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EPRODUCCIN. Aspectos a tener en cuenta en la valoracin seminal

REPRODUCCIN

ASPECTOS a TENER en CUENTA

en la VALORACIN SEMINAL
RAL GONZLEZ URDIALES (1) y
VNIA CASEIRO DOMNGUES (2)
(1) Centro Tecnolgico de Inseminacin Artificial
S.A. (CENTROTEC). Universidad de Len.
(2) Cuncola Gallega de Inseminacin S.L.

La correcta realizacin de las

pruebas de contrastacin seminal es
fundamental a la hora de valorar la
aptitud reproductiva de los machos; no
obstante, hay que tener en cuenta que
ninguna de ellas, de forma individual, es
suficiente para determinar la capacidad
fecundante de un determinado eyaculado.
Por regla general, a la hora de elaborar las dosis
seminales nicamente se utilizan ciertos datos
que permiten determinar qu eyaculado
aceptamos o rechazamos en funcin de un
determinado baremo preestablecido, obviando
otros que, sin embargo, revelan una informacin
que es de gran inters y por ello han de ser tambin
considerados. Con ello tendremos un mejor
criterio de eliminacin de los eyaculados y
podremos realizar un mayor control sobre la
capacidad repro-ductiva de los machos, estableciendo
protocolos de actuacin ms acertados, tanto con los
animales como en el laboratorio.
A la hora de establecer una metodologa de
preparacin de dosis seminales en el conejo no es
aconsejable simplificar excesivamente el proceso, lo
cual se hace en ocasiones a fin de que resulte ms
sencillo y econmico. Ello puede conducir a la comisin
de errores con consecuencias negativas en los resultados
productivos, que podran evitarse adjudicando la
importancia justa a cada una de las pruebas y fijndose
en ciertos detalles que, aunque a priori puedan parecer
irrelevantes, a la postre pudieran determinar la buena
marcha de un centro e incluso su misma viabilidad.
En concreto, no se suele dar la importancia debida
a la realizacin del clculo del volumen y de la

concentracin seminal, cuando son, sin embargo, los

dos parmetros que ms influyen en el nmero de dosis
que podremos realizar a partir de uno o de varios
eyaculados. Es importante efectuar una valoracin lo
ms exacta posible de los mismos, puesto que esto nos
va a permitir destinar un menor nmero de animales a
la inseminacin artificial o evitar posibles reducciones
en la fertilidad y/o prolificidad. Una pequea variacin
en el volumen de un eyaculado puede determinar grandes
oscilaciones en el nmero de espermatozoides totales
del mismo. As, teniendo en cuenta que una diferencia
de 0,1 ml en un eyaculado, para una concentracin media
de 250 millones de clulas espermticas por mililitro,
supone 25 millones que no contabilizamos, con los que
podran realizarse de 2 a 4 dosis seminales, si se
extrapolara este resultado al supuesto de que se empleen
50 eyaculados para hacer un pool heterosprmico, la
diferencia sera de 200 dosis, que bien se estaran
dejando de realizar o bien se realizaran de ms, por lo
que incorporaran un menor nmero de espermatozoides,
reduciendo posiblemente con ello la capacidad
fecundante de stas.
Igual de importante es el clculo de la concentracin seminal, que algunos reducen a una mera
valoracin macroscpica de la densidad y color del
eyaculado, con lo que podemos estar suponiendo
concentraciones elevadas a eyaculados con muy pocos
espermatozoides, puesto que la densidad del eyaculado
no tiene porque determinar su concentracin
espermtica. Resulta mucho ms fiable, siempre y
cuando se haga de forma correcta, realizar el clculo
mediante la utilizacin de una cmara de recuento
celular, adems de que no lleva ms que unos minutos
y su coste es relativamente bajo.
Estas dos valoraciones son tanto ms relevantes
en la rentabilidad de la explotacin cuanto mejor
podamos precisar el nmero de espermatozoides
necesario para que una dosis seminal presente la mxima
fertilidad posible, y este valor depende de varios
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factores, como la lnea gentica de los animales, el

diluyente empleado, el semental utilizado, la calidad
de los espermatozoides o el tiempo de conservacin
previo a la inseminacin. Aunque se ha establecido que
con un nmero bajo de espermatozoides por dosis (4-8
millones) se pueden obtener resultados aceptables para
la IA (Viudes de Castro y Vicente, 1996; Lavara et al.,
2000), lo aconsejable es que cada uno realice sus propias
pruebas para determinar el nmero idneo, puesto que
aquellos factores sern distintos en cada caso.

Fig. 1. La utilizacin de un sistema fiable para el clculo de la

concentracin, como las cmaras de recuento celular, nos
permite rentabilizar mucho ms los eyaculados de los machos
reproductores.

