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FOTOSNTESIS

Miriam Contreras, Daniela Luis, Joskua Malfavn, Jassihel Ordaz, y Diego Villagrn.
Equipo 1. Laboratorio de Bioqumica Dinmica, Ingeniera en Biotecnologa,
Coatzacoalcos, Mxico.

Introduccin
La fotosntesis es un proceso que
metablico que realizan las plantas, las
cianobacterias y algunos protistas para
convertir energa lumnica a qumica y
almacenarla en enlaces de azcares
(Carter, 2014). En los organismos
eucariontes se realiza en los cloroplastos,
y se lleva a cabo siguiendo la reaccin
general:
+ 6 2 + 62
6 12 6 + 62
+
Por cada 6 molculas de agua y 6
molculas de dixido de carbono se
producen una molcula de glucosa y 6
molculas de oxgeno.
La fotosntesis no es un proceso simple y
consta de mltiples etapas. Las primeras
etapas se conocen como reacciones
lumnicas y se encargan de convertir la
energa solar en energa qumica
produciendo oxgeno como producto de
desecho, y se da en las membranas de los
tilacoides. Las segundas reacciones se
conocen como Ciclo de Calvin (o
reacciones de oscuridad) y producen
molculas de azcar utilizando el CO2 y
los productos de alto contenido energtico
de las reacciones lumnicas, siendo
llevadas a cabo en el estroma.
La absorcin de la luz se logra gracias a
pigmentos: la clorofila es un pigmento
verde comn a todas las clulas
fotosintticas, la cual es apoyada por

pigmentos accesorios que absorben la


energa que la clorofila no absorbe
(Farabee, 2007).
Con sta prctica se pretende un
acercamiento al complejo e importante
proceso de la fotosntesis, para ello se
realizarn diferentes procedimientos,
empezando por la identificacin de los
cloroplastos en las clulas vegetales vivas
mediante el uso del microscopio, seguida
de una identificacin de los pigmentos
fotosintticos mediante una tcnica de
separacin llamada cromatografa y
terminando con la medicin de la tasa
fotosinttica mediante un ensayo de discos
flotantes.
Los discos de hoja normalmente flotan.
Cuando los espacios de aire se infiltran con
una solucin, la densidad de la hoja se
incrementa y los discos se precipitan. La
solucin de infiltracin incluye una
pequea cantidad de bicarbonato de sodio.
Los iones de bicarbonato sirven como una
fuente de carbono para la fotosntesis.
Durante el proceso de la fotosntesis se
libera oxgeno del interior de la hoja,
cambiando as, que el disco flote. La
respiracin celular por su parte consume
oxgeno y se da al mismo tiempo que la
fotosntesis; la velocidad que se demoran
los discos precipitados en flotar es una
medida indirecta de la tasa de fotosntesis.

Metodologa

Identificacin de cloroplastos

Se cort una hoja de elodea, se coloc en


un portaobjetos, se agreg una gota de
agua, se cubri con el cubreobjetos y se
observ en el microscopio con los
objetivos 10x y 40x.

Identificacin de clorofila por


cromatografa

En un vaso de precipitado de 250 ml se


coloc etanol hasta alcanzar un centmetro
de profundidad y se cubri con un vidrio
de reloj para crear una atmsfera
alcohlica en su interior. Se cortaron hojas
de espinaca y se trituraron en mortero
junto a 5 ml de acetona, siendo macerados
hasta crear una mezcla homognea; esta
mezcla se filtr usando una gasa hasta
obtener un lquido. En un pedazo de papel
filtro de 2 X 10 cm se marcaron dos lneas
paralelas en cada borde con un lpiz. Con
un tubo capilar se coloc muestra en una
de las lneas marcadas. Se introdujo el
papel filtro con la muestra hacia abajo
dentro del vaso con alcohol (evitando tocar
las paredes y procurando que la muestra no
entrara en contacto con el solvente). Con
el papel en forma vertical se dej correr el
solvente por absorcin en el papel filtro
hasta alcanzar la lnea superior.
Finalmente, se retir el papel y se dej
secar a temperatura ambiente para
poderrealizar el clculo de Rf para cada
pigmento separado.

