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AIREACIN

El rol de los dispositivos de aireacin colocados en los fermentadores, es de

proveer a los microorganismos del oxigeno necesario para su crecimiento.
Por otra parte el fin de la agitacin es asegurar la uniformidad de la suspensin
microbiana de manera de acelerar la rapidez de intercambio entre esta y el
medio de cultivo.
La turbulencia generada por la agitacin adems, permite la divisin de las
burbujas de aire lo que aumenta la superficie de contacto y la duracin de este,
entre el oxigeno y los microorganismos.
La demanda de oxigeno de cultivos lquidos es satisfecha inicialmente por el
oxigeno disuelto en el medio proveniente del aire atmosfrico, debido a la
solubilidad extremadamente baja del mismo en medios lquidos, ( 7 ppm a 37
C ), esta no puede ser satisfecha, si no se toman medidas para restituir el
oxigeno disuelto, por ejemplo en un cultivo denso y de rpido crecimiento.
El mtodo corriente es el burbujeo, pero a veces no logra aumentar el factor
critico ( concentracin de oxigeno disuelto ), porque por ejemplo, si las burbujas
son de gran tamao escapan rpidamente del seno del liquido hacia la
superficie del mismo.
La solubilidad el oxigeno es baja en agua pura ( 7 ppm ), pero esta tasa no es
alcanzada en la industria ya que el aire no contiene mas del 20,9 % de oxigeno.
La solubilidad del oxigeno es inversamente proporcional a la temperatura y
entre 5 y 30 C puede ser calculada por la siguiente formula:
C=

475
33,5 x t

C = expresado en partes por milln

La presencia de compuestos disueltos disminuye la solubilidad del oxigeno, por
este motivo es que en el agua de mar, la cantidad de oxigeno es el 80 % del
disuelto en agua pura.
Como las enzimas microbianas estn localizadas en el interior de los
microorganismos estos no pueden utilizar fcilmente el oxigeno disuelto en el
medio de cultivo, por esta causa y por la baja solubilidad, la reserva de gas es
muy baja, la cantidad disuelta en todo momento y lugar del medio de cultivo
debe ser superior a un valor critico pre-establecido, por debajo del cual los
disturbios metablicos acarrean la muerte celular.
A todo esto debe sumarse la viscosidad del medio, densidad celular, presencia
de metabolitos, variaciones en la composicin del sustrato, presencia de
micelio, etc. todos factores que disminuyen la disponibilidad del oxigeno
disuelto.

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El mtodo corriente de suministro es la aireacin, pero a veces no se logra
aumentar la eficacia de la oxigenacin porque por ejemplo el aire introducido
escapa rpidamente del medio.
La demanda de oxigeno por ml de cultivo es igual a la demanda por clula por
el numero de clulas por ml.
La mayor demanda para un cultivo se registra al final del crecimiento
exponencial, sin embargo, la demanda por clula es mayor en la fase de
latencia debido al aumento de tamao y permanece constante por unidad de
peso durante todo el ciclo de crecimiento.
La respiracin celular y el crecimiento es prcticamente independiente de la
concentracin de oxigeno ha condicin que esta concentracin sea mantenida
por encima de un valor critico por lo tanto no hay necesidad de trabajar con
oxigeno en exceso.
Es necesario conocer la demanda mxima de oxigeno de un microorganismo
ya que condiciona su productividad.
Se utiliza el coeficiente de absorcin de oxigeno QO2 definido por la cantidad
de microlitros de oxigeno absorbidos por miligramo de clulas secas y por hora,
podemos decir entonces que si C es la concentracin, la formula seria:
DEMANDA MXIMA = QO2 . C

moles / litro / hora

Para muchos microorganismos ya es conocida la demanda, si no la conocemos

podemos obtenerla utilizando por ejemplo el respirometro de Warburg.
Las tcnicas respirometricas estn basadas en la medida e interpretacin del
consumo biolgico de oxigeno, debido a la respiracin aerbica, de una
poblacin microbiana bajo unas condiciones determinadas.
El consumo biolgico de oxigeno esta directamente relacionado con el
crecimiento bacteriano y con el consumo de sustrato para la obtencin de
energa.
Con el respirometro manometrico de Warburg,el oxigeno utilizado se mide con
respecto al tiempo anotando la disminucin de presin en el recipiente donde
se esta realizando la respirometria, que tiene volumen constante, es hermtico
y se mantiene a temperatura constante.
En el recipiente se introduce la muestra a analizar dejando una cmara de aire
y adems se coloca un vaso con una solucin de hidrxido de potasio para que
absorba el CO2 producido, de tal forma que la disminucin de la presin sea
una medida del oxigeno consumido.
Es un ejemplo de respirometro, en el que la medida de la concentracin de
oxigeno se realiza de manera indirecta y tanto la muestra liquida como el gas
permanecen de manera esttica en el interior del recipiente, sin que exista
renovacin alguna de ambos componentes durante la determinacin.

