Enzimas de restrio
1970 Purifica-se a primeira enzima de
restrio tipo II: o Hind II (Smith & Wilcox).
1972 Primeiras experincias com DNA
recombinante.
1978 Isolamento e caracterizao de mais de
200 enzimas de restrio.
Enzimas de restrio
As enzimas restrio ou endonucleases de restrio, so enzimas
que cortam a molcula de DNA atravs do reconhecimento de
sequncias nucleotdicas especficas.
So altamente especficas.
Hidrlise Enzimtica
" As enzimas de
restrio atuam sobre
sequncias especficas
do DNA, catalisando a
destruio da ligao
fosfodister entre
nucleotdeos.
" Produtos da hidrlise
resultam em
extremidades 3-OH e
5-P
Enzimas de restrio
Podem ser de 3 tipos: I, II e III.
Reconhecem seqncias de 4 a 8 pares de bases.
Cortes com extremidades abruptas ou coesivas.
Pode-se recombinar DNA humano com qualquer outra
espcie.
Fragmentos separados por eletroforese.
Escherichia
(gnero)
co coli
(espcie)
(estirpe)
(ordem de identificao da
bactria)
RY13
Primeira
identificada
5N-N-N-G-A-A-T-T-C-N-N-N 3
3N-N-N-C-T-T-A-A-G-N-N-N 5
Extremidades Coesivas
Extremidades Cegas
Resultado:
Em concluso, da especificidade da
sequncia de determinada molcula de
DNA, cada enzima de restrio gera um
conjunto nico de fragmentos.
Izoesquizmeros
" Diferentes enzimas de restrio que possuem a
mesma sequncia de reconhecimento
" Diferem nas condies timas de reao, na
estabilidade
Exemplo:
Enzimas de
restrio
Sequncia de
reconhecimento
SacI
GAGCTC
CTCGAG
SstI
GAGCTC
CTCGAG
Restrio enzimtica