Esterilizacin > Generalidades

Esterilizacin: eliminacin o muerte de todos los microorganismos que contiene un objeto o sustancia, y que se
encuentran acondicionados de tal forma que no pueden contaminarse nuevamente.

Sanitizante: agente que disminuye la carga microbiana total a un nivel el cual es seguro para la salud de la pobla
Slo es aplicable sobre objetos inanimados.

Desinfectante: agente que elimina la carga microbiana total en superficies inanimadas tales como habitaciones.

Antisptico: agente que controla y reduce la presencia de microorganismos potencialmente patgenos sobre piel
mucosas (slo pueden aplicarse externamente sobre seres vivos).

Agentes antibacterianos esterilizantes y/o desinfectantes

1.

Provocan prdida de la viabilidad en los microorganismos

Fsicos (calor, radiaciones)

2.

Qumicos (xido de etileno, formaldehdo, agentes oxidantes, soluciones antispticas.)

Provocan una separacin de los microorganismos de la sustancia lquida

Filtracin (se eliminan los microorganismos presentes en un fluido).

Esterilizacin > Agentes fsicos

Calor

Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la accin del calor. El calor provoca desnaturalizaci
protenas, fusin y desorganizacin de las membranas y/o procesos oxidativos irreversibles en los microorganismos.
La efectividad del calor como mtodo de esterilizacin depende de:

Temperatura
Tiempo de exposicin

Calor Hmedo

El calor hmedo produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas. Estos efectos se deben principalmente a dos razone

El agua es una especie qumica muy reactiva y muchas estructuras biolgicas (DNA, RNA, protenas, etc) son
producidas por reacciones que eliminan agua. Por lo tanto, reacciones inversas podran daar a la clula a causa d
produccin de productos txicos. Adems, las estructuras secundarias y terciarias de las protenas se estabilizan
mediante uniones puente de hidrgeno intramoleculares que pueden ser reemplazadas y rotos por el agua a altas
temperaturas.

El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho ms elevado que el aire. Por lo que, los
materiales hmedos conducen el calor mucho ms rpidamente que los materiales secos debido a la energa libera
durante la condensacin.

El autoclave es el aparato ms comnmente utilizado en los laboratorios para esterilizar cultivos y soluciones que no f
emulsiones con el agua y que no se desnaturalicen a temperaturas mayores a 100 C. Una temperatura de 121 C
atmsfera de sobrepresin) con un tiempo de exposicin mayor a 15 minutos sirve para destruir organismos formador
esporas.

Presin
[atm]

Temperatura
[C]
Descarga completa del
aire

Descarga de 2/3 del

aire

Descarga de 1/2 del

aire

Sin descarga del

aire

1/3

109

100

90

72

2/3

115

109

100

90

121

115

109

100

4/3

126

121

115

109

5/3

130

126

121

115

133

130

126

121

Influencia de la descarga incompleta de aire en la temperatura del autoclave

Ventajas

Rpido calentamiento y penetracin

Destruccin de bacterias y esporas en corto tiempo
No deja residuos txicos
Hay un bajo deterioro del material expuesto
Econmico

Desventajas

No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua

Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metlicos

Calor Seco

El calor seco produce desecacin de la clula, efectos txicos por niveles elevados de electrolitos, procesos oxidativos y
de membranas. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde los materiales a los microorganismos que est
contacto con stos. El aire es mal conductor del calor, y el aire caliente penetra ms lentamente que el vapor de ag

materiales porosos. La accin destructiva del calor sobre protenas y lpidos requiere mayor temperatura cuando el materia
seco o la actividad de agua del medio es baja. Esto se debe a que las protenas se estabilizan mediante uniones puen
hidrgeno intramoleculares que son ms difciles de romper por el calor seco.

La estufa de esterilizacin es el artefacto utilizado en los laboratorios para esterilizar por calor seco. Se requiere
temperatura y tiempo de exposicin que el autoclave. La temperatura vara entre 120 y 180C, requirindose distintos tie
de exposicin. A 140C se necesitan por lo menos 5 horas de exposicin, mientras que a 160C se requieren al menos 2
de exposicin.
Sirve para esterilizar material de vidrio. El papel y el algodn no pueden ser esterilizados a ms de 160C.
Ventajas

No es corrosivo para metales e instrumentos.

Permite la esterilizacin de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias viscosas no voltiles.

Desventajas

Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo, debido a la baja penetracin del calor.

Existen otras formas de eliminar microorganismos por calor seco. La incineracin se utiliza para destruir material desca
contaminado. La accin directa de la llama elimina a los microorganismos cuando se lleva al rojo el material de metal
ansas, lancetas, agujas de diseccin.

