2015-2016

Master1
Mouvement, Sport, Sant

Mise en place d'un systme de

stimulation lectrique de cellules
musculaires afin de mimer l'activit
physique in vitro

Mmoire de Joaquim GRIMAUD

Tutrice universitaire et encadrante du projet: Amlie REBILLARD
Prpar au laboratoire Mouvement, Sport, Sant M2S
(EA1274, Rennes)

Contexte gnral
Les cancers, 2me cause de mortalit dans le monde
(22% des dcs par maladies non transmissibles ; OMS,
2012)
( White et al. 2014)

Contexte gnral
Les cancers, 2me cause de mortalit dans le monde
(22% des dcs par maladies non transmissibles ; OMS,
2012)
( White et al. 2014)

LActivit physique (AP) amliore la prvention secondaire et

tertiaire des cancers
Amlioration de la condition physique globale
Diminution des effets secondaires indsirables des traitements
Baisse du risque de mortalit
AP Aprs diagnostic ou opration:
Risque de mortalit infrieur pour les cancers colorectaux, de la prostate et des poumons
Diminution du risque de rcidive des cancers du sein

(Courneya et Friedenreich 2011)

Contexte gnral
Les cancers, 2me cause de mortalit dans le monde
(22% des dcs par maladies non transmissibles ; OMS,
2012)
( White et al. 2014)

LActivit physique (AP) amliore la prvention secondaire et

tertiaire des cancers
Amlioration de la condition physique globale
Diminution des effets secondaires indsirables des traitements
Baisse du risque de mortalit
AP Aprs diagnostic ou opration:
Risque de mortalit infrieur pour les cancers colorectaux, de la prostate et des poumons
Diminution du risque de rcidive des cancers du sein

(Courneya et Friedenreich 2011)

Type dAP le plus souvent conseill:

Chronique dintensit modre (Ex: Course dendurance)
et renforcement musculaire
Intensits dAP

Frquences dAP
Aigu

Chronique

Faible

Modre

Intense

Effets de lAP sur les mcanismes molculaires lis la

progression tumorale
AP chronique dintensit modre

Insuline et insulino-rsistance
Masse grasse et adipokines
Adaptation au stress oxydant

Systmique

Modulation de diffrents mcanismes qui permet de ralentir la prolifration tumorale

Importance de ltude des voies de signalisation impliques dans ces processus

Effets de lAP sur les mcanismes molculaires lis la

progression tumorale
AP chronique dintensit modre

Insuline et insulino-rsistance
Masse grasse et adipokines

Synthse et scrtion

Adaptation au stress oxydant

IL-6

SPARC

OSM

Myokines
Systmique

Modulation de diffrents mcanismes qui permet de ralentir la prolifration tumorale

Importance de ltude des voies de signalisation impliques dans ces processus

Effets de lAP sur les mcanismes molculaires lis la

progression tumorale
AP chronique dintensit modre

Insuline et insulino-rsistance
Masse grasse et adipokines

Synthse et scrtion

Adaptation au stress oxydant

IL-6

SPARC

OSM

Myokines
Systmique

Modulation de diffrents mcanismes qui permet de ralentir la prolifration tumorale

Importance de ltude des voies de signalisation impliques dans ces processus

Effets de lAP sur les mcanismes molculaires lis la

progression tumorale
AP chronique dintensit modre

Activit contractile

Scrtome

Effets de lAP sur les mcanismes molculaires lis la

progression tumorale
AP chronique dintensit modre

Activit contractile

Scrtome

IL-6

IL-1ra

IL-10

TNF-

prolifration tumorale

Effets de lAP sur les mcanismes molculaires lis la

progression tumorale
AP chronique dintensit modre

Activit contractile

Scrtome

IL-6
Oncostatine M
(OSM)
IL-1ra

IL-10

TNF-

prolifration tumorale

Cancer
du sein

Effets de lAP sur les mcanismes molculaires lis la

progression tumorale
AP chronique dintensit modre

Activit contractile

Scrtome

IL-6
Oncostatine M
(OSM)
IL-1ra

Ostonectine
(SPARC)

IL-10

TNF-

prolifration tumorale

Cancer
du sein

Cancer
du clon

Effets de lAP sur les mcanismes molculaires lis la

progression tumorale
AP chronique dintensit modre

Activit contractile

Scrtome

IL-6
Oncostatine M
(OSM)
IL-1ra

Ostonectine
(SPARC)

