concentrados.
b. Incubar 15 minutos a 37C.
c. Centrifugar y extraer el suero autoadsobido.
d. Con el suero autoadsorbido hacer un TAI con clulas I y II, el cual debera ser
Negativo, si no lo es, repetir la autoadsorcin usando una nueva alcuota de GR
tratados con ZZAP.
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Tcnica
1. Lavar 4 veces 1 ml de glbulos rojos concentrados PAD + con PBS.
2. Guardar el ltimo sobrenadante del lavado para utilizarlo posteriormente como control
negativo al realizar la identificacin del anticuerpo.
3. Agregar 1 ml de la solucin de elucin. Mezclar por inversin 5 a 6 veces. Dejar a
temperatura ambiente por 1,5 a 2 minutos.
4. Centrifugar de acuerdo al tiempo de lavado estandarizado. Remover el eludo
sobrenadante, colocarlo en un tubo kahn previamente rotulado que contenga la cantidad
de solucin neutralizante necesaria para que el pH del eludo quede entre 6,8 y 7,2. Esto
depende de la cantidad de eludo obtenido, es decir por cada ml de eludo, son 200
microlitros de sol. neutralizante.
5. Mezclar por inversin varias veces y centrifugar para remover algn precipitado que se
pudo haber formado despus de la neutralizacin. Traspasar el eludo neutralizado a un
tubo kahn limpio, previamente rotulado.
6. Realizar la identificacin del anticuerpo del eludo, sin dejar de incluir como control
negativo un test de Coombs indirecto con el sobrenadante del ltimo lavado reservado
previamente.
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ESTUDIO DE CRIOAGLUTININAS
Crioaglutininas: Anticuerpos fros.
Las Crioaglutininas son anticuerpos inespecficos que generalmente se pueden visualizar a
temperatura de 4C, sin relevancia clnica pero que es necesario estudiar y demostrar su
inocuidad. Una crioaglutinina puede estar enmascarando un anticuerpo clnicamente significativo
(Aloanticuerpo; alo de griego Allo=otro) o estar relacionado con alguna patologa como por
ejemplo Sndrome de aglutininas fras, que se da en pacientes con enfermedades
lifoproliferativas, mononucleosis infecciosa, o neumona atpica por Mycoplasma pneumoniae,
Hemoglobinuria paroxstica por frio o Sndrome de Donath-Landsteiner, hemoglobinuria
paroxstica nocturna. Dichas patologas pueden desarrollar anticuerpos del tipo IgM debido a
cierta similitud antignica frecuentemente contra el antgeno I (antgeno i grande) del glbulo rojo
generando un fenmeno autoinmune lo que se refleja en la produccin de autoanticuerpos fros
dirigidos en contra del husped, por tanto hay una relacin directa entre el ttulo del anticuerpo y
la severidad del cuadro clnico ( Neumona).
Las crioaglutininas por sus caractersticas anteriormente sealadas se pueden fijar a los Glbulos
rojos causando activacin de la cascada del complemento, por tanto se puede obtener una
prueba de Coombs Directa positiva al utilizar suero antiglobulina Humana poliespecfico o mono
especfico anti-C3, por otro lado si se requiere asegurar la presencia de una IgG adherida al
glbulo rojo es conveniente utilizar un suero antiglobulina humana monoespecfico anti-IgG. En
este sndrome la aglutinacin se produce a temperaturas bajas y es mnima por sobre los 30 C. La
hemlisis intravascular en rara vez suficiente para causar hemoglobinuria y hemosideruria, pero
su presencia es ayuda diagnstica importante.
En algunos pacientes no se puede encontrar una causa subyacente, sta forma atpica suele
observarse en personas mayores. Mycoplasma pneumoniae es una etiologa ms comn en
jvenes. Independiente de la causa el sitio primario de destruccin es el hgado.
Para realizar el titulo la muestra debe cuidadosamente tratarse a 37 C, es decir; al momento de
extraer la muestra mediante puncin venosa, inmediatamente se de llevar a 37C, idealmente el
tubo donde se extraiga debera calentarse a bao mara o simplemente con agitacin con la palma
de las manos, transportar al laboratorio rpidamente conservando la cadena de temperatura
requerida.
Una vez recibida por el laboratorio de inmunohematologa, controlar la temperatura durante el
transporte, no debe ser inferior a 32C. Luego la muestra es dejada en el bao mara a 37C hasta
obtener una buena calidad del coagulo extrado o de lo contrario centrifugar la muestra en una
centrfuga con temperatura controlada , tomar suero y trasvasijarlo a un tubo Kahn previamente
rotulado con el nombre del paciente, dejar el tubo original en el bao a 37C.
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Determinacin de crioaglutininas
Para este anlisis se requiere que la muestra sea extrada y puesta inmediatamente en un bao a
37C.
1. Marcar 3 tubos, I, II y PA.
2. Agregar 0.1 ml de suero del paciente a cada uno.
3. Agregar a cada uno de estos tubos 0.05 ml de glbulos correspondientes, es decir,
screening cells I y II y glbulos autlogos.
4. Incubar los tubos por 1 hora a 4C
5. Leer los tubos sin centrifugarlos previamente, en busca de aglutinacin o hemlisis sobre
la fuente de luz.
Interpretacin
Si no hay reaccin en ningn tubo luego de 60 minutos a 4C, el resultado es negativo.
Si existe aglutinacin en los tubos de clulas I, II o ambos y no en el tubo antlogo, no
estamos en presencia de crioaglutininas, sino de un aloanticuerpo fro.
Si aglutinan los tres tubos por igual, estamos en presencia de crioaglutininas.
Si va desde +/- hasta ++ en los tres tubos, se informa como dbilmente positivas, sin
realizar ttulo.
Si va de +++ o mayor, se realiza ttulo para lo cual se debe marcar 11 tubos con las
diluciones a realizar para titular. (1/2,1/4,.,1/2048).
