04/12/2012

CURSO TERICOTERICO-PRCTICO DE
ESPECTROMETRA DE MASAS
Dra. Pilar Blasco
Dr. Pablo Candela

CURSO FORMACIN ESPECFICA PAS - 2012

Partes del Espectrmetro de Masas

El ANALIZADOR es
la parte principal del
espectrmetro de
masas.
El resto de
componentes deben
seleccionarse en
funcin de su
compatibilidad y sus
prestaciones.

Qu ocurre en la Fuente de Ionizacin?

+
IONIZACIN

VOLATILIZACIN

FRAGMENTACIN?

C6H5COCH5+
C3H3+
120
39
C6H5CO+
CH3CO+
105
C6H5+
43
77 C H +
4

IONES en FASE GAS

51

Abundancia

Qu ocurre en el Analizador?

m/z

04/12/2012

Funciones del Analizador

9 CONDUCE los iones desde la fuente de ionizacin
hasta el detector.
9 SEPARA los iones en funcin de su RELACIN
( / )
MASA/CARGA (m/z).
9 SELECCIONA iones actuando como filtro.

Movimiento de iones (o del haz inico)

MOVIMIENTO de IONES (o del HAZ de IONES) mediante una
OPTICA INICA equivalente a la ptica del haz luminoso.

Movimiento de iones (o del haz inico)

MOVIMIENTO de IONES emplea diferentes elementos: rendijas,
lentes, uso de campos elctricos, magnticos, de radiofrecuencia,

04/12/2012

Analizadores de Masas
Sector Magntico
Cuadrupolar
Trampa de iones
Tiempo de vuelo
Transformada de Fourier/In ciclotrnico
Orbitrap
Sistemas hbridos
7

Caractersticas que definen el analizador

9 RESOLUCIN
9 PRECISIN DE MASA
9 RANGO de MASAS
9 SENSIBILIDAD
9 VELOCIDAD de ADQUISICIN
9 RANGO DINMICO LINEAL

Hay analizador ideal???

Cronologa de los Analizadores en E.M.

1899-1912 Primer
espectrmetro de
masas

1900

1946 Tiempo de
vuelo
1949 ICR

2000 Orbitrap
1974 FT-ICR

1950
1918 Enfoque
simple (sector)

1950 FT-MS

2004 LITs

2000
1978 Triple Quads

1952 Doble enfoque 1980 Trampa de

(sector)
iones
1953 Quads

04/12/2012

Analizadores de Masas
Sector Magntico
Cuadrupolar
Trampa de iones
Tiempo de vuelo
Transformada de Fourier/In ciclotrnico
Orbitrap
Sistemas hbridos
10

Sector Magntico

m1 < m2 < m3

IN EN UN CAMPO MAGNTICO

m1

ECUACIN FUNDAMENTAL

m
z

B2R2
2V

m2 m3

Fc = mv2 /R
Fm = zvB

EC = mv2 = zV

zvB = mv2 /R

v2 = 2zV/m

11

Sector Magntico

m
z

B2R2
2V

12

04/12/2012

Sector Magntico

m
z

MODOS DE TRABAJO:

B2R2
2V

B y V CONSTANTES, R VARIABLE

R CONSTANTE, B o V VARIABLE
VARIABLE B (BARRIDO MAGNTICO)
VARIABLE V (BARRIDO ELCTRICO)
PEAK-MATCHING

13

Sector Magntico
m/z =74
m/z =87
m/z =143

t0

m
z

B2R2
2V

BARRIDO
VoB

t1

t2

t3

tSCAN
14

Sector Magntico
RESOLUCIN: es baja debido a la gran dispersidad de energas
cinticas de los iones formados en la fuente.
Solucin:ANALIZADOR ELECTROSTTICO

15

04/12/2012

Sector Magntico
GEOMETRAS:
ENFOQUE SIMPLE
DOBLE ENFOQUE GEOMETRA NIER-JOHNSON
DOBLE ENFOQUE GEOMETRA INVERSA
TRIPLE ENFOQUE

16

Sector Magntico
CARACTERSTICAS

o Capacidad de medida de masa exacta

o Capacidad de realizar estudios cinticos y de iones metastables.
o Modo de trabajo Peak-Matching
o Complejidad de manejo, elevado Coste y Mantenimiento
o IRMS
17

Sector Magntico
En la unidad de Espectrometra de Masas de los SSTTI

DOBLE ENFOQUE (BE)

TRIPLE ENFOQUE (EBE)

18

04/12/2012

Analizadores de Masas
Sector Magntico
Cuadrupolar
Trampa de iones
Tiempo de vuelo
Transformada de Fourier/In ciclotrnico
Orbitrap
Sistemas hbridos
19

Cuadrupolar
IN EN UN CUADRUPOLO

Un CUADRUPOLO est formado por CUATRO superficies

barras hiperblicas, EQUIDISTANTES entre s una
distancia R, sobre las que se aplica un voltaje de radio
frequencia (RF) y una corriente directa (DC).