Chitinase 3-like 1
CHI3L1

IL-10
EMT

TNF-

prolifration tumorale

Cancer
du sein

Cancer
du clon

Migration
tumorale
(Ost et al. 2016)

Modles dtude de ces mcanismes

In vivo
AP chez des rongeurs porteurs de tumeurs

Utilisation dactimtres:
- Sur roue instrumente
- Sur tapis roulant motoris
Nage force
Electrostimulation dun muscle squelettique (MSS)

Modles dtude de ces mcanismes

In vivo
AP chez des rongeurs porteurs de tumeurs

Utilisation dactimtres:
- Sur roue instrumente
- Sur tapis roulant motoris
Nage force
Electrostimulation dun muscle squelettique (MSS)

Limites de ces modles:

On ne sait pas si les effets de lAP sur la croissance des tumeurs sont lis ou non au
scrtome du muscle

Modles dtude de ces mcanismes

In vitro

Principe: Mimer lAP sur des cellules ou des tissus en culture

Principal intrt:
Permet lisolement et ltude du scrtome dun seul organe ou type de cellule

Modles dtude de ces mcanismes

In vitro

Principe: Mimer lAP sur des cellules ou des tissus en culture

Principal intrt:
Permet lisolement et ltude du scrtome dun seul organe ou type de cellule

Effets de lAP chronique dintensit modre

Augmentation des marqueurs suivants:
-

Interleukine 6 (IL-6)

Phospho-AMPK (Thr172)

PGC-1

Enzymes mitochondriales
Ex: citrate synthase (CS)

Isoformes de la chane lourde de myosine MyHC et MyHC2a

Biogense
mitochondriale

Fibres
contraction Lente

Fibres contraction rapide

Oxydatives

Glycolytiques

ST

FTa

FTx

FTb

Isoforme de MyHC
caractristique

MyHC-/lent

MyHC-IIa

MyHC-IIx/d

MyHC-IIb

Gne associ

MYH7

MYH2

MYH1

MYH4

Effets de lAP chronique dintensit modre

Augmentation des marqueurs suivants:
-

Interleukine 6 (IL-6)

Phospho-AMPK (Thr172)

PGC-1

Enzymes mitochondriales
Ex: citrate synthase (CS)

Isoformes de la chane lourde de myosine MyHC et MyHC2a

Si expression augmente de
ces marqueurs

Alors, validation du protocole

de stimulation

Biogense
mitochondriale

Fibres
contraction Lente

Fibres contraction rapide

Oxydatives

Glycolytiques

ST

FTa

FTx

FTb

Isoforme de MyHC
caractristique

MyHC-/lent

MyHC-IIa

MyHC-IIx/d

MyHC-IIb

Gne associ

MYH7

MYH2

MYH1

MYH4

Programmes EPS chroniques dans la littrature

Chronique et haute frquence

Dure
EPS

Intermittente

Continue

plusieurs fois 90 min

intervalle rgulier durant
4 jours

24 h

-Myotubes: C2C12 et SOL8

-Voltage: 14 V
-Frquence: 50 Hz
-Dure dimpulsion: 1 ms
-Dure dun train dimpulsions: 1 sec
-Temps de rcupration aprs chaque
stimulation (1 sec)

Expression de PGC-1 plus forte pour une stimulation

chronique en continu par rapport une stimulation
chronique intermittente
(Burch et al. 2010)

Plutt sorienter vers une

stimulation chronique en continu

Programmes EPS chroniques dans la littrature

Chronique et haute frquence

Dure
EPS

Intermittente

Continue

plusieurs fois 90 min

intervalle rgulier durant
4 jours

24 h

Expression de PGC-1 plus forte pour une stimulation

chronique en continu par rapport une stimulation
chronique intermittente
(Burch et al. 2010)

-Myotubes: C2C12 et SOL8

-Voltage: 14 V
-Frquence: 50 Hz
-Dure dimpulsion: 1 ms
-Dure dun train dimpulsions: 1 sec
-Temps de rcupration aprs chaque
stimulation (1 sec)

Plutt sorienter vers une

stimulation chronique en continu

Chronique et basse frquence

Myotubes utiliss

Homme

Dure totale de la session de

stimulations

24 ou 48h

Dure dimpulsion

2 ms

Voltage

30 V

Frquence

1 Hz

Effets sur le mtabolisme

Augmentation du mtabolisme oxydatif

Changements cellulaires
observs

Biogense mitochondriale

Variations de diffrents
marqueurs

oxydation du glucose et des acides gras

PDK4 IL-6 Cyt c CPT1b

Augmentation de lexpression des gnes des

protines impliques dans la
phosphorylation oxydative et la biogense
mitochondriale

