1. INTRODUCCIN
El nitrgeno y el azufre constit uyen dos de los elementos
qumicos ms abundantes en la materia viva (vase el
Captulo 6) . La razn N/S en la biomasa vegetal es de alrededor de 20, que es, aproximadamente, la proporcin de
ambos elementos en la s molculas de protena. Todos los
aminocidos contienen nitrgeno, mientras que el azufre
se encuentra en los aminocidos cistena y metionina.
Ambos elementos se hallan presentes, adems, en otras
importantes biomol culas. Los animales, a diferencia de
las plantas, no son capaces de usar formas inorgnicas de
nitrgeno o de azufre, por lo que necesitan ingerir formas orgnicas de dichos elementos, principalmente como
protenas.
El nitrgeno y el azufre inorgnicos presentes en los
suelos experimentan cambios en sus estados de oxidacin
como consecuencia de la actividad metablica de diversos
grupos de bacterias. En los suelos aireados se encuentran
principalmente en sus formas ms oxidadas, esto es, como
nitrato (NO; ) y como su lfato (S02-). Las plantas tienen la
capacidad de reducir el nitrato y el su lfato a amonio (NH4)
Y.a sulfuro (H 2S) o tiol (-SH), respectivamente, e in corporar
dIchas formas reducidas a molculas org nica s. Estos procesos se denominan asimilacin del nitrato y asimilacin deL
suLfato. Las algas, las cianobacterias (algas verde-azuladas)
y muchas bacterias y hongos tambin asimilan el nitrato
~. el sulfato. Existen otros grupos de bacterias -anaerod~~s e~trictas- que utilizan el nitrato o el sulfato, en lugar
. OXIgeno, como aceptores terminales de electrones en la
OXIda Clon
'. de los sustratos orgnicos, con lo que producen
288
Medio
externo
2W
'"
E
ro'"
~
a::'"
ADP + P;
Citosol
nitrito reductasa
nitrato reductasa
(+5) NO;-
(+3)NO z
~ (-3)NH~
NADH
NAD'
6 Fd,ect
6 Fd o,
+W
+ H20
+8 W
+ 2 H20
CAPTULO
75kDa
NAW/
FAD
Hemo
NO:;
MoCo
NOz-
ON A NR
e _ G luta m i n a - e l
Tran scripcin
0Transcripcin
El)
N 3
El)
Azcares
l
mRNA NR '\./v
pfr
'\./v mRNA NiR
FP
Traduccin
6 Fd ox
NOZ-
Traduccin
VV'
Pfr
,1
sirohemo
NH ;'
1,
i
i
Grupos
prostticos
Pr
[J
Activa
(LUZ)
ATP~
ADP
t P;
Azcares
Inactiva
(OSC URIDAD)
Proteasas
lJVPre-NiR
LU Z
~P
[4Fe-4S]
Grupos
prostticos
H, O
'XXX
Apoproteina NR
6 Fd,ed
289
14kDa
28 kDa
NADH
15:
lJV
[]lliJ
FP
Activa
FOTOsiNTESIS
290
Coo-
cooI
I
HJN' -
C-
CH 2 + NAD(P)'
CH 2
I
cooGlutamato
c=o
GDH
CH z + NH + NAD(P)H
CH 2
COO-
La GDH tambin cata liza la reaccin en sentido opuesto, esto es, sintetizando glutamato mediante la aminacin
reductiva del 2-oxoglutarato. De hecho, la reaccin en este
sentido fue considerada durante muchos aos como la ru~
de asimilacin del amonio en las plantas. Sin embargo, e
papel de la GDH en la asimilacin del amonio fue cuestionado cuando, ms tarde, se descubri el ciclo GS-GOGAT (vase
el siguiente prrafo). Se ha encontrado que la GDH se induce
de forma acusada en las plantas expuestas a altas concentraciones de amonio, lo que sugiere que, en dichas condiciones,
CAPTULO
ISNTES IS DE PROTENAS
'"
/:
'"
Ureldos
~ l
Glicina
'.