MANOMETRO

MUESTRA

SOLUCION DE KOH

Es necesario poder medir el consumo de oxigeno de los microorganismos y

adems la eficacia de los dispositivos de aireacin para cada uno de ellos.
Un mtodo eficaz es el de Cooper, que se basa en la oxidacin de sulfito a
sulfato en presencia de un catalizador de cobre y a pH alcalino ( 8 )
El oxigeno absorbido por un volumen conocido de solucin de sulfito de sodio
se mide valorando la cantidad de este antes y despus de la aireacin.
Se coloca agua en un recipiente y se aaden cantidades sulfito de sodio hasta
que el ion sulfito ( SO3 ) alcance una concentracin aproximada de 1 N y sulfato
de cobre hasta una concentracin de por lo menos 0,001 M de Cu.
Una vez disuelto todo se toma una muestra inicial y una segunda muestra
despus de un periodo de aireacin establecido.
Se vierte cada muestra en una solucin patrn recin preparada de I2 con
pipeta vaciada en nitrgeno y se valora el iodo residual con patrn de tiosulfato
en presencia de un indicador de almidn.
El oxigeno absorbido se calcula restando el volumen de tiosulfato requerido
para valorar la segunda muestra menos el volumen de la primera.
El mtodo es muy usado en la actualidad pero debe interpretarse con cuidado
ya que lo que se mide es el volumen absorbido por una solucin acuosa de
sulfito y no por un medio de cultivo que contiene microorganismos y sus
productos metablicos, de todas maneras este fenmeno oxidativo puede ser
comparado a la rapidez de absorcin del oxigeno por los microorganismos.
Podemos concluir entonces que la rapidez de la disolucin del oxigeno
expresado por la rapidez de la oxidacin es igual a la rapidez de desaparicin

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del oxigeno por la respiracin celular y es proporcional a la superficie de
interfase entre el liquido y las burbujas de aire.
TRANSFERENCIA DE O2 ( OTR )
OTR = KLa ( C* - CL ) = QO2 x C = rapidez de disolucin de oxigeno
C* = concentracin del oxigeno en equilibrio con la atmsfera ( en la aireacin
es la conc. del oxigeno del aire )
CL = concentracin real en el medio ( en mtodo de sulfito = 0 )
KL = coeficiente de intercambio es decir la facilidad con que el oxigeno pasa
desde el aire atmosfrico al medio
a = rea de la interfase atmsfera medio
por el mtodo del sulfito podemos reducir la formula a Kla . C*
como es imposible medir por separado estas superficies se valora en bloque
Kla
Ejemplo de aplicacin:
Sabemos que la demanda de oxigeno de E. coli es 5-8 mmoles / litro / hora,
sino lo determinamos por Warburg.
Tenemos un erlenmeyer agitado donde la vamos a cultivar y el Kla del mismo
es 25
En el aire el valor C* es igual a 0,2 mmoles por litro ( 6,4 ppm )
Aplicando la formula:
Kla . C* = 25 . 0,2 = 5
Demanda QO2 = 5 8 mmoles
Observamos que estamos muy cerca del valor critico mnimo, determinado
adems por el mtodo de sulfito de Cooper donde no se ponen en juego los
parmetros de composicin del medio, concentracin celular etc. y que afectan
la disponibilidad de oxigeno para los microorganismos, por lo tanto debemos
lograr un mejor coeficiente de aireacin, cosa que podemos hacer de varias
maneras:
Aumento de C*, es decir tratar de aumentar la presin parcial atmosfrica,
imposible, este parmetro no podemos modificarlo.
Aumento a, es decir el rea de intercambio, es lo mas corriente a utilizar y
consiste en el aumento del burbujeo o la agitacin del medio en el recipiente
que contiene el medio.

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Las burbujas pequeas son mas eficaces porque aumentan el rea de interfase
gas liquido y se pueden obtener pasando el aire por un filtro poroso.
El chorro de aire ingresa al biorreactor ( tanque agitado) por debajo del sistema
agitador del mismo y al ser golpeado por por las paletas se transforma en miles
de pequeas burbujas de pequeo tamao, si se coloca una placa sobre el
sistema de burbujeo evitamos que estas escapen rpidamente en direccin a la
superficie del medio lo que tambin se logra por la presencia de deflectores o
pantallas laterales en el recipiente, que impiden la formacin de vortice
generando turbulencia en el liquido, de este modo logramos que las burbujas
se mantengan temporalmente retenidas en el seno del liquido lo que tambin
facilita la transferencia de O2.
Aumento de KL , facilidad con que el oxigeno pasa de la atmsfera al medio
La formacin de espuma dificulta con frecuencia la aireacin en los cultivos con
agitacin, esta se forma principalmente en medios ricos en proteinas, el uso de
antiespumantes, muy efectivos y generalmente inertes, evitan su formacin.
En estos caso debemos tener en cuenta que la espuma, si bien impide una
buena aireacin tambin genera el riesgo de rebalsamiento, con el
consiguiente humedecimiento de los filtros de salida de aire del reactor,
generando el riesgo de explosin del mismo.
Los antiespumantes pueden tambin impedir la transferencia de O2 , al cubrir la
superficie de los mismos, creando una nueva interfase: aire medio
antiespumante microorganismo.
En shakers la aireacin puede verse dificultada por tapones de algodn
demasiado apretados o mojados, en estos caso es preferible utilizar tapones de
algodn envueltos en gasa.
Para medir CL en medios de cultivo ya instalados en un biorreactor se usan
electrodos que permiten la medicin directa de la concentracin de O2 en
cualquier momento del proceso.
INHIBICIN POR AIREACIN EXCESIVA
En determinadas circunstancias se inhibe el desarrollo microbiano por exceso
de aireacin, no estn del todo aclaradas las causas, pero se cree que se
debe a una deficiencia en CO2 en el aire, inferior a la optima para dicho
desarrollo.
Se evita esto no aireando los cultivos hasta verlos turbios y en los medios
salinos hasta 1 o 1,5 Hs. despus de ser sembrados, cuando ya los
microorganismos estn en fase logartmica de crecimiento.
En medios salinos con latencia prolongada puede evitarse este efecto
aadiendo SNa2 al 0,01 %.