ENSAYO DE ANLISIS POR CROMATROFRAFA DE CAPA DELGADA DE UN

EXTRACTO

I.

INTRODUCCIN
La cromatografa en capa delgada es un mtodo simple y eficiente que
sirve para identificar y cuantificar metabolitos secundarios en las vegetales,
sus extractos, tinturas e igualmente para que en una formulacin
farmacutica sea posible identificar la presencia de un metabolito
secundario de inters farmacolgico.
La mayora de monoterpenos y sesquiterpenos se encuentran presentes en
los aceites esenciales de diversas plantas. A partir de dichos extractos es
posible realizar su aislamiento mediante la utilizacin de uno o varios
mtodos cromatogrficos tales como la cromatografa en columna, en capa
fina y HPLC. Para las cromatografas en columna y en capa fina se utiliza
ampliamente la slica gel como fase estacionaria. Como fase mvil se
emplea solventes apolares puros o mezclados. Sin embargo actualmente
se utilizan tcnicas de separacin ms eficientes y rpidas como la
cromatografa lquida de alta eficiencia HPLC, y la cromatografa de gases
(GC), as como tambin combinaciones online HPLC-GC-MS.

II.

OBJETIVOS
Anlisis cromatogrfico (CCD) del extracto de ajo sacha para identificar sus
componentes principales.

III.

REVISION BIBLIOGRAFICA
Existen dos procedimientos, uno sobre papel y otro sobre placa de silicagel.
Tanto al papel como a la placa de silica gel se les denomina fase
estacionaria.
En ambos se deposita el material a ensayar con una micropipeta de
laboratorio o instrumental semejante (una jeringuilla de muestreo), sobre
una lnea de referencia o de partida. La placa de silica gel con la muestra
depositada se coloca dentro de una cmara con una mezcla de solventes
orgnicos que son especficos para cada ensayo a la cual se le denomina
fase mvil.
Al cabo de cierto tiempo especificado se determina el corrimiento que ha
tenido la mezcla de solventes los cuales se desplazaron sobre la fase fija
en el papel o placa de silica gel y se determina la distancia desde el punto
en donde se coloc la muestra hasta el borde extremo del corrimiento de la
fase mvil.

En la medida que la muestra se desplaza sobre la fase fija va dejando un

rastro de sustancias orgnicas que deben ser reveladas por medio de un
reactivo qumico o exponiendo la fase mvil bajo los rayos de la luz
ultravioleta.
Se determina la distancia que se encuentra la mancha o manchas
detectadas desde su posicin al punto de partida de la muestra. La razn
entre la distancia a que se encuentra la mancha analizada y el total del
corrimiento de la fase mvil se le llama razn de fraccionamiento Rf.
Cuando los principios activos de una droga no son conocidos, la
identificacin del extracto puede ser realizada a travs de la determinacin
de sustancias caractersticas de la planta en cuestin, aunque no tengan
actividad farmacolgica (perfil cromatogrfico) contra un extracto preparado
bajo las mismas condiciones de la muestra, pero con un material vegetal de
referencia.
Estas sustancias denominadas marcadores (o marcadores positivos), son
seleccionadas entre los diferentes compuestos caractersticos de la planta
medicinal. El uso de ellas debe limitarse solamente a la identificacin del
material vegetal, de los extractos y de las tinturas. Los marcadores pueden
servir, igualmente, para identificar la presencia del extracto en un
fitofrmaco.
Cuando los marcadores no son las sustancias responsables de la accin
farmacolgica

del

extracto,

no

deben

ser

utilizados

para

las

determinaciones cuantitativas.
La presencia de manchas o bandas coloreadas con el mismo valor de
razn de fraccionamiento (Rf) de las sustancias de referencia en el
cromatograma de la muestra, no es suficiente para identificar el material
vegetal.
La existencia de otras manchas o bandas coloreadas debe ser anotada, as
como su posicin en relacin a la posicin de las sustancias de referencia
utilizada. El uso de sustancias de referencia que no son constituyentes de
la planta es de utilidad para determinar la ocurrencia de falsificaciones,
estas sustancias reciben la denominacin de marcadores negativos.
Debe especificarse las condiciones cromatogrficas de la fase estacionaria,
IV.

la fase mvil y el revelado.

MATERIALES Y MTODOS
MATERIALES
Muestra: extracto de material vegetal (ajo sacha).
Solvente de extraccin: puede ser etOH, MeO, CH2Cl2, hexano.
Cmara oscura en Ultra Violeta.
Probeta.
Capilar.