Radiaciones
Su accin depende de:

Tipo de radiacin
Tiempo de exposicin
Dosis

Ionizantes

Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los cidos nucleicos, estructuras proteicas y lipdicas, y compon
esenciales para la viabilidad de los microorganismos.

Tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar materiales termolbiles (termosensibles) como jeringas descart
sondas, etc. Se utilizan a escala industrial por sus costos.
No se utilizan para medios de cultivo o soluciones proteicas porque producen alteraciones de los componentes.

Ultravioletas

Afectan a las molculas de DNA de los microorganismos debido a que forman dmeros de pirimidinas adyacentes que in
errores en la duplicacin y por lo tanto la prdida de la viabilidad de las clulas.
Son escasamente penetrantes y se utilizan para superficies.

Esterilizacin > Agentes qumicos

Dentro de los compuestos qumicos podemos encontrar agentes esterilizantes, desinfectantes y antispticos.
La efectividad de estos agentes depende de las condiciones bajo las que actan.

Concentracin: vara con el tipo de agente y de microorganismo, pues una misma concentracin del agente pued
producir un efecto diferente en distintos microorganismos.

Tiempo: los microorganismos no son susceptibles a un agente en la misma forma, por lo que no todos los
microorganismos mueren al mismo tiempo.

pH: afecta tanto a los microorganismos como a los agentes qumicos. El aumento de pH por encima de 7 incremen
carga negativa de los microorganismos afectando la concentracin del agente sobre la clula. El pH determina el gr
de disociacin y la efectividad del agente qumico, pues a menor disociacin mayor permeabilidad y mayor efectivid
Alcoholes
Iodo
Antispticos

Agentes catinicos, aninicos y anfteros

Organo Mercuriales
Colorantes
Cloro y Compuestos clorados
Aldehdos

Desinfectantes y/o Esterilizantes

Oxido de Etileno
Compuestos Fenlicos
Acidos y Alcalis

Antispticos
Alcoholes

Lesionan la membrana celular de los microorganismos y desnaturalizan protenas celulares. Desorganizan la est

fosfolipdica.

No destruyen esporas y tienen una accin germicida lenta. Los alcoholes de cadena corta tienen un efecto nocivo mayor q
de cadena larga.
Se utilizan en concentraciones del 50 al 70%. Los ms utilizados son el etanol e isoproplico.

Iodo

Es un agente oxidante que modifica grupos funcionales de protenas y cidos nucleicos. Inactiva protenas y enzim
oxidacin de los grupos -SH a S-S, pudiendo atacar tambin grupos amino, indoles, etc.

Se utiliza como desinfectante de la piel (tintura de iodo: yodo molecular 2% y yoduro de sodio 2% en alcohol), aun
irritante.
Es efectivo contra esporas en una concentracin de 1600 ppm de iodo libre.

Agentes inicos y anfteros

Son sustancias que lesionan la membrana celular debido a que desordenan la disposicin de las protenas y de los fosfo
por lo que se liberan metabolitos desde la clula, se interfiere con el metabolismo energtico y el transporte activo.

No son esporicidas ni tubercolicidas an en altas concentraciones. Sus principales ventajas se hallan en que son inodor
tien, no son corrosivos de metales, estables, no txicos y baratos.

Catinicos: Sales de amonio cuaternarias. Tienen mayor actividad a pH alcalino y los Gram + son ms susceptible
Aninicos: Jabones y cidos grasos. Tienen mayor actividad a pH cido y son eficaces contra Gram +.
Anfteros: Actan como catinicos o aninicos segn el pH.

Organo Mercuriales

Estos tipos de compuestos se combinan con los grupos -SH de las protenas, inactivando enzimas. Dentro de los merc
orgnicos se encuentran el metafen y el mertiolate.

Perxido de Hidrgeno
Es un antisptico dbil, con capacidad oxidante y formadora de radicales libres.

Actualmente, el perxido de hidrgeno gaseoso se est utilizando como desinfectante de superficies o descontamina
gabinetes biolgicos debido a que no posee las propiedades txicas y cancerigenas del xido de etileno y formaldehdo.

Colorantes

Interfieren en la sntesis de cidos nucleicos y protenas (acridina) o interfieren en la sntesis de la pared celular (derivad
trifenilmetano). La acridina se inserta entre dos bases sucesivas del DNA separndolas fsicamente. Esto provoca errore
duplicacin del DNA. Los derivados del trifenilmetano (violeta de genciana, verde de malaquita y verde brillante) bloqu
conversin del cido UDP-acetilmurmico en UDP-acetilmuramil-pptido.

R = HSO4- Verde Brillante

R = Cl- Verde de Malaquita

Violeta de Genciana

Desinfectantes y/o Esterilizantes

Cloro
El cloro, los hipocloritos y las cloraminas son desinfectantes que actan sobre protenas y cidos nucleicos
microorganismos. Oxidan grupos -SH, y atacan grupos aminos, indoles y al hidroxifenol de la tirosina.