20

Cuadrupolar
IN EN UN CUADRUPOLO: en la PRCTICA
Cada pareja de barras opuestas estn conectadas entre s. Una
de las parejas toma polaridad positiva y la otra negativa.
Las barras positivas actan
paso alto,
como un filtro de p
filtrando las masas que
tienen un valor de m/z por
debajo del valor deseado.
Las barras negativas actuan
como un filtro de paso bajo,
filtrando las masas que
tenga un valor de m/z por
encima del valor deseado.
21

04/12/2012

Cuadrupolar
ECUACIN FUNDAMENTAL
Ecuaciones de Mathieu.

Solo ciertas combinaciones

de U () y V (q) producen
trayectorias estables para
una determinada relacin
masa/carga.
22

Cuadrupolar
DIAGRAMAS DE ESTABILIDAD
Lnea de barrido

23

Cuadrupolar
MODOS DE TRABAJO:

S/N ~1559.4

BARRIDO

S/N ~18630.2

SIM

BARRIDO (SCAN)
o Informacin estructural
o Comparacin con libreras
SELECCIN DE IONES (SIM o SIR)
o Mejor Sensibilidad (S/N)
o Mayor Selectividad

24

04/12/2012

Cuadrupolar
CARACTERSTICAS

o Baja resolucin (unidad)

o Rango de masas 5-4000 (dependiendo del modelo)
o Baja sensibilidad (en modo barrido)
o Elevada velocidad adquisicin (2-10 espectros/segundo)
o Compacto, robusto, econmico y de fcil manejo
25

Cuadrupolar
MULTIPOLOS
Los CUADRUPOLOS cuando trabajan SOLO con RF no filtran iones,
actan como transmisores de iones. Para este fin tambin son usados
HEXAPOLOS y OCTAPOLOS.

26

Cuadrupolar
En la unidad de Espectrometra de Masas de la UA los equipos de
GC/MS de baja resolucin presentan este tipo de analizador (5
en total).

27

04/12/2012

Analizadores de Masas
Sector Magntico
Cuadrupolar
Trampa de iones
Tiempo de vuelo
Transformada de Fourier/In ciclotrnico
Orbitrap
Sistemas hbridos
28

Trampa de iones
IN EN UN TRAMPA DE IONES

Consiste en un ELECTRODO con forma DE ANILLO y dos TAPAS ELIPSOIDES

en la parte superior e inferior, que crean un campo cuadrupolar 3D donde los
iones son RETENIDOS de forma indefinida en una trayectoria circular.
Tambin conocida como Cuadrupolo Circular, Trampa de iones de PAUL, QIT,
QUISTOR, Trampa 3D.

29

Trampa de iones
ECUACIN FUNDAMENTAL

30

10

04/12/2012

Trampa de iones
DIAGRAMAS DE ESTABILIDAD

31

Trampa de iones
MODOS DE TRABAJO:
La Trampa de Iones trabaja por ETAPAS:
1. ACUMULACIN de Iones en la Trampa
2. CIERRE de la trampa
3. EXPULSIN
Secuencial de los Iones atrapados hacia el detector o
SELECCIN de In para su aislamiento.
4. FRAGMENTACIN del in Seleccionado.
5.

32

Trampa de iones
MODOS DE TRABAJO:
BARRIDO (SCAN)
Expulsin en el lmite de estabilidad
Expulsin resonante
SELECCIN DE IONES
TRANSICIONES (MRM)
EXPERIMENTOS MS/MS o MSn

33

11

04/12/2012

ION PRECURSOR

Trampa de iones

210

210

MODOS DE TRABAJO:

222
268 280

165

BARRIDO (SCAN)

170

210

250

290

190 210

1. AISLAMIENTO
2. FRAGMENTACIN
3 AISLAMIENTO
3.

SELECCIN DE IONES

158

TRANSICIONES (MRM)