Otro de los aspectos que se tiene en cuenta, junto

las dos valoraciones anteriores, a la hora de elaborar
las dosis, es el porcentaje de movilidad, que es
posiblemente el parmetro ms empleado para
determinar la calidad de un eyaculado dado; ahora bien,
como ya se ha dicho hasta la saciedad, "la movilidad no
es sinnimo de fertilidad", y por tanto, un eyaculado
que presente una movilidad superior a otro, no
necesariamente proporcionar un mayor porcentaje de
fecundaciones, ya que stas dependen de muchos ms
factores. Por ello, mientras no se conozca con ms
precisin su relevancia en el proceso de fecundacin,
hay que darle slo la importancia justa. En los ltimos
aos, con ayuda de las innovaciones llevadas a cabo en
las tcnicas de anlisis computerizado de semen
(C.A.S.A.), se est intentando averiguar cul es el tipo
de movimiento del espermatozoide que determina una
mayor capacidad de fecundacin del mismo, pero an
no se ha podido establecer y ni siquiera podemos afirmar,
a la hora de valorar un eyaculado, que uno que presente
movilidad de los espermatozoides al microscopio vaya
a ser ms fecundante que otro que no la presente, sino
slo que hay un determinado porcentaje de espermatozoides que presentan, aparentemente, una normalidad
en su funcionamiento, ya que para que tengan una
movilidad estable, han de estar en perfectas condiciones
multitud de estructuras celulares y funcionar
correctamente numerosas rutas metablicas. Por lo
tanto, y reconociendo la importancia parcial de esta
valoracin, comprenderemos que cuantas ms pruebas

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realicemos, de forma complementaria a sta, ms

podremos acercarnos a una determinacin cualitativa
fiable de los eyaculados.
Si tenemos en cuenta que el estudio de la
morfologa espermtica es una de las valoraciones que
ms informacin nos puede aportar, su realizacin, por
sencilla y econmica, resulta ineludible para el buen
funcionamiento de cualquier centro donde se elaboren
dosis seminales. Puede orientarnos acerca de la
fertilidad de un determinado eyaculado, en la medida
en que los eyaculados con una alta proporcin de
morfoanomalas presentarn con toda seguridad
resultados de fertilidad bajos; ahora bien, cuando los
eyaculados estn dentro de unos niveles aceptables, esta
valoracin ya no nos va a aportar informacin suficiente
para saber cul de ellos presenta una mayor capacidad
fecundante. Adems, esta prueba, aparte de actuar como
filtro de eyaculados con un alto ndice de morfoanomalas, hemos de realizarla de tal forma que nos permita
detectar alteraciones en la espermatognesis, en la
maduracin epididimaria o incluso problemas por un
mal manejo seminal en el laboratorio, sirvindonos
como herramienta para eliminar reproductores cuando
estas anomalas indiquen patologas genitales mayores.
Existen diversos criterios a la hora de realizar la
clasificacin de los espermatozoides en funcin de sus
caractersticas morfolgicas, pudiendo mencionar las
siguientes clasificaciones:
Estrictamente morfolgica (la ms conocida):
es aquella que clasifica a los espermatozoides
en funcin de la parte donde se encuentra una
determinada anomala (cabeza, tracto intermedio, cola).
En funcin de la importancia de la afectacin
(Bloom, 1977): divide las alteraciones en
anomalas mayores o menores, en funcin de
si estn o no asociadas con la infertilidad.
"

Etiolgica: aquella que clasifica las diferentes

alteraciones en funcin de dnde se han
originado, siendo primarias (aquellas originadas en la espermatognesis), secundarias
(aquellas acaecidas durante la maduracin
espermtica) o terciarias (provocadas por un
mal manejo en el laboratorio).

En funcin de la capacidad de ser compensadas

o no por un incremento en el nmero de
espermatozoides por dosis (Saacke, 1994): se
dividen en anomalas compensables y no
compensables, siendo stas ltimas aquellas
en las que los espermatozoides anmalos,
aunque pueden unirse a los ovocitos no son
capaces de producir ningn embrin viable,
impidiendo con esta unin, como consecuencia
del bloqueo de poliespermia, que aquellos
espermatozoides sin este tipo de anomalas
lleguen a fecundarlos.