El producto clorado ms utilizado en desinfeccin es el hipoclorito de sodio (agua lavandina), que es activo sobre tod
bacterias, incluyendo esporas, y adems es efectivo en un amplio rango de temperaturas.

La actividad bactericida del hipoclorito de sodio se debe al cido hipocloroso (HClO) y al Cl 2 que se forman cuando el hipoclo
diluido en agua. La actividad germicida del ion hipocloroso es muy reducida debido a que por su carga no puede pe
fcilmente en la clula a travs de la membrana citoplamtica. En cambio, el cido hipocloroso es neutro y penetra fcilme
la clula, mientras que el Cl2 ingresa como gas.

El hipoclorito de sodio se comercializa en soluciones concentradas (50-100 g/l de Cloro activo), a pH alcalino y en e
oscuros que favorecen su estabilidad, pero es inactivo como desinfectante. A causa de sto, es que deben utilizarse solu
diluidas en agua corriente (que tiene un pH ligeramente cido), con el objeto de obtener cido hipocloroso. Generalme
utilizan soluciones con una concentracin del 0.1-0.5% de Cloro activo.

Su actividad est influida por la presencia de materia orgnica, pues puede haber en el medio sustancias capaces de reac
con los compuestos clorados que disminuyan la concentracin efectiva de stos.

Aldehdos

Son agentes alquilantes que actan sobre protenas, lo que provoca modificacin irreversible de enzimas e inhibicin
actividad enzimtica (Adicin nucleoflica de grupos -NH2 y -SH). Se utilizan como desinfectantes y esterilizantes. Des
esporas.

El glutaraldehdo es el nico esterilizante efectivo en fro. El formaldehdo como gas se utiliza para descontaminar ed
ambientes, etc. El formaldehdo gaseoso se obtiene por calentamiento del paraformaldehdo (OH (CH2O)n-H), lo que prod
despolimerizacin de este compuesto y la liberacin de formaldehdo.
El formaldehdo tiene la desventaja de ser muy irritante y perder actividad en ambientes refrigerados.

Compuestos Fenlicos

Son desinfectantes que provocan lesiones en la membrana citoplasmtica porque desordenan la disposicin de las prote
fosfolpidos. Esto causa filtracin de compuestos celulares, inactivacin de enzimas y lisis.

El fenol no es usado a menudo como desinfectante por su olor desagradable, por ser muy irritante y por el residuo que
luego de tratar las superficies.

Los derivados del fenol ms utilizados son el hexaclorofeno (compuesto difenlico) y los cresoles (alquil fenoles). Estos so
efectivos a bajas concentraciones contra formas vegetativas de bacterias. No son efectivos contra esporas.

Oxido de Etileno
Es un agente alquilante que se une a compuestos con hidrgenos lbiles como los que tienen grupos carboxilos,
sulfhidrilos, hidroxilos, etc.

Es utilizado en la esterilizacin gaseosa, generalmente en la industria farmacutica. Sirve para esterilizar material termose
como el descartable y plstico, equipos electrnicos, bombas cardiorrespiratorias, etc. Es muy peligroso por ser alta
inflamable y explosivo, y adems cancerigeno.

Esterilizacin > Controles en esterilizacin

Controles fisico-qumicos
Controles de Esterilizacin

Monitorean el proceso de esteril

Controles biolgicos
Transferencia a medios de cultivo

Controles de
Esterilidad

Test de promocin del crecimiento

Monitorean el material esterili

Test de bacteriostsis
Filtracin por membranas

Controles de Esterilizacin

Son controles que se realizan sobre el mtodo de esterilizacin. Monitorean o controlan si el proceso de esterilizacin
correctamente.

Controles Biolgicos
Utiliza indicadores biolgicos como controles del proceso de esterilizacin. Estos indicadores son preparaciones estandarizad
microorganismos relativamente resistentes al mtodo de esterilizacin que se emplea. Los indicadores se procesan en form
conjunta con el material a esterilizar y el nmero de microorganismos presentes en el indicador es mayor que el que se enc
en el material.

Una vez concluido el proceso de esterilizacin los indicadores son inoculados en medios de cultivo adecuados e incubado
un determinado perodo de tiempo. Si el proceso de esterilizacin fue correctamente empleado y funciona bien no debe o
desarrollo del indicador incubado.

Controles fisicoqumicos

Termocuplas: son mtodos directos que registran la temperatura a la que se desarrolla la esterilizacin.

Sustancias de punto de fusin conocido: se utilizan en autoclaves generalmente, son sustancias con un punto
similar al de la temperatura de esterilizacin del proceso. Estas sustancias estn mezcladas con un colorante y al fu
indican si se alcanz la temperatura ptima de esterilizacin y el tiempo que se mantuvo.