191
190

160

2
158
150

191 210
170

190

210

IONES PRODUCTO
TRANSICIONES

EXPERIMENTOS MS/MS o MSn

210 158
210 191

34

Trampa de iones
3-Excitacin

1-Acumulacin

2-Aislamiento
In
Precursor

La energa de
Fragmentacin se aplica
selectivamente. Slo la
recibe el In Precursor o
rango de iones que interese
fragmentar

4-Fragmentacin
He

(C.I.D.: Disociacin Inducida por

Colisin (con helio) del in precursor)

He

En una Trampa el proceso

de transmisin de Iones
de Fuente a Detector es
un proceso discontinuo

5
6

6-Deteccin

Espectro
MSn

MS/MSMS/

5-Acumulacin
de Fragmentos

Espectro
de Masasn
(n=1-11)35

Trampa de iones
CARACTERSTICAS

o Resolucin variable, con la velocidad de barrido

o El cut-off (no permite el atrapado de todos los iones, 1/3).
o Elevada sensibilidad (en modo scan ms que Q 100veces)
o Elevadas velocidades adquisicin 2-10 espectros/s (=Q)
o MS/MS/MS/(MSn) con MS/MS en el tiempo
o Aplicaciones en ANALISIS ESTRUCTURAL

36

12

04/12/2012

Trampa de iones
TRAMPAS LINEALES (2D)

37

Trampa de iones
En la unidad de Espectrometra de Masas de la UA

38

Analizadores de Masas
Sector Magntico
Cuadrupolar
Trampa de iones
Tiempo de vuelo
Transformada de Fourier/In ciclotrnico
Orbitrap
Sistemas hbridos
39

13

04/12/2012

Tiempo de vuelo
IN EN UN TIEMPO DE VUELO (TOF)

ACELERACIN
de los iones

DETECCIN

VELOCIDADES

TIEMPOS

40

Tiempo de vuelo
ECUACIN FUNDAMENTAL

EC = zV = 1/2 mv2
m/z = 2V / v2 = 2Vt2 / L2

41

Tiempo de vuelo
IONIZACIN
RETARDO
EXTRACCIN
ACELERACIN
ANLISIS (VUELO)
DETECCIN

42

14

04/12/2012

Tiempo de vuelo
RESOLUCIN.
La resolucin de iones se obtiene a partir de dt, por ello los iones deben
abandonar la fuente al mismo tiempo (pulsos de nanosegundos).
Distribuciones temporales
Distribuciones de E.Cintica inicial
Distribuciones espaciales.

9 Extraccin pulsada (1-2 etapas)

9 Voltajes elevados de aceleracin
9Tiempo de retardo
(1-2
9 Reflectores (1
2 etapas)

REFLECTOR
s/REFLECTOR

c/REFLECTOR

43

Tiempo de vuelo
MODOS DE TRABAJO:
BARRIDO (SCAN)
MALDI-TOF
100 fmol digerido de BSA

44

Tiempo de vuelo
CARACTERSTICAS

o Alta resolucin (FWHM<0.1), masa exacta

o Amplio rango de masas 40kDa (hasta 200KDa con MALDI)
o Elevada sensibilidad (100veces ms que Q y IT (scan) y = en SIM)
o Elevadas velocidades adquisicin espectros (ht 10 espectros/sec) s
o Pulsos de iones, Uso de Reflectores hacen que Resolucin TOF>TRAP>Q
o Precio TOF>TRAP>Q

45

15

04/12/2012

Tiempo de vuelo
En los SSTTI, actualmente en la Unidad de Protemica de la UA,
disponemos de un equipo MALDI-TOF.

46

Analizadores de Masas
Sector Magntico
Cuadrupolar
Trampa de iones
Tiempo de vuelo
Transformada de Fourier/In ciclotrnico
Orbitrap
Sistemas hbridos
47

Transformada de Fourier/In ciclotrnico

IN EN UN FT-ICR

ECUACIN FUNDAMENTAL

48

16

04/12/2012

Transformada de Fourier/In ciclotrnico

MODO DE TRABAJO:

La parte fundamental de un instrumento de transformada de

Fourier es una trampa de iones en la cual los iones circulan en
rbitas bien definidas durante largos periodos. Tales cavidades
se construyen aprovechando el fenmeno de resonancia inica
ciclotrnica.
49

Transformada de Fourier/In ciclotrnico

CARACTERSTICAS

o Alta resolucin - Masa exacta Es posible alcanzar una resolucin

extremadamente elevada (superior a 106) dado que las medidas de
frecuencia se pueden realizar con elevada precisin.
o Los espectrmetros de masas FT proporcionan mejores relaciones
seal/ruido, velocidades mayores y sensibilidad y resolucin ms
elevadas.