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La importancia de clasificar a los espermatozoides

radica en la relevancia que pueda tener cada categora
sobre la fecundacin. Quiz la clasificacin ms utilizada
sea la estrictamente morfolgica, atendiendo slo a que
el porcentaje de espermatozoides morfolgicamente
normales sea superior al que hayamos establecido para
considerar a un eyaculado como apto para la
inseminacin. Sin embargo, de esta forma estaremos
obviando una informacin que tambin es valiosa acerca
del estado reproductivo de los animales, por lo que
pudiera ser ms interesante emplear cualquiera de las
otras tres clasificaciones, si bien, debido al desconocimiento existente, en bastantes casos, de la influencia
sobre la fecundacin de muchas de estas anomalas,
posiblemente la ms til para el funcionamiento de un
centro de IA sea la etiolgica.
Dentro de esta clasificacin, las alteraciones
primarias son aquellas que se producen por alguna

brevedad posible. En cambio, si este tipo de anomalas

aparecen en unos pocos animales, o en uno en particular,
lo lgico ser suponer un origen gentico y lo que
procedera es la eliminacin de los mismos si las
mantienen en varios eyaculados consecutivos.
Las alteraciones secundarias son aquellas que se
producen durante la maduracin en el epiddimo,
afectando de forma especial a la cola o al tracto
intermedio; pueden controlarse o revertirse en muchos
casos. Destacan las colas enrolladas u "ovillos", las
torsiones a nivel del TI o de la cola, los espermatozoides
decapitados (aparecen cabezas y colas sueltas al
microscopio), o los "ltigos", que son torsiones de cola
a nivel de la unin entre el TI y la cola (anillo de Jensen),
generalmente, por la presencia de una gota citoplasmtica. En primer lugar, hay que aprender a
diferenciar estas alteraciones de las terciarias y, a
continuacin, hay que tratar de identificar su causa,

Fig. 2. Ejemplos de
alteraciones primarias:
espermatozoide con
una doble cabeza
(izquierda) y
espermatozoide
macrocfalo frente a
uno con dimensiones
normales (derecha).

deficiencia en la espermatognesis, pudiendo ser stas

especficas (de origen gentico) o inespecficas (etiologa
diversa), localizndose en cualquier parte de la
estructura espermtica; as, pueden ser:
Anomalas ceflicas: macrocfalos, microcfalos, cabezas alargadas, piriformes,
Alteraciones del tracto intermedio (TI): pieza
intermedia doble, delgada, engrosada,
Alteraciones a nivel de la cola: colas cortas,
colas dobles,
En caso de que el porcentaje de estas malformaciones sea suficientemente importante, si el nmero
de animales afectados es alto habr que comprobar
todos los factores que pueden contribuir a su aparicin
(pueden estar provocadas por txicos, deficiencias
nutricionales, alteraciones ambientales, etc.) y proceder
a realizar las correcciones pertinentes a la mayor

que en ocasiones se encuentra en un deficiente control

del ritmo de extraccin. Si ste es excesivamente lento,
los espermatozoides que ya han sufrido la maduracin
espermtica en el epiddimo y no son evacuados mediante
la eyaculacin, empiezan a degenerarse, apareciendo como
consecuencia de ello un alto porcentaje de alteraciones a
nivel de la cola o del cuello (la regin ms frgil de la
clula). Para solventar la situacin debemos identificar
aquellos animales que son ms susceptibles al periodo
de reposo sexual prolongado y modificar su ritmo de
extraccin, eliminndolos en caso de que la situacin se
repitiera frecuentemente.
En el caso de que el ritmo de extraccin sea
demasiado intenso, ya sea para un macho en particular
o para el conjunto de ellos, nos encontraremos con la
presencia de gotas citoplasmticas en los espermatozoides. stas son residuos de la espermatognesis
localizados, en un primer momento, a nivel del cuello
(Gota Citoplasmtica Proximal [GCP]), y que, tras
recorrer todo el TI, se acaban situando en el anillo de
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Fig. 3. Imgenes captadas con un microscopio de contraste de fases en las que se aprecian espermatozoides normales, con gota
citoplasmtica distal (izquierda) y proximal (derecha).