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Ttulo de crioaglutininas
Procedimiento
1. Marcar 3 tubos, I, II y PA.
2. Agregar 0.1 ml de suero a cada tubo.
3. Agregar a cada uno de estos tubos 0.05 ml de glbulos rojos de clulas de screening I y II y
glbulos autlogos.
4. Mezclar los tubos por agitacin lateral.
5. Incubar los tubos por 60 Minutos a 4C. Una vez terminada la incubacin.
6. Leer los tubos sin centrifugarlos previamente, en busca de aglutinacin o hemlisis sobre la
fuente de luz, anotar y registrar sus resultados. De no haber reaccin en ningn tubo, el resultado
es negativo.
7. Si existe aglutinacin en los tubos de clulas I,II o ambos y no en el tubo autlogo, no estamos
en presencia de crioaglutininas, sino de un aloanticuerpo fro.
8. Si aglutinan los tres tubos por igual, estamos en presencia de crioaglutininas.
9. Si la aglutinacin es desde +/- hasta ++ en los tres tubos, se informa como dbilmente
positivas, sin realizar ttulo.
10. Si la intensidad de aglutinacin es de +++ o mayor, se realiza ttulo para lo cual se debe marcar
11 tubos con las diluciones a realizar para titular. (1/2,1/4,.,1/2048).
11. Colocar a cada uno de los tubos 0.1 ml de PBS.
12. Agregar al primer tubo de dilucin (1/2) 0.1 ml de suero a investigar.
13. Mezclar por agitacin manual y tomar 0.1 ml de la mezcla. Transferir estos 0.1 ml al tubo con
PBS de la dilucin siguiente (1/4). Realizar esto hasta el ltimo tubo de la serie.
14. Preparar como primer tubo de la serie el tubo sin diluir, marcarlo como 1 y agregar 0.1 ml de
suero a analizar.
15. Agregar a cada uno de los tubos 0.05 ml de glbulos rojos, escoger screening cells I o II en la
cual la aglutinacin en el paso anterior haya sido ms alta.
16. Mezclar los tubos por agitacin lateral.
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MATERIALES
-
Tubos Kahn
Centrifuga y lector de Inmunohematologa
Pipetas Pasteur y micro pipeta.
Bao termo regulable.
Timer.
Clulas o glbulos rojos Control heterocigotos para los anfgenos investigados
Anticuerpos Controles Anti D, Anti Fya, Anti con una reaccin dbil
Suero Antiglobulina Humana o Suero de Coombs
Suero AB sin anticuerpos o Coombs Indirecto negativo
Clulas control AGH
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ACTIVIDAD PRCTICA
Sacar de nuestra seroteca los anticuerpos control. Un anti D marcado dbil, si no est disponible
el de ms bajo ttulo que se disponga. Tambin un anti Duffy A o B y un anti K.
Diluya los sueros 1: 4 o 1: 3 para que la reaccin al hacer un test de Coombs indirecto, la reaccin
obtenida sea de una a dos cruces.
Incube durante una hora los sueros control con los anticuerpos elegidos y diluidos segn
intensidad.
Ejemplo
Anti D dbil con clula del panel de identificacin R1 r
Anti Fya con clula del panel screening que contengan antgenos Fya+ Fyb+
Anti Kell con clula del panel screening que contengan antgenos K+ k+
Mientras se estn incubando estos Coombs indirectos lave dos veces en PBS una cantidad
suficiente (aprox. 1ml) de clulas control adecuadas a los anticuerpos elegidos, en el ejemplo
seran clula 4 del panel de identificacin R1/r y clula I del screening de anticuerpos, djelos
secos esperando diluirlos al 3- 4% en el nuevo lote de LISS.
Preparar una batera de tubos marcados con los diferentes tiempos de incubacin 8-10-12-15
minutos, en el ejemplo seria para anti D dbil, anti Fya, anti Kell y suero AB sin anticuerpos.
Una vez cumplido el tiempo de los Coombs indirectos lave y aplique la AGH. Registre los
resultados para luego compararlos con los diferentes tiempos del nuevo LISS.
Repartir los sueros a los tubos segn su marca en una proporcin idntica entre suero y glbulos o
clulas apropiadas, es decir tres gotas de suero para tres de glbulos rojos. Proporcin 1:1
Prepare los glbulos que haba dejado secos al 3 % en el nuevo LISS.
Comience a incubar los tiempos previamente establecidos comenzando por el mayor es decir 15
minutos. Coloque tres gotitas de glbulos apropiados a los tubos marcados D dbil, Fya, Kell y AB
C. Ind. Neg. Incube por 15 minutos a 37 C. Programe el timer en 15 min. Cuando el timer marque
12 min. 15 segundos reparta las tres gotas de glbulos apropiados a los tubos marcados 12
minutos e incube a 37 C .Repita lo mismo para los tiempos 10 minutos, a los 10 min. 15 seg. y a
los 8 min. 15 seg. para el tiempo 8 min.
Nota: Para el suero AB sin anticuerpos puede usar cualquiera de los glbulos preparados se
realiza para descartar reacciones falsas positivas de nuestro reactivo.
Al terminar los tiempos de incubacin se realiza un test de AGH a todos los tubos es decir se lavan
4 veces con PBS y se les agregan dos gotas de AGH a cada tubo.
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MEDIO Y TIEMPO
DE REACCION
ANTI - Fya
ANTI - K
SUERO AB
LISS 8
+/-
+/-
+/-
LISS - 10
+/-
LISS - 12
++
LISS - 15
++
AGH 1 Hr
++
RESULTADOS
El tiempo de incubacin a elegir para el nuevo lote es el que muestre una aglutinacin
igual o superior a la lograda al incubar los mismos sueros por una hora a 37 C y terminados en
AGH.
El tiempo ptimo en el ejemplo es de 12 minutos. Se selecciona el tiempo menor donde la
reaccin es igual a la obtenida en AGH en incubacin 1 hora.
