Anda di halaman 1dari 5

09/10/2013

VALIDACION DE METODOS
MICROBIOLOGICOS
ENSAYOS DE APTITUD
PRODUCTOS NO OBLIGATORIAMENTE ESTERILES

APINAM SAFYBI
9 de Octubre 2013

Bioq. Stella Maris Stagnaro

Demostrar que las muestras sometidas a las condiciones del ensayo no inhiben
la multiplicacin de los microorganismos que pudieran estar presentes

09/10/2013

Promocin de crecimiento de los medios de cultivo


Solubles en agua
No grasos insolubles en agua
Grasos
Lquidos slidos en forma de aerosol
Parches transdrmicos

Preparacin de la muestra

Cepas de prueba

Suspensin estandarizada

Colecciones de cultivo microbianas reconocidas por la WFCC


N de microorganismos a inocular 100 ufc

Inoculacin y dilucin

Directo
Dilucin
Filtracin
Agregado de antagonista

Neutralizacin / eliminacin
de la actividad antimicrobiana

Ausencia de toxicidad de tensioactivos / antagonistas


Incubacin apropiada segn medio y microorganismo de prueba
Presencia / ausencia de muestra
Controles negativos de medios y diluyentes

PREPARACIN Y USO DE MICROORGANISMOS DE PRUEBA PARA RECUENTO


Microorganismo

Preparacin
de Cepas de
Prueba

Promocin del Crecimiento

Recuento
Total de
Microorganismos Aerobios

Recuento Total de
Hongos
Filamentosos y
Levaduras

Aptitud del Mtodo de


Recuento en Presencia
del Producto
Recuento
Total de
Microorganismos Aerobios

Recuento Total de
Hongos Filamentosos y
Levaduras

Staphylococcus aureus
Por ejemplo ATCC 6538,
NCIMB 9518, CIP 4.83 o
NBRC 13276

Agar Digerido
de Casena-Soja o Caldo
Digerido de CasenaSoja
30 - 35 C
18-24 horas

Agar Digerido de CasenaSoja y Caldo


Digerido de Casena-Soja
100 ufc
30 - 35 C
3 das

Agar Digerido de CasenaSoja / NMP


Caldo Digerido de
Casena- Soja 100 ufc
30 - 35 C
3 das

Pseudomonas aeruginosa
Por ejemplo ATCC 9027,
NCIMB 8626, CIP 82.118 o
NBRC 13275

Agar Digerido de
Casena-Soja o Caldo
Digerido de CasenaSoja
30 - 35 C
18 - 24 horas

Agar Digerido de CasenaSoja y Caldo


Digerido de Casena-Soja
100 ufc
30 - 35 C
3 das

Agar Digerido de CasenaSoja / NMP


Caldo Digerido de
Casena-Soja 100 ufc
30 - 35 C
3 das

Bacillus Subtilis Por


ejemplo ATCC 6633,
NCIMB 8054, CIP 52.62 o
NBRC 3134

Agar Digerido de
Casena-Soja o Caldo
Digerido de CasenaSoja
30 - 35 C
18 - 24 horas

Agar Digerido de CasenaSoja y Caldo


Digerido de Casena-Soja
100 ufc
30 - 35 C
3 das

Agar Digerido de CasenaSoja / NMP


Caldo Digerido de
Casena-Soja 100 ufc
30 - 35 C
3 das

Candida albicans
Por ejemplo ATCC 10231,
NCPF 3179,
IP 48.72 o
NBRC 1594

Agar Sabouraud
Dextrosa o Caldo
Sabouraud Dextrosa
20 - 25 C
2 - 3 das

Agar Digerido de CasenaSoja 100 ufc


30 - 35 C
5 das

Agar
Sabouraud Dextrosa
100 ufc
20 - 25 C
5 das

Agar Digerido de CasenaSoja 100 ufc


30-35 C
5 das
NMP: no aplica

Agar
Sabouraud Dextrosa
100 ufc
20 - 25 C
5 das

Aspergillus
brasiliensis
Por ejemplo ATCC 16404,
IMI 149007,
IP 1431.83 o NBRC 9455

Agar Sabouraud
Dextrosa o Agar Papa
Dextrosa
20 - 25 C
5.-7 das o hasta
alcanzar una buena
esporulacin.