(Burch et al. 2010 ; Nikoli et al. 2012)

Les paramtres de ces protocoles

semblent bien mimer lAP chronique

Programmes EPS chroniques dans la littrature (2)

Impact de la frquence
Chronique basse et haute frquence
Myocytes utiliss

C2C12

Dure dimpulsion

20 ms

Voltage

10 V

Frquence

1 Hz

Temps de
rcupration

Aucun

Apparition de lsions sur les sarcomres

pour des frquences trop leves sur
une dure trop longue
15 et 5 Hz

(Orfanos et al. 2016)

5 secondes

Utiliser une frquence entre 1 et 2 Hz

pour une stimulation chronique continue de
basse intensit

Programmes EPS chroniques dans la littrature (2)

Impact de la frquence
Chronique basse et haute frquence
Myocytes utiliss

C2C12

Dure dimpulsion

20 ms

Voltage

10 V

Frquence

1 Hz

Temps de
rcupration

Aucun

Apparition de lsions sur les sarcomres

pour des frquences trop leves sur
une dure trop longue
15 et 5 Hz

(Orfanos et al. 2016)

5 secondes

Utiliser une frquence entre 1 et 2 Hz

pour une stimulation chronique continue de
basse intensit

Choix de la dure du programme

Une dure de stimulation dau moins 48 h apparat ncessaire pour obtenir une
augmentation significative de lactivit des enzymes mitochondriales
(Ex: Activit de la CS)
(Nikoli et al. 2012)

Paramtres dlectrostimulation

mimer lAP chronique dintensit modre

Stimulation en continu
Intensite: 1 Hz
Voltage: 14V
Dure dimpulsion: 2 ms
Dure: 48 h ou 72 h

Objectif
mettre en place un modle EPS in vitro sur des myotubes qui soit le plus possible
capable de mimer lAP chronique dintensit modre et ses effets in vivo

Modle choisi:
Myotubes murins C2C12

Souris C3H / HeNRj

Stimulateur EPS
Electrical Pulse Stimulator

Objectif
mettre en place un modle EPS in vitro sur des myotubes qui soit le plus possible
capable de mimer lAP chronique dintensit modre et ses effets in vivo

Modle choisi:
Myotubes murins C2C12

Stimulateur EPS
Electrical Pulse Stimulator

Souris C3H / HeNRj

Il reste choisir les marqueurs de validation du protocole

et les paramtres de stimulation

Matriel et Mthodes
Plan du protocole

Myotubes C2C12

Matriel et Mthodes
Plan du protocole

Myotubes C2C12

Expriences ralises (1)

Vrification de la diffrenciation
Prolifration/Diffrenciation/Maturation

Myoblastes

Myotubes

Matriel et Mthodes
Plan du protocole

Myotubes C2C12

Expriences ralises (2)

Effets de la stimulation EPS

Rsultats attendus

Les myotubes sont bien diffrencis

Rsultats attendus

Les myotubes sont bien diffrencis

Rsultats attendus

Les myotubes sont bien diffrencis

Ces variations refltent les adaptations du muscle squelettique lAP

chronique dintensit modre
Validation du protocole de stimulation

Conclusion et perspectives

Perspectives
-

Dcouvrir de nouvelles myokines dans le scrtome

Etudier les potentielles interactions entre myokines (Ex: OSM et SPARC)
Etudier les rles des myokines IL-6, SPARC et OSM dans les cancers

Conclusion et perspectives

Perspectives
-

Dcouvrir de nouvelles myokines dans le scrtome

Etudier les potentielles interactions entre myokines (Ex: OSM et SPARC)
Etudier les rles des myokines IL-6, SPARC et OSM dans les cancers

traitement

Conclusion et perspectives

Perspectives
-

Dcouvrir de nouvelles myokines dans le scrtome

Etudier les potentielles interactions entre myokines (Ex: OSM et SPARC)
Etudier les rles des myokines IL-6, SPARC et OSM dans les cancers

traitement

Mettre galement en place dautres protocoles EPS qui permettent de mimer

lAP aigu ou chronique intermittente diffrentes intensits
Composition du scrtome diffrente
(Ex: SPARC davantage exprim en aigu)
(Aoi et al. 2013)

Conclusion et perspectives

Limites de cette approche:

(Gogh et al. 2015)

Conclusion et perspectives

Limites de cette approche:

(Gogh et al. 2015)

Merci de votre attention