50

Analizadores de Masas
Sector Magntico
Cuadrupolar
Trampa de iones
Tiempo de vuelo
Transformada de Fourier/In ciclotrnico
Orbitrap
Sistemas hbridos
51

17

04/12/2012

Orbitrap
o Trabaja solo con DC.
o FT.

CARACTERSTICAS

52

Analizadores de Masas
Sector Magntico
Cuadrupolar
Trampa de iones
Tiempo de vuelo
Transformada de Fourier/In ciclotrnico
Orbitrap
Sistemas hbridos
53

Sistemas hbridos
9 COMBINAR varios analizadores.
9 Para FAVORECER las VENTAJAS de cada uno, y EVITAR los
INCONVENIENTES.
9 Se simbolizan mediante la combinacin de las ABREVIATURAS en
su orden.
9 Es posible casi CUALQUIER COMBINACIN.
9 Permite realizar anlisis de MS/MS en el ESPACIO.

54

18

04/12/2012

Sistemas hbridos
CLASIFICACIN de los ANALIZADORES

ENERGA CINTICA DE LOS IONES

MS/MS
/
EN
E EL
E ESPACIO
E P
o EN
E EL
E TIEMPO
E P
PODER DE RESOLUCIN o PRECISIN DE MEDIDA

55

Sistemas hbridos
CLASIFICACIN
Instrumentos Hbridos Beam-Beam
QqQ, QTOF, BEBE, BEqQ o EBqQ,
p
Instrumentos Hbridos Beam-Trap
QIT, QqLIT, Q/FTICR,
Instrumentos Hbridos Trap-Beam
QIT/TOF, LIT/TOF, QTRAP,
Instrumentos Hbridos Trap-Trap
LIT/FT-ICR, LIT/Orbitrap,

56

57

19

04/12/2012

Sistemas hbridos
ALGUNOS EJEMPLOS

QqTOF
(QTOF)

QqQ

58

Sistemas hbridos
ALGUNOS EJEMPLOS

QqTRAP
(QTRAP)
59

EJERCICIO

Para cada aplicacin elegir la opcin ms adecuada

de analizador, teniendo en cuenta que no podemos
repetir!!!
o

Sector doble enfoque

Qumico de sntesis orgnico que quiere conocer la

masa exacta de un compuesto

(BE o EB)

Cuadrupolo

Tiempo de vuelo

FT-ICR

Bioqumico que quiere conocer el peso molecular de

una protena relativamente grande (MW=300 000).
EPA quiere confirmacin del benceno en extractos
de 3000 muestras slidas
Qumico de la industria petrolera quiere confirmar
la presencia de 55 compuestos nicos en un nico
valor de masas nominal (m/z) en un espectro de
masas
60

20

04/12/2012

EJERCICIO

Ordenar los analizadores siguientes segn su

capacidad de realizar experimentos MS/MS en el
tiempo o en el espacio

Sector doble enfoque (BE o EB)

Trampa de iones

Cuadrupolo

QqQ (triple cuadrupolo)

QTOF

QTrap

FT-ICR

Tiempo de Vuelo

61

RESUMEN

62

Partes del Espectrmetro de Masas

El DETECTOR es
la parte final del
espectrmetro de
masas, donde se
realiza
li ell recuento de
d
los iones separados
por el analizador,
generando el
espectro de masas.

63

21

04/12/2012

Qu ocurre en el detector?
REGISTRO Y
AMPLIFICACIN
HAZ IONICO

SEAL

+
+
+

I (V)

QUADS
E.M. VOLTS (CDEM)
(-1200V TO -3000V)

Diagrama de Barras
Abundancia vs m/z

64

Caractersticas que definen el Detector

9 AMPLIFICACIN
9 RANGO de MASAS
9 SENSIBILIDAD
9 VELOCIDAD de ADQUISICIN

65

Consideraciones generales
Sensibilidad, tiempo de respuesta y precisin son los factores que
determinan el detector ms adecuado.
La sensibilidad est determinada por los iones que alcanzan el detector/
molculas introducidas y por la ganancia.
Algunos detectores son tan sensibles como para detectar un simple in.
Puede ser deseable una posterior amplificacin de la seal en el
detector. Tambin podemos diferenciar entre aquellos detectores que
permiten una medida directa de las cargas que alcanzan el detector, como
son las placas fotogrficas y la Copa de Faraday, de aquellos que aumentan
la intensidad de la seal como los detectores multiplicadores de electrones
o fotones y los detectores array.
Los detectores de iones pueden situarse en el eje del haz de iones o
fuera de ste, dependiendo del diseo del instrumento.
66

22

04/12/2012

Clasificacin
Los detectores de iones pueden dividirse en dos clases:
aquellos que detectan la llegada de todos los iones de forma
secuencial en un punto (detector de iones puntual) y aquellos
que detectan la llegada de iones de forma simultnea a lo
largo de un plano (detector array).