Asparraglna :
291
ITRANSPORTE I
/ / .( ~" "" ,. .
IFOTORRESPIRACIN I
.
REDUCCION NODE NITRATO
3 -
15:
NO-
NW
,-
tGDH
GS
GOGAT
Glutamato
AT
Glutamato
Oxocldos
I
ICICLO GS/GOGAT I.
Glutamato'
N,
I FIJACiN DE NITRGENO I
t
Figura 15-4. Procesos metablicos que generan amonio en los tejidos vegetales, y su asimilacin y transporte. AS: asparragina sintetasa;
AT: aminotransferasas; GDH: glutamato deshidrogenasa; GOGAT: glutamato sintasa; GS: glutamina sintetasa.
gLutamina . A co ntinuacin, La GOGAT cata Liza La transferencia reductiva deL grupo amido de la gLuta mina aL ( -2 del
2-oxogLutarato, producindose dos moLcuLas de gLutamato
(Fig. 15-5). De Las dos moLcuLas de glutamato formadas ,
una de ellas es reciclada, y la segunda transfiere su grupo
amino a diversos oxocidos, en reacciones cataLizadas por
Las aminotransferasas (transaminasas), para la sntesis de
Los restantes aminocidos.
Genes
COO-
H3 N' -C- H
CH , _- -
_'" c=o
__ -
CH,
~----
/ /---- CIH,
.~
' -~C=O
A~P
Fd,cd o NADH
(2 e- )
GLU TAMINA
CIH,
COO-
2-0XOG LUT
~* ~
ATP
GLUTAMATO
g/n-I!
g /n o;'
g/n-
pre-
H3 N '-C- H
coo
I
~C-H
I
coo-
CH,
CH,
I
COO
Polipptidos
(subunidades)
G)
(jJ)
j/j~j
tE
tE
GS n ,
GS,/GS,
(hoja/raz) (ndu lo)
GLUTAMAT(
COO-
I
I
CH,
I
CH,
I
g/n-y:
coo-
tE
GS",
(ndu lo)
~ro
Ci.
2
o
tE
GS,
(hoja)
292
Los estudios con plantas mutantes deficientes o con actividad reducida de GS o de GOGAT, el empleo de inhibidores
especficos de dichas enzimas, y los experimentos de marcaje
tras la aplicacin de 15NH4+ han permitido establecer que el
ciclo GS-GOGAT constituye la principal ruta de asimilacin
del amonio en las plantas. Obsrvese que la asimilacin de
una molcula de amonio para la sntesis neta de una molcula de glutamato consume un ATP y dos electrones proporcionados por la ferredoxina reducida o por la NADH. Por tanto,
el proceso global de asimilacin de una molcula de nitrato
en glutamato consume un total de diez electrones.
El nitrgeno asimilado, o reasimilado, puede ser tambin destinado al transporte a otros rganos. Las amidas
gLutamina y asparragina, cuyas molculas contienen dos
tomos de nitrgeno, son los aminocidos preferentemente
utilizados por la planta como compuestos transportadores
de nitrgeno a larga distancia (Fig. 15-4). En las leguminosas de origen tropical y subtropical, el nitrgeno fijado y
asimilado en los ndulos es transportado mayoritariamente
en forma de ureidos (vase el Captulo 16).
CAPTULO
COO-
I
@-C-H
I
CH 2
I
CH 2
I
coo-
COO-
I
I
CH 2
I
CH 2
I
Glutamina
I
I
CH 2
I
+ @ - C -H
coo-
cooOxalacetato
coo-
2-0xog lutarato
Aspartato
COOcoo-
H3 W-C-H
@-c=o
coo-
c=o
coo-
I
I
CH 2
I
CH 2
I
293
COO-
Aspartato
aminotransferasa
I
C= O
I
CH 2
I
Glutamato
la nitrogenasa, como se infiere del hecho de que su snporis se incrementa durante el desarrollo del ndulo de forma
te~alela a la sntesis de nitrogenasa, leghemoglobina y GS
~~dular (vase el Captulo 16).