MEDIO Y TIEMPO
DE REACCIN
ANTI - Fya
ANTI - K
SUERO AB
LISS 8
LISS - 10
LISS - 12
LISS - 15
AGH 1 Hr
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Agua destilada.
Papana Sigma.
Cistena Sigma (como hidrocloruro).
buffer sorensen.
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Tcnica
1. Pesar 1 gr. de Papana Sigma y poner en un vaso pp.
2. Pesar 0.44 gr de Cistena Sigma y poner en el otro vaso pp.
3. Poner el gramo de papana en el mortero y pulverizar, adicionando 50 ml de buffer sorensen.
Preparacin Buffer Sorensen.
-
KH2PO4
2.2 grs.
Na2HPO4 x 2 H2O
0.09 grs.
Disolver en 100 ml aprox. De agua destilada.
Ajustar pH a 5.4, y llevar a volumen final de 250 ml.
Conservar refrigerado
4. Poner sobre un embudo Papel whatman sin que queden espacios entre el papel y el embudo.
Poner el embudo en un matraz de aforo de 100ml. Filtrar la mezcla sin mover.
5. Disolver los 0.44 grs de cistena en la solucin de papana filtrada.
6. Enrasar a 100 ml con buffer sorensen e incubar 60minutos a 37C.
7. Envasar en tubos Eppendorf en alcuotas de 0.5 ml.
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Soluciones anticoagulantes-conservantes mg
Relacin solucin/sangre
Vida til das
Citrato de sodio
cido ctrico
Dextrosa
Fosfato de sodio monobsico
Adenina
CPD
CP2D
CPDA-1
1,4 : 10
21
1.660
188
1.610
140
0
1,4 : 10
21
1.660
188
3.220
140
0
1,4 :10
35
1.660
188
2.010
140
17,3
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Venupuncin
Esta se debe realizar en una sala que sea cmoda, equipada y aireada.
Debe ser realizada por personal capacitado, mediante una venopuntura nica, con aguja de
dimetro de 16 G desechable y estril. Antes de romper el sello de la aguja de extraccin debe
estar pinzada la tubuladura que comunica con la bolsa (ASEGURA CIRCUITO CERRADO).
Durante la extraccin de la sangre es de suma importancia mezclarla con el anticoagulante
(agitacin mecnica o inversin manual de la bolsa).
La recoleccin de la sangre debe tener un flujo continuo, se puede extraer en un tiempo que vara
entre 8-10 minutos, aceptable hasta 15 minutos.
Reacciones adversas a la donacin:
Si bien el procedimiento es bien tolerado por la mayora de los donantes existe un nmero de
personas que reaccionan inesperadamente a la donacin de sangre, por lo que es necesario estar
preparado para reconocer y atender a estos donantes. Por lo mismo se hace necesario que exista
entrenamiento en Reanimacin Cardio Pulmonar (RCP) y los elementos bsicos para atender un
paro cardiorrespiratorio, as como manejar la cadena de sobrevivencia de apoyo vital bsico de la
institucin a que pertenece el banco de sangre.
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Presin Arterial
La presin arterial representa la presin ejercida por la sangre contra la pared de las arterias.
La presin arterial tiene dos componentes:
La presin sistlica: Se refiere al efecto de presin que ejerce la sangre eyectada del corazn
sobre la pared de los vasos.
La presin diastlica: Se refiere al efecto de distensibilidad de la pared de las arterias, es
decir el efecto de presin que ejerce la sangre sobre la pared del vaso.
La presin de pulso es la diferencia entre la presin sistlica y la diastlica.
La presin arterial vara en las personas a lo largo de las 24 horas. Los factores que influyen son las
emociones, la actividad fsica, la presencia de dolor, estimulantes como el caf, tabaco o algunas
drogas, etc.
Materiales
Esfigmomanmetro de mercurio
Valores de referencia
Sistlica 100-160 mm Hg.
Diastlica 60-100 mm Hg.
Valores fuera de los rangos normales son causa de exclusin.
Temperatura
La temperatura axilar del donante no debe ser superior a 37 C. Temperaturas inferiores a lo
normal, no suelen ser significativas.
Valor de referencia
No mayor a 37 C
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Para medir la hemoglobina, se debe desinfectar la yema de uno de los dedos del donante con
alcohol 70%.
Puncionar rpida y suavemente la yema del dedo con una lanceta estril.
Con un algodn limpiar la primera gota de sangre. Tomar un poco de sangre en un capilar
y dejar caer una gota en un vaso con sulfato de cobre a una altura de 2 cm del lquido.
En caso de tener lector automtico, encender lector y calibrar. Con otra celdilla capilar de
HemoCue tomar una gota de sangre del donante que cubriendo el crculo central del capilar o
idealmente que este quede lleno.
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los
RECHAZO DEFINITIVO: Aqul que no cumple con los requisitos establecidos y no susceptible de
alcanzarlos en el tiempo.
DONACION EFECTIVA: Procedimiento que logr la Sangra; en donante aceptado en el tiempo - en
volumen (peso) en calidad adecuada, obteniendo una bolsa de Sangre o de un Hemocomponente
en particular, susceptible de ser fraccionada o transfundida.
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DONACION FRUSTRA: Procedimiento que no logr ser efectivo por dificultad en acceso
venoso, dificultad en la Sangra, Reaccin Adversa a la donacin o por problema tcnico,
incluyendo fallas en las bolsas.
Si la causa es motivada por prolongacin en el tiempo de la Sangra, se le denomina donacin
lenta.
UNIDAD O BOLSA FRACCIONABLE: Es toda bolsa de recoleccin de sangre completa, que
cumple con los requisitos de calidad volumen/peso ; aspecto ; ausencia de cogulos, etc.
susceptible de ser fraccionada mediante procedimientos especficos para cada hemocomponente.