Jensen (Gota Citoplasmtica Distal [GCD]) para,

posteriormente, liberarse en el epiddimo al final de la
maduracin o en el momento de la eyaculacin como
consecuencia del contacto con los fluidos de las
glndulas sexuales accesorias; es por ello por lo que su
presencia en un espermatozoide eyaculado suele ser un
elemento utilizado para determinar su inmadurez, que
ser mayor cuando se trate de una CGP, por lo que su
presencia resulta ms peligrosa que la de la CGD, que
pertenece a un estadio ms avanzado en la maduracin
de la clula.
Las alteraciones terciarias son aquellas que
provocan los operarios por un mal manejo del semen;
sobre todo nos vamos a encontrar con alteraciones a
nivel de la cola, del cuello o del acrosoma (si
introducimos estas ltimas dentro de las anomalas
morfolgicas). Su identificacin resulta de gran inters
puesto que nos permitir diferenciarlas de las
secundarias, evitando tomar decisiones incorrectas con
respecto al manejo de los animales, y adems nos va a
aportar informacin de lo que podemos estar haciendo
mal en el laboratorio. El origen de las mismas se puede
ser de dos tipos:
Fisicoqumico: como consecuencia de variaciones
bruscas de temperatura, de pH, de la composicin del
medio, de la osmolaridad, o bien como consecuencia
de una combinacin de algunas de stas, encontrndonos
con morfoanomalas de cola, normalmente colas "en
ltigo", o alteraciones en el acrosoma.
Mecnico: en general a raz de extensiones mal
realizadas, que dejan multitud de espermatozoides
decapitados.
En ocasiones resulta complicado diferenciar estas
alteraciones de las secundarias y habr que repetir las
valoraciones y repasar los pasos realizados para
comprobar si se ha realizado todo el manejo de forma
correcta, siendo para ello necesario conocer los factores

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que pueden provocar este tipo de alteraciones. En el

caso de alteraciones de origen fisicoqumico, hemos de
evitar los cambios bruscos de temperatura, reduciendo
de forma progresiva la temperatura del semen hasta
alcanzar la de conservacin de las dosis seminales
(mediante el control de la temperatura ambiental, del
diluyente y del material), o las variaciones del medio,
mediante una correcta elaboracin y conservacin de
los diluyentes y, asimismo, hay que evitar el contacto
del semen con sustancias como el agua que, aunque a
priori pueda parecer inocua, es letal para los
espermatozoides, ya que produce una variacin brusca
de la osmolaridad del medio.
Para evitar las alteraciones de origen mecnico,
hemos de procurar no realizar movimientos muy bruscos
con el material seminal (agitar enrgicamente los
recipientes donde se realizan las diluciones para
homogeneizar el contenido) y procurar efectuar las
extensiones de las muestras seminales cuidadosamente,
haciendo discurrir un cubreobjetos sobre el portaobjetos
(en este ltimo caso, la identificacin de las alteraciones
terciarias resulta sencilla, debido a que los espermatozoides decapitados en el proceso aparecen orientados
en la direccin de la extensin).
Existen otras dos pruebas que, aunque no son
complicadas y tambin tienen su importancia en el
anlisis seminal, no suelen realizarse, sin embargo, de
forma rutinaria en los centros de IA: la valoracin de la
vitalidad y del estado del acrosoma. La primera consiste
en determinar el estado de la membrana plasmtica del
espermatozoide para comprobar su estado estructural,
ya que si presenta soluciones de continuidad en ella la
viabilidad de la clula estar seriamente comprometida,
debido a la prdida de la permeabilidad selectiva de la
misma, que impedir que se mantengan en su interior
las concentraciones necesarias de determinados iones
y solutos, perdindose importantes metabolitos y
coenzimas, lo que conlleva una supresin de la
movilidad, en un primer momento, y de todas las
funciones vitales a continuacin.

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Fig. 4. Imgenes captadas con un microscopio de contraste de fases en las que se aprecian espermatozoides con alteraciones
secundarias: presencia de una torsin de cola "en ltigo" (izquierda) y espermatozoide decapitado (derecha).

Fig. 5. Imagen captada con un microscopio de contraste de

fases en la que se aprecia un espermatozoide con el acrosoma
reaccionado. Ntese la diferencia con el que presenta esta
estructura en buen estado en la figura 4 (derecha).

Por otro lado, puesto que el acrosoma juega un

relevante papel en la fecundacin, encargndose, tras
la capacitacin del espermatozoide y por medio de su
contenido enzimtico, de disolver las envueltas
ovocitarias para que aqulla tenga lugar, la valoracin
de su estado tambin resulta interesante.
Los porcentajes de integridad de ambas estructuras
suelen permanecer bastante constantes entre los
eyaculados de un mismo macho, y habr que presumir
que as es mientras no se observe ninguna otra
modificacin en el resto de valoraciones seminales o
en el comportamiento del animal, en cuyo caso sera
conveniente realizar estas pruebas. En cualquier caso,
es interesante realizarlas peridicamente puesto que
factores como la temperatura ambiental, la estacin del
ao, el fotoperiodo, etc., pueden provocar alteraciones
en estas estructuras, disminuyendo notablemente la
calidad de los eyaculados. Una mala praxis en el manejo,
tanto del semen como de las dosis seminales, tambin
puede originarlas; en concreto, es importante tener un
adecuado control sobre la temperatura puesto que las
variaciones bruscas o la exposicin a temperaturas bajas
pueden ocasionar daos graves.

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