15: ASIMILACIN
I
I
H3 W - C- H
CH 2
cooAspartato
I
I
coo-
H W - C- H
CH 2
(
ATP
"
AMP
+
PP;
I
CH 2
I
COOGlutamato
I
I
CH 2
I
H3 W - C-H
@-c=o
Asparragina
Figura 15-7. A. Sntesis de aspartato mediante la transferencia del grupo amino del glutamato al oxalacetato, catalizada por la aspartato
aminotransferasa. B. Sntesis de asparragina por transferencia del grupo amido de la glutamina al aspartato, catalizada por la asparragina
sintetasa.
294
Almidn
~~
e
Triosas-P
Tri osas-P
I Sacarosa I
"---PEP - ------.,.
Pir
,HCOj
Citr
Icitr
VD
CLOROPLASTO
OG
Asp
Glu
(2)Glu
Gln
(@,, '
ATP
ADP
~;
I2IGlo
Glu
@GJ
OG
i? "\
NAD' NADH
@
{
IAsn l
Gln
(2)Gln-{
ATP ADP
P;
Gln
Glu
ATP
AMP + PP;
(2) NO i
NAD+ ~
NADH
-1 CD
CITOSOL
(2)NO j
(2)NO j
Figura 15-8. Conexiones entre el metabolismo del nitrgeno y el del carbono. Asn: asparragina; Asp: aspartato; CAT: ciclo de los cidos
tricarboxlicos; Citr: citrato; CRPP: ciclo reductivo de las pentosas fosfato; Fd ox Y Fd"d: formas oxidada y reducida, respectivamente, de la
ferredoxina; Glu: glutamato; Gln: glutamina; lcitr: isocitrato; OAA: oxalacetato; OG: 2-oxoglutarato; PEP: fosfoenolpiruvato; Pi: fosfato
inorgnico; Pir: piruvato; pp: pirofosfato. Enzimas: 1) nitrato reductasa; 2) nitrito reductasa; 3) glutamina sintetasa; 4) glutamato
sintasa; 5) aspartato aminotransferasa; 6) asparragina sintetasa; 7) isocitrato deshidrogenasa; 8) fosfoenolpiruvato carboxilasa.
CAPTULO
Altos
15: ASIMILACiN
OSCURIDAD
SENESCENCIA, GERMINACiN
Bajos nivel es de C reducido
Altos niveles de N reducido
nivele~~~ C reducido I
NOj __ 1 NR
/ \~
~
1
I
~e7'iOC'\
GLUTAMINA
5C:2N
295
IGfHI P,,"61;,;, y
Glu -
catabo li smo
de am in oc idos
ASP~~!~GINA I
~gura 1~-9. Regulacin diferencial de la sntesis de glutamina y de asparragina por la disponibilidad de carbono y de nitrgeno reducido.
d snteSIS de asparragina es ms eficiente que la de glutamina en cuanto a consumo de carbono orgnico. Ambos aminocidos poseen
~s tomos de nitrgeno, pero la glutamina contiene cinco tomos de carbono mientras que la asparragina tiene nicamente cuatro. Los
~gn~S (+) y (-) denotan induccin y represin, respectivamente, de las enzimas indicadas. AS: asparragina sintetasa; GDH: glutamato
t;'drogena.sa; Gln: glutamina; Glu: glutamato; GOGAT: glutamato sin tasa; GSl y GS2: isoformas citoslica y plastdica, respectivamente,
e a glutamma sintetasa; NiR: nitrito reductasa; NR: nitrato reductasa.
296
. O)
~
EB
I ALMIDN I
ext.
Ciclo de
Calvin
Triosas-P
TN
I PROTENAS I
NO -
NH
/'
(r:.~.