UNIDAD O BOLSA POR AFRESIS : Es toda unidad o bolsa colectada mediante mquina de
afresis, que contiene un hemocomponente programado, especfico y obtenida de
donante previamente seleccionado, y susceptible de ser transfundida.
REACCION ADVERSA A LA DONACIN FISICA/MENTAL : Es toda Reaccin negativa, que se presenta
en el donante, durante cualquier etapa del procedimiento y que puede tambin producirse
durante o post donacin. En este ltimo caso la relacin causa efecto depender de la patogenia
de la Reaccin Adversa.
DONANTE AUTOEXCLUIDO: Persona que acudiendo al Banco de Sangre con el fin de donar sangre
se autoexcluye sin necesidad de precisar causa en cualquier etapa.
AUTOEXCLUSION PRE DONACION: La autoexclusin ocurre en la pre seleccin o durante la
seleccin.
AUTOEXCLUSION POST DONACION: Aqul que por cualquier medio verbal - por escrito, en
documento Autoexclusin - telfono Mail - carta correo etc. indica al centro colector que su
sangre o hemocomponente no debe ser ocupada para transfusin.
DONANTE PARA AUTOTRANSFUSION: Es toda persona sana o enferma, en condiciones de
someterse al procedimiento de Sangra, que dona en forma autodirigida (Donante / Receptor) y
requiere cumplir los requisitos que el centro de coleccin determine.
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4.- PULSO: -
5.- HEMOGLOBINA:
6.- HEMATOCRITO:
38% en hombres
36% en mujeres
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Dirigida a detectar cualquier patologa o antecedentes que no estn cubiertos por las
preguntas de la encuesta y que pudieran causar dao ya sea al donante o al receptor. El
donante debe tener un aspecto saludable, sin sntomas o signos de intoxicacin por
alcohol o drogas. Donantes bajo la influencia del alcohol, deben rechazarse
transitoriamente hasta cumplir 12 horas sin ingesta de alcohol, debido a que
generalmente no es posible obtener antecedentes clnicos fidedignos, la donacin adems
puede ser daina para el propio donante.
Preguntar sobre antecedentes de alcoholismo crnico, dao heptico crnico,
hemorragias digestivas etc. Si existen estos antecedentes, rechazar en forma definitiva al
donante.
Una pequea cantidad de alcohol ingerida recientemente, en especial durante las
comidas, no es causa de rechazo ya que en ese caso no existe riesgo para donante ni
receptor.
Pregunta adicional:
a.- Ayuno de ms de 6 horas, en cuyo caso debe rechazarse temporalmente al donante
hasta que ingiera algn alimento.
SI:
NO:
Se acepta.
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100
3.- Ha sido rechazado alguna vez como donante de sangre? por qu?
Dirigida a conocer alguna causa temporal o definitiva que lo inhabilite como donante.
Enfatizar acerca del conocimiento de resultados alterados de exmenes realizados a su
sangre. Rechazar todo donante con antecedentes de exmenes positivos para : Hepatitis,
Chagas, Sida, HTLV-I. En caso de Sfilis depender si hubo tratamiento, aceptndolo si existi
y fue dado de alta hace un ao por lo menos.
Evaluar si el rechazo anterior fue por una causa definitiva o transitoria, en este ltimo
caso, el donante se acepta si el plazo determinado se ha cumplido.
SI:
NO:
SI:
Debe rechazarse todo aquel que haya presentado complicaciones mayores como
vmitos, palpitaciones, desmayo, etc.
NO:
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101
Cncer: Se rechaza. Se aceptar solo con autorizacin mdica, despus de 5 aos sin tratamiento.
j)
k) Malaria: Se rechaza por un perodo de 3 aos a quienes hayan sufrido de Malaria, tomado drogas
antimalricas, o quienes han vivido en pases endmicos.
l)
Piel: Se rechaza a quienes presenten lesiones en la piel especialmente en las reas de puncin
venosa o vecinas. Lesiones poco importantes como dermatitis y sarna sern causa de rechazo
temporal.
102
o) Sfilis y Gonorrea: Se rechaza por un perodo de 12 meses, ya que pudieran asociarse con
transmisin de VIH.
Acepte al donante
SI:
NO:
Acepte al donante.
SI:
Se rechaza hasta cumplir 12 meses desde el momento de la transfusin. Consultar
la causa de la transfusin y registrarla en la hoja de encuesta, seccin observaciones.
NO:
Acepte al donante.
SI:
activo.
NO:
Acepte al donante.
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103
SI:
NO:
NO:
SI:
104
Antibiticos
Antihistamnicos
Corticoides
Neurolpticos (Antipsicticos y tranquilizantes mayores)
Antiepilpticos - anticonvulsivantes.
NO:
SI:
SI:
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105
NO:
SI:
Se rechaza en forma transitoria hasta que cumpla 10 das del ltimo episodio.
Sugerirle que consulte un mdico
NO:
SI:
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106
Para la malaria , se recomienda que aquellos que la han tenido, deben ser diferidos por
tres aos desde que se vuelven asintomticos, diferir por un ao a aquellos que han
estado en alguna zona endmica para malaria (ver anexo zonas endmicas), y diferir por
tres aos a aquellos que han vivido en una zona endmica. Exposicin al riesgo con o sin
profilaxis, rechazar por 3 aos
NO:
SI:
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107
TIPO VACUNA
VACUNA
Agentes Vivos
Atenuados
BCG
PERIODO DE RECHAZO
FIEBRE AMARILLA
PAPERA
2 3 SEMANAS
RUBEOLA
VARICELA ZOSTER
Agentes Muertos ,
Toxoides
4 SEMANAS
DIFTERIA
TIFOIDEA
TIFUS
PARATIFOIDEA
TETANOS
COLERA
COQUELUCHE
INFLUENZA
HEPATITIS B
ANTIGENO RECOMBINANTE
POLIO (SALK)
DIFTERIA
Anticuerpos
RABIA
1 AO
INMUNOGLOBULINAS:
PROFILACTICA: NO se rechaza
HEPATITIS B:
EXPOSICIN AL VIRUS
Rechazo por 1 ao.