67

Detectores
Placa Fotogrfica
Copa de Faraday
Multiplicador de Electrones
de Dinodos Discretos
Channeltron
Conversin fotnica,
fotnica, Daly o de centelleo
Multicanal
Microchannel Plate
68

Placa Fotogrfica
9 Empleado en los primeros espectrmetros
9 Detector simultaneo
9 No cuantitativo

69

23

04/12/2012

Detectores
Placa Fotogrfica
Copa de Faraday
Multiplicador de Electrones
de Dinodos Discretos
Channeltron
Conversin fotnica,
fotnica, Daly o de centelleo
Multicanal
Microchannel Plate
70

Copa de Faraday
9 Gran sencillez y robustez
9 Baja sensibilidad
9 Puede trabajar a presiones relativamente altas
9 Gran linealidad de respuesta
9 Combinado con un SEM
9 Muy precisos. Respuesta independiente de la energa, de
la masa y de la naturaleza del in
9 Baja velocidad de barrido
9 Situado en el eje ptico del haz de iones
71

Detectores
Placa Fotogrfica
Copa de Faraday
Multiplicador de Electrones
de Dinodos Discretos
Channeltron
Conversin fotnica,
fotnica, Daly o de centelleo
Multicanal
Microchannel Plate
72

24

04/12/2012

Multiplicador de Electrones
a) Multiplicador de electrones secundarios (SEM) de
dinodos discretos

73

Multiplicador de Electrones
b) Detector Channeltron (CEM)

74

Multiplicador de Electrones
9 El ms empleado en MS
9 Tanto para iones positivos como negativos
9 Amplificacin del orden 106-108
9 Requiere alta tensin y mejor vaco
9 Detector de vida limitada
9 Robustos y seguros
9 Ganancias elevadas
9 Dinodos de conversin
9 Tiempos de respuesta (ns)
75

25

04/12/2012

Detectores
Placa Fotogrfica
Copa de Faraday
Multiplicador de Electrones
de Dinodos Discretos
Channeltron
Conversin fotnica,
fotnica, Daly o de centelleo
Multicanal
Microchannel Plate
76

Conversin fotnica,
fotnica, Daly o de centelleo

9 Elevada sensibilidad
9 Larga duracin
9 Elevada velocidad de respuesta
9 Buena estabilidad
9 Deteccin fuera del eje ptico
9 Consta de dinodo, pantalla fosforescente y tubo
fotomultiplicador.

77

Detectores
Placa Fotogrfica
Copa de Faraday
Multiplicador de Electrones
de Dinodos Discretos
Channeltron
Conversin fotnica,
fotnica, Daly o de centelleo
Multicanal
Microchannel Plate
78

26

04/12/2012

Multicanal

9 Detector simultneo
9 Elevada sensibilidad
9 Medida rpida
9 Amplificacin (104-107)
9 Diferentes configuracines
79

Detectores
Placa Fotogrfica
Copa de Faraday
Multiplicador de Electrones
de Dinodos Discretos
Channeltron
Conversin fotnica,
fotnica, Daly o de centelleo
Multicanal
Microchannel Plate
80

Microchannel Plate

9 Elevada sensibilidad
9 Se pueden conectar varios placas
9 Amplificacin 108
9 Acta como un NICO detector puntual que conecta
todos los multicanales.
81

27

04/12/2012

Detectores

DETECTORES

SECUENCIAL
(puntual)

SIMULTNEA
(array)

medida directa

COPA FARADAY

PLACA FOTOGRAFICA

con amplificacin

SEM
CENTELLEO

DETECTORES MLTIPLES
MCP

Analizadores

Q, Sector, TOF, IT

Sector

82

Partes del Espectrmetro de Masas

CONCLUSIN:
Todos los E. de
Masas no son
i
iguales.
l
Seleccin del
instrumento que
necesitamos para
nuestro anlisis.

83

28