/'
Ciclo GS -GOGAT
GOGAT
I SACAROSA I
P~P
P2(EPC OAA
t-
C0 2
ACETIL-CoA
@1---~
Gln )
i,'~+6
"
'.- Glu
Hexosas-P
PIR
@) 12
, " Glu
NO) int.
@l
tt (8 DPGPV8
Cf 2
CITR
...
ICITR
OG
"<.
Ciclo de
Krebs
~
---- -- OG - --.-- - - "
Figura 15-10. El nitrato constituye una seal reguladora del metabolismo del nitrgeno y del metabolismo del carbono. El nitrato
induce los genes requeridos para la absorcin y reduccin del nitrato, la asimilacin del amonio, y la sntesis de esqueletos carbonados,
como el 2-oxoglutarato, exigidos para la formacin de aminocidos. En cambio, el nitrato reprime los genes involucrados en la
biosntesis de carbohidratos. Los signos (+) y (-) denotan induccin y represin, respectivamente, de las enzimas indicadas. CITR:
citrato; Gln: glutamina; Glu: glutamato; ICITR: isocitrato; OAA: oxalacetato; OG: 2-0xoglutarato; PEP: fosfoenolpiruvato; PIR: piruvato;
Enzimas: ADPGPP: ADP-glucosa pirofosforilasa; CS: citrato sin tasa; GOGAT: glutamato sin tasa; GS: glutamina sintetasa; IDH: isocitrato
deshidrogenasa; NiR: nitrito reductasa; NR: nitrato reductasa; PEPC: fosfoenolpiruvato carboxilasa; PK: piruvato quinasa; SPS: sacarosafosfato sin tasa; TN: transportador de nitrato.
CAPTULO
SEMILLA
HOJA
Protenas
de rese rva
Protenas
z~
,
uz
Cfl
ou
Cfl
j
w
1Z
'j
Cfl
cr:
W
1-
t?Z
Z
'j
WW
o~
FLOEMA
NH ;
-Aminoc id os -- - - - ~ - - - - - - ~
er
ACUO:~
r--
Aminoc idos
297
' l
I
L--_ _ _ _ _- '
03
NO;
W
-'
~
~
I
I
I
I
RAz
I
I
:'----
I
I
,
I
I
I
Proten as _
Aminocidos
r
NO ; ---. NO i ---. NH ;
15:
NO;
298
6e-
(+5) NO j
6e-
(+3)NOz-
2e-
52-
Cistena
Glutamato
Una diferencia importante entre la asimilacin del sulfato y la del nitrato es que el sulfato tiene que ser activado
previamente para poder ser luego reducido. La activacin
del sulfato por ATP est catalizada por la enzima ATP sulfurilasa, la cual transfiere el fragmento de adenosina 5'-fosfato del ATP al sulfato, formndose pirofosfato y adenosina
5'-fosfosulfato (APS), que constituye la forma de sulfato
activo (Fig. 15-12):
PPi + APS
SO~- +
6 Fd,ed
S2- + 6 Fd ox
2e-
- (-J) NH ;'~
SO~- + ATP -
~ SO~- + 5'-AMP +
GSSG + 2 W
O-acetilserina + CoA
cistena + acetato
PAPS + ADP
CAPTULO
II
11
OH
0-
299
Adenink'jc-o- r - o-w-o-
HHH
15:
Sulfotransferasa
11
(
~ R- O- W- OR-OH
PAP
o
Metabolito sulfatado
PAPS
O=P-O-
0-
O
11
-o- so-
ATP
sulfurilasa
_~---.,,:--
11
O
su lfato
ATP
(~
ADP
APS
qUlnasa
ATP
2
Ad eninaqOH C___
HH
HH
OH
OH
11
11
APS
red uctasa
(
~
0-P-0- S - 0 -
II
0-
0-
-(----,..-""~
-.....