ANTI-TETANOS:
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108
19.- Est Ud. embarazada, ha tenido parto o aborto en los ltimos 6 meses?
Mujeres embarazadas y que han tenido parto o aborto en los ltimos 6 meses, no deben
donar sangre debido a los altos requerimientos de fierro en ste perodo. Excepciones a
esta regla deben ser hechas por el mdico del Banco de Sangre.
NO:
SI:
Se rechaza transitoriamente.
Se acepta al donante.
SI:
Se rechaza. Debe instrursele en que nunca puede ser un donante de sangre. Solo
se acepta un donante que refiere ictericia de causa obstructiva comprobada. Si
documenta una hepatitis de tipo A, puede ser aceptado como donante.
21.- Ha tenido relaciones sexuales con personas con hepatitis, dializados o politransfundidos,
en los ltimos 12 meses?
Dirigida a identificar pacientes que pueden estar en fase de incubacin de Hepatitis.
Aunque el perodo de incubacin es generalmente menor de 6 meses, debe rechazarse
hasta 12 meses despus de la ltima exposicin.
Personal de salud no se considera grupo de riesgo, a menos que haya sufrido accidentes
corto-punzantes con material presuntamente contaminado, en cuyo caso debe rechazarse
por 12 meses.
NO:
Se acepta
SI:
109
SI:
Se acepta al donante.
SI:
NO:
Se acepta
SI:
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110
SI:
26.- Ha tenido relaciones sexuales con ms de una persona en los ltimos 12 meses?
Dirigido a detectar personas que estn en riesgo de infeccin por VIH y otras
enfermedades infecciosas que podran ser transmitidas al receptor de productos
sanguneos.
NO:
SI:
27- Usted quiere donar sangre para hacerse el examen del SIDA?
Si es as consultar el porqu y enviarlo a los consultorios de CONASIDA en que lo hacen en
forma gratuita.
NO:
SI:
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111
NO:
SI:
SI:
NOTA: Cualquier duda que se presente frente a las respuestas entregadas por un donante, que
signifique aplicar un criterio diferente al escrito en este instructivo, o aparezcan aspectos no
consignados en l, deben ser consultados al mdico Jefe del Banco de Sangre.
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112
Lertus (diclofenaco)
Action (piroxican)
Meclomen ( ac meclofenamico)
Adona (ibuprofeno)
Merpal (diclofenaco)
Midol (ibuprofeno)
Algipres (ketorolaco)
Mitrotil (tenoxicam)
Artren (diclofenaco)
Mobex (meloxicam)
Aspirina efervescente
Motrim (ibuprofeno)
Aspirina
Moviflex ( indometacina)
Astodol (ibuprofeno)
Naprosym ( naproxeno)
Naproxeno
Bioflan (tenoxicam)
Naproxeno Sodico
Bodil (ibuprofeno)
Niofen (Ibuprofeno)
Bladex (ibuprofeno)
Notagol (piroxican)
Brevedol (diclofenaco)
Pediaprofen ( ibuprofeno)
Brexicam (piroxican)
Pemar (piroxican)
Burten (ketorolaco)
Pevoran ( diclofenaco)
Butartrol (ibuprofeno)
Pirexyl ( sup.diclofenaco)
Piroflan (diclofenaco )
Pironal (ibuprofeno )
Cataflan (diclofenaco)
Piroxicam
Desinflan (tenoxicam)
Profenil (ketoprofeno)
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113
Diclofenaco
Propalgin (piroxican)
Diclofenaco Sodico
Recaflex (tenoxican)
Dignofenac
Silartrin (ibuprofeno )
Sipirax (diclofenaco )
Dolmix (ibuprofeno)
Talflex (ketoprofeno)
Dolofar ( ketoprofeno)
Dolo-Ketazon (ketoprofeno)
Tenoxicam
Dolonase (ibuprofeno)
Tepronac (piroxican )
Dolo-octirona (ibuprofeno)
Texicam DU (tenoxicam )
Trigesico ( ac acetilsalicilico)
Efexicam ( tenoxicam)
Veradin ( ac acetilsalicilico)
fabudol (piroxican)
Zadetin (ketotifeno )
Facitor ( ac acetilsalicilico)
Zolimin (tenoxicam)
Fastum (ketoprofeno)
Feldene ( piroxican)
Felis ( tenoxicam)
Flexono ( indometacina)
Foldox ( piroxican)
Hassapirin ( ac acetilsalicilico)
IBU-2 (ibuprofeno)
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114
IBU-4
IBU-6
Ibupirac
Ibuprofeno
Indometacina
Ketoprofeno
Ketorolaco
Ketorolaco trometadol
Ketotisin (ketorolaco)
Kin (ibuprofeno)
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115
Hormona del crecimiento de la gldula pituitaria Utilizada slo hasta 1985 en nios
con retardo en el crecimiento
Si el donante est tomando Proscar, Avodart, Propecia, Accutane, Soriatane, or Tegison, debe
saber que estas drogas pueden causar malformaciones, la sangre donada a una embarazada
podra contener suficiente para causar dao al feto. Debe diferirse por un mes despus de la
ltima dosis.
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116
Insulina Bovina (Bovine, or Beef, Insulin), Esta insulina proviene de pases que tienen el mal de las
vacas locas, y por tanto puede estar infectada por los agentes causales de la enfermedad. Se
difiere en forma permanente.
Hepatitis B Immune Globulin (HBIG) Riesgo a exposicin de personas que han sufrido de hepatitis
B. Diferir por 12 meses.
Vacunas no licenciadas Diferir por al menos un ao, a no ser que el mdico jefe del servicio diga
lo contrario.