Controles de Esterilidad

Permite controlar en forma probabilstica si el material qued completamente esterilizado pues se testea un p
representativo de todo el material.

Transferencia Directa a Medios de Cultivo

Se transfiere una parte de la muestra a medios de cultivos apropiados que permitan el crecimiento de cualquier contaminan

Tioglicolato para anaerobios y aerobios (37C)

Tripticasa-Soja para aerobios (25C)

Las muestras representativas se incuban en estos medios durante un perodo de 14 das, al cabo del cual no se debe
ningn tipo de crecimiento.

Puede ocurrir que la muestra no se encuentre estril pero que no se produzca crecimiento durante la incubacin por alg
inherente al medio o a la muestra, por ejemplo presencia de algn inhibidor, etc.

Test de Promocin del Crecimiento

Es un testigo del control de esterilidad. Son testigos que se utilizan para los medios de crecimiento del control ya que estos
tienen capacidad de promover el crecimiento. Para estos testigos se utilizan microorganismos con exigencias nutricionales.
medios deben ser inoculados con un bajo nmero de microorganismos, se incuban durante 7 das, al cabo de los que se deb
observar un abundante crecimiento.

Test de Bacteriostasis
Es un control que se realiza para determinar si la muestra supuestamente estril no posee propiedades bacteriostticas. De
forma se previenen falsos negativos pues no se produce crecimiento habiendo en la muestra microorganismos viables. Para
test se toman los medios de cultivo con microorganismos de ensayo y se siembran en las muestras a testear. Se incuban du
das. Si se produce crecimiento esto indica que el material no contena inhibidores.

Filtracin por Membranas

Se utiliza para determinar la esterilidad de medios de cultivo, soluciones de antibiticos, etc.

Se filtran los medios y se procesa el filtro como en un control de esterilidad para determinar si hay microorganismos presen

Esterilizacin > Concepto estadstico

Cuando una poblacin bacteriana es sometida a un proceso de esterilizacin que le provoca la prdida de la viabilida
observa una disminucin progresiva en el nmero de microorganismos sobrevivientes en funcin del tiempo de exposic
agente esterilizante. La muerte microbiana sigue un comportamiento de tipo exponencial, por lo que se hace asinttico y
se llega a un nmero de microorganismos igual a cero.

N = N0 . e

- Kt

Donde N es el nmero de microorganismos viables, N0 es el nmero de microorganismos viables iniciales, k es la ta

muerte (min-1) y t es el tiempo de exposicin al agente. El coeficiente k es funcin de las condiciones de esteriliz
(temperatura, tenor de humedad, concentracin del agente qumico) y de la resistencia del microorganismo al proce
esterilizacin. Si esta ecuacin se transforma a base 10 resulta:

N = N0 . 10

-t/D

En donde D (min) se denomina Tiempo de reduccin decimal, esto es el tiempo requerido para reducir la pob
microbiana un 90% o un orden de magnitud. El valor de D se deduce cuando t=D y por lo tanto N=0.1 N0. Comparan
ecuaciones anteriores se llega a que:

D = ln 10 / K = 2.303 / K

Esto significa que D est inversamente relacionado con k. Entonces, menores valores de D significan una mayor tasa de m
o una muerte ms rpida.

Graficando el logartmo del nmero de microorganismos sobrevivientes en funcin del tiempo de exposicin a un determ
agente esterilizante se obtiene una recta. La pendiente est dada por -1/D y la ordenada al origen es log N0. Por lo exp
anteriormente, la pendiente de la recta est determinada por las condiciones de esterilizacin y de la resistenci
microorganismo.

Cuando el log del nmero de sobrevivientes es menor a cero se habla de probabilidad de sobrevivencia . Por lo
cuando el valor de la probabilidad sea -1 significa que hay 0.1 microorganismos viables por unidad, o correctamente expr
una unidad contaminada por cada 10 unidades idnticas procesadas.

Un producto se considera estril cuando la probabilidad de encontrar unidades contaminadas es menor o igual a
esto es una unidad contaminada cada milln de unidades idnticas procesadas.

A mayor nmero de microorganismos y/o resistencia de la poblacin se necesitar mayor tiempo de esterilizacin, o lo que
mismo mayor tiempo para alcanzar la probabilidad de sobrevivencia.

Durante el proceso de esterilizacin por calor debe tenerse en cuenta que el tiempo de esterilizacin comienza cuando
alcanzado la temperatura ptima en el interior del aparato (autoclave o estufa) y que generalmente el contenido de un auto
puede requerir tiempos ms largos para alcanzar la temperatura de esterilizacin.

BIBLIOGRAFA