 Vial.
Cmara cromatografa.
Placas cromatografas.
Papel de filtro.
Matraz.
MTODOS Y/O PROCEDIMIENTO
1. Se pesa el extracto 0.0109 mg. en una balanza analtica.
2. Luego de esto se le agrega etanol 0.5 ml y se procede a diluir.
3. Previa dilucin se tiene que medir la placa cromatografa entre las 2
rayas lmites de la placa la cual nos dio una distancia de 8.5 cm
4. Una vez hecho lo de arriba se procede a colocar 10 microlitros del
diluido en una de la rayas de la placa, colocndolo en forma de un
punto cuidando que no se expanda la muestra en la placa.
5. Posteriormente desarrollamos la CCD en un sistema Tolueno acetato
de etilo en una relacin de 1:9.
6. Una vez hecho el sistema CCD se deja unos minutos para que empiece
el recorrido, y pueda llegar a una distancia de 8 cm aproximadamente,
esta medicin puede ser relativa, depender del desarrollo que se hace
en la prctica.

CAMARA CROMATOGRAFICA LISTA

7. Luego de los minutos de espera, se procede a retirar la placa y secarlo
al aire libre, observando los resultados, asimismo hacer el revelado de
los puntos en la cmara oscura de ultra violeta hasta donde llego o
migro el extracto, anotando todos los resultados vistos, para luego
proceder a realizar los clculos de factores de referencia.

8. Anotar los resultados del recorrido de las manchas segn ecuacin.

9. Despus de terminado la primer experimento, se procede a hacer otro
experimento ms pero esta vez usando una disolucin del extracto en 1
ml. en la relacin de 3:7.
10. Luego se repite todo el procedimiento del experimento anterior,
anotando los resultados.
V.

RESULTADOS Y DISCUSIONES

RESULTADOS
La distancia recorrida por el disolvente fue de 8.5 cm.

Para calcular el Rf se aplica la siguiente expresin:

Rf =

h h
Distancia recorrida de la substancia
;o 1 , n
Distancia recorrida por el disolvente D D

Dnde: h1 = sustancia uno (1)

hn = sustancia n
RF CON UN SISTEMA DE TOLUENO: ACETATO DE ETILO 1:9
Se prepar 3 ml de solvente, Tolueno Acetato de etilo en relacin (2.7 ml
de tolueno y 0.3 ml de acetato de etilo).
Se obtuvieron 3 puntos en la placa cromatografa, previa visualizacin en la
cmara oscura de ultra violeta.

substanci
a
A
B
C

Recorrido
(substanci
a)
1.45
2.95
5.95

Rf

0.171
0.347
0.7

RF CON UN SISTEMA DE TOLUENO: ACETATO DE ETILO 3:7

Se prepar 3 ml de solvente, Tolueno Acetato de etilo en relacin (2.1 ml
de tolueno y 0.9 ml de acetato de etilo).
Para esta ocasin se obtuvo tambin 3 puntos en la placa cromatografa,
previa visualizacin en la cmara oscura de ultra violeta.
substanci
a
A
B
C

Recorrido
(substanci
a)
2.1
5.3
6.8

Rf

0.247
0.624
0.8

En ambos casos se puede apreciar que los metabolitos que ms

recorrieron fueron la C.
DISCUSIONES
Se tiene que tener en cuenta que la medicin del recorrido del
metabolito es relativo, puesto que eso puede variar, y se tiene que tener
el momento exacto donde est lista para secarla al aire.
En ambos mediciones de los puntos de recorrido nos dio que el punto
se C se desplaz ms que los dems, muestra de la buena existencia
y cantidad de metabolitos presentes.
En su recorrido ascendente el disolvente arrastrara uno o ms
substancias de la muestra que se pretende separar y por efecto de sus
factores de referencia especfica para cada substancia tendrn un
determinado recorrido el cual es medible, de los cuales se pueden
observar las manchas coloreadas propias dcada substancia
VI.

CONCLUSIONES

 Se puede demostrar la presencia de metabolitos secundarios en el

experimento.
Nos indica la mayor separacin de los metabolitos en los solventes.
Se llega a la conclusin de que la separacin se da por migracin diferencial,
puesto que la fase mvil, arrastra a las substancias menos polares y aquellas
menos polares quedan retenidas.

VII.

ANEXOS

Momento de preparacin del sistema tolueno-acetato de etilo:

Cmara cromatografa lista para el experimento:

Muestra de las placas cromatografas despus del experimento y en la cmara ultra

violeta:

VIII.

BIBLIOGRAFIA
http://www.plantas-medicinal farmacognosia.com/temas/m
%C3%A9todos-de-an%C3%A1lisis-de-droga/cromatograf
%C3%ADa-en-capa-delgada/
http://www.monografias.com/trabajos85/analisis-fitoquimicametabolitos-secundarios/analisis-fitoquimica-metabolitossecundarios.shtml
http://old.iupac.org/publications/cd/medicinal_chemistry/Practica-VI6.pdf