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117
Dermatitis local
Hematoma
Puncin arterial
Dao del nervio
Infeccin local
Tromboflebitis superficial
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118
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119
Tranquilizar al donante
Solicitar ayuda si el cuadro no cede con las medidas especficas, es muy intenso o se prolonga
en el tiempo.
Desmayos
Nuseas y vmitos
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120
Si no cede se puede usar una bolsa de papel para que respire en ella
Hematoma
Remover la ligadura, sacar la aguja e intentar vaciar el hematoma por medios mecnicos
Colocar parches de gasa estril sobre la zona de puncin y presionar firmemente durante 7 a
10 minutos, manteniendo el brazo elevado sobre el nivel del corazn
Puncin arterial.
Se debe sospechar puncin arterial si el llenado de la bolsa es muy rpido, si la sangre es muy
roja.
Se debe retirar la aguja, presionar firmemente por 10 minutos la zona de puncin , controlar el
pulso arterial, y si este es ausente, avisar al jefe del Banco de Sangre o al mdico de urgencia
en su ausencia.
Convulsiones
Ante cualquier reaccin que no ceda en pocos minutos o que sea muy intensa se debe avisar al
mdico del Banco de Sangre. En su ausencia, se avisar o se referir al mdico residente o de
urgencia.
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121
Todas las reacciones adversas a la donacin deben ser registradas en la ficha del donante, con
una indicacin clara si la persona es o no apto para una prxima donacin.
La mantencin de stock de medicamentos para tratar las reacciones adversas a la donacin ser
definida por el mdico jefe del Banco de Sangre, as como las personas autorizadas para
administrarlos
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122
Objetivo
El objetivo del servicio de banco de sangre, es la obtencin de hemoderivados producidos
por la separacin asptica de los componentes celulares de la sangre y del plasma, mediante un
sistema cerrado estril, el cual permite mantener la integridad de los hemocomponentes y as
asegurar la calidad y seguridad que beneficien al receptor de estos.
La sangre se recolecta en bolsas de extraccin plsticas con bolsas de transferencia o
satlite (doble, triple, cudruple) o con solucin aditiva. La bolsa de extraccin contiene
soluciones anticoagulantes-conservantes, destinada a evitar la coagulacin y preservar la
viabilidad y funcin celular, durante su almacenamiento.
Las bolsas de extraccin de sangre estn diseadas para un volumen de 450 45 ml (405495 ml) con un 63 ml de anticoagulante-conservante. Para los pacientes que pesan menos de 50
Kg para los casos de autotransfusin peditrica o en aquellas situaciones que el volumen extrado
supere el 15% de la volemia se deben extraer una parte del anticoagulante.
La solucin anticoagulante usual contiene citrato (fija calcio del plasma), fosfato (sustrato
para mantener el 2,3-DPG), dextrosa (azcar), adenina (nucletido).
Segn el hemocomponente que se desee, depender la temperatura de conservacin y
velocidad de centrifugacin de la sangre recolectada.
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123
FRACIONAMIENTO DE LA SANGRE
Comienza con un donante sano (evitar bacteriemia transitoria) y puncin venosa
limpia (minimizar contaminacin bacteriana).
La sangre se debe extraer de forma rpida (evitar activacin de la coagulacin) sin
traumatizar el tejido, esta se puede extender hasta 15 minutos sin alterar las plaquetas y el
plasma congelado. Al finalizar, la sangre se puede refrigerar a 1-6 C, excepto si se empleara para
la produccin de plaquetas.
La sangre se fracciona antes de 8 horas post extraccin.
La separacin se realiza de acuerdo al peso especfico de cada uno de los
componentes, mediante centrifugacin diferencial y de acuerdo a la calibracin establecida
(velocidad y duracin para cada componente).
Plasma
Plaquetas
Glbulos rojos
Densidad g/ml
1.023
1.03
1.100
Sangre Total
Es la sangre fresca no separada, contiene la solucin anticoagulante y conservante
(450 ml sangre + 63 ml anticoagulante-conservante.).
Plaquetas y leucocitos dejan de ser funcionales.
Hematocrito 35-45%
Se conserva a 1-6 C
Sin factores de coagulacin lbiles
Actualmente los bancos de sangre no la utilizan, slo cuando es necesario reponer la
masa eritrocitaria y la volemia (hemorragia masiva).
Glbulos rojos
Son unidades de sangre casi sin plasma obtenidas por centrifugacin fuerte.
Este preparado contiene un concentrado de hemates de 200 ml ms unos 100 ml de plasma
residual.
Si la sangre se recoge en CPD-A, los concentrados pueden conservarse por 35 das a 4C.
Hematocrito 60-80% CPD-A
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124
Si los glbulos rojos son suspendidos en 100 ml de solucin aditiva (SAG-M, ADSOL), pueden
conservarse por 42 das, hematocrito 55-65%.
Indicacin: componente de eleccin en las anemias sintomticas y en las transfusiones
quirrgicas.
Glbulos rojos leucodepletados
Consisten en la suspensin o concentrado de glbulos rojos contenidos en 5 x 106 leucocitos por
unidad, que se preparan mediante el paso de estos a travs de un filtro de leucodeplecin,
generalmente realizado antes de la transfusin.
Indicacin: Estos componentes pobres en leucocitos tienen valor en pacientes con reacciones
transfusionales no hemolticas febriles, evitar la aloinmunizacion HLA, disminuir transmisin de
algunos virus (CMV, Epstein Barr).
Glbulos rojos irradiados
Consiste en prevenir la proliferacin de linfocitos T transfundidos en los receptores con riesgo de
enfermedad injerto versus husped. La dosis mnima necesaria de irradiacin gamma es de 25 G.
Los glbulos rojos irradiados se conservan por un mximo de 28 das despus de la colecta y
procedimiento de irradiacin.
Indicacin: Transfusiones intrauterinas, inmunocompetentes sometidos a trasplantes de medula
sea, unidades de donantes consanguneos, neonatos bajo peso.