0=1
2 GXSH
GSSG 5'-AMP
Sulfito
reductasa
0 - 6 Fd 'ed
S2I
6 Fd o ,
PP;
NADP'
APS
COO-
I
H3N' -CH
I
?H 2
Serina
acetiltransfera sa
f'
Acetil -CoA
OH
CoA
NADPH
COO-
Sulfito
Sulfuro
0-
I
I
C= O
C=O
CH 3
I
I
COO-
I
I
H3N'-C H
?H2
SH
CH 3
Serina
O-Acetil se rina
Acetato
Cistena
Figura 15-12. Asimilacin del su lfata por las plantas. El sulfato necesita ser activado con ATP para poder ser reducido a sulfito y luego
a sulfuro. A continuacin, el sulfuro reacciona con O-acetilserina para formar cisteina. En la parte superior de la Figura se muestra la vio
de sulfatacin, en la que el sulfato es incorporado a ciertas molculas orgnicas sin ser reducido. 5'-AMP: adenosina 5'-monofosfato; APS:
adenosina 5'josfosulfato; GSH: glutatin reducido; GSSG: glutatin oxidado; PAP: 3'-fosfoadenosina-5'-fosfato; PAPS: 3'josfoadenosina-5'fosfosulfato.
300
coo-
B
Glutamato
Cisteina
H3 N' -9 H
Glutamato
9
9c= o
H2
ATP
H2
I
I
ADP + P;
NH
Cisteina
)'-Glutamileistein a
H9- CH2-SH
c= o
I
I
Glicin a
Glicina
~ ATP
(2)
NH
ADP + PI
9cooH2
GLUTATIN
(reducido)
e
" -G lu- Cys-Gly
)'-Glu-Cys-Gly
SH
s
I
s
SH
2 GSH
Glutatin reduetasa
',rNADP'
""\
NADPH + W
CAPTULO
de esa forma como seales encargadas de mantener la homeostasis del azufre en la clula.
La asimilacin del sulfato se encuentra tambin regulada
por los niveles internos de O-acetilse rina (OAS), la molcula que se incorpora al sulfuro para formar cistena. La OAS
induce los genes del transportador de sulfato y de la APS
reductas a, e inactiva a la serina acetiltransferasa, enzima
responsable de su sntesis. Si se produce una acumulacin
de OAS en la clula por produccin insuficiente de sulfuro,
la sntesis de OAS disminuye, a la vez que la reduccin de
sulfato a sulfuro se estimula. Si, por el contrario, existe poca
disponibilidad de OAS, su sntesis se activa y la reduccin de
sulfato se reprime. Este sistema permite coordinar la sntesis
de OAS con la va de reduccin del sulfato para lograr una
sntesis adecuada de cistena.
En los ltimos aos se ha puesto de manifiesto que la
asimilacin del azufre est coordinada con la del nitrgeno
y la del carbono. Es bien conocido que, en situaciones de
15:
301
deficiencia de nitrato, se produce un descenso de la asimilacin del sulfato, y viceversa, plantas privadas de sulfato
ven reducida su capacidad para asimilar nitrato. Por otro
lado, formas reducidas de nitrgeno, tales como el amonio
y los aminocidos, estimulan la reduccin de sulfato. Ms
recientemente se ha demostrado el papel regulador de los
carbohidratos sobre la asimilacin del azufre. As, se ha
observado que la adicin de sacarosa a la planta induce
de forma paralela la sntesis de APS reductasa y de nitrato
reductasa, dos enzimas claves de las vas de asimilacin
del sulfato y del nitrato, respectivamente, mientras que
ambas apenas se expresan en las plantas mantenidas en
aire libre de CO 2 Esta regulacin cruzada entre las vas de
asimilacin del carbono, del nitrgeno y del azufre permite a la planta coordinar las velocidades de asimilacin
de cada uno de dichos nutrientes para poder sintetizar en
cada momento las cantidades y las proporciones adecuadas de carbohidratos y de aminocidos, tanto azufrados
como no azufrados (Kopriva, S. y Rennenberg, H. Joumal
of Experimental Botany 55:1831-1842,2004).
