Treatment with AqB013 reduces invasion of colon cancer cells

The area of the spheres was measured as the cells invaded the
surrounding matrix. For HT29 spheres treated with 80 M or 160 M of
AqB013, there was a 59.5 %1.4 % (p=0.0003) or 60.3 %8.5 %
(p<0.0001) decrease in invasion respectively at 144 hours compared to
the vehicle control (Fig. 2c). A reduced rate of invasion was also found
compared to the vehicle control (F-test, p=0.001). The IC50 was 55.6
M, Hill Slope -5.17. Treatment of HCT-116 with AqB013 showed no
significant effect on spheroid invasion (Fig. 2d). There was no
appreciable cytotoxic effect as there was no effect on proliferation of
HCT- 116 at concentrations of AqB013 up to 320 M, al- though there
was a small decrease in proliferation of HT29 treated at 160 M
AqB013 (Fig. 2e).
Treatment of endothelial cells with AqB013 markedly inhibits tube
formation
Compared to vehicle control, treatment of HUVECs with 40 M
AqB013, showed a 43 % reduction in the number of junctions formed
(34.03.0, p<0.01) while treatment with 80 M AqB013 resulted in a
reduction of 89.5 % (6.32.4, p<0.0001) (Fig. 3ad). As expected there
was no significant difference in the number of junctions formed
between untreated and vehicle treated HUVECs (64.33.0 versus
602.5 respectively) (Fig. 3e). There was no effect on viability or
proliferation of HUVEC treated at up to 80 M AqB013 (Fig. 3f).
Conclusions
These studies have shown clear links between AQP1 activity and
cancer cell migration and invasion, and endothelial cell tubeforming
capacity, indicating the importance of characterising suitable AQP1
blockers. This study provides preliminary data showing that the AQP1
inhibitor AqB013 abrogates endothelial tube formation and reduces
cancer cell migration and invasion and will be further investigated in an
in vivo mouse xenotransplant model of human colon cancer. Small
molecule pharmaceuticals have an established therapeutic use and as
this new drug is a modification of bumetanide, it should be welltolerated in cancer patients with far fewer side-effects than from
currently used che- motherapeutic drugs. Furthermore, in view of the
documented role of AQP1 in murine tumour angiogenesis [10, 12], it is
envisaged that in metastatic CRC patients, AQP1 inhibitors may have a
role combined with antivascular endothelial growth factor (VEGF)
therapy, or as an alternative anti-angiogenesis therapy in cases that
become resistant to anti-VEGF therapy. The inhibition of AQP1
clinically may slow down the progression of CRC, increasing the
window for optimal treatment resulting in better survival outcomes,
particularly in early stage cases where micro-metastatic disease is
present.

El tratamiento con AqB013 reduce la invasin de las clulas del

cncer de coln
Fue medida el rea de las esferas alrededor de la matriz que
invadieron las clulas. Por HT29 esferas tratadas con 80 M o 160 M
de AqB013, decreci la invasin un 59.5 %1.4 % (p=0.0003) o 60.3 %
8.5 % (p<0.0001) respectivamente en 144 horas comparado con el
vehculo control (Fig. 2c). Tambin fue encontrada una reduccin de la
tasa comparada con el vehculo control (F-test, p=0.001). El IC50 fue
55.6 M, Hill Slope -5.17. El tratamiento de HCT-116 con AqB013 no
mostr un efecto significativo sobre la invasin de las esferas (Fig. 2d).
Como no hubo un efecto en la proliferacin de HCT-116 en
concentraciones de AqB013 hasta 320 M, no fue apreciado un efecto
citotxico, aunque hubo una pequea disminucin en la proliferacin
de HT29 tratada en 160 M AqB013 (Fig. 2e).
El tratamiento con AqB013 de las clulas endoteliales inhibe
considerablemente la formacin de tubos (o trompas).
En comparacin con el vehculo control, el tratamiento de HUVECs con
40 M AqB013, mostr una reduccin del 43 % en el nmero de
uniones formadas (34.03.0, p<0.01) mientras que el tratamiento con
80 M AqB013 result en una reduccin del 89.5 % (6.32.4,
p<0.0001) (Fig. 3ad). Como fue esperado, no hubo una diferencia
significativa en el nmero de uniones formadas entre los vehculos
tratados y los no tratdos HUVECs (64.33.0 versus 602.5
respectively) (Fig. 3e). No hubo un efecto en la viabilidad o
proliferacin de HUVEC tratado hasta en 80 M AqB013 (Fig. 3f).
Conclusiones
Estos estudios muestran claramente el vnculo entre la actividad AQP1
y la migracin e invasin de las clulas del cncer, y la capacidad de
las celulas endoteliales formando tubos, lo que indica la importancia
de una adecuada caracterizacin de los bloqueadores AQP1. Este
estudio proporciona datos preliminares que muestran que la AQP1
inhibidor AqB013 suspende la formacin endotelial de tubos y reduce
la migracin e invasin de clulas de cncer, lo que ser investigado
en un futuro en un ratn vivo como modelo xenotransplantado del
cncer de coln humano. Estas molculas farmaceuticas pequeas
tienen un uso teraputico consolidado siendo nuevas drogas porque
son una modificacin de bumetanide, deberan ser mejor toleradas en
pacientes con cncer teniendo menores efectos secundarios que las
drogas usadas actualmente en monoterapia. Adems, en vista del
documentado rol de AQP1 en la angiognesis del tumor murino [10,
12], se prev que en los pacientes de CCR metastticos, inhibidores
de AQP1 pueden tener un papel combinado con terapia de factor de
crecimiento endotelial antivascular (VEGF), o como una terapia
alternativa anti-angiognesis en los casos que se vuelven resistentes a
la terapia anti-VEGF. La inhibicin de la AQP1 clnicamente puede
ralentizar la progresin del CCR, incrementando la posibilidad para un
tratamiento ptimo que tenga mejores resultados de supervivencia,
particularmente en casos de etapa temprana donde haya micro
metstasis presente.