Glbulos rojos lavados
Se requiere realizar en condiciones de asepsia, en 1-2 litros de solucin salina normal, donde se
remueve protenas, electrolitos y anticuerpos plasmticos.
Estos deben usarse dentro de las 24 horas, debido a la realizacin del procedimiento con sistemas
abiertos y se corre el riesgo de proliferacin bacteriana.
Indicacin: En pacientes que tienen reacciones a las protenas del plasma y en aquellos con anti
IgA.
Plaquetas
Se preparan a partir de sangre total a temperatura ambiente. Se obtienen plasma rico en
plaquetas por centrifugacin suave, mediante el sistema cerrado, el PRP se transfiere a la segunda
bolsa (satlite), el que se centrifuga fuerte para obtener el concentrado plaquetario sedimentadas
y resuspendidas en 40-60 ml de plasma. Estas se conservan a temperatura ambiente 20-24 C por
no ms de 5 das en agitacin constante.
Indicacin: pacientes con trombocitopenias o disfuncin plaquetaria.
Para prevenir hemorragias espontneas o detener las existentes.
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125
Crioprecipitado
Se prepara a partir de plasma congelado dentro de las 6 horas de extrada.
El PFC se descongela entre 1-6 C, luego se somete a centrifugacin fuerte para sedimentar el
crioprecipitado, este se resuspende en 15 ml de plasma y se conserva a -30C por 12 meses.
El crioprecipitado contiene aproximadamente 250 mg de fibringeno y 80 U de FVIII.
Antes de usarse se debe descongelar en agua a 37 C.
Indicacin: hemorragias secundarias a deficiencias de FVIII, hemofilia, enfermedad de Von
Willebrand.
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126
Esterilidad: sembrar sangre en placa de agar sangre observar a las 24-48 horas.
Determinacin del pH: > 6,2 o mas
Recuento plaquetario /U: > 5,5 x 1010
Rec. Leucocitos/ U: 0.2 x 10 9
Volumen 40-60 ml
Sin contaminacin con glbulos rojos.
Antes de entregarlas se debe inspeccionar:
Agregados
Aspecto arremolinado frente a una fuente de luz.
Tipo de hemocomponente
Volumen
Glbulo rojo
PFC
250-300 ml
100 ml
Crioprecipitado
10-30 ml
Temperatura
conservacin
1-4 C
-30 C
-80 C
-30 C
Plaquetas
40-60 ml
20-24 C
de Tiempo de almacenamiento
21-35-42 das
1 ao
2 aos
1 ao
Descongelado 24hrs a 4C
Mx. 5 das en agitacin horizontal
constante
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127
PRUEBAS PRETRANSFUSIONALES
Pruebas pretransfusionales
El objetivo de las pruebas pretransfusionales, es prevenir las reacciones adversas a la transfusin
por incompatibilidad entre donante y receptor.
Los estudios pretransfusionales comprenden:
Identificacin inequvoca del receptor de la transfusin.
Identificacin inequvoca de las muestras del receptor de la transfusin.
Comprobacin de los resultados obtenidos de las muestras con los obtenidos previamente y
registrados, en el caso de anteriores transfusiones.
Determinacin del grupo ABO y Rh en las muestras del receptor de la transfusin.
Descubrimiento de anticuerpos presentes en el suero del receptor de la transfusin.
Seleccin de los componentes sanguneos apropiados para el receptor de la transfusin.
. Reclasificacin del grupo sanguneo de la bolsa de GR del donante desde la tubuladura de esta.
Realizacin de las pruebas cruzadas de compatibilidad entre el suero del receptor y los hemates
del donante, excepto en casos de extrema urgencia en donde la falta de suministro de la sangre
comprometa la vida del paciente, esto debe ir indicado por escrito por el mdico responsable, en
el laboratorio se debe proseguir con el estudio de compatibilidad luego de entregar la sangre.
Etiquetado de los componentes sanguneos con la informacin adecuada del receptor de la
transfusin.
Tipo de muestra:
Sangre con EDTA para la determinacin del grupo ABO y Rh.
Sangre sin anticoagulante para obtener suero o con EDTA para determinar anticuerpos irregulares
y prueba cruzada. No deben utilizarse muestras hemolizadas.
(Las muestras pueden conservarse a 1-6 C hasta por 1 semana en el caso de necesitarse otra
transfusin dentro de la misma)
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128
DESPACHO DE TRANSFUSIONES
Seleccin de unidades a cruzar
Antes de iniciar las pruebas de compatibilidad y una vez seleccionadas las unidades a
cruzar, se debe confirmar el grupo ABO y Rh de las unidades.
Compatibilidad ABO
Siempre que sea posible, todos los pacientes deben recibir unidades de concentrado de
hemates ABO idnticos. Cuando ello no es posible, pueden seleccionarse componentes de grupos
ABO compatibles, en funcin de los antgenos presentes en los hemates y de los anticuerpos
existentes en el plasma del receptor.
Compatibilidad Rh
Los componentes sanguneos Rh positivos deben destinarse a los receptores D positivos,
en tanto que las unidades Rh negativas, aunque sean compatibles con receptores D positivos,
deben reservarse para los receptores D negativos
En ocasiones y ante cuadros de urgencia y carencia de unidades Rh negativas un receptor
D negativo puede recibir unidades Rh positivas, siendo consciente de que se va a producir una
inmunizacin, valorando los riesgos y la posible administracin ulterior de inmunoglobulina antiRh.
Pruebas cruzadas de compatibilidad
En todo paciente que precisa una transfusin y en aquellos que son sometidos a
procedimientos quirrgicos en donde es muy probable la administracin de sangre, se deben
realizar las pruebas cruzadas de compatibilidad, que consisten en enfrentar el suero del receptor
con los hemates del donante.