Agar Digerido de CasenaSoja 100 ufc


30 - 35 C
5 das

Agar
Sabouraud Dextrosa
100 ufc
20 - 25 C
5 das

Agar Digerido de CasenaSoja 100 ufc


30 - 35 C
5 das
NMP: no aplica

Agar
Sabouraud Dextrosa
100 ufc
20 - 25 C
5 das

09/10/2013

Preparacin y uso de microorganismos de prueba para investigacin

Staphylococcus aureus

ATCC 6538, NCIMB 9518, CIP 4.83 o NBRC 13276

Pseudomonas aeruginosa

ATCC 9027, NCIMB 8626, CIP 82.118 o NBRC


13275

Escherichia coli

ATCC 8739, NCIMB 8545, CIP 53.126 o NBRC 3972

Salmonella enterica subesp. enterica serovar


Typhimurium o, como alternativa,

ATCC 14028

Salmonella enterica subesp. enterica serovar


Abony

NBRC 100797, NCTC 6017 o CIP 80.39

Candida Albicans

ATCC 10231, NCPF 3179, IP 48.72 o NBRC 1594

Clostridium sporogenes

ATCC 19404 o ATCC 11437

Antagonistas
Sustancia de Interferencia

Agentes Neutralizantes
Potenciales / Mtodo

Glutaraldehido, Mercuriales

Sulfito Acido de Sodio ( Bisulfito de


Sodio)

Fenlicos, Alcohol, Aldehdos, Sorbato

Dilucin

Aldehdos
Compuestos
de
Amonio
Cuaternarios
Parahidroxibenzoatos (Parabenos), Biguanidas

Glicina
(CAC),

Lecitina

CAC, Yodo, Parabenos

Polisorbato

Mercuriales

Tioglicolato

Mercuriales, Halgenos, Aldehdos

Tiosulfato

EDTA (Edetato)

Iones de Mg o Ca

09/10/2013

Microorganismos de prueba para el ensayo de grmenes revivificables

Los microorganismos adecuados para usar en la prueba de promocin del crecimiento


de los medios de cultivo y para el ensayo de validacin

Caldo digerido de Casena Soja

Medio Fluido Tioglicolato

Bacillus subtilis ATCC 6633, CIP 52.62, NCIMB 8054, NBRC 3134
Candida albicans ATCC 10231, IP 48.72, NCPF 3179, NBRC 1594
Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, IP 1431.83, IMI 149007, NBRC
9455
Staphylococcus aureus ATCC 6538, CIP 4.83, NCTC 10788, NCIMB
9518, NBRC 13276
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, NCIMB 8626, CIP 82.118, NBRC
13275*
Clostridium sporogenes ATCC 19404, CIP 79.3, NCTC 532 o ATCC
11437, NBRC 14293**

* alternativo Kocuria rhizophila ATCC 9341


** alternativo Bacteroides vulgatus ATCC 8482

Cuando NO se obtiene el criterio de aceptacin establecido, modificar


el mtodo de ensayo de acuerdo a:

- Aumentar el factor de dilucin siempre que la especificacin del


producto o materia prima lo permita,
- Agregar un antagonista adecuado,
- Otra modificacin apropiada del mtodo, diluyente o medio de cultivo,
- Una combinacin de los anteriores.
En caso de no cumplir el criterio de aceptacin habiendo efectuado todas las
modificaciones detalladas anteriormente, los microorganismos podrn inocularse
directamente en la placa antes del agregado del medio slido, para evaluar la
remocin del agente inhibitorio.

09/10/2013

En caso de agregar una sustancia antagonista, o si se cambia la


composicin del diluyente o medio de cultivo, demostrar que dicha
modificacin no tiene efecto txico que afecte el desarrollo de los
microorganismos de prueba.

Para demostrar la validez del mtodo de recuento por filtracin, la


suspensin con los microorganismos se agrega en el ltimo lavado, para
evaluar la ausencia de sustancias inhibitorias en la membrana que
puedan afectar su crecimiento.

En el recuento en placa, las suspensiones de las cepas de control se


agregan en la dilucin del producto.

MUCHAS GRACIAS
POR SU
ATENCIN

sstagnaro@anmat.gov.ar