Ensayo de disco flotante para


comprobar la fotosntesis

Se dispusieron en un vaso de precipitado


20 ml de una solucin de bicarbonato de
sodio al 0.2%, mientras que en otro vaso se
disponan 20 ml de agua destilado, los

cuales se usaron como control del


experimento. Se adicionaron 5 ml de jabon
lquido al vaso con bicarbonato,
humedeciendo la superficie hidrofbica de
la hoja y permitiendo que las soluciones
penetren el interior de los tejidos. Se
cortaron con un sacabocados alrededor de
15 discos uniformes de hoja de espinaca
fresca para cada ensayo, evitando obtener
discos conteniendo parte de venas
centrales. Se seleccionaron los discos, se
removi el pistn de la jeringa y se
colocaron dentro los discos para despus
volver a colocar el pistn y se empuj para
dejar un pequeo volumen de aire para los
discos de hoja. Se succion un pequeo
volumen de bicarbonato de sodio y se
resuspendieron los discos. Se puso el dedo
ndice en la abertura de la jeringa y se jal
el pistn para crear un vaco que se
conserv durante 10 segundos, logrando
que el bicarbonato se infiltrara en los
espacios de aire de los discos de hoja. Se
colocaron los discos y la solucin dentro
de un vaso de precipitado y se adicionaron
10 ml de la solucin de bicarbonato de
sodio. Para el tratamiento control se
infiltraron los discos nicamente con agua
y jabn lquido sin adicionar bicarbonato.
Para finalizar, se colocaron ambos
tratamientos, previamente etiquetados, en
una fuente de luz y se empez a
contabilizar el tiempo, contando despus
de cada minuto el nmero de discos que
flotaron, continuando con el conteo hasta
que todos los discos se encontraban a flote.
Resultados
El valor de retencin (Rf) se define como
el ratio de la distancia recorrido por el
soluto y la distancia recorrida por el
solvente a travs del papel (Mifsud, 2002),
siendo ambas distancias medidas a partir
de la lnea base en la cual se coloc

inicialmente la muestra. Cada compuesto


tiene un valor Rf especfico para un
solvente y concentracin especficos, lo
cual es muy til para identificacin de
compuestos desconocidos (Mifsud, 2002).
Con 6.5 cm de desplazamiento para el
soluto proveniente de las hojas de
espinacas y 7.8 cm para el desplazamiento
del etanol se obtuvo un valor de Rf = 0.83.
Con respecto al ensayo de disco flotante,
el valor de ET50 fue igual a 7.
Tabla 1.- Ensayo de disco flotante

Tiempo (min)
0
1
2
3
4
5
7
9
10

Discos flotando
1
2
2
3
4
7
8
13
16

Grfico 1.- Ensayo de disco flotante

Ensayo de discos flotantes


20
15
10

disminuyendo la densidad y permitiendo


que los discos floten, lo cual pudo
observarse en la realizacin de la prctica.
El valor de Rf = 0.83 es bastante cercano a
0.9, valor propio del caroteno, pero difiere
al valor de la clorofila, puede ser que slo
hayamos registrado la distancia del
pigmento carotenoide, ya que slo se anot
de una lnea en vez de todas las que se
obtuvieron con la cromatografa de papel.
Conclusiones
La cromatografa de papel indic que las
hojas poseen varios pigmentos, siendo uno
de ellos un carotenoide con Rf = 0.83. En
cuanto a la prueba de disco flotante ET50
= 7.
Bibliografa
Carter, J. S. (13 de Enero de 2014).
Photosynthesis. Obtenido de UC
Clermont Biology Home Page:
http://biology.clc.uc.edu/courses/b
io104/photosyn.htm
Farabee, M. (2007). What is
photosynthesis? Obtenido de
Photosynthesis:
http://www2.estrellamountain.edu
/faculty/farabee/BIOBK/BioBook
PS.html

5
0
-5 0

10

Discusin
A medida que la solucin de bicarbonato
de sodio entra en la hoja y obliga al aire a
salir la masa adicional hace que los discos
se hundan en la solucin. A medida que la
fotosntesis ocurre, el oxgeno producido
llena
los
espacios
intercelulares,

Mifsud, S. (30 de Agosto de 2002). RF


Values. Obtenido de Chemistry:
Chromatography:
http://www.marzkreations.com/Chemistry/160Chemistry.html