Por medio de esta prueba debemos demostrar la compatibilidad ABO, Rh y la ausencia de
anticuerpos antieritrocitarios significativos. Si se identifican anticuerpos relevantes, el paciente
debe recibir sangre sin los antgenos correspondientes, aunque los glbulos rojos del donante con
los antgenos fuesen compatibles in vitro.
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129
Mtodo:
Pruebas de compatibilidad en tubo
1. Marque un tubo con el No de la unidad a transfundir
2. Lavar 4 veces con PBS los eritrocitos del dador obtenidos de la tubuladura de la bolsa, en el
ltimo lavado eliminar todo el PBS.
3. Preparar una suspensin al 2 % en Liss (19 gotas de Liss por 1 gota de glbulos concentrados).
4. En un tubo previamente marcado colocar 2 gotas del suero del receptor y 2 gotas de eritrocitos
del dador previamente preparados.
5. Centrifugar y leer. Lea en busca de hemlisis o aglutinacin rotando suavemente el tubo frente
a una fuente de luz. Registre el resultado.
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130
Investigacin
anticuerpos irregulares
+
de Prueba
cruzada
-
Causa de la aglutinacin
Compatible para la
transfusin
algn Fenotipar donante
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131
Inspeccin de la unidad
Antes del despacho de la transfusin se debe verificar la integridad de la bolsa, evidenciar
hemlisis en el plasma, presencia de turbidez, grumos o burbujas, evidenciar grandes cogulos.
Identificacin de la unidad
Identificar la unidad a transfundir (etiqueta con nombre del receptor)
Identificacin del receptor
Al receptor de la transfusin para ser identificado se le pide que diga su nombre completo
o se puede identificar mediante un brazalete de identificacin si este est inconsciente. Sus datos
deben coincidir con su ficha clnica.
Explicar al paciente el procedimiento
Resolver la va de administracin (preexistente o instalar va)
Reclasificacin ABO y Rh del paciente en la cabecera, y debe concordar con la unidad a
transfundir y con la clasificacin original del paciente.
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132
INDICACION DE LA TRANSFUSION
(Extractos: 2Edicin 2003 Sociedad Espaola de Transfusin Sangunea Apartado de correos 40078, 28080 Madrid Deposito Legal:
Copyright: SETS 2003 GUA SOBRE LA TRANSFUSIN DE COMPONENTES SANGUNEOS Y DERIVADOS PLASMTICOS)
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141
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142
Etiologa
Incompatibilidad eritrocitaria
Hemoltica no inmune
Febril no hemoltica
Alrgica
Anafilctica
Sobrecarga circulatoria
Lesin pulmonar
aguda
Signos y sntomas
Escalofros, fiebre, dolor en la
zona de infusin, dolor seo,
hemoglobinuria, fallo renal
agudo, oliguria, coagulacin
intravascular diseminada
hemoglobinuria
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143
Hipocalcemia
Transfusin masiva de
hemocomponentes y disminucin del
metabolismo del citrato.
Contaminacin
bacteriana
Administracin de hemoderivados
contaminados por bacterias
Hipotermia
Fiebre (generalmente
>40C), taquicardia,
shock, CID, nuseas y
vmitos, hipotensin,
colapso circulatorio
Arritmia cardiaca
Infusin rpida de
hemocomponentes fros
Administracin de varias unidades de Arritmia cardiaca
hemocomponentes con niveles altos
de potasio
Introduccin de aire
Hipotensin, cianosis,
en la va venosa
colapso circulatorio
Hiperkalemia
Embolia gaseosa
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144
Aloinmunizacin
Enfermedad injerto
contra husped
Prpura posttransfusional
Sobrecarga frrica
Transmisin de
Enfermedades
Etiologa
Respuesta anamnsica
antgenos eritrocitarios
Signos y sntomas
a Malestar general,
inadecuado aumento
de los niveles de
hemoglobina, elevacin de la
bilirrubina srica
Respuesta inmune frente a Generalmente ninguno, pero
antgenos de las clulas puede dar un estado de
sanguneas
refractariedad a la transfusin de
plaquetas,
dificultad
para
encontrar unidades
compatibles, reacciones
hemolticas tardas
ulteriores
Accin de los linfocitos
Eritrodermia,rash maculopapular,
funcionales infundidos sobre anorexia,
nuseas,
vmitos,
el sistema inmune
diarrea, hepatitis, pancitopenia,
fiebre
Anticuerpos
Cuadro purprico,
Plaquetarios
hemorragia, a los 8-10 das posttransfusion
Mltiples transfusiones
Transtornos endocrinos,
de hemocomponentes en
arritmias,
pacientes con necesidades
miocardiopata, fallo heptico y
reiteradas
pancretico
Contaminacin por agentes
Las propias de cada agente
patgenos de las unidades
patgeno transmitido
administradas
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post-
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Hemocomponente
Sangre
Glbulos Rojos
Plasma
Plaquetas
Soluciones
INCOMPATIBLES
Soluciones en caso de
malos accesos
Soluciones
Compatibles
- Suero glucosado
- Dextrosa
- Ringer Lactato
- Soluciones que
contengan calcio
- Antibiticos
- Calmantes
- Cloruro de sodio
hipotnico
- Suero glucosado
- Dextrosa
- Ringer Lactato
- Soluciones que
contengan calcio
- Antibiticos
- Calmantes
- Cloruro de sodio
hipotnico
- Ringer Lactato
- Soluciones que
contengan calcio
- Antibiticos
- Calmantes
- Ringer Lactato
- Albmina 5%
Suero fisiolgico
Plasma Compatible
- Albmina 5%
- Suero fisiolgico
- Plasma Compatible
- Suero glucosado
- Dextrosa
- Suero fisiolgico
- Suero glucosado
- Suero fisiolgico
- Soluciones que
contengan calcio
- Dextrosa
- Antibiticos
- Calmantes
Crioprecipitados
- Ringer Lactato
- Soluciones que
contengan calcio
- Antibiticos
- Calmantes
- Suero glucosado
- Dextrosa
- Suero fisiolgico
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