RESUMEN
El nitrgeno y el azufre se encuentran en los suelos principalmente en forma de nitrato (NO)") y de sulfato (SO-), respectivamente. Las plantas tienen la capacidad de reducir y asimilar dichas formas inorgnicas oxidadas convirtindolas en
las correspondientes formas orgnicas reducidas: grupos amino o amido (- NH 2) Y grupos tilicos (- SH) de aminocidos
y otras molculas nitrogenadas y azufradas.
El nitrato es reducido a amonio por la accin secuencial de las enzimas nitrato reductasa y nitrito reductasa. A continuacin, el amonio, mediante la actuacin concertada de las enzimas glutamina sintetasa y glutamato sintasa (ciclo
GSjGOGAT), es incorporado a esqueletos carbonados para la formacin de aminocidos y de compuestos transportadores
de nitrgeno (glutamina y asparragina). El ciclo GSjGOGAT tambin participa en la reasimilacin del amonio que se
genera en la fotorrespiracin y en el catabolismo de las protenas de reserva durante la germinacin y la senescencia. La
asimilacin del nitrgeno es un proceso dependiente de la fotosntesis y del metabolismo del carbono para el aporte de
poder reductor, ATP y esqueletos carbonados. Por ello, no s lo el nitrato, sino tambin la luz y los carbohidratos, actan
como seales que modulan positivamente la sntesis de nitrato reductasa, nitrito reductasa y las isoformas cloro plsticas
de glutamina sintetasa y de glutamato sintasa, promoviendo as la formacin de glutamato y glutamina. Por el contrario,
la sntesis de asparragina, catalizada por la asparragina sintetasa, se ve favorecida, en detrimento de la de glutamina,
en condiciones de oscuridad y de baja disponibilidad de carbohidratos.
La asimilacin reductiva del sulfato tiene lugar mediante su activacin previa con ATP, formndose adenosina 5'-fosfosulfato (APS), y la posterior reduccin a sulfito (SO ~ -) y a sulfuro W-) mediante las enzimas APS reducta sa y sulfito
reductasa, respectivamente. El sulfuro es finalmente transferido a una molcula de O-acetilserina para formar cistena,
convirtindose as en el grupo tiol de dicha molcula. A partir de la cistena, la planta sintetiza metionina y glutatin.
El glutatin constituye la principal forma de almacenamiento y de transporte a larga di stancia del azufre orgnico. Dicha
molcula desempea otras importantes funciones en la planta, como la reduccin de los puentes disulfuro de los centros
activos de las enzimas y la destoxificacin de especies activas de oxgeno y de diversos xenobiticos. Las fitoquelatinas
son otras molculas azufradas, estructuralmente derivadas del glutatin, que actan como sistemas de destoxificacin
de metales pesados.
Las rutas de asimilacin del nitrgeno y del azufre se regulan entre ellas y, a la vez, con la de asimilacin del carbono.
Ello permite a la planta coordinar las velocidades de asimilacin del nitrgeno, el azufre y el carbono, para as mantener
un adecuado balance entre dichos elementos en la materia vegetal.
302
PROBLEMAS Y CUESTIONES
Qu papel desempean las enzimas glutamina sintetasa, glutamato sintasa, asparragina sintetasa y
glutamato deshidrogenasa en la asimilacin del
amonio?
0
0
De dnde provienen los esqueletos carbonados necesarios para la sntesis de glutamina y asparragina?
Qu reacciones catalizan las enzimas nitrito reductasa y sulfito reductasa y qu caractersticas comunes
poseen?
o
o
CAPTULO
15:
303
BIBLIOGRAFA RECOMENDADA
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10. Vance CP. The molecular biology of N metabolismo En:
Oennis OT et al. (eds.) . Plant Metabolism. 2a